KOLOM LAMBAT

TUJUAN Mahasiswa mampu melakukan fraksinasi suatu ekstrak dengan menggunakan kromatografi kolom lambat.

PROSEDUR KERJA 1. Lakukan optimasi eluen dengan cara uji KLT terhadap ekstrak dengan mengganti-ganti eluen sampai diperoleh pemisahan yang baik. 2. Siapkan Kristal silica gel sebanyak 15 g. 3. Siapkan eluen dari butir 1 sebanyak 100 ml. 4. Masukkan silica gel ke dalam kolom hingga 2/3 bagian (untuk mengetahui perkiraan jumlah silica yang dibutuhkan) 5. Silika gel (4) dimasukkan dalam labu Erlenmeyer + eluen, kocok selama 10 menit. 6. Silika gel+eluen (5) dituangkan pelan-pelan ke dalam kolom sampai 2/3 bagian. 7. Silica gel yang masih tersisa dalam Erlenmeyer dibilas dengan eluen, lalu dituang ke dalam kolom (posisi kran kolom dibuka,eluen yang menetes ditampung). Diulangi sampai silica gel dalam Erlenmeyer bersih. 8. Sisakan eluen dalam kolom setinggi 0,5 cm (jangan sampai kering). Tutup dengan aluminium foil. 9. Timbang ekstrak 1% dari jumlah silica gel yang digunakan, ekstrak ditambah silica aa, diaduk menggunakan batang pengaduk sampai homogen dan kering. Jika belum kering ditambah silica gel sampai kering. 10.Ekstrak yang sudah kering dimasukkan ke dalam kolom, lalu ditambahkan eluen setinggi 1 cm. kemudian di atas ekstrak ditambah silica gel kering setinggi 1 cm. 11.Eluen dialirkan sambil dituangi eluen baru,dan disisakan setinggi 1 cm. 12.Kolom dibiarkan selama semalam.

13.Setelah semalam, eluen dialirkan dan ditampung dalam vial (tiap vial diisi 3/4 bagian) sambil dituangi eluen baru. ditampung sampai eluen tidak berwarna. 14.Fraksi yang telah ditampung dalam vial, ditutup dengan aluminium foil, dan disimpan untuk dilakukan analisa.

IDENTIFIKASI HASIL FRAKSINASI KOLOM LAMBAT

TUJUAN Mengetahui keberadaan senyawa flavonoid dan fenol pada hasil fraksinasi.

PROSEDUR KERJA 1. siapkan eluen untuk identifikasi flavonoid = butanol:asam asetat glacial:water (4:1:5). (kelompok 1-4) 2. siapkan eluen untuk identifikasi senyawa fenol = kloroform:etil asetat:asam formiat (0,5:9:0,5). (kelompok 5-9) 3. totolkan hasil fraksinasi dimulai dari vial 1,5,10,15 (kelipatan 5). 4. lakukan eluasi pada masing-masing eluen. 5. Identifikasi senyawa flavonoid disemprot dengan uap ammonia. 6. Identifikasi senyawa fenol disemprot dengan FeCl3. 7. Fraksi yang memiliki hasil totolan yang sama dijadikan satu.