LAPORAN RESMI Desinfektan TDT Dinny

1
Laporan Resmi Praktikum

Mikrobiologi Teknik
LAPORAN RESMI
ANTISEPTIK DAN THERMAL DEATH TIME
I. Tujuan
I.1 Antiseptik
Tujuan percobaan ini adalah untuk mempelajari pengaruh antiseptik terhadap
pertumbuhan mikroorganisme.
I.2 Thermal Death Time
Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengetahui waktu terpendek yang
dibutuhkan untuk membunuh mikroorganisme pada suhu dan kondisi tertentu.
II. Data Pengamatan
II.1 Antiseptik
Tabel II.1.1 Hasil Pengamatan Antiseptik setelah 20 Jam
Jenis
Jenis
Antiseptik
Bakteri
Albothyl
E. Coli
Foto Pengamatan
(permukaan atas)
Keterangan:
Diameter kertas saring : 1,8 cm
Zona bebas bakteri : 3,6 cm
Warna media : Kuning jernih
Warna zona bebas : Kuning jernih
Koloni bakteri : Bintik-bintik putih
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
Gambar Pengamatan
(permukaan atas)

Mikrobiologi Teknik
Bacillus
Keterangan:
Koloni bakteri : Berkoloni bintik-bintik putih
Dettol
E. Coli
Keterangan:
Koloni bakteri : Berkoloni berwarna putih
Bacillus
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi

Mikrobiologi Teknik
Keterangan:
Tabel II.1.2 Hasil Pengamatan Antiseptik setelah 96 jam

Jenis
Jenis
Antiseptik
Bakteri
Albothyl
E. Coli
Foto Pengamatan
(permukaan atas)
Keterangan:
Koloni bakteri : Bintik-bintik putih
Bacillus
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
Gambar Pengamatan
(permukaan atas)

Mikrobiologi Teknik
Keterangan:
Koloni bakteri : Berkoloni bintik-bintik putih
Dettol
E. Coli
Keterangan:
Bacillus
Keterangan:
II.2 Thermal Death Time

Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi

Mikrobiologi Teknik
Tabel II.2.1 Hasil Pengamatan Thermal Death Time setelah 20 jam

Petridish
Foto Pengamatan
Gambar Pengamatan
(Permukaan Atas)
(Permukaan Atas)
Keterangan:
Lama Pemanasan: 5 menit
Bentuk Koloni : Bintik-bintik putih kecil
Warna : Putih kekuningan
Lain-lain : Bintik-bintik sangat tebal di tepi dan sedikit memudar di tengah
Keterangan:
Lain-lain : Bintik-bintik putih semakin berkurang
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi

Mikrobiologi Teknik
Keterangan:
Lain-lain : Semakin transparan, bintik-bintik semakin berkurang
Keterangan:
Lain-lain : Bintik-bintik semakin sedikit dan lebih transparan
Tabel II.2.2 Hasil Pengamatan Thermal Death Time setelah 96 jam
Petridish
Foto Pengamatan
Gambar Pengamatan
(Permukaan Atas)
(Permukaan Atas)
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi

Mikrobiologi Teknik
Keterangan:
Lain-lain : Bintik-bintik sangat tebal di tepi dibanding di tengah
Keterangan:
Lain-lain : Bintik-bintik putih semakin berkurang
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi

Mikrobiologi Teknik
Keterangan:
Lain-lain : Semakin transparan, bintik-bintik semakin berkurang
Keterangan:
Lain-lain : Bintik-bintik semakin sedikit dan lebih transparan
Gambar II.1 Foto Pengamatan

Blanko Media
Keterangan
Gambar II.2 Gambar Pengamatan

Blanko Media
Terdapat bercak-bercak berwarna putih pada permukaan blanko yang

menandakan bahwa blanko tercemar mikroorganisme.
III. Pembahasan
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi

Mikrobiologi Teknik
III.1 Antiseptik
Percobaan ini bertujuan untuk mempelajari pengaruh antiseptik terhadap
pertumbuhan mikroorganisme. Bakteri yang digunakan dalam percobaan ini
adalah Escherichia coli dan Bacillus subtilis. Untuk larutan antiseptik yang
digunakan adalah Albothyl dan Dettol (hand sanitizer).
Pada percobaan ini, langkah pertama adalah menyediakan 4 buah tabung
reaksi kosong dan memasukkannya ke dalam autoklaf bersama dengan 4 buah
petridish yang kosong selama 15 menit pada suhu 121 C agar mikroorganisme
yang terdapat di dalam tabung reaksi dan petridish mati. Sebelumnya petridish
telah dibungkus dengan kertas coklat. Setelah disterilisasi, mendiamkan media
sampai 45 C karena apabila suhu terlalu panas bakteri yang diuji akan mati saat
diinokulasikan ke dalam media tersebut. Kemudian keempat tabung reaksi
tersebut diisi dengan media NBA (Nutrient Broth Agar) Komposisi penyusun
NBA adalah ekstrak daging (0,3%), pepton (0,5%) dan agar dalam air (1,5%).
Menginokulasikan bakteri Escherichia coli ke dalam 2 buah tabung reaksi
pertama dan bakteri Bacillus subtilis ke dalam 2 buah tabung reaksi kedua.
Mengaduk tabung reaksi agar bakteri menyebar dengan merata dalam media.
Menuangkan media yang telah diinokulasikan ke dalam petridish dan membiarkan
hingga padat. Mencelupkan potongan kertas saring kecil yang berbentuk lingkaran
ke dalam larutan antiseptik masing-masing Albothyl dan Dettol. Kemudian
meletakkan sebentar pada sehelai kertas saring lain untuk mencegah kelebihan
antiseptik agar tidak menetes saat diletakkan di media. Meletakkan kertas saring
ke dalam media yang mulai padat agar kertas saring menempel pada media
sehingga tidak jatuh pada saat inkubasi dalam keadaan terbalik. Peletakkan kertas
saring setelah media dikarenakan apabila meletakkan kertas saring dahulu
kemudian menambahkan media maka zat-zat antiseptik yang terdapat di kertas
saring akan terlarut oleh media dan menyebar ke seluruh permukaan petridish
sehingga nantinya akan sulit dalam menentukan zona bebas bakteri. Membungkus
petridish dengan kertas coklat dan menginkubasikan selama 20 jam dan 96 jam.
Semua kegiatan yang melibatkan mikroba dilakukan secara aseptik agar tidak
terkontaminasi oleh mikroba yang tidak diharapkan sehingga mempengaruhi hasil
pengamatan.
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
10

Mikrobiologi Teknik
Pada pengamatan setelah 20 jam untuk petridish dengan kertas saring yang
menggunakan larutan Dettol, tidak ditemukan zona bebas bakteri di sekitar kertas
saring baik untuk bakteri Escherichia coli maupun Bacillus subtilis. Koloni
bakteri Escherichia coli sebagian besar berbentuk bulat kecil berwarna putih yang
pinggirnya bergerigi/berambut halus sedangkan untuk bakteri Nitrobacter
winogradsky berbentuk bulat seperti pear. Rivanol merupakan senyawa organik
berkristal kuning oranye yang berbau menyengat. Penggunaannya sebagai
antiseptik dalam larutan 0,1%. Tindakan bakteriostatik rivanol dilakukan dengan
mengganggu proses vital pada asam nukleat sel bakteri. Efektivitas rivanol
cenderung lebih kuat pada bakteri gram positif daripada gram negatif. Rivanol
dapat
menghambat
pertumbuhan
mikroorganisme
dalam
percobaan
ini
ditunjukkan dengan adanya zona bebas bakteri. untuk bakteri Nitrobacter

winogradsky diameter zona bebas bakterinya sebesar 2 cm, koloninya berbentuk
daratan luas yang berwarna putih dan mengelilingi zona bebas bakteri. Untuk
bakteri Zymomonas mobilis diameter zona bebas bakterinya 2,3 cm.
Untuk petridish yang menggunakan larutan antis, terlihat zona bebas bakteri
pada kedua media dalam petridish, untuk bakteri Nitrobacter winogradsky
diameter zona bebas bakterinya sebesar 3 cm, koloninya berbentuk daratan luas
yang berwarna putih dan mengelilingi zona bebas bakteri. Untuk bakteri
Zymomonas mobilis diameter zona bebas bakterinya 2,5 cm dan koloninya
berbentuk bulat kecil ada yang menggumpal sehingga terlihat besar.
Pada pengamatan setelah 88 jam 30 menit , tidak jauh berbeda pada
pengamatan setelah 18 jam 30 menit hanya saja kepekatan bakteri lebih tinggi dan
diameter zona bebas bekteri lebih kecil daripada hari pertama.
Dari hasil pengamatan, kita dapat membandingkan kekuatan kedua
bakteri. Tidak semua mikroorganisme sama rentannya terhadap suatu zat kimia
tertentu
yang bersifat menghambat atau mematikan bakteri. Berdasarkan
komposisi dinding sel serta sifat pewarnaannya, bakteri dibedakan menjadi bakteri
gram negatif dan bakteri gram positif. Nitrobacter winogradsky dan Zymomonas
mobilis merupakan jenis bakteri gram negatif.
Diameter zona bebas bakteri untuk bakteri Zymomonas mobilis lebih kecil
dibandingkan Nitrobacter winogradsky sehingga kita dapat menyimpulkan bahwa
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
11

Mikrobiologi Teknik
Zymomonas mobilis lebih resisten terhadap antiseptik dibandingkan dengan

Nitrobacter winogradsky. Bakteri gram negatif lebih resisten terhadap perlakuan
pemberian antiseptik daripada bakteri gram positif. Dinding sel gram negatif lebih
tebal daripada gram positif. (Handranie, Nuniek. 2001. Mikrobiologi Industri.
Surabaya: ITS)
(Pelczar, 2008, hal 85)
Jika dua sel mikroba pada inokulum asal terlalu berdekatan letaknya pada
medium agar, maka koloni yang terbentuk dari masing-masing sel dapat
tercampur dengan sesamanya, atau paling tidak bersentuhan, jadi massa sel yang
dapat diamati itu bukanlah biakan murni.
Ada beberapa metode untuk memperoleh biakan murni dari isolat campuran.
Dua diantaranya yang sering digunakan adalah teknik cawan gores dan teknik
cawan tuang. Pada praktikum ini akan dilakukan isolasi mikroorganisme dari
suatu campuran dengan menggunakan metode cawan gores dan cawan tuang.
Prinsip dari kedua metode tersebut sama yaitu mengencerkan biakan campuran
hingga setiap individu spesies dapat dipisahkan dan nantinya setiap koloni yang
terbentuk merupakan hasil dari pembelahan satu sel.
III.1.1 Metode Cawan Gores
Metode cawan gores merupakan metode yang praktis, hemat bahan dan
waktu, hanya membutuhkan keterampilan. Sektor penggoresan diharapkan
tampak seperti gambar 3.1.
Gambar III.1 Pembagian sektor pada petridish

Pada metode cawan gores, dua buah petridish yaitu untuk campuran A dan
campuran B, dibagi menjadi 4 sektor, yaitu sektor 0, I, II dan III. Campuran A
merupakan campuran dari Bacillus subtilis dan Escherichia coli, sedangkan
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
12

Mikrobiologi Teknik
campuran B merupakan campuran dari Aspergillus niger dan Rhizopus

oligosporus. Media yang digunakan adalah Nutrient Broth Agar atau biasa disebut
NBA untuk campuran A dan Potato Dextrose Agar atau yang biasa disebut PDA
untuk campuran B. Setelah membagi sektor pada petridish, kemudian mengisi
satu petridish dengan NBA dan yang satu lagi diisi dengan PDA. Selanjutnya
membungkus petridish dengan kertas coklat dan disterilkan dalam autoclave pada
suhu 121C selama 15 menit. Hal ini dilakukan karena pada kondisi tersebut spora
dan bakteri akan mati sehingga petridish dan media menjadi steril.
Selanjutnya adalah melakukan inokulasi. Inokulasi dilakukan dengan cara
menggores secara zig-zag pada media yang telah memadat. Penggoresan
dilakukan dengan menggunakan kawat ose yang sebelumnya telah dibakar dengan
pembakar bunsen dan dilakukan di incase agar biakan tidak terkontaminasi
bakteri yang tidak diinginkan. Kawat ose yang digunakan harus dalam keadaan
telah dingin untuk menggores permukaan media agar. Kawat ose yang panas akan
mematikan mikroorganisme, sehingga tidak terjadi pertumbuhan pada bekas
penggoresan. Penggoresan pertama dilakukan pada sektor 0 setelah pengambilan
suspensi. Penggoresan kedua dilakukan di sektor I, setelah pengambilan suspensi
dari sektor 0. Penggoresan ketiga dilakukan di sektor II, setelah pengambilan
suspensi dari sektor I. Sedangkan penggoresan keempat dilakukan pada sektor III
setelah pengambilan suspensi dari sektor II. Setiap pergantian penggoresan sektor,
kawat
ose
harus
dibakar
dengan
bunsen.
Tujuan
inokulasi
secara
berkesinambungan pada petridish ini adalah untuk mengencerkan suspensi,

sehingga diharapkan pada sektor III tumbuh koloni yang terbentuk dari satu jenis
bakteri (didapat biakan murni).
Langkah selanjutnya adalah inokulum di inkubasi didalam inkubator dengan
suhu 30C. Petridish harus diletakkan secara terbalik agar saat terjadi
pengembunan, air hasil pengembunan tidak akan membasahi media agar beserta
bakteri dan jamur yang ada didalamnya. Hal tersebut dapat menyebabkan
terkontaminasinya bakteri dan jamur sehingga bakteri dan jamur pada media agar
tidak dapat tumbuh. Selain itu, bakteri atau jamur dapat terangkat bersama uap air
sehingga jamur atau bakteri dapat menempel pada tutup petridish. Oleh karena itu
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
13

Mikrobiologi Teknik
petridish diletakkan secara terbalik. Inkubasi didalam inkubator dilakukan selama

20 dan 116 jam.
Dari hasil pengamatan selama 20 jam, untuk media NBA dengan campuran
bakteri pada sektor 0 tumbuh koloni bakteri berwarna putih yang sangat pekat.
Pada sektor 1 pertumbuhan bakteri terlihat semakin samar. Pada sektor 2
pertumbuhan bakteri semakin tidak terlihat, dan pada sektor 3 belum terlihat
adanya pertumbuhan bakteri. Untuk media PDA dengan campuran jamur pada
pengamatan 20 jam, sektor 0 pertumbuhan jamur sangat banyak berwarna putih
kekuningan dan sangat pekat. Pada sektor 1 pertumbuhan jamur semakin samar
dan lebih sedikit. Pada sektor 2 dan sektor 3 pertumbuhan jamur belum terlihat.
Gambar III.3 Hasil pengamatan

cawan gores campuran bakteri setelah
20 jam (tampak atas)

cawan gores campuran jamur setelah
Pada pengamatan setelah 116 jam, pada media NBA koloni bakteri tampak
semakin melebar dan berwarna putih lebih pekat dari pada pengamatan setelah 20
jam. Pada sektor 0 pertumbuhan bakteri sangat banyak, berwarna putih, terlihat
berstruktur halus, dan sangat pekat. Pada sektor 1 pertumbuhan bakteri berwarna
putih dan lebih sedikit. Pada sektor 2 pertumbuhan bakteri terlihat semakin sedikit
dan berwarna putih. Pada sektor 3 pertumbuhan bakteri berwarna putih dan
terlihat lebih pekat dari pada sektor lain. Pada percobaan ini sektor 3 seharusnya
berisi koloni bakteri paling sedikit dibanding ketiga sektor lainnya sehingga pada
sektor 3 hanya didapatkan biakan murni.
Untuk media PDA, sektor 0 pertumbuhan jamur sangat banyak, berwarna
putih kekuningan dan sangat pekat. Pada sektor 1 pertumbuhan jamur berwarna
putih, lebih sedikit dan tidak terlalu pekat. Pada sektor 2 pertumbuhan jamur
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
14

Mikrobiologi Teknik
terlihat semakin sedikit dan berwarna putih. Pada sektor 3 pertumbuhan jamur
berwarna putih sangat jarang dan sedikit. Jamur yang tumbuh membentuk titiktitik pada media.
cawan gores campuran bakteri setelah
cawan gores campuran jamur setelah
Dari hasil percobaan dan pengamatan pada media NBA dengan campuran
bakteri, bakteri yang terisolasi adalah Bacillus subtilis karena pada sektor III
bentuk koloni kasar, tidak seperti Escherichia coli yang memiliki bentuk koloni
halus. Bakteri Escherichia coli memiliki bentuk pertumbuhan koloni yang sama
dengan Bacillus subtilis pada medium padat tegak yaitu tipe bead. Pada medium
padat miring, tipe pertumbuhan koloni Escherichia coli adalah bertipe filiform.
Bentuk pertumbuhan filiform dicirikan dengan adanya suatu pertumbuhan yang
seragam pada garis inokulasi. Escherichia coli memiliki bentuk koloni smogh atau
halus dengan bentuk circular, sedangkan Bacillus subtilis memiliki bentuk koloni
rough atau kasar yang berbentuk curled (bergelombang).
(http://www.scribd.com/doc/)
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
15

Mikrobiologi Teknik
Gambar III.7 Koloni bakteri Bacillus subtilis pada metode cawan gores
secara literatur
Pada PDA dengan campuran jamur, pada sektor 0 terdapat bintik putih dan
kuning yang merupakan Aspergillus niger dan koloni jamur berwarna hitam yang
merupakan Rhizopus oligosporus, sedangkan pada sektor III hanya terdapat bintik
putih yang merupakan ciri dari Aspergillus niger, sehingga yang terisolasi pada
media PDA adalah Aspergillus niger. Aspergillus niger merupakan jamur
multiseluler yang membentuk benang-benang hifa/filamen, tidak mempunyai
klorofil dan hidup heterotrof. Aspergillus niger memiliki bulu dasar berwarna
putih atau kuning dengan lapisan konidiospora tebal berwarna coklat gelap sampai
hitam.
(Raper dan Fennel, 1977)
Sedangkan Rhizopus oligosporus mempunyai koloni abu-abu kecoklatan dengan
tinggi 1 mm atau lebih. Sporangiosfor tunggal atau dalam kelompok dengan
dinding halus atau agak sedikit kasar, dengan panjang lebih dari 1000 mikro meter
dan diameter 10-18 mikro meter. Sporangia globosa yang pada saat masak
berwarna hitam kecoklatan, dengan diameter 100-180 mikro meter. Rhizopus
oligosporus dapat tumbuh pada kondisi terisolasi dengan suhu maksimum 4549C.
Gambar III.2 Rhizopus oligosporus (a) koloni pada MEA, 7 hari, 25C (b)
sporangiospores, bar = 10m (c) perkembangan sporangia, bar = 25m (d)

sporangia, bar = 25m
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
16

Mikrobiologi Teknik
(John I. 2009. Hal 162-163)

III.1.2 Metode Cawan Tuang
Metode cawan tuang merupakan teknik lain yang dapat digunakan untuk
mendapatkan koloni murni mikroorganisme. Kelemahan metode ini adalah
membutuhkan waktu yang lama dan bahan yang banyak, akan tetapi tidak
memerlukan
keterampilan
tinggi.
Biakan
campuran
diencerkan
dengan
menggunakan medium agar yang telah dicairkan dan disterilkan. Pengenceran

dilakukan dalam beberapa tahap hingga diperoleh koloni tunggal.
Pada metode cawan tuang, menggunakan tiga buah petridish dan tiga buah
tabung reaksi. Langkah pertama yang harus dilakukan adalah mengisi tabung
reaksi dengan NBA sebanyak setengah dari tabung reaksi dan ditutup dengan
sumbat kapas. Selanjutnya memasukkan ketiga tabung reaksi yang berisi NBA
dan petridish yang telah dibungkus kertas coklat kedalam autoclave pada suhu
121C selama 15 menit. Kemudian melakukan inokulasi menggunakan campuran
A yang merupakan campuran dari Bacillus subtilis dan Escherichia coli. Inokulasi
dilakukan dalam tabung reaksi saat agar masih cair. Inokulasi dilakukan dari
biakan ke tabung reaksi I, dari tabung reaksi I kemudian memindahkan satu lup
penuh suspensi biakan campuran kedalam tabung reaksi II dengan menggunakan
kawat ose yang telah dipijarkan diatas api bunsen, dan terakhir dari tabung reaksi
II ke tabung reaksi III. Semua tabung reaksi dikocok agar bakteri tercampur rata
dalam media. Setelah itu, isi tabung reaksi dipindahkan secara steril ke petridish I,
II dan III. Tujuan metode ini ialah pengenceran, sehingga diharapkan didapatkan
biakan murni dari masing-masing bakteri secara terpisah pada petridish III.
Selanjutnya petridish diinkubasikan didalam inkubator selama 20 dan 116
jam pada suhu 30oC. Kemudian dilakukan pengamatan sebanyak dua kali pada
saat 20 dan 116 jam.
Setelah proses inkubasi selama 20 jam dilakukan pengamatan terhadap
ketiga petridish, untuk petridish pertama (cawan tuang yang pertama) muncul
banyak koloni yang tersebar dan berbentuk bintik-bintik kecil berwarna putih,
dengan diameter sekitar 0,10,2 mm. Pada petridish kedua bakteri juga berkoloni
dan terdapat bulatan-bulatan kecil berwarna putih agak pekat dengan diameter
0,30,5 mm mm. Sedangkan pada petridish ketiga membentuk koloni yang sangat
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
17

Mikrobiologi Teknik
jelas dan jarak antar koloni berjauhan, serta diameternya 12 mm dengan warna
putih tulang dan pekat. Koloni paling sedikit berada pada petridish yang ketiga.
Karena semakin terakhir dilakukan inokulasi, suspensi mikroorganisme campuran
semakin sedikit sehingga koloni yang didapat juga semakin sedikit.
Pada pengamatan setelah 116 jam koloni mikroorganisme sama dengan
pengamatan setelah 20 jam, hanya saja warnanya lebih pekat dan berbeda panjang
diameter. Pada petridish I diameternya menjadi 0,1-0,2 mm, petridish II menjadi
0,4-0,6 mm dan petridish III menjadi 1-3 mm dan koloninya lebih jelas dan
terpisah jauh. Sehingga dapat disimpulkan bahwa pada petridish III didapatkan
biakan murni hasil dari cawan tuang.
Pada metode cawan tuang ini dapat disimpulkan bahwa bakteri yang
terisolasi pada petridish III adalah Escherichia coli, karena pada petridish III
koloni bakteri berwarna putih pekat, berbentuk bulat dan halus. Hal ini sesuai
dengan literatur yang menyebutkan bahwa Escherichia coli memiliki bentuk
koloni smogh atau halus dengan bentuk circular.
(http://www.scribd.com/doc/)
III.2 Uji Biokimia
III.2.1 Methyl-Red-Voges-Proskaurer (MR-VP Test)
Percobaan uji MR-VP ini diawali dengan mengambil dua tabung reaksi
kemudian mengisi dengan media MRVP. Setelah itu, mensterilkan tabung reaksi
yang berisi media tersebut dalam autoclave selama 15 menit pada suhu 121C.
Suhu yang tinggi inilah yang akan membunuh mikroorganisme. Autoclave
terutama ditujukan untuk membunuh endospora, yaitu sel resisten yang diproduksi
oleh bakteri, sel ini tahan terhadap pemanasan, kekeringan dan antibiotik. Pada
spesies yang sama, endospora dapat bertahan pada kondisi lingkungan yang dapat
membunuh sel vegetatif bakteri tersebut. Endospora dapat dibunuh pada suhu
100C, yang merupakan titik didih air pada tekanan atmosfir normal. Pada suhu
121C, endospora dapat dibunuh dalam waktu 4-5 menit, dimana sel vegetatif
bakteri dapat dibunuh hanya dalam waktu 6-30 detik pada suhu 65C.
(http://repository.ipb.ac.id/)
Langkah selanjutnya menginokulasi Aspergillus niger kedalam dua tabung
reaksi. Pada saat melakukan inokulasi, kawat ose yang digunakan untuk
memindahkan bakteri dan jamur disterilkan terlebih dahulu dengan cara dibakar
dengan bunsen yang berada di dalam incase hingga memijar. Hal ini bertujuan
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
18

Mikrobiologi Teknik
agar jarum ose berada dalam kondisi steril sehingga saat mengambil bakteri atau
jamur tidak akan ada kontaminasi dari zat-zat asing atau dari mikroorganisme
yang sudah menempel sebelumnya. Kemudian membiarkannya jarum sejenak
hingga panasnya hilang. Hal ini dilakukan agar jamur/mikroorganisme yang akan
diambil tidak mati/terdenaturasi karena suhu jarum ose yang terlalu tinggi, oleh
karena itu jarum ose perlu dibiarkan sejenak hingga suhunya turun/dingin. Setelah
diinokulasi, tabung reaksi ditutup dengan sumbat kapas.
Kemudia kedua tabung reaksi diinkubasi dalam dalam inkubator pada
suhu 30C selama 116 jam. Pengamatan dilakukan setelah 116 jam. Pada tabung
reaksi pertama ditetesi Methyl Red sebanyak 3 ml dan pada tabung reaksi kedua
ditetesi dengan reagen Barrit sebanyak 3 ml pula. Dari hasil percobaan selama 116
jam untuk media MRVP dengan Aspergillus niger yang ditetesi Methyl Red
menunjukkan hasil yang positif, yaitu terjadi perubahan warna menjadi merah.
Artinya bakteri ini menghasilkan asam campuran dari proses fermentasi glukosa
yang terkandung dalam media MR-VP. Terbentuknya asam campuran pada media
akan menurunkan pH sampai 5 atau kurang, oleh karena itu bila indikator metil
ditambahkan pada biakan tersebut dengan pH serendah itu maka indikator tersebut
menjadi merah. Begitu juga dengan media yang ditetesi reagen Barrit,
menunjukkan hal yang positif dengan berubah warna menjadi merah.
(http://www.scribd.com/)
Hasil percobaan selama 116 jam, pada media yang ditetesi reagen metil
merah menunjukkan hasil yang positif, ditandai dengan adanya perubahan warna
menjadi merah. Methyl red, merupakan indikator pH yang akan berwarna merah
pada pH<=4.4 dan berwarna kuning pada pH>=6.2. Dan, bila bakteri tersebut
menggunakan fermentasi campuran asam dan memproduksi asam yang stabil,
asam-asam yang dihasilkan akan mengatasi larutan buffer pada medium cair
tersebut dan menghasilkan lingkungan yang asam dalam medium cair tersebut.
Oleh karena itu, larutan menjadi berwarna merah.
(www. austin.cc.us/ microbugz/ mrvp_test.htm)
Pada media yang ditetesi reagen Barrit juga menunjukkan hasil yang positif,
namun perubahan warnanya kurang mencolok. Hal ini dapat disebabkan karena
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
19

Mikrobiologi Teknik
produksi asam tidak maksimal, lebih maksimal pada masa inkubasi selama 20
jam.
III.2.2 Hidrolisa Lemak
Percobaan hidrolisa lemak bertujuan untuk menentukan jenis mikroorganisme
yang memiliki lipase, suatu enzim yang mempunyai kemampuan menghidrolisis
lemak menjadi asam lemak dan gliserol.
Lipid atau lemak adalah senyawa berat molekul (BM) besar dan
menghasilkan energi tinggi. Peruraian lipid dilakukan oleh enzim lipase/ esterase
dengan memecah ikatan-ikatan ester dengan bantuan air membentuk gliserol dan
asam lemak. Produk yang dihasilkan dari hidrolisa lemak digunakan untuk
pembentukan lemak mikroba dan komponen sel esensial, atau dapat dioksidasi
untuk menghasilkan energi kebutuhan sel di bawah kondisi aerob yang sangat
unik.
Tabung reaksi diisi dengan media NBA dan menambahkan minyak tumbuhan
steril ke dalamnya, tujuannya karena pada media NBA tidak mengandung lemak
sehingga ditambahkan minyak tumbuhan yang mengandung lemak agar terdapat
lemak yang dapat dihidrolisis bakteri dan sebagai bukti jika mikroba tersebut
memiliki enzim lipase. Selanjutnya mengocok tabung reaksi hingga homogen.
Selanjutnya mensterilkannya dalam autoclave. Setelah disterilisasi, memindahkan
isi dari tabung reaksi tersebut media ke dalam cawan petri dan menunggu hingga
padat. Setelah itu, memulai inokulasi ke cawan petri. Kemudian menempatkan
hasil inokulasi ke dalam inkubator dan menunggu hingga 116 jam.
Setelah media diinkubasikan selama 116 jam, ke dalam petridish tuangkan
larutan CuSO4 jenuh dan diamkan selama 10-15 menit. Penambahan larutan
CuSO4 ini bertujuan untuk mempercepat reaksi (sebagai katalis). Larutan CuSO 4
yang masih ada dalam petridish dibuang. Percobaan hasil uji lemak ini
menunjukkan hasil positif, yaitu terjadi perubahan warna menjadi biru gelap pada
koloni setelah ditetesi larutan CuSO4. Hal ini menunjukkan bahwa Bacillus
subtilis memiliki enzim lipase yang mampu menghidrolisa lemak, sehingga
menghasilkan asam lemak bebas dan gliserol, namun enzim tersebut aktif oleh
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
20

Mikrobiologi Teknik
panas. Reaksi yang terjadi pada hidrolisa lemak adalah: Lemak + H2O gliserol +
asam lemak.
IV.
Jawaban Pertanyaan
IV.1 Desinfektan
1. Apakah yang disebut dan beri contohnya ?
a. Antiseptik
b. Desinfektan
Jawab:
a. Antiseptik adalah suatu zat yang dapat melawan infeksi atau
menghambat pertumbuhan serta aktivitas mikroorganisme. Contohnya
Listerin, Betadin, Barwater.
b. Desinfektan adalah suatu bahan, biasanya bahan kimia yang mematikan
sel vegetatif tetapi belum tentu mematikan bentuk spora dati
mikroorganisme. Contohnya Detergen, Soklin, Pembersih lantai (Wipol),
pembersih luka (Detol).
2. Dalam hal-hal apa sajakah desinfektan dan antiseptik digunakan terangkan ?
Jawab:
-
Antiseptik:
Dalam bidang kesehatan untuk membersihkan luka, dalam bidang
kedokteran, sebelum pasien disuntik, permukaan kulit yang disuntik
diberi Alkohol untuk mematikan mikroorganisme yang ada di
permukaan kulit tersebut agar tidak terjadi infeksi.
-Desinfektan
Dalam bidang sanitasi, untuk membersihkan lantai, air, pakaian dari
mikroorganosme pathogen. Penggunaan dalam bidang industri
makanan.
IV.2 Thermal Death Time
1. Apakah yang dimaksud dengan Thermal Death Time, Thermal Death
Rate, dan Thermal Death Point?
Jawab :
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
21

Mikrobiologi Teknik
Thermal Death Time adalah periode terpendek yang dibutuhkan untuk

mematikan suatu suspensi bakteri pada suhu tertentu di bawah
keadaan tertentu.
Thermal Death Rate adalah kecepatan kematian mikroba akibat

pemberian temperatur.
Thermal Death Point adalah temperatur serendah-rendahnya yang

dapat membunuh mikroba pada media standar selama 10 menit pada
kondisi tertentu.
2. Hal-hal apakah yang perlu diperhatikan dalam menentukan Thermal

Death Time dan Thermal Death Rate?
Jawab :
Thermal Death Time: temperatur konstan dan fungsi waktu
Thermal Death Rate: daya tahan masing-masing bakteri, usia sel, dan
ada tidaknya spora
3.
Dalam hal apakah (bidang apakah) percobaan ini diterapkan, jelaskan !

Jawab:
Percobaan ini diterapkan pada industri pengawetan makanan atau susu,
4. Metode apakah yang paling efektif untuk sterilisasi liquid yang mungkin
mengandung bakteri pembentuk spora ?
Jawab:
Sterilisasi dengan metode pemanasan dalam autoclave pada suhu 121 0 C
agar bakteri sekaligus dengan sporanya ikut mati.
5. Bagaimana cara saudara melakukan suatu eksperimen untuk menentukan
waktu TDT dari Aspergillus niger? mulailah dengan data-data yang telah
saudara dapatkan dalam percobaan.
Jawab:
Dengan menentukan jumlah bakteri setelah waktu pemanasan yang
berbeda yaitu 5, 10, 15, dan 20 menit, kemudian membandingkannya.
Membuat regresi grafiknya dan menentukan TDT dari Aspergillus niger
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
22

Mikrobiologi Teknik
V. Kesimpulan
V.1 Desinfektan
Dari hasil percobaan dan pengamatan dapat disimpulkan bahwa:
1. Pada metode cawan gores sektor III merupakan koloni yang paling encer,
pada sektor inilah didapat biakan murni. Untuk media NBA dengan
campuran Bacillus subtilis dan Escherichia coli didapat biakan murni yang
terisolasi adalah Bacillus subtilis. Untuk media PDA dengan campuran
Rhizopus oligosporus dan Aspergillus niger didapat biakan murni yang
terisolasi adalah Aspergillus niger.
2. Pada metode cawan tuang, petridish III memiliki jumlah koloni terkecil
dan jarak yang berjauhan antar koloni, pada petridish III inilah didapat
biakan murni dari pengisolasian bakteri Bacillus subtilis dan Escherichia
coli melalui metode cawan tuang. Biakan murni yang terisolasi adalah
Escherichia coli.
V.2 Uji Biokimia
V.2.1 Methyl-Red-Voges-Proskaurer (MR-VP Test)
Dari hasil percobaan dan pengamatan dapat disimpulkan bahwa Aspergillus
niger dapat menghasilkan asetil metil karbinol sebagai salah satu asam organik.
V.2.2 Hidrolisa Lemak
Dari hasil percobaan dan pengamatan dapat disimpulkan bahwa bakteri
Bacillus memiliki lipase yang memiliki kemampuan untuk menghidrolisis lemak
menjadi asam lemak dan gliserol.
Daftar Pustaka
Dipa Penelitian. http://www.unsri.ac.id (Diakses tanggal 31 Maret 2014, pukul
12.10)
Dwidjoseputro, D. 2005. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
John I, Pitt and Ailsa D. Hocking. 2009. Fungi and Food Spoilage. New York:
Springer Dordrecht Heidelberg.
Laboratorium Mikrobiologi Teknik. 2014. Buku Petunjuk Praktikum
Mikrobiologi. ITS: Jurusan Teknik Kimia FTI.
Marine Microbiology FPIK UNPAD. 2012.
http://marinemikrobiologyfpikunpad.com/ (Diakses tanggal 31 Maret 2014,
pukul 13.23)
Michael J.Pelczar and Chan. 2008. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta:
Universitas Indonesia Press.
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi
23

Mikrobiologi Teknik
Raper dan Fennel. 1977. http://digilib.unimus.ac.id/files/disk1/125/jtptunimusgdi-dewivalasy-6217-2-babii.pdf (Diakses tanggal 31 Maret 2014, pukul
21.13)
Sarah, dkk. 2009. Isolasi a-amilase Termostabil dari Bakteri Termofilik Bacillus
stearothermophilus. ITS: Jurusan Kimia FMIPA.
Uji Biokimia. http://www.repository.usu.ac.id/ (Diakses tanggal 31 Maret 2014
pukul 13.01)
http://repository.ipb.ac.id. (Diakses tanggal 1 April, pukul 11.03)
http://www.scribd.com/doc/15564953/8292565Morfologikolonibakteri (Diakses
tanggal 1 April 12.30)
http://www.scribd.com/doc/22086106/Uji-Biokimia-Mikroba. (Diakses tanggal 1
April 2014, pukul 11.43)
http://www. austin.cc.us/ microbugz/ mrvp_test.htm. (Diakses tanggal 3 April
2014, pukul 14.32)
Lampiran
Laboratorium
Teknik
Mikrobiologi

LAPORAN RESMI Desinfektan TDT Dinny

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN RESMI Desinfektan TDT Dinny

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

1

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Tabel II.1.2 Hasil Pengamatan Antiseptik setelah 96 jam

Laporan Resmi Praktikum

II.2 Thermal Death Time

Laporan Resmi Praktikum

Tabel II.2.1 Hasil Pengamatan Thermal Death Time setelah 20 jam

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Gambar II.1 Foto Pengamatan

Gambar II.2 Gambar Pengamatan

Terdapat bercak-bercak berwarna putih pada permukaan blanko yang

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

ditunjukkan dengan adanya zona bebas bakteri. untuk bakteri Nitrobacter

yang bersifat menghambat atau mematikan bakteri. Berdasarkan

Laporan Resmi Praktikum

Zymomonas mobilis lebih resisten terhadap antiseptik dibandingkan dengan

Gambar III.1 Pembagian sektor pada petridish

Laporan Resmi Praktikum

campuran B merupakan campuran dari Aspergillus niger dan Rhizopus

berkesinambungan pada petridish ini adalah untuk mengencerkan suspensi,

Laporan Resmi Praktikum

petridish diletakkan secara terbalik. Inkubasi didalam inkubator dilakukan selama

Gambar III.3 Hasil pengamatan

Gambar III.4 Hasil pengamatan

Laporan Resmi Praktikum

Gambar III.5 Hasil pengamatan

Gambar III.6 Hasil pengamatan

cawan gores campuran bakteri setelah

cawan gores campuran jamur setelah

116 jam (tampak atas)

116 jam (tampak atas)

Laporan Resmi Praktikum

sporangiospores, bar = 10m (c) perkembangan sporangia, bar = 25m (d)

Laporan Resmi Praktikum

(John I. 2009. Hal 162-163)

menggunakan medium agar yang telah dicairkan dan disterilkan. Pengenceran

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Thermal Death Time adalah periode terpendek yang dibutuhkan untuk

Thermal Death Rate adalah kecepatan kematian mikroba akibat

Thermal Death Point adalah temperatur serendah-rendahnya yang

2. Hal-hal apakah yang perlu diperhatikan dalam menentukan Thermal

Thermal Death Time: temperatur konstan dan fungsi waktu

Dalam hal apakah (bidang apakah) percobaan ini diterapkan, jelaskan !

Laporan Resmi Praktikum

Laporan Resmi Praktikum

Anda mungkin juga menyukai