Gateway Cloning System

Keuntungan menggunakan sistem Gateway adalah kita hanya perlu mengkloning sekuens DNA
1 kali untuk membuat seluruh klon. Jika 1 kali klone sudah terverifikasi maka kita dapat
memindahkan fragment ke semua sistem ekspresi hanya dengan 1 step yakni dengan reaksi
rekombinasi tanpa menggunakan enzim restriksi, ligase, subkloning ataupun membaca dan
screening multiple clones.

Gambar 1. Aplikasi penggunaan Gateway Cloning System

Kelebihan dari penggunaan Gateway Cloning System adalah :
1. Efisien dan dapat measukkan DNA dari 1 ekspresi plasmid ke plasmid yang lain.
2. Memiliki langkah kerja yang lebih singkat sehingga lebih hemat waktu.
3. Menghasilkan ekspresi klon tanpa menggunakan enzim restriksi dan ligase.
4. Menggunakan cloning ORF.
5. Kloning bersifat simultan (baik dari segi urutan maupun orientasi, bisa mencapai 4
fragment DNA dalam 1 plasmid).

Proses dilakukan dengan :

(1). Menentukan klon entry
Klon entry mengandung gen yang kita inginkan atau fragmen DNA yang diapit oleh sekuens-sekuens
attL, yang digunakan kemudian untuk rekombinasi dengan sekuens-sekuens attR untuk membuat klon
ekspresi yang diinginkan. Kita dapat menggunakan salah satu vector cloning TOPO untuk membuat klon
entry.
(2). Mediasi reaksi dengan enzim klonase
Setelah klon entry diperoleh, gen yang diinginkan dipindahkan dengan mudah ke plasmid sekunder,
yakitu ke vector destinasi.
(3). Memilih vector destinasi
Dipindahkan dari vector destinasi ke vector ekspresi sebanyak yang kita mau.