TAHAPAN PEMBUATAN MEDIA POTATO SUCROSE AGAR (PSA)

1. Sterilisasi alat
Alat gelas dicuci terlebih dahulu hingga bersih, bila perlu dengan sabun pencuci
Disterilisasi dengan oven dengan suhu 180C selama 2-3 jam atau 121C 10-20 menit

Cara penggunaan Oven:

1. Bungkus alat-alat gelas dengan kertas payung atau aluminium foil (tidak juga
tidak apa-apa)
2. Atur pengatur suhu oven menjadi 1800C dan alat disterilkan selama 2-3 jam.

Keterangan:
Sterilisasi dengan metode ini biasanya digunakan untuk peralatan gelas seperti
cawan petri, pipet ukur dan labu erlenmyer. Alat gelas yang disterilisasi dengan
udara panas tidak akan timbul kondensasi sehingga tidak ada tetes air (embun)
didalam alat gelas.

2. Pembuatan Media PSA

Alat Bahan Jumlah

Botol kaca Air 1 liter

Gelas ukur Gula pasir 15 gr

Karet gelang Agar 10 gr

LAF (Laminar Air Flow) Kentang 300 gr

Oven Plastik wrap Disesuaikan

Pipet Alumunium foil Disesuaikan

Prosedur pembuatan :
1) Siapkan alat dan bahan
2) Kupas kentang, cuci sampai bersih, kentang di potong-potong dengan ukuran sedang.
3) Rebus kentang sampai empuk (jika dirasakan hambar).
4) Kentang di pisahkan dari ekstraknya dengan cara di saring
5) Didihkan kembali ekstrak kentang dengan nyala api yang kecil.
6) Tambahkan gula, aduk hingga larut.
7) Tambahkan agar secara perlahan-lahan sambil diaduk terus menerus (jangan sampai
menggumpal).
8) Tunggu sampai mendidih dan matikan api.
9) Masukan media ketest tube atau botol kaca (ukuran di sesuaikan dengan ukuran test
tube atau botol kaca sebanyak 15 ml), kemudian di tutup dengan kapas dan
alumunium foil
10) Bungkus dengan menggunakan alumunium foil dan ikat dengan karet gelang. Lalu
tutup kembali dengan plastic wrap.
11) Sterilkan di autocklaf dengan suhu 1210C sampai jarum menunjukan angka 15 psi
(atm = menunjukan tekanan di dalam autoklaf), baru kemudian mulai hitung
waktunya selama 15-20 menit. Kemudian, setelah waktu berakhir matikan api jika
menggunakan autoklaf manual dengan gas, namun jika menggunakan autoklaf listrik
cabut kabel listriknya. dibuka penutup uapnya dengan hati-hati hingga jarum pada
skala kembali ke nol dan semua uap sudah keluar. Setelah itu diamkan beberapa saat
dan buka tutupnya dengan hati-hati dengan cara melonggarkan terlebih dahulu baut-
bautnya. Keluarkan media dan dinginkan beberapa saat.
12) Baringkan botol kaca dan damkan hingga media PSA dingin dan mengeras
13) Media siap digunakan untuk di inokulasi jamur atau bakteri
Cara Penggunaan autoklaf :

1. Sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu banyaknya air dalam autoklaf. Jika air kurang dari
batas yang ditentukan, maka dapat ditambah air sampai batas tersebut. Gunakan air hasil
destilasi, untuk menghindari terbentuknya kerak dan karat.
2. Masukkan peralatan dan bahan. Jika mensterilisasi botol beretutup ulir, maka tutup harus
dikendorkan.

3. Tutup autoklaf dengan rapat lalu kencangkan baut pengaman agar tidak ada uap yang keluar
dari bibir autoklaf. Klep pengaman jangan dikencangkan terlebih dahulu.

4. Nyalakan autoklaf, diatur timer dengan waktu minimal 15 menit pada suhu 121oC.

5. Tunggu samapai air mendidih sehingga uapnya memenuhi kompartemen autoklaf dan
terdesak keluar dari klep pengaman. Kemudian klep pengaman ditutup (dikencangkan) dan
tunggu sampai selesai. Penghitungan waktu 15 dimulai sejak tekanan mencapai 2 atm.

6. Jika alarm tanda selesai berbunyi, maka tunggu tekanan dalam kompartemen turun hingga
sama dengan tekanan udara di lingkungan (jarum pada preisure gauge menunjuk ke angka
nol). Kemudian klep-klep pengaman dibuka dan keluarkan isi autoklaf dengan hati-hati.

Penjelasan:

Suhu dan tekanan tinggi yang diberikan kepada alat dan media yang disterilisasi
memberikan kekuatan yang lebih besar untuk membunuh sel dibanding dengan udara
panas. Biasanya untuk mesterilkan media digunakan suhu 1210C dan tekanan 15 lb/in2 (SI
= 103,4 Kpa) selama 15 menit.
Alasan digunakan suhu 1210C atau 249,8 0F adalah karena air mendidih pada suhu
tersebut jika digunakan tekanan 15 psi. Untuk tekanan 0 psi pada ketinggian di
permukaan laut (sea level) air mendidih pada suhu 1000C, sedangkan untuk autoklaf yang
diletakkan di ketinggian sama, menggunakan tekanan 15 psi maka air akan memdididh
pada suhu 1210C.
 Ingat !!! kejadian ini hanya berlaku untuk sea level, jika dilaboratorium terletak pada
ketinggian tertentu, maka pengaturan tekanan perlu disetting ulang. Misalnya autoklaf
diletakkan pada ketinggian 2700 kaki dpl, maka tekanan dinaikkan menjadi 20 psi supaya
tercapai suhu 1210C untuk mendidihkan air. Semua bentuk kehidupan akan mati jika
dididihkan pada suhu 1210C dan tekanan 15 psi selama 15 menit.