Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 1

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi

R. Adawiyah, Nengah D. Kuswytasari, dan Arif L. Hakim
Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Analitika Data, Institut Teknologi Sepuluh Nopember
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail: robiyatuladawiya37@gmail.com
Abstrak—Medium adalah suatu bahan yang penambahan aquades hal terebut berfungsi untuk
digunakan untuk media pertumbuhan mikroba yang melarutkan bahan yang digunakan untuk pembuatan
mengandung banyak nutrisi untuk mikroba. Sedangkan medium [3]. Sedangkan pada sterilisasi aquades digunakan
sterilisasi adalah proses pemusnahan segala macam untuk membantu proses sterilisasi alat atau medium yang
bentuk kehidupan pada suatu alat dan bahan yang akan akan digunakan dalam bentuk uapnya. Biasanya
digunakan untuk praktikum. Tujuan dari dilakukannya pemanfaatan aquades ini digunakan pada sterilisasi dengan
praktikum adalah untuk memperkenalkan cara autoklaf [4].
pembuatan medium, pembuatan larutan, serta teknik Medium berdasarkan bentuknya terdiri dari solid atau
sterilisasi. Metodologi yang dilakukan terbagi menjadi medium berbentuk padat merupakan medium yang
pembuatan medium nutrient agar, nutrient broth, potato mengandung agar dan berfungsi untuk menjaga sel agar
dextrose agar. Teknik pembuatan sumbat dan tidak berpindah tempat. Sedangkan untuk medium slant,
pembungkusan serta teknik sterilisasi. Hasil dari plate, dan deep merupakan medium yang terbuat dari agar
dilakukannya praktikum yaitu berupa medium NA, NB, padat dengan slant merupakan agar miring, dan agar padat
PDA serta dapat melakukan proses sterilisasi, membuat lainnya berupa agar datar (plate) dan agar tegak (deep) [5].
sumbat, dan teknik pembungkusan yang benar. Lalu ada medium cair atau broth merupakan medium yang
Kesimpulan dari dilakukannya praktikum ini yaitu berbentuk cair dan tidak mengandung agar. Kemudian
dilakukan pembuatan tiga jenis medium yaitu medium medium semi padat atau semisolid merupakan medium
nutrient agar, nutrient broth, dan potato dextrose agar. yang berbentuk setengah padat bertujuan agar media tidak
Pada ketiga medium tersebut memiliki bentuk, mengalami pencampuran ketika digoyangkan [5].
komposisi dasar, bahan penyusun medium, dan fungsi Medium berdasarkan komposisi dasar, terbagi menjadi
yang berbeda beda. Selain itu juga dilakukan teknik dua yaitu medium kompleks dan medium bahan kimia.
sterilisasi dengan menggunakan autoklaf dengan Medium kompleks adalah medium yang sebagian
tekanan, suhu, dan waktu penggunaan secara berturut komposisi dasarnya tidak diketahui secara pasti. Sedangkan
turut yaitu 1,5 atm, 121 oC dan selama 15-30 menit. untuk medium bahan kimia tertentu adalah medium yang
Terakhir juga dilakukan teknik pembungkusan dan seluruh komposisi dasarnya diketahui secara pasti [5].
pembuatan sumbat untuk alat alat yang akan Proses sterilisasi terdiri dari sterilisasi fisik dan
disterilisasi. sterilisasi kimia. Sterilisasi fisik dibagi lagi menjadi
dengan panas kering yaitu menggunakan oven untuk
mensterilkan alat geals pada suhu 170-180 oC selama 2-3
Kata Kunci—Medium, Mikroba, Sterilisasi. jam, lalu dengan panas lembab yaitu dengan cara uap
dialirkan pada suhu 100 oC untuk mensterilkan bahan yang
thermostabil, kemudian dengan suhu tinggi yaitu
I. PENDAHULUAN menggunakan autoklaf pada tekanan 1,5 atm dan suhu

A
121oC untuk mensterilkan medium dan alat injeksi [5].
gar atau dapat disebut juga agar agar adalah salah
Radiasi adalah sterilisasi fisik dengan menggunakan sinar
satu produk dari makroalgae dan struktukrnya
X, sinar gamma, UV dan sebagainya. Filtrasi adalah
ditentukan oleh fraksi yang mempunyai kemapuan untuk
sterilisasi fisik dengan menggunakan bahan yang dapat
membentuk gel terbesar yaitu agarose, agar juga bersifat
menahan mikroba untuk dipisahkan secara fisika [5].
tidak larut dalam air dingin, tetapi dapat larut pada air
Sterilisasi kimia adalah proses sterilisasi dengan cara
mendidih [1]. Fungsi dari agar sendiri yaitu digunakan
memaparkan alat dan bahan yang akan disterilisasi dengan
dalam bidang kedokteran gigi dalam tujuan pembuatan
menggunakan senyawa kimia. Hal tersebut bertujuan agar
obat obatan, agar juga berfungsi untuk mencegah
alat atau bahan yang terdapat mikroorganismenya untuk
terjadinya kerusakan ikan yang telah dikalengkan ketika
membunuh dan dihentikan pertumbuhannya tanpa merusak
diangkut [1]. Selain itu yang paling penting agar juga
bahan dan alat yang disterilisasi [5].
berfungsi untuk pembuatan medium padat kultur bakteri
atau media umum untuk menumbuhkan berbagai bakteri,
yang disebut dengan nutrient agar [2]. Komposisi dari agar II. METODOLOGI
itu sendiri yaitu terdiri dari agarose dan agaropektin.
Kandungan agarose umumnya 55-66% dan sisanya yaitu A. Waktu dan Tempat
45-54% mengandung agaropektin, tergantung pada Praktikum pembuatan medium dan teknik sterilisasi ini
makroalgae yang digunakan untuk menghasilkan agar [1]. dilakukan di Laboratorium Dasar 2 Biologi Institut
Pada pembuatan medium ditambahkan dengan Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya pada tanggal 27
Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061
September 2022 pukul 09.15 WIB.
B. Alat dan Bahan
Alat dan bahan yang digunakan pada praktikum
pembuatan medium dan teknik sterilisasi ini yaitu pada alat
terdiri dari Erlenmeyer 250 ml dan 500 ml, pemanas listrik
dan bunsen, gelas ukur 100 ml dan 250 ml, pipet ukur 1 ml
dan 10 ml, neraca analitik, batang pengaduk, tabung reaksi
dan rak tabung, autoklaf dan jarum inokulasi. Pada bahan
yang dibutuhkan terdiri dari aquades, NaCl, agar, ekstrak
daging, pepton, ekstrak ragi, glukosa, kentang, kapas, dan
kertas.
C.Cara Kerja
Cara kerja dari praktikum pembuatan medium dan
teknik sterilisasi adalah sebagai berikut yang pertama yaitu
pembuatan medium Nutrient Agar yaitu yang pertama 0,5
g pepton, 0,5 g NaCl, 0,2 g ekstrak ragi, 0,1 g ekstrak
daging dan 100 ml aquades disiapkan dan digunakan
neraca analitik. Kemudian semua bahan medium satu per
satu dilarutkan ke dalam 75 ml aquades pada Erlenmeyer
250 ml, diaduk dan dipanaskan hingga semua melarut.
Setelah itu ditambahkan sisa aquades hingga volume
medium mencapai 100 ml. Medium kaldu nutrisi cair
tesebut ditambahkan 2 g agar, diaduk sambal dipanaskan
hingga agar larut (warna medium jernih). Selanjutnya 10
ml medium dituangkan masing masing ke dalam 10 tabung
reaksi bersih dan ditutup dengan kapas atau kertas lalu
diikat menggunakan karet. Terakhir medium siap
disterilkan dengan autoklaf.
Pada cara kerja pembuatan medium Nutrient Broth yaitu
yang pertama 0,5 g pepton, 0,5 g NaCl, 0,2 g ekstrak ragi,
0,1 g ekstrak daging dan 100 ml aquades disiapkan dan
digunakan neraca analitik. Kemudian semua bahan
medium satu per satu dilarutkan ke dalam 75 ml aquades
pada Erlenmeyer 250 ml, diaduk dan dipanaskan hingga
semua melarut. Setelah itu ditambahkan sisa aquades
hingga volume medium mencapai 100 ml. Selanjutnya 10
ml medium dituangkan masing masing ke dalam 10 tabung
reaksi bersih dan ditutup dengan kapas atau kertas lalu
diikat menggunakan karet. Terakhir medium siap
disterilkan dengan autoklaf.
Pada cara kerja pembuatan medium Potatotes Dextrose
Agar yaitu yang pertama 25 g kentang yang telah bersih
dan dipotong potong dadu, 2 g dextrose, 2 agar, dan
aquades 100 ml disiapkan. Kentang dalam 100 ml aquades
direbus selama 2 jam sejak dididihkan, volume aquades
dijaga supaya tetap. Air rebusan kentang diambil dan
disaring potongan potongan kentangnya dengan lap bersih
atau kain kasa. Air rebusan kentang ditambahkan dengan
dextrose, diaduk hingga merata. Kemudian ditambahkan 2
g agar, sambal diaduk dan dipanaskan hingga agar larut
sempurna dan medium berwarna bening. Selanjutnya 10 ml
medium dituangkan masing masing ke dalam 10 tabung
reaksi bersih dan ditutup dengan kapas atau kertas lalu
diikat menggunakan karet. Terakhir medium siap
disterilkan dengan autoklaf.
Pembuatan sumbat dan teknik pembungkusan yaitu
dengan cara pertama cara pembuatan sumbat sebagai
berikut disiapkan kasa dan kapas lemak sebanyak yang
diinginkan, diletakkan kapas lemak diatas kasa, dilakukan
2
pembungkusan, diberi solasi bagian atasnya, sumbat
diletakkan pada lubang Erlenmeyer dan dilapisi plastic
wrap. Sedangka untuk teknik pembungkusan yaitu dengan
cara disiapkan 2 lembar kertas yellow page, dilipat kedua
kertas pada salah satu sisinya, diletakkan tabung reaksi
pada ujung kertas dengan posisi miring dan digulung
hingga ujung kertas lainnya, dilipat sisa kertas di kanan dan
kiri sesuai ukuran tabung reaksi dan tabung reaksi telah
selesai dibungkus.
Sterilisasi dengan autoklaf yaitu dengan cara yang
pertama bagian dasar autoklaf diisi dengan aquades hingga
batas tertentu. Kedua, bahan bahan yang disterilkan,
dimasukkan dengan kapasitas kurang lebih 60% dari
keranjang. Ketiga, autoklaf ditutup dengan rapat, sekrup
diputar dengan diagonal untuk dikunci. Autoklaf
dihubungkan dengan sumber listrik dan ditekan tombol on.
Katup pembuangan air dan katup pembuangan tekanan
udara ditutup, kemudian timer diputar selama 15-20 menit,
bila lampu hijau nyala maka proses sterilisasi dimulai. Bila
sterilisasi telah selesai sesuai dengan waktu yang telah
ditetapkan, akan terdengar bunyi alarm. Tombol
dikembalikan ke posisi off dan hubungan alat dengan
sumber arus listrik diputus. Ditunggu sampai tekanan udara
autoklaf mencapai 0 kemudian sekrup pengunci tutup
autoklaf dibuka. Alat dan bahan yang telah steril
dikeluarkan dan air yang ada di tabung autoklaf dibuang.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan sumbat dan teknik pembungkusan
Pada pembuatan sumbat berfungsi untuk menutup
lubang atau mulut pada tabung reaksi, erlenmeyer, atau alat
gelas lain. Pembuatan sumbat dapat dengan cara
membungkus kapas lemak kedalam kasa steril dan diisolasi
untuk mengunci kapas lemaknya serta setelah dipakaikan
ke mulut alat gelas, digunakan plastic wrap untuk mncegah
terjadinya kontaminasi. Kemudian pada teknik
pembungkusan alat dan bahan yang akan disterilisasi yaitu
menggunakan kertas yellow page. Alat yang dipakai
contohnya seperti cawan petri, tabung reaksi, pipet ukur
dan alat gelas lainnya. Penggunaan yellow page sebagai
pembungkus karena memiliki kertas ini memiliki tekstur
yang tebal dan kaku serta dianjurkan dalam penggunaan
autoklaf [6].
Pada pembuatan sumbat dan teknik pembungkusan
diperlukan alat dan bahan berupa kertas yellow page yang
berfungsi sebagai pembungkus alat yang akan disterilkan
karena bentuknya yang kaku dan mempunyai ketebalan
yang tebal jika dibandingkan dengan kertas lain [6].
Tabung reaksi yang berfungsi sebagai tempat untuk
mereaksikan larutan atau bahan kimia lain serta bisa juga
untuk mengembangbikkan mikroorganisme dalam media
cair [7]. Cawan petri yang berfungsi sebagai wadah untuk
perkembangbiakan dan menampung mikroorganisme serta
bisa juga untuk kultur [8]. Pipet ukur berfungsi sebagai alat
untuk mengambil dan memindahkan larutan namun dengan
ukuran yang lebih presisi dari pipet lainnya [9]. Kasa
berfungsi sebagai pembungkus kapas lemak. Kapas lemak
berfungsi sebagai bahan membuat sumbat. Isolasi berfungsi
untuk mengunci kapas lemak didalam kasa. Plastic wrap
berfungsi untuk menutup mulut tabung yang sudah diberi
sumbat untuk mencegah kontaminasi.
Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061
B. Pembuatan Medium NA
Pada pembuatan medium Nutrient Agar dapat
dilakukan dengan cara yang pertama yaitu dengan
menggunakan neraca analitik disiapkan 0,5 g pepton, 0,5 g
NaCl, 0,2 g ekstrak ragi, 0,1 g ekstrak daging dan 100 ml
aquades hal ini berfungsi untuk menimbang bahan yang
akan digunakan untuk membuat medium kaldu nutrisi [10].
Masukkan semua bahan kedalam aquades, diaduk dan
dipanaskan serta ditmbahkan aquades lagi hingga 100 ml,
hal ini berfungsi untuk melarutkan bahan bahan untuk
membuat medium kaldu nutrisi dengan aquades [3].
Kemudian medium kaldu nutrisi cair tersebut ditambahkan
agar 2 g, diaduk dan dipanaskan hingga larut, hal ini
berfungsi untuk membuat medium kaldu nutrisi menjadi
bentuk padat seperti agar [1]. Lalu masukkan kedalam
autoklaf, hal ini berfungsi untuk mensterilkan medium
NA[11].
Pada pembuatan medium NA ini dibutuhkan alat bahan
berupa neraca analitik yang berfungsi sebagai alat untuk
meghitung massa bahan yang akan digunakan untuk
praktikum [10]. Pepton, NaCl, ekstrak ragi, ekstrak daging
yaitu bahan yang berfungsi sebagai salah satu pembuatan
medium NA [5]. Ekstrak daging dan ekstrak ragi berfungsi
sebagai penyedia vitamin, karbohidrat, nitrogen, dan garam
pada medium [5]. Aquades berfungsi sebagai pelarut bahan
yang digunakan dalam pembuatan medium NA [3]. Agar
yang berfungsi untuk memadatkan medium cair menjadi
medium padat yaitu medium NA [1]. Autoklaf merupakan
alat instrument yang berfungsi untuk sterilisasi medium NA
[11].
Komposisi dari medium NA yaitu terdiri dari pepton
yang merupakan hasil hidrolisis dari protein berupa
proteosa, polipeptida, dan asam amino [14]. NaCl yang
tersusun dari natrium dan klorin. Ekstrak ragi yang
tersusun dari protein dan asam amino [12]. NaCl yang
terdiri dari unsur natrium dan klorin. Ekstrak daging yang
tersusun dari asam amino, karbohidrat, vitamin, lemak, dan
unsur mineral seperti zat besi, fosfor, seng dan lain lain
[13]. Agar yang tersusun dari agarose dan agaropektin [1].
Dan yang terakhir aquades yang tersusun dari unsur
hydrogen dan oksigen.
Medium Nutrient Agar temasuk ke dalam medium
komposisi dasar jenis medium kompleks, karena terbuat
dari bahan alamiah yang komposisinya tidak diketahui
secara pasti. Fungsi dari medium Nutrient Agar yaitu
sebagai media untuk menumbuhkan dan mengembang
biakkan bakteri dan mengandung banyak nutrisi untuk
pertumbuhan bakteri [15].
C.Pembuatan Medium NB
Pada pembuatan medium Nutrient Broth dapat
dilakukan dengan cara yang pertama yaitu dengan
menggunakan neraca analitik disiapkan 0,5 g pepton, 0,5 g
NaCl, 0,2 g ekstrak ragi, 0,1 g ekstrak daging dan 100 ml
aquades hal ini berfungsi untuk menimbang bahan yang
akan digunakan untuk membuat medium kaldu nutrisi [10].
Masukkan semua bahan kedalam aquades, diaduk dan
dipanaskan serta ditmbahkan aquades lagi hingga 100 ml,
hal ini berfungsi untuk melarutkan bahan bahan untuk
membuat medium kaldu nutrisi dengan aquades [3]. Lalu
masukkan kedalam autoklaf, hal ini berfungsi untuk
3
mensterilkan medium NB[11].
Pada pembuatan medium NB ini dibutuhkan alat bahan
berupa neraca analitik yang berfungsi sebagai alat untuk
meghitung massa bahan yang akan digunakan untuk
praktikum [10]. Pepton, NaCl, ekstrak ragi, ekstrak daging
yaitu bahan yang berfungsi sebagai salah satu pembuatan
medium NB [5]. Ekstrak daging dan ekstrak ragi berfungsi
sebagai penyedia vitamin, karbohidrat, nitrogen, dan garam
pada medium [5]. Aquades berfungsi sebagai pelarut bahan
yang digunakan dalam pembuatan medium NB [3].
Autoklaf merupakan alat instrument yang berfungsi untuk
sterilisasi medium NB [11].
Komposisi dari medium NB yaitu terdiri dari pepton
yang merupakan hasil hidrolisis dari protein berupa
proteosa, polipeptida, dan asam amino [14]. NaCl yang
terdiri dari unsur natrium dan klorin. Ekstrak daging yang
tersusun dari asam amino, karbohidrat, vitamin, lemak, dan
unsur mineral seperti zat besi, fosfor, seng dan lain lain
[13]. Dan yang terakhir aquades yang tersusun dari unsur
hydrogen dan oksigen.
Medium Nutrient Broth temasuk ke dalam medium
komposisi dasar jenis medium kompleks, karena terbuat
dari bahan alamiah yang komposisinya tidak diketahui
secara pasti. Fungsi dari medium Nutrient Broth yaitu
sebagai media untuk menumbuhkan dan mengembang
biakkan bakteri dan mengandung banyak nutrisi untuk
pertumbuhan bakteri [15].
D.Pembuatan Medium PDA
Pada pembuatan medium Potato Dextrosa Agar dapat
dilakukan dengan cara yang pertama yaitu, air rebusan
kentang yang sudah direbus dan disaring ditambahkan
dengan dextrose, hal ini berfungsi untuk pembuatan
medium PDA yang memberikan nutrisi berupa sumber gula
dan energy [16]. Kemudian ditambahkan dengan agar
sambil diaduk dan dipanaskan, hal ini berfungsi untuk
membuat medium kaldu nutrisi menjadi bentuk padat
seperti agar [1]. Lalu tabung disumbat dengan kapas lemak,
hal ini bertujuan agar medium tidak mengalami penguapan
saat dimasukkan dalam autoklaf. Terakhir masukkan
kedalam autoklaf, hal ini berfungsi untuk mensterilkan
medium PDA [11].
Pada pembuatan medium PDA ini dibutuhkan alat
bahan berupa kentang, dextrosa, agar yaitu bahan yang
berfungsi sebagai salah satu pembuatan medium PDA [5].
Kentang berfungsi sebagai bahan untuk sumber nutrisi
berupa karbohidrat, dextrosa berfungsi untuk sumber gula
dan energy pada medium PDA [16]. Aquades berfungsi
sebagai pelarut bahan yang digunakan dalam pembuatan
medium PDA [3]. Agar yang berfungsi untuk memadatkan
medium cair menjadi medium padat yaitu medium PDA
[1]. Autoklaf merupakan alat instrument yang berfungsi
untuk sterilisasi medium PDA [11].
Komposisi dari medium PDA yaitu terdiri dari kentang
yang mengandung protein, karbohidrat, vitamin A, B
kompleks, C, asam folat, mineral karotenoid, dan polifenol
[17]. Dextrosa yang terdiri dari gula sederhana identic
dengan glukosa [16]. Agar yang tersusun dari agarose dan
agaropektin [1]. Dan yang terakhir aquades yang tersusun
dari unsur hydrogen dan oksigen.
Medium Potato Dextrosa Agar temasuk ke dalam
medium komposisi dasar jenis medium kompleks, karena
Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 4

terbuat dari bahan alamiah yang komposisinya tidak biasanya destruksi dilakukan setelah percobaan agar tidak
diketahui secara pasti. Fungsi dari medium Potato berbahaya, serta waktu yang dibutuhkan untuk destruksi
Dextrosa Agar yaitu sebagai media untuk menumbuhkan relatif lebih cepat daripada sterilisasi [22].
dan mengembang biakkan jamur atau fungi dan
mengandung banyak nutrisi untuk pertumbuhan jamur atau IV. KESIMPULAN
fungi [15].
Berdasarkan praktikum pembuatan medium dan teknik
E. Tabel Perbandingan sterilisasi yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan
Pembeda NA NB PDA bahwa pada praktikum ini dilakukan pembuatan tiga jenis
Gambar medium yaitu medium nutrient agar, nutrient broth, dan
Medium potato dextrose agar. Pada ketiga medium tersebut
memiliki bentuk, komposisi dasar, bahan penyusun
medium, dan fungsi yang berbeda beda. Selain itu juga
Gambar. 2 Gambar. 3 dilakukan teknik sterilisasi dengan menggunakan autoklaf
Gambar. 1 NB [20] PDA [19] dengan tekanan, suhu, dan waktu penggunaan secara
NA [18] berturut turut yaitu 1,5 atm, 121 oC dan selama 15-30 menit.
Medium Solid Liquid Solid Terakhir juga dilakukan teknik pembungkusan dan
berdasarkan pembuatan sumbat untuk alat alat yang akan disterilisasi.
bentuknya
Medium Kompleks Kompleks Kompleks
berdasarka DAFTAR PUSTAKA
n komposisi
dasar [1] A. Rasyid, "BEBERAPA CATATAN TENTANG
Medium Umum Pengaya Umum AGAR," Oseana, vol. 29, no. 2, pp. 1-7, 2004.
berdasarkan [2] M. Uthayasooriyan, S. Pathmanathan, N. Ravimannan
komposisi and S. Sathyaruban, "Formulation of alternative
dan fungsi culture media for bacterial and fungal growth," Der
Komposisi Aquades, Aquades, Kentang, Pharmacia Lettre, vol. 8, no. 1, pp. 431-436, 2016.
bahan agar, pepton, pepton, NaCl, dextrose, [3] H. Khotimah, E. W. Anggraeni and A. Setyaningsih,
medium NaCl, ekstrak ekstrak ragi, agar, dan "KARAKTERISASI HASIL PENGOLAHAN AIR
ragi, ekstrak dan ekstrak aquades MENGGUNAKAN ALAT DESTILASI," Jurnal
daging daging Chemurgy, vol. 1, no. 2, pp. 34-39, 2017.
Fungsi Pertumbuhan Pertumbuhan Pertumbuha
[4] L. Winarsih, Aprira, D. Susanto and Edwar, "Mencari
medium dan dan n dan
Media Pemanas Autoclave yang Murah dan Bersih,"
pengembang pengembang perkembang
INDONESIAN JOURNAL OF LABORATORY, vol. 3,
biakkan biakkan biakan
no. 1, pp. 34-38, 2020.
bakteri bakteri jamur
[5] Hafsan, Mikrobiologi Analitik, Makassar: Alauddin
University Press, 2014.
F. Teknik sterilisasi [6] I. Istini, "Pemanfaatan Plastik Polipropilen Standing
Sterilisasi fisik dengan panas lembab yaitu biasanya Pouch Sebagai Salah Satu Kemasan Sterilisasi
menggunakan konsep pemanasan dengan tekanan uap 1,5 Peralatan Laboratorium," Indonesian Journal of
atm suhu 121oC selama 15 menit dan biasanya konsep Laboratory, vol. 2, no. 3, p. 41, 2020.
sterilisasi ini terdapat pada autoklaf [21]. Bagian bagian [7] R. C. Eliyarti and Zakirman, "Deskripsi Pengetahuan
dan fungsinya pada autoklaf yaitu ada tutup autoklaf yang Awal Alat Praktikum Materi Koloid dalam
berfungsi sebagai penutup autoklaf, katup pengaman untuk Perkuliahan Kimia Dasar Mahasiswa Teknik," Jurnal
mengeluarkan uap, pengukur tekanan atau barometer, Pendidikan Kimia dan Ilmu Kimia, vol. 3, no. 1, pp.
tombol on off untuk menyalakan dan mematikan autoklaf, 14-25, 2020.
thermometer untuk pengukur suhu, serta keranjang untuk [8] R. C. Dubey, A Textbook of Biotechnology for
tempat alat dan bahan yang disterilisasi [4]. Cara University and Collage Student in India and Abroad,
menggunakan autoklaf untuk sterilisasi dan destruksi yaitu New Delhi: Chand and Company Limited, 2019.
tutup autoklaf dibuka, keranjang dikeluarkan, autoklaf diisi [9] R. N. Rohmatningsih, "Perbandingan Waktu
aquades sampai dengan batas yang ada pada autoklaf, Pengukuran Pipet Ukur Glas Firn Pi Pump,"
masukkan alat dan bahan yang akan disterilisasi ke Indonesian Journal Of Laboratory, vol. 4, no. 1, pp.
keranjang. Lalu keranjang dimasukkan dalam autoklaf dan 1-7, 2021.
autoklaf ditutup atur suhu, tekanan, dan timer sesuai [10] Wardiyah, Praktikum Kimia Dasar, Jakarta Selatan:
dengan prinsip autoklaf dan jika sudah 15 menit tunggu KEMENKES RI, 2016.
dulu sampai suhunya 0oC. Selanjutnya matikan autoklaf
[11] R. Andriani, "Pengenalan Alat Alat Laboratorium
dengan tombol off dan ambil alat dan bahan yang tadi
Mikrobiologi Untuk Mengatasi Keselamatan Kerja
disterilisasi. Fungsi aquades yaitu untuk menghasilkan uap
dan Keberhasilan Praktikum," Jurnal Mikrobiologi,
pada penggunaan autoklaf. Sedangkan untuk destruksi
vol. 1, no. 1, pp. 1-7, 2016.
dapat disebut juga sterilisasi kotor untuk menghancurkan
bakteri hasil penelitian yang tidak digunakan kembali, [12] T. Maryana, D. Silsia and Budiyanto, "PENGARUH
KONSENTRASI DAN JENIS RAGI PADA
Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 5

PRODUKSI BIOETANOL DARI AMPAS TEBU," Jawab: aquades digunakan dalam pembuatan medium
Jurnal Agroindustri, vol. 10, no. 1, pp. 47-46, 2020. sebagai pelarut bahan bahan penyusun medium yang aka
[13] S. Malyena and E. R. Mawarnis, "Kajian Analisis dibuat tersebut [4].
Konsumsi Daging Sapi dan Daging Babi Ditinjau
Kajian Analisis Konsumsi Daging Sapi dan Daging
Babi Ditinjau," Jurnal Pendidikan Tambusai, vol. 6, DAFTAR PUSTAKA
no. 1, pp. 3131-3136, 2022.
[14] S. Gupte, Mikrobiologi Dasar, Jakarta: Binarupa [1] I. Nurrobifahmi, Y. Anas, Setiyadi and Ishak,
Aksara, 1990. "Pengaruh Metode Sterilisasi Radiasi Sinar Gamma
[15] J. G. Cappuccino and S. Natali, Manual Laboratorium Co60 Dan Autoklaf Terhadap Bahan Pembawa,
Biologi, Jakarta: EGC, 2013. Viabilitas Spora Gigaspora Margarita Dan
Ketersediaan Fe, Mn Dan Zn," Jurnal Tanah dan Iklim,
[16] A. Octavia and S. Wantini, "Perbandingan
vol. 41, no. 1, 2017.
Pertumbuhan Jamur Aspergillus flavus Pada Media
PDA (Potato Dextrose Agar ) dan Media Alternatif [2] R. Andriani, "Pengenalan Alat Alat Laboratorium
dari Singkong (Manihot esculenta Crantz)," Jurnal Mikrobiologi Untuk Mengatasi Keselamatan Kerja dan
Analis Kesehatan, vol. 6, no. 2, pp. 625-632, 2017. Keberhasilan Praktikum," Jurnal Mikrobiologi, vol. 1,
no. 1, pp. 1-7, 2016.
[17] Judiono and Y. Widiastuti, Ilmu Pangan Aspek Gizi
Pangan Indonesia, Yogyakarta: Ladyamayu Pinasti, [3] J. G. Cappuccino and S. Natali, Manual Laboratorium
2019. Biologi, Jakarta: EGC, 2013.
[18] P. Jadhav, M. Sonne , S. Kadam, K. Patil, [4] H. Khotimah, E. W. Anggraeni and A. Setyaningsih,
Dahigaonkar and J. K. Oberoi, "Formulation of Cost "KARAKTERISASI HASIL PENGOLAHAN AIR
Effective Alternative Bacterial Culture Media Using MENGGUNAKAN ALAT DESTILASI," Jurnal
Fruit and Vegetables wastle," International Journal Chemurgy, vol. 1, no. 2, pp. 34-39, 2017.
ofCurrent Research and Review, vol. 10, no. 2, pp. 6-
16, 2018.
[19] G. W. Griffith, "Copper deficiency in potato dextrose
agar causes reduced pigmentation in cultures of
various fungi," FEMS Microbiology Letters, vol. 276,
no. 2, pp. 165-171, 2007.
[20] Z. A. Alkhfaji, "Bee collected pollen load (BCPL) as
alternative culture media for bacterial and yeast
growth," Journal of Pharmaceutical Sciences and
Research, vol. 10, no. 4, pp. 830-836, 2018.
[21] I. Nurrobifahmi, Y. Anas, Setiyadi and Ishak,
"Pengaruh Metode Sterilisasi Radiasi Sinar Gamma
Co60 Dan Autoklaf Terhadap Bahan Pembawa,
Viabilitas Spora Gigaspora Margarita Dan
Ketersediaan Fe, Mn Dan Zn," Jurnal Tanah dan
Iklim, vol. 41, no. 1, 2017.
[22] I. Rochmawati, Mikrobiologi Dasar dan Terapan,
Jakarta: Gramedia Pustaka Utama, 2016.

DISKUSI
1. Mengapa bagian dasar autoklaf diisi dengan aquades?
Jawab: untuk mengahsilkan uap yang akan digunakan pada
proses sterilisasi alat dan bahan pada autoklaf [1].

2. Bagaimanakah prinsip kerja autoklaf?

Jawab: prinsip kerja autoklaf yaitu dengan masukkan
aquades dan alat yang akan disterilkan kemudian diatur
suhu 121 derajat celcius dan tekanan 5 atm selama 15
menit [2].

3. Mengapa setiap penumbuhan mikroba memerlukan

medium?
Jawab: agar mikroba mudah diamati dan mikroba yang
akan diteliti tidak mati, karena medium merupakan sumber
nutrisi untuk mikroba yang menjaga agar mikroba dapat
tumbuh dan berkembang [3].

4. Mengapa dalam pembuatan medium digunakan air

aquades?
Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 6

LAMPIRAN

No. Dokumentasi Perlakuan Fungsi Perlakuan

Pembuatan Sumbat

1 Siapkan kasa steril Sebagai pembungkus

kapas

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

2 Siapkan kapas lemak Sebagai isi sumbat karena

sebanyak yang memiliki tekstur yang
diinginkan padat

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

3 Letakkan kapas lemak Untuk dipakai sebagai isi

diatas kasa dari sumbat

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 7

4 Dilakukan Untuk membungkus kapas

pembungkusan supaya menjadi lebih
rapat

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

5 Diselotip bagian atasnya Untuk mengunci kapas

lemak didalam kasa

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

6 Sumbat diletakkan pada Untuk menyumbat

lubang erlenmeyer erlenmeyer

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

7 Sumbat pada lubang Untuk mencegah

erlenmeyer dilapisi kontaminasi
dengan plastic wrap

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 8

8 Sumbat siap digunakan Tabung telah ditutup

dengan rapat dan tercegah
dari kontaminasi

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

Teknik Pembungkusan

1 Siapkan 2 lembar kertas Sebagai pembungkus alat

yellow page

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

2 Lipat kedua kertas pada Untuk menggabungkan

salah satu sisinya kedua kertas

(Dokumentasi Pribadi, 2022)

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 9

3 Letakkan tabung reaksi Agar semua bagian

pada ujung kertas dengan tabung reaksi dapat
posisi miring dan gulung tertutup

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

4 Gulung hingga ujung Supaya semua kertas

kertas lainnya terlipat dan rapat untuk
menutup tabung

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

5 Lipat sisa kertas di kanan Agar sisi atas dan bawah

dan kiri sesuai ukuran tabung reaksi tertutup
tabung reaksi

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 10

6 Tabung reaksi telah Dapat mencegah tabung

selesai dibungkus dari terkena uap air saat
dimasukkan pada autoklaf

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium NA

1 Bubuk NB ditimbang Penimbangan

menggunakan neraca menggunakan neraca
analitik hingga analitik untuk
didapatkan berat 1,3 mendapatkan hasil
gram timbangan yang akurat.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

2 Agar batang ditimbang Penimbangan

menggunakan neraca menggunakan neraca
analitik hingga analitik untuk
mendapatkan 1,5 gram mendapatkan hasil
timbangan yang akurat.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 11

3 Bubuk NB yang Aquades untuk

sebelumnya sudah melarutkan bubuk NB,
dimasukkan ke dalam agar menjadi larutan.
erlenmeyer kemudian
disiapkan sebanyak 100
ml aquades

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

4 Erlenmeyer dikocok Adapun tujuan dari

perlakuan tersebut ialah
untuk meng-homogenkan
aquades dengan bubuk
NB

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

5 Agar batang dihancurkan Bertujuan untuk agar

menjadi kecil. batang dapat dimasukkan
ke dalam erlenmeyer.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

6 Erlenmeyer disumbat dan Adapun perlakuan

dilapisi dengan plastic tersebut bertujuan untuk
wrap menyumbat erlenmeyer
dan juga mencegah dari
kontaminasi.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 12

Pembuatan Medium NB

1. Bubuk NB ditimbang Penimbangan

menggunakan neraca menggunakan neraca
analitik hingga analitik untuk
didapatkan berat 1,3 mendapatkan hasil
gram timbangan yang akurat.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

2. Bubuk NB yang Aquades untuk

sebelumnya sudah melarutkan bubuk NB,
dimasukkan ke dalam agar menjadi larutan.
erlenmeyer kemudian
disiapkan sebanyak 100
ml aquades

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

3. Erlenmeyer dikocok Adapun tujuan dari

perlakuan tersebut ialah
untuk meng-homogenkan
aquades dengan bubuk
NB

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

3. Erlenmeyer disumbat dan Adapun perlakuan

dilapisi dengan plastic tersebut bertujuan untuk
wrap menyumbat erlenmeyer
dan juga mencegah dari
kontaminasi.
Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 13

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium PDA

1 Dextrosa ditimbang Penimbangan

menggunakan neraca menggunakan neraca
analitik hingga analitik untuk
didapatkan berat 4 gram mendapatkan hasil
timbangan yang akurat.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

2 Agar batang ditimbang Penimbangan

menggunakan neraca menggunakan neraca
analitik hingga analitik untuk
mendapatkan 1,5 gram mendapatkan hasil
timbangan yang akurat.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

3 Agar batang dihancurkan Bertujuan untuk agar

menjadi kecil dan batang dapat dimasukkan
dimasukkan ke dalam ke dalam erlenmeyer.
erlenmeyer.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 14

4 Air rebusan kentang Air rebusan kentang

dimasukkan ke dalam mempunyai fungsi
erlenmeyer yang berisi sebagai pelarut.
agar batang dan dextrosa.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

5 Erlenmeyer disumbat dan Adapun perlakuan

dilapisi dengan plastic tersebut bertujuan untuk
wrap menyumbat erlenmeyer
dan juga mencegah dari
kontaminasi.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Teknik Sterilisasi

1 Masukkan aquades ke Aquades digunakan

dalam autoklaf sebagai air yang akan
menghancurkan
mikroorganisme dalam
wujud uap air

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 15

2 Tabung erlenmeyer yang Supaya tabung tidak

akan dibersihkan ditata bersentuhan langsung
pada keranjang autoklaf dengan dasar autoklaf dan
kemudian dimasukkan uap air dapat masuk
pada autoklaf kedalam tabung

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

3 Putar pengatur timer Untuk mengatur lama

untuk mengatur waktu waktu proses sterilisasi
proses sterilisasi berlangsung

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

4 Setelah timer diatur, ditunggu hingga tekanan

autoklaf ditunggu hingga 0 agar saat dibuka tidak
berbunyi dan setelah menimbulkan panas sisa
berbunyi, autoklaf sterilisasi.
dibiarkan hingga
tekanannya mencapai 0
dan tutup pada autoklaf
dibuka untuk
mengeluarkan benda
yang telah disterilkan.

(Dokumentasi Pribadi, 2022).

Pembuatan Medium dan Teknik Sterilisasi_7_5005211061 16