Uji ELISpot menggunakan teknik uji imunosorben enzim enzyme-linked enzyme (ELISA).

Salah satu antibodi monoklonal atau poliklonal yang spesifik untuk analit yang dipilih
dilapisi terlebih dahulu pada lempeng biru belakang PVDF (polyvinylidene difluoride). Sel
yang distimulasi dengan tepat disaring ke dalam sumur dan lempeng mikro ditempatkan ke
dalam inkubator CO2 37 C yang lembab untuk jangka waktu tertentu. Selama periode
inkubasi ini, antibodi immobilisasi, di sekitar sel sekretori, mengikat analit yang disekresikan.
Setelah membasuh sel dan zat tak terikat, antibodi poliklonal biotinilasi yang spesifik untuk
analit yang dipilih ditambahkan ke sumur. Setelah dicuci untuk menghilangkan antibodi
biotinilasi yang tidak terikat, alkali-fosfatase yang dikonjugasikan ke streptavidin
ditambahkan. Enzim tak terikat kemudian dikeluarkan dengan cara mencuci dan larutan
substrat (BCIP / NBT) ditambahkan. Bentuk presipitat berwarna biru-hitam dan tampak
seperti bintik-bintik di situs lokalisasi sitokin, dengan masing-masing tempat mewakili sel
yang mensekresikan analit. Bintik-bintik tersebut dapat dihitung dengan sistem pembaca
ELISpot otomatis atau secara manual, dengan menggunakan stereomikroskop.

ELISPOT dilakukan dengan menggunakan membran PVDF atau nitrocellulose 96-well plate
yang dilapisi dengan antibodi yang spesifik pada protein yang disekresikan. Sel ditambahkan
ke piring dan menempel pada membran yang dilapisi. Sel kemudian dirangsang dan protein
yang disekresikan mengikat antibodi. Selanjutnya, antibodi deteksi ditambahkan yang
mengikat secara khusus protein terikat.

Kompleks antibodi yang dihasilkan dapat dideteksi melalui tindakan enzimatik untuk
menghasilkan substrat berwarna atau dengan label neon. Keuntungan menggunakan
fluoresensi adalah kemampuan untuk mengidentifikasi lebih dari satu protein yang
disekresikan pada satu waktu.

Membran dapat dianalisis dengan menghitung secara manual bintik atau dengan pembaca
otomatis yang dirancang untuk tujuan ini. Setiap sel yang disekresi muncul sebagai tempat
warna atau fluoresensi, jadi ini adalah metode kuantitatif untuk mengevaluasi sekresi protein

Uji ELISPOT sitokin didasarkan pada teknik imunosorben enzim-linked dan dirancang untuk
menghitung sel-sel yang sitokin; Ini sangat sensitif dan karena itu berguna dalam mendeteksi
sel sitokin frekuensi rendah (hingga 1 dalam 300.000). Sitokin yang dilepaskan sebagai
respons terhadap antigen dapat dipetakan ke sel tunggal sehingga frekuensi rekanan sel T
dapat dihitung. Khususnya, informasi yang diperoleh dari tes ELISPOT bersifat kuantitatif
dan kualitatif, karena memberikan indikasi jenis respon sitokin yang telah ditimbulkan.
Aplikasi utama uji ELISPOT adalah dalam memantau respon imun pada manusia dan hewan.

IGRA dirancang untuk mendeteksi respons imun terhadap antigen M. tuberkulosis spesifik,
yang tidak terdapat pada BCG atau beberapa mikobakteri nontuberculous tertentu. Dua tes
tersedia secara komersial; Satu didasarkan pada Elispot (T-SPOT.TB, Oxford Immunotec,
Inggris) dan yang lainnya mengenai teknik uji imunosorbent enzyme-linked (ELISA)
(QuantiFERON-TB Gold-in-Tube, Cellestis, Australia, QFT-GIT) . Kedua tes didasarkan
pada prinsip bahwa sel T dari individu yang telah memperoleh infeksi TBC akan merespons
dengan mensekresikan cytokine interferon-gamma (IFN-) saat di restimulasi dengan antigen
M. tuberkulosis [21]. Untuk menghindari reaktivitas silang, tes ini menggunakan antigen
yang dikodekan di wilayah perbedaan 1 (RD1), sebagian dari genom Mycobacterium
tuberculosis yang tidak ada dari genom BCG dan banyak NTM [21]. QFT-GIT menggunakan
keseluruhan darah pasien dan didasarkan pada pengukuran ELISA IFN- yang dihasilkan
sebagai tanggapan terhadap tiga M. antigen tuberkulosis (ESAT-6, CFP-10, dan TB7.7). Tes
kedua, T-SPOT.TB, didasarkan pada pengukuran immunospot enzim terkait jumlah sel
mononuklear perifer yang menghasilkan IFN- setelah stimulasi dengan dua antigen
mikobakteri: ESAT-6 dan CFP-10

Tes kulit tuberkulin (juga disebut tes tuberkulin Mantoux) dilakukan untuk mengetahui
apakah Anda pernah terkena TBC (TBC). Tes ini dilakukan dengan meletakkan sejumlah
kecil protein TB (antigen) di bawah lapisan atas kulit pada lengan bawah Anda. Jika Anda
pernah terkena bakteri TB (Mycobacterium tuberculosis), kulit Anda akan bereaksi terhadap
antigen dengan mengembangkan benjolan merah perusahaan di lokasi dalam waktu 2 hari.

Antigen TB yang digunakan dalam tes kulit tuberkulin disebut pure protein derivate (PPD).
Jumlah PPD yang terukur dalam tembakan diletakkan di bawah lapisan atas kulit pada lengan
bawah Anda. Ini adalah tes yang bagus untuk menemukan infeksi TBC. Hal ini sering
digunakan saat gejala, skrining, atau pengujian, seperti sinar-X dada, menunjukkan bahwa
seseorang mungkin terkena TB.

Tes kulit tuberkulin tidak tahu berapa lama Anda terinfeksi TB. Ini juga tidak bisa
membedakan apakah infeksi itu laten (tidak aktif) atau aktif dan bisa dilewatkan ke orang
lain.

Reaksi tuberkulin yang disuntikkan secara intrakutane adalah contoh klasik dari reaksi
hipersensitivitas (seluler) yang tertunda. T-sel yang peka terhadap infeksi sebelumnya
direkrut ke tempat kulit di mana mereka melepaskan limfokin. Limfokin ini menginduksi
indurasi melalui vasodilatasi lokal, edema, deposisi fibrin, dan perekrutan sel-sel inflamasi
lainnya ke daerah tersebut. Fitur reaksi meliputi (1) tertunda, mencapai puncak lebih dari 24
jam setelah injeksi antigen; (2) karakter indurasinya; Dan (3) vesikulasi dan nekrosis sesekali.