ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID DARI

DAUN SALAM (Syzigium polyanthum)

Dosen Pembimbing : Rari Windyaswari,SSi., MSi., Apt

Disusun oleh :
Kelompok 5A
Annisa Anggraeni (3311131069)
Ratna Ayu P (3311141001)
M. Angger P (3311141010)
Stia Avina (3311141011)
Johan P (3311141019)
Devy Rahayu (3311141032)
Fenti Martiana (3311141043)

Fakultas Farmasi
Universitas Jenderal Achmad Yani
Cimahi
2017

i
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur dipanjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena
berkat dan bimbingan-Nyalah sehingga penyusunan proposal ini dapat
terselesaikan. Dalam penyusunan proposal ini kami menyadari keterbatasan
kemampuan, karena itu proposal ini jauh dari kesempurnaan. Namun, semangat
dalam penyusunan proposal ini memberi motivasi kepada kami sehingga dapat
menyelesaikannya.
Penyusunan proposal ini melibatkan dukungan dari berbagai pihak. Kami
selaku penyusun berterima kasih kepada pihak-pihak yang berperan sertta dalam
proses penyusunan proposal ini.
Semoga Tuhan Yang Maha Esa melindungi dan memberikan berkat dan
kasih-Nya kepada kita semua, utamanya bagi semua pihak yang turut membantu
penulis dalam menyelesaikan proposal ini. Harapan kami sebagai penyusun,
semoga proposal ini membatu semua pihak untuk menjadikannya suatu bahan
kajian yang layak untuk dipelajari.
Cimahi, 7 Mei 2017

Penulis

i
 DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR........................................................................................................i
DAFTAR ISI.....................................................................................................................ii
BAB 1 PENDAHULUAN.................................................................................................1
1.1 Latar Belakang.......................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah..................................................................................................2
1.3 Tujuan Percobaan..................................................................................................2
BAB 11 TINJAUAN PUSTAKA......................................................................................3
2.1. Tanaman Salam.....................................................................................................3
2.1.1. Taksonomi Tanaman Salam...........................................................................3
2.2.2. Morfologi Daun Salam...................................................................................3
2.2. Flavonoid...............................................................................................................4
2.3. Proses isolasi yang dilakukan oleh sumber lain..................................................5
BAB III ALAT DAN BAHAN.........................................................................................6
1.1 Bahan................................................................................................................6
1.2 Alat....................................................................................................................6
BAB IV METODE PERCOBAAN..................................................................................2
4.1 Pembuatan simplisia.................................................................................................2
4.2 Proses penapisan fitokimia.......................................................................................2
4.3 Proses ekstraksi........................................................................................................4
4.4 Metode identifikasi-isolasi.......................................................................................4
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................................8
5.1 Hasil Pengamatan.............................................................................................8
1. Penapisan fitokimia............................................................................................8
2. KLT Ektrak Kental.............................................................................................9
3. KLT Tanin setelah Ekstraksi Cair-cair..............................................................11
4. KKT Tanin........................................................................................................12
5. Setelah di semprot dengan Sitroborat...............................................................13
6. KLT Flavonoid.................................................................................................16
8. KLT Preparatif..................................................................................................17
9. KLT untuk mencari eluen yang sesuai untuk KLTP..........................................18
10. KLT dengan 3 macam pengembang..............................................................18
5.2 Pembahasan..........................................................................................................19

ii
 5.2.1 Skrining Fitokimia...........................................................................................19
5.2.2 Metode Ekstraksi dengan Reflux.....................................................................22
5.2.3 Kromatografi Lapis Tipis terhadap Ekstrak...................................................22
5.2.4 Fraksinasi dengan Ekstraksi Cair-Cair.............................................................23
5.2.5 Kromatografi kolom........................................................................................24
5.2.6 KLT Subfraksi.................................................................................................24
5.2.7 KLT Preparatif.................................................................................................24
5.2.8 KLT dengan 3 Pengembang.............................................................................25
5.2.9 Spektrofotometri UV-Vis.................................................................................25
BAB VI PENUTUP........................................................................................................26
6.1 Kesimpulan...........................................................................................................26
DAFTAR PUSTAKA......................................................................................................27
LAMPIRAN...................................................................................................................29
Penapisan Fitokimia.............................................................................................29
Metode ekstraksi-refluks......................................................................................30
Ekstraksi cair-cair (ECC).....................................................................................31
Kromatografi kolom.............................................................................................31
Kromatografi Lapis tipis Preparatif......................................................................31
Dokumentasi...............................................................................................................32

iii
iv
 BAB 1

PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Daun salam merupakan tumbuhan yang mudah hidup di dataran rendah
maupun tinggi. Tanaman ini dapat hidup tanpa perlakuan khusus. Daun salam
biasanya digunakan sebagai penyedap rasa dalam makanan. Daun salam memiliki
tinggi mencapai 25 m. Daunnya yang rimbun, berbentuk lonjong/bulat telur,
berujung runcing bila diremas mengeluarkan bau harum. Daun salam
mengandung zat-zat bahan warna, zat samak dan minyak atsiri yang bersifat
antibakteri. Zat tannin yang terkandung bersifat menciutkan (astringent). Daun
salam juga bermanfaat untuk mengatasi diare, diabetes, kudis, atau gatal dan
lambung lemah. Terdapat efektifitas antimikroba pada daun salam memiliki zat
aktif dalam menghambat pertumbuhan bakteri berupa tannin, flavonoid dan
minyak atsiri, yang mana ketiga zat tersebut merupakan komposisi kimia yang
terkandung dalam ekstrak daun salam.
Kemampuan flavonoid sebagai antioksidan telah banyak diteliti
belakangan ini (Pourmorad et al. 2006; Sunarni et al. 2007; Setiawan 2008;
Zuhra et al. 2008; Akbar 2010; Borges 2010). Sebagai antioksidan,
flavonoid memiliki kemampuan mengubah atau mereduksi radikal bebas dan
juga sebagai anti radikal bebas (Zuhra 2008). Salam (Syzygium polyanthum)
merupakan salah satu sumber flavonoid yang berpotensi sebagai antioksidan.
Daun salam mengandung beberapa komponen utama, yaitu minyak atsiri
(sitral dan eugenol), tanin dan flavonoid. Daun salam berkhasiat untuk
pengobatan diabetes melitus, inflamasi, dan diare (Lelono 2009). Kandungan
flavonoid dalam daun salam mendorong dilakukannya suatu usaha yang
dapat mengoptimalkan pemanfaatan tanaman tersebut. Potensi salam sebagai
antioksidan yang dapat menangkap molekul radikal bebas telah diketahui
dalam penelitian Lelono (2009), yaitu aktivitas antioksidan kulit batang salam
meningkat dengan meningkatnya kandungan fenol total dari kulit batang
salam.
Efektivitas ekstraksi sangat bergantung pada kondisi-kondisi percobaan
yang digunakan seperti waktu ekstraksi, penggunaan sampel-pelarut, dan jenis

1
pelarut. Oleh karena itu perlu dilakukan optimisasi pada kondisi percobaan
untuk mendapatkan hasil yang optimal. Pengaruh perbedaan metode ekstraksi,
pelarut, dan waktu ekstraksi terhadap kadar flavonoid, pemantauan KLT dan
spektro-UV dan Spektro IR diamati pada penelitian ini.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan diatas, maka dapat
dirumuskan yaitu :
Bagaimana cara metode ekstraksi daun salam?
Bagaimana cara identifikasi daun salam?
1.3 Tujuan Percobaan
Tujuan dari praktikum ini yaitu untuk mengetahui adanya senyawa isolat
flavonoid yang terdapat di dalam tanaman daun salam (Syzygium polyanthum)
tersebut.

2
 BAB 11

TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Tanaman Salam
Tanaman salam merupakan tanaman berkayu yang biasanya dimanfaatkan
daunnya. Daun salam sudah dikenal sejak lama sebagai bumbu masakan. Dalam
perkembangannya di bidang kesehatan, daun salam dapat dimanfaatkan sebagai
ramuan obat tradisional. Daun salam memiliki khasiat pengobatan yang biasanya
digunakan untuk terapi hipertensi, diabetes, asam urat, diare, maag, katarak,
mabuk akibat alcohol, sakit gigi dan lainnya, karena memiliki kandungan kimia
yang berguna dalam bidang kesehatan. Senyawa metabolit sekunder yang banyak
terdapat dalam daun salam antara lain minyak atsiri, tannin, dan flavonoid.
2.1.1. Taksonomi Tanaman Salam
Kingdom : Plantae

Subkingdom :Traceobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Kelas : Dicotyledoneae

Ordo : Myrtales

Family : Mytaceae

Genus : Syzygium

Spesies : Syzygium polyanthum (Wight.) Walp

2.2.2. Morfologi Daun Salam

Tanaman salam berupa pohon yang mempunyai ketinggian sekitar 20
meter dan sangat baik dibudidayakan di daerah dengn ketinggian 5-1000 meter
dpl.
Bagian tanaman salam yang banyak digunakan umumnya adalah bagian daun.
Daun salam merupakan daun tunggal yang berbentuk lonjong sampai elips, letak
berhadapan, panjang tangkai 0,5-1 cm, ujung meruncing, pangkal runcing, tepi
rata, panjang daun 5-15 cm dengan lebar daun 3-8 cm, pertulangan daun

3
menyirip, permukaan atas daun licin berwarna hijau tua, permukaan bawah
berwarna hijau muda serta daun salam memiliki aroma wangi.
2.2. Flavonoid
Flavonoid merupakan salah satu kelompok senyawa metabolit sekunder
yang paling banyak ditemukan di dalam jaringan tanaman. Flavonoid termasuk
dalam golongan senyawa fenolik dengan struktur kimia C6-C3-C6. Kerangka
flavonoid terdiri atas satu cincin aromatic A, satu cincin aromatic B, dan cincin
tengah berupa heterosiklik yang mengandung oksigen.

Flavonoid tersebar dalam fotosintesis sel dan tersebar luas disemua

tanaman. Senyawa ini dapat ditemukan di buah-buahan, sayuran, kacang-
kacangan, batang dan bunga. Telah diteliti bahwa flavonoid memiliki aktivitas
biologis dan farmakologis, antara lain sebagai antibakteri, anti inflamasi, inhibisi
enzim, menghambat aktivitas alergi, antitumor sitotoksik, dan sebagai
antioksidan.

Flavonoid terbagi kedalam 6 golongan, yaitu flavon, isoflavon, flavanon,

flavonol, khalkon, dan antosianin. Penggolongan flavonoid ini berdasarkan pada
perbedaan struktur kimianya, yaitu substituent cincin heterosiklik mengandung
oksigen dan distribusi gugus hidroksil. Oksigenasi pada atom C3 menentukan
sifat, khasiat, dan golongan flavonoid.

4
2.3. Proses isolasi yang dilakukan oleh sumber lain
1) Persiapan bahan baku
Pada tahap preparasi bahan baku, hal yang pertama dilakukan adalah daun
salam dikeringkan di dalam oven pada suhu konstan 40oC selama 7 hari
hingga benar-benar kering, kemudian dihaluskan menggunakan blender
hingga daun menjadi bentuk bubuk. Tujuan utama dalam pengeringan
daun ini adalah untuk mengurangi kandungan air dalam daun salam dan
mempermudah proses penghalusan, selain itu suhu yang konstan 40oC agar
daun tidak terdegradasi baik bentuk maunpun warnanya. (Koenigii et al.
n.d.)
2) Penapisan fitokimia
Penapisan fitokimia dilakukan sebagai langkah awal untuk mengetahui
golongan komponen kimia yang terkandung pada simplisia yang
digunakan. Penapisan fitokimia meliputi pemeriksaan alkaloid flavonoid,
saponin, steroid/triterpenoid, tannin dan kuinon. (Bahari n.d.)
3) Proses ekstraksi
Ekstrak daun salam dibuat dengan mengekstraksi 30 gram serbuk daun
salam secara maserasi dengan pelarut etanol hingga terekstraksi sempurna.
Simplisia direndam dalam pelarut etanol absolute sebanyak 300 mL
selama 2 x 24 jam. Setelah 2 x 24 jam filtrate yang diperoleh disaring dan
residunya dimaserasi kembali dengan pelarut etanol. Hasil ekstraksi
selanjutnya dipekatkan dengan menggunakan rotary vacuum evaporator.
(Rizki & Hariandja 2016)
4) Proses Fraksinasi
Setelah itu dilakukan proses fraksinasi dengan metode ekstraksi cair-cair
(ECC), identifikasi menggunakan kromatografi lapis tipis, pemurnian
menggunakan kromatografi kolom serta kromatografi lapis tipis
preparative dan pemeriksaan spektrofotometri UV-vis dan IR. (Effect et al.
n.d.)

5
 BAB III

ALAT DAN BAHAN

1.1 Bahan
Daun salam yang sudah Larutan Steasny
Methanol
dikeringkan
N-heksan 100%
Ammonia
Etil asetat 100%
Kloroform
Silika Gel 60
HCl 2N
Etil Asetat
Aquadest
Sitro borat
FeCl3 (besi (III) klorida)
Etanol
Larutan gelatin 1%
Vanilin-SO4

1.2 Alat
Tabung reaksi Pipet tetes
Beaker glass 100 ml Pipa kapiler
Pembakar spirtus Botol vial
Kaki 3 Batang pengaduk
Kertas saring Kapas
Cawan penguap Kertas perkamen
Mortir dan steamper Spektrofometri UV-Visible
Corong pisah Satu set alat refluks
Chamber Satu set alat rotary-
Pelat TLC evaporator
Gelas Ukur 10 ml, 25 ml, 250
Satu Set Alat Kromatografi
ml
Pinset Kolom
Alat percolator Alat Kromatografi Lapis
Satu set alat KK Tipis dan Kromatografi

Lampu UV 254 & 366 Kertas

Erlenmeyer

6
 BAB IV

METODE PERCOBAAN

4.1 Pembuatan simplisia

1. Dikeringkan daun salam dalam oven pada suhu konstan 40oC selama 7 hari
hingga benar-benar kering, untuk mengurangi kandungan air
2. Dihaluskan dengan menggunakan blender hingga menjadi bentuk
bubuk/powder
3. Daun salam yang telah menjadi potongan kecil dapat disimpan untuk
kemudian dipakai diproses selanjutnya.
4.2 Proses penapisan fitokimia
1. Penentuan golongan senyawa alkaloid
Dibasakan serbuk simplisia dengan ammonia.
Ditambahkan kloroform dan digerus kuat-kuat.
Dipipet lapisan kloroform dan ditambahkan asam klorida 2 N
Campuran tersebut dikocok kuat-kuat hingga terdapat dua lapisan.
Lapisan asam (bawah) dipipet dan dibagi menjadi 3 bagian: masing-
masing ditambahkan pereaksi mayer-adanya endapan putih,
dragendorf adanya endapan jingga kuning hingga merah bata dan
blanko
2. Penentuan golongan senyawa polifenolat
Sejumlah kecil serbuk simplisia ditambahkan aquadest dan dipanaskan
diatas penangas air, kemudian disaring.
Filtratnya ditambahkan larutan besi (III) klorida. Adanya fenolat
ditandai dengan warna hijau-biru kehitaman
3. Penentuan golongan senyawa tannin
Sejumlah kecil serbuk simplisia ditambahkan aquadest dan dipanaskan
diatas penangas air, kemudian disaring. Dibagi menjadi 2 bagian
Bagian pertama diteteskan larutan gelatin 1%, adanya tannin ditandai
dengan endapan berwarna putih
Bagian kedua diteteskan larutan steasny, adanya tannin ditandai
dengan endapan berwarna merah muda.
4. Penentuan golongan senyawa flavonoid
 Sejumlah kecil serbuk simplisia ditambahkan aquadest dan dicampur
dengan serbuk magnesium serta asam klorida 2 N.
Dipanaskan diatas tangas air lalu disaring.
Filtrate ditambahkan amil alcohol, lalu dikocok kuat-kuat.
Adanya flavonoid ditandai terbentuknya warna kuning hingga merah
pada lapisan amil alkohol
5. Penentuan golongan senyawa kuinon
Sejumlah kecil serbuk simplisia ditambahkan aquadest dan dipanaskan
diatas penangas air, kemudian disaring
Filtrate ditambahkan larutan KOH/NaOH 5%.
Perubahan waena kuning / jingga menunjukkan adanya senyawa
kuinon.
6. Penentuan golongan senyawa saponin
Sejumlah kecil serbuk simplisia ditambahkan aquadest dan dipanaskan
diatas penangas air, kemudian disaring
Filtrate dikocok selama 1-2 menit dalam tabung reaksi, adanya busa.
Didiamkan selama 5 menit dan ditambahkan HCl encer, jika busa teap
maka menunjukan senyawa saponin.
7. Penentuan golongan senyawa monoterpenoid dan seskuiterpenoid
Sebuk simplisia digerus dengan eter (5-10 mL)
Filtrate ditempatkan dalam 2 cawan penguap dan dibiarkan menguap
hingga kering.
Residu pada cawan ditambahkan larutan vanillin 10% dalam H 2SO4
pekat
Terjadinya warna merah keunguan/coklat menunjukkan adanya
senyawa monoterpenoid-seskuiterpenoid.
8. Penentuan golongan senyawa steroid dan triterpenoid
Serbuk simplisia digerus dengan eter, kemudian disaring.
Filtrate ditempatkan dalam cawan penguap dan dibiarkan menguap
hingga kering.
Residu pada cawan penguap ditambahkan pereaksi Liebermann-
bouchard.
Terbentuknya warna ungu menunjukan triterpenoid, sedangkan hijau
biru menunjukkan steroid.
4.3 Proses ekstraksi
a. Sebanyak 246 g serbuk simplisia daun salam dimasukkan ke dalam labu
ekstraksi dengan volume 2000 mL.
 b. Dimasukkan 1000 mL n-heksan kedalam labu ekstraksi.
c. Dipanaskan hingga mencapai titik didih pelarut dan di ekstraksi selama 4 jam.
d. Ekstrak didinginkan, disaring dan dipisahkan dari serbuk simplisia.
e. Serbuk simplisia dapat direekstraksi 3 kali dengan prosedur yang sama.
f. Serbuk simplisia dikeluarkan dan diangin-anginkan hingga selanjutnya diganti
pelarut menggunakan etil asetat dan metanol menggunakan prosedur yan sama
g. Ekstrak dikumpulkan, diuapkan dan dipekatkan hingga mendapatkan ekstrak
kental.
4.4 Metode identifikasi-isolasi
a. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) pemantauan
1. Penjenuhan pengembang (fase gerak)
- Disiapkan chamber dan pelarut atau campuran pelarut yang
digunakan sebagai fase gerak
- Dimasukkan 10 mL pelarut atau campuran pelarut ke dalam
chamber
- Dibiarkan selama 30 menit sebagai proses penjenuhan
2. Penotolan pelat silica gel (fase diam)
- Ekstrak yang akan dipisahkan dilarutkan dalam pelarut yang sesuai
- Totolkan berupa bercak menggunakan pipa kapiler kaca
- Biarkan pelarut pada bercak menguap
3. Elusi
- Dimasukkan lapisan ke dalam chamber yang telah dijenuhkan
- Dibiarkan proses elusi berlangsung hingga batas atas (0,5 cm) dari
ujung atas
- Diangkat lapisan setelah proses elusi mencapai batas atas dan
dibiarkan mongering
- Dihitung Rf bercak pada lapisan secara visuall, UV 254 nm dan
365 nm serta penampak bercak
b. Fraksinasi- ekstraksi cair-cair (ECC)
- Sejumlah ekstrak kental yang diperoleh dari hasil ekstraksi
dilarutkan dalam air:etanol (90:10) sebanyak 100 mL
- Dimasukkan ke dalam corong pisah dan ditambahkan dengan n-
heksan sama banyak dengan jumlah pelarut pertama.
- Dikocok dan sesekali udara di dalam corong pisah dikeluarkan
- Didiamkan corong pisah hingga kedua pelarut terpisah sempurna
- Proses pemisahan diulang sampai diperoleh fraksi n-heksan yang
hampir tidak berwarna (minimal 3 kali pengulangan)
 - Fraksi n-heksan dipisahkan dari fraksi air, fraksi n-heksan
dikumpulkan, diuapkan dan dipekatkan
- Pemisahan fraksi air dilanjutkan dengan fraksi etilasetat dengan
prosedur yang sama
c. Kromatografi Kolom
1. Preparasi kolom
Ditimbang silica gel G 60 dengan perbandingan 1:10 terhadap
sampel
Disuspensikan silica dengan menambahkan pelarut non polar
Dimasukkan suspensi silikia ke dalam kolom yang bagian
bawahnya disumbat menggunakan kapas
Diperhatikan keserbasamaan silica dalam kolom, jangan sampai
ada rongga udara yang berpengaruh buruk pada pemisahan
Pelarut dibiarkan keluar hingga permukaannya tepat pada
permukaan silica
Ekstrak yang dipisahkan ditempatkan diatas silica dalam bentuk
lapisan tipis rata diatas permukaan.
2. Prosedur kromatografi
Digunakan sistem eluen tunggal, isokratik ataupun gradient
Kolom dielusi dengan eluen yang cocok dimulai dari eluen dengan
kepolaran rendah dan ditingkakan perlahan (n-heksan:n-heksan-
etil:etil:etil-metanol:metanol)
Hasil kolom dikumpulkan persubfraksinya, diuapkan dan
dianalisis
d. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) kualitatif
Hasil fraksinasi kemudian di KLT sesuai dengan KLT pemantauan,
menggunakan fase gerak yang sesuai
Disemprot dengan penampak bercak spesifik
e. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) preparative
1. Pembuatan pelat silica GF254 (fase diam)
Dibuat bubur silica gel dengan mencampurkan silica gel 60 20 g
dengan 40 ml aquadest, dikocok kuat-kuat hingga homogeny
Dituang semua bubur silica ke dalam alat desaga dan diratakan
pada kaca
Didiamkan silica pada suhu ruang selama 24 jam
Sebelum pemakaian, pelat dioven selama 20 menit
2. Penjenuhan pemgembang (fase gerak)
 Disiapkan chamber dan campuran pelarut yang diguanak sebagai
fase gerak
Dimasukkan 20 ml campuran pelarut ke dalam chamber
Dibiarkan selama 30 menit sebagai proses penjenuhan
3. Penotolan pelat silica
Sejumlah fraksi dilarutkan dalam pelarut yang cocok
Ditotolkan sampel secara berderet sehingga membentuk pita
sebagai garis awal pemgembangan
Ditunggu kering beberapa saat.
4. Elusi
Pelat dimasukkan ke dalam chamber yang telah jenuh dengan
larutan pengembang
Dibiarkan hingga proses elusi mencapai batas atas pelat (2 cm dari
ujung atas)
Dikeluarkan dari chamber dan dibiarkan mongering
Dikerok pita yang terbentuk dan dilarutkan menggunakan pelarut
yang cocok, disaring
Filtrat diuapkan dan dianalisisi menggunakan pelat silica gel GF
254
f. Pengecekan menggunakan spektrofotmetri UV-visible
Sampel dilarutkan dalam metanol pro analisis
Kemudian di cek munggunakan instrument spektrofometri UV-visible.
 BAB V

HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Hasil Pengamatan

1. Penapisan fitokimia

GAMBAR KETERANGAN
Penapisan Alkaloid
Pereaksi Dragendorff : (+) terdapat endapan
merah bata
Pereaksi Mayer : (-) tidak adanya endapan
putih

Penapisan Polifenol
Pereaksi FeCl3 : (+) Larutan berubah
menjadi warna hitam

Penapisan Saponin
Pereaksi HCl encer : (-) Busa yang di
hasilkan kurang dari 1 cm

Penapisan Tanin
Pereaksi Gelatin 1% : (+) Terdapat endapan
berwarna putih

Penapisan Flavonoid
Amil Alkohol : (+) Terbentuk 2 lapisan dan
terdapat cincin berwarna merah
 Penapisan Kuinon
Pereaksi KOH 5% : (+) Berubah menjadi
merah bata

2. KLT Ektrak Kental

GAMBAR KETERANGAN
Fraksi N-Heksan
Etil Asetat : Kloroform (5:5)
UV 254
Fraksi N-Heksan
Etil Asetat : Kloroform (5:5)
UV 254
Fraksi N-Heksan
Etil Asetat : Kloroform (5:5)
Setelah di bakar
Fraksi N-Heksan
Etil Asetat : Kloroform (9:1)
UV 254
Fraksi N-Heksan
Etil Asetat : Kloroform (9:1)
UV 365

Fraksi N-Heksan
Etil Asetat : Kloroform (9:1)
Setelah di bakar

Fraksi N-Heksan
Etil Asetat : Kloroform (7:3)
UV 254
Fraksi Etil Asetat
Etil Asetat : Metanol (5:5)
UV 365

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Metanol (5:5)
UV 254

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Metanol (3:7)
UV 254

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Metanol (1:9)
UV 365

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Metanol (1:9)
UV 254

Fraksi Etil Asetat

E1 : Etil Asetat : Metanol (5:5)
E2 : Etil Asetat : Metanol (3:7)
E3 : Etil Asetat : Metanol (1:9)

E2 : Etil Asetat : Metanol (3:7)

E3 : Etil Asetat : Metanol (1:9)
Fraksi Etil Asetat
 Etil Asetat : Metanol (7:3)
UV 365
Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Metanol (7:3)

UV 254
Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Metanol (9:1)

UV 254
Fraksi Etil Asetat
Etil Asetat : Metanol (9:1)
UV 365
Fraksi Etil Asetat

3. KLT Tanin setelah Ekstraksi Cair-cair

Fraksi Etil Asetat

Etil : kloroform (1:9)
UV 254

Fraksi Etil Asetat

etil : kloroform (5:5)
UV 365

Fraksi Etil Asetat

etil:kloroform (5:5)
UV 254
 Fraksi Etil Asetat
etil:kloroform
Kiri (3:7)
Kanan (9:1)
UV 254
Fraksi Etil Asetat
Butanol : Metanol (5:5)
UV 254
Fraksi Etil Asetat
Butanol : Metanol
(5:5)
UV 365
Fraksi Etil Asetat
Kiri : Metanol : Butanol (5:5)
Kanan: Butanol

4. KKT Tanin

Fraksi Etil Asetat

Butanol 100%

Fraksi Etil Asetat

Butanol : Metanol (5:5)

Fraksi Etil Asetat

Butanol : Metanol (7:3)
 Fraksi Etil Asetat
Butanol : Metanol (7:3)

Fraksi Etil Asetat

Butanol : Metanol (9:1)

Fraksi Etil Asetat

Butanol : Metanol (1:9)

Fraksi Etil Asetat

Butanol : Metanol (3:7)

5. Setelah di semprot dengan Sitroborat

Fraksi n-heksan
Etil Asetat : Kloroform (7:3)

Fraksi n-heksan
Etil Asetat : Kloroform (9:1)

Fraksi n-heksan
Etil Asetat : Kloroform (5:5)

Fraksi Etil Asetat

Fraksi Metanol
Etil Asetat : Metanol (3:7)

Fraksi Metanol
Etil Asetat : Metanol (1:9)

Fraksi Metanol
Etil Asetat : Metanol (5:5)

Fraksi Metanol
Etil Asetat : Metanol (7:3)

Fraksi
Metanol : N-Heksan (3:3)

Fraksi
Metanol : N-Heksan (3:3)

Fraksi
Metanol : N-Heksan (7:3)

Fraksi
Metanol : N-Heksan (7:3)
 Fraksi
Metanol : N-Heksan (3:7)

Fraksi
Metanol : N-Heksan (3:7)

Fraksi
Metanol : N-Heksan (3:7)

6. KLT Flavonoid

GAMBAR KETERANGAN

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Kloroform (5:5)

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Kloroform (3:7)

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Kloroform (9:1)
 Fraksi Etil Asetat
Etil Asetat : Kloroform (1:9)

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Kloroform (7:3)

Fraksi Etil Asetat

Etil Asetat : Kloroform : Metanol
Kiri (3:3:0,5)
Kanan (4:5:1)

Fraksi Etil Asetat

Kloroform : Etil Asetat : Air (3:3:0,5)

Fraksi Etil Asetat

Kloroform : Etil Asetat : Air (4:5:1)

7. KLT Sub-fraksi

Etil Asetat : Kloroform (1:9)

8. KLT Preparatif

Etil Asetat : Kloroform (1:9)

9. KLT untuk mencari eluen yang sesuai untuk KLTP

Fraksi 1 (etil kloroform 1:9)

Fraksi 2 (etil:kloroform 1:9)

Fraksi 3 (etil:kloroform 1:9)

Fraksi 4 (etil:kloroform 1:9)

10. KLT dengan 3 macam pengembang

Kloroform:etil:metanol (9:1:0,5)
 Kloroform:etil:metanol (7:3:0,5)

Kloroform:etil:metanol (5:4:0,5)

5.2 Pembahasan
5.2.1 Skrining Fitokimia
Komponen yang terdapat dalam ekstrak daun salam dianalisis golongan
senyawanya dengan tes uji warna dengan beberapa pereaksi untuk golongan
senyawa alkaloid, tanin dan polifenol, saponin, flavonoid, dan antrakuinon,
monoterpenoid dan seskuiterpenoid, serta steroid dan triterpenoid. Pereaksi-pereaksi
spesifik yang digunakan kebanyakan bersifat polar sehingga bisa berinteraksi
dengan sampel berdasarkan prinsip like dissolve like.
Terbentuknya endapan pada uji Mayer, dan Dragendorff berarti dalam
ekstrak daun salam terdapat alkaloid. Tujuan penambahan HCl adalah karena
alkaloid bersifat basa sehingga biasanya diekstrak dengan pelarut yang
mengandung asam (Harborne, 1996). Perlakuan ekstrak dengan NaCl sebelum
penambahan pereaksi dilakukan untuk menghilangkan protein. Adanya protein yang
mengendap pada penambahan pereaksi yang mengandung logam berat (pereaksi
Mayer) dapat memberikan reaksi positif palsu pada beberapa senyawa (Santos et al.,
1998). Hasil positif alkaloid pada uji Mayer ditandai dengan terbentuknya
endapan putih. Diperkirakan endapan tersebut adalah kompleks kalium-alkaloid.
Pada pembuatan pereaksi Mayer, larutan merkurium(II) klorida ditambah kalium
iodida akan bereaksi membentuk endapan merah merkurium(II) iodida. Jika
kalium iodida yang ditambahkan berlebih maka akan terbentuk kalium
tetraiodomerkurat(II) (Svehla, 1990). Alkaloid mengandung atom nitrogen yang
mempunyai pasangan elektron bebas sehingga dapat digunakan untuk membentuk
ikatan kovalen koordinat dengan ion logam (McMurry, 2004). Pada uji alkaloid
dengan pereaksi Mayer, diperkirakan nitrogen pada alkaloid akan bereaksi dengan

ion logam K+ dari kalium tetraiodomerkurat(II) membentuk kompleks kalium-

alkaloid yang mengendap. Pada uji alkaloid dengan pereaksi Dragendorff, nitrogen

digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan K+ yang

merupakan ion logam.
Pada uji tanin diperoleh hasil positif, adanya tanin akan mengendapkan
protein pada gelatin. Tanin bereaksi dengan gelatin membentuk kopolimer mantap
yang tidak larut dalam air (Harborne, 1996). Reaksi ini lebih sensitif dengan
penambahan NaCl untuk mempertinggi penggaraman dari tanin-gelatin.
Uji polifenol dilakukan dengan cara memanaskan serbuk daun salam yang
ditambah dengan air sebanyak 10 ml ke dalam penangas air mendidih selama 10
menit. Pemanasan ini berfungsi untuk melarutkan polifenol agar terpisah dari bagian
tubuh tumbuhan sampel. Larutan disaring panas panas yang bertujuan untuk
mendapatkan senyawa polifenol yang lebih banyak dan mencegah senyawa polifenol
bercampur kembali dengan serbuk simplek. Setelah dingin, ditambah dengan FeCl3
terbentuk warna hijau tua. Terbentuknya warna hijau tua karena FeCl3 berfungsi
untuk membentuk kompleks. FeCl3 ditambahkan saat larutan dingin agar tidak
teroksidasi. Berarti daun salam positif mengandung polifenol.
Senyawa flavonoid yang terkandung dalam daun salam dapat diidentifikasi
dengan menggunakan Mg-HCL. Menurut strukturnya merupakan senyawa induk
flavon Penggunaan Mg ini bertujuan untuk menghidrolisis ikatan glikosida dengan
cara mereduksi ikatan tersebut karena biasanya senyawa flavonoid berikatan dengan
gula membentuk glikosida, dan flavonoid merupakan aglikon glikosida. Kemudian
flavonoid yang sudah bebas ditarik oleh amil alkohol sehingga amil alkohol yang
membentuk cincin berwarna.
Adanya saponin ditandai dengan timbulnya busa setelah pengocokan dengan
aquadest dan busa konstan selama 15 menit. Busa terbentuk karena adanya
gelembung udara yang terjebak dalam larutan. Saponin merupakan kpmponen lipida
polar yang bersifat ampifilik (mempunyai gugus hidrofilik dan Hidrofobik) didalam
sistem cair lipid acair secara soonta terdispersi membentuk misel dengan ekor filik
yang bersinggungan dengan medium cair. Misel tersebut mengandung ribuan lipida
cair membnetuk suatu lapisan dengan ketebalan satu molekul yaitu lapisan tunggal.
Pada sistem tersbut ekor hidrokarbon terbuka sehingga terhindar dari air dan lapisan
hidrofilik memanjang ke air yang bersifat polar sistem inilah yang disebut busa. Hasil
menunjukkan daun salam tidak mengandung saponin dikarenakan busa yang
dihasilkan kurang dari 1 cm.
Selanjutnya dilakukan uji kuinon pada ekstrak daun salam. Ekstrak
ditambahkan dengan KOH 5% dan 1 ml H2SO4 encer. KOH berfungsi sebagai
pemberi suasana basa dan berfungsi untuk menghidrolisis glikosida dan
mengoksidasi antron atau antranol menjadi antrakinon. Sedangkan H2SO4 berfungsi
sebagai pemberi suasana asam. Sehingga didapatkan senyawa dengan suasana netral
dengan adanya penmbahan H2SO4. Warna kuning menunjukkan adanya antrakuinon.
Pada pengujian monoterpenoid ditambahkan Vanillin SO4 yang
bertujuan untuk mendeteksi ada atau tidaknya senyawa atsiri pada bahan yang di uji,
adanya warna warna menandakan positif mengandung senyawa monoterpen dan
seskuiterpen. Pada percobaan kali ini setelah ekstrak ditambah Vanillin dalam SO 4
pekat timbul warna - warna, hal tersebut menandakan bahwa di dalamdaun salam
terdapat senyawa monoterpen dan seskuiterpen.
Pada proses pengujian triterpenoid dan steroid yaitu dengan di tambahkan
larutan pereaksi lieberman burchard. Lieberman burchard merupakan campuran
antara asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat yang bertujuan untuk membentuk
turunan asetil dari steroid yang akan membentuk turunan asetil di dalam kloroform,
kloroform digunakan pada pereaksi ini karena golongan senyawa ini paling larut baik
di dalam pelarut ini dan tidak mengandung molekul air, karena jika pada larutan uji
terdapat molekul air maka asam asetat anhidrat akan berubah menjadi asam asetat
sebelum reaksi berjalan dan turunan asetil tidak akan terbentuk. Setelah ditambahkan
pereaksi ini tanda positif pada triterpenoid terjadi warna merah ungu, tetapi pada
percobaan tidak terdapat warna tersebut sehingga dinyatakan negativ triterpenoid, dan
pada steroid tanda positif dengan adanya warna hijau/biru juga tidak terdapat
sehingga dinyatakan negatif steroid pada ekstrak daun salam yang diuji.
5.2.2 Metode Ekstraksi dengan Reflux
Daun salam yang diekstraksi diperoleh dalam bentuk simplisia
berupa serbuk yang berwarna coklat. Ekstraksi daun salam tersebut dilakukan
pengulangan sebanyak tiga kali. Daun salam tersebut diekstraksi sebanyak tiga
kali selama 4 jam dengan menggunakan pelarut bergradient, n heksana-etil asetat-
metanol dengan metode refluks. Penggunaan sebagai pelarut untuk ekstraksi
bertujuan untuk mengekstrak senyawa-senyawa bioaktif yang bersifat polar,
semi-polar dan non polar. Metode refluks digunakan karena simplisia yang
digunakan yaitu daun salam bersifat termostabil. Ekstrak yang diperoleh berwarna
coklat tua dengan aroma khas salam. Rendemen yang diperoleh dari masing-
masing dengan pelarut tersebut berturut-turut sebesar 3, 081%, 13,26%, dan
23.26%. Perbedaan rendemen ekstraksi dapat menunjukkan kandungan senyawa-
senyawa metabolit sekunder daun salam dengan pelarut berbeda-beda.
5.2.3 Kromatografi Lapis Tipis terhadap Ekstrak
Ekstrak n-heksana dan etil asetat daun salam ditotolkan pada pelat KLT
sebanyak 3 kali penotolan. Setelah kering, pelat dielusi dalam bejana kromatografi
yang telah dijenuhkan oleh uap eluen pengembang. Elusi dilakukan dengan
menggunakan eluen campuran, yaitu etil asetat: kloroform dengan perbandingan 5:5,
9:1, 7:3 dan etil asetat : metanol dengan perbandingan 5:5, 1:9, 7:3. Noda yang
dihasilkan dari proses elusi masing-masing eluen diamati di bawah lampu UV pada
panjang gelombang 254 dan 366 nm. Eluen yang menghasilkan noda terbanyak dan
terpisah dipilih sebagai eluen terbaik. Pemilihan eluen terbaik dari ekstrak
menggunakan fase diam silika G60 F254. Ekstrak n-heksana dan etil asetat daun
salam ditotolkan pada pelat KLT sebanyak 3 kali penotolan, lalu di elusi dengan
berbagai eluen campuran dengan berbagai perbandingan. Sebelum dielusi, bejana
kromatografi dijenuhkan dengan uap eluen selama 30 menit. Hal ini bertujuan
melancarkan gerak eluen dan komponen, dengan membentuk kesetimbangan cair-uap
sehingga komponen yang akan dipisahkan akan naik tanpa ada gangguan. Penjenuhan
juga dapat memperkecil penguapan pelarut.
Pergerakan suatu senyawa dalam ekstrak juga bergantung pada kesamaan
polaritasnya dengan polaritas eluen. Tujuan dibuat nya eluen campuran diharapkan
mampu memisahkan komponen dengan baik dan lebih banyak yang terpisah.
Berdasarkan profil kromatogram yang diperoleh dengan eluen campuran,
masih belum terbentuk spot yang diinginkan, yang dapat disebabkan oleh pemilihan
eluen yang belum tepat untuk memisahkan, pada saat elusi chamber yang digunakan
masih belum tertutup sempurna, atau penggunaan bahan yang kurang murni.
5.2.4 Fraksinasi dengan Ekstraksi Cair-Cair
Fraksinasi diperlukan untuk memisahkan golongan utama kandungan yang
satu dari golongan utama lainnya, berdasarkan perbedaan kepolarannya. Pemilihan
metode ECC, didasarkan pada hasil KLT yang masih belum sempurna. ECC
menggunakan pelarut n heksana, etil asetat dan methanol, karena target isolasi ada
pada pelarut tersebut sesuai dengan sifat fisiko kimia target isolat yaitu golongan
tanin dan flavonoid yang masing-masing polar dan semi polar. Masing-masing fraksi
yang sudah di dapat di KLT dan KKt untuk pemantauan pemisahan. Elusi pada KLT
dan Kkt menggunakan eluen campuran dengan tujuan agar dapat memisahkan
komponen dengan baik dan lebih banyak yang terpisah.
Berdasarkan hasil percobaan Kkt untuk isolasi tanin spot yang terbentuk
masih belum sempurna, hal ini disebabkan oleh BM Tanin yang besar, sehingga berat
untuk diisolasi. Hasil KLT terbaik ada pada fraksi etil asetat dengan menggunakan
eluen etil asetat:kloroform 1:9 dengan Rf 0,35.
 5.2.5 Kromatografi kolom
Fraksionasi dengan kromatografi kolom menggunakan fraksi etil
asetat daun salam, karena fraksi ini memiliki target isolat flavonoid. Fraksionasi
menggunakan metode elusi landaian, yaitu menggunakan lebih dari 1 pelarut dan
berdasarkan kenaikan kepolaran. Hal ini bertujuan agar dengan peningkatan polaritas
system eluen, semua komponen akan terbawa lebih cepat (Harvey, 2000). Fraksionasi
diawali menggunakan etil asetat, kemudian dilanjutkan dengan methanol.
Eluat yang diperoleh ditampung dalam botol yang telah diberi nomor,
hasil pemisahan ini ditampung dalam 13 botol. Penentuan fraksi dari elute yang
diperoleh menggunakan metode KLT dengan eluen terbaik dan diamati dengan lampu
UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm. Kemudian pelat silika disemprot
dengan sitroborat dan diberi uap NH3 dan diamati di bawah UV 254 dan 366 nm
menghasilkan garis yang berfluoresensi yang mengindikasikan adanya golongan
flavonoid sebagai target isolasi.
5.2.6 KLT Subfraksi
Pemilihan dan penggabungan fraksi-fraksi dari kolom, berdasarkan
pada hasil KLT kromatografi kolom. Fraksi 1, terdiri dari n-heksana 100%, etil
asetat:n-heksana dengan perbandingan 1:9, 3:7, 5:5, 7:3, dan 9:1. Fraksi 2, terdiri dari
etil asetat 100%, etil asetat:methanol dengan perbandingan 1:9. Fraksi 3, terdiri dari
etil asetat:methanol dengan perbandingan 3:7, 5:5, dan 7:3. Fraksi 4, terdiri dari etil
asetat:methanol dengan perbandingan 9:1, dan methanol 100%. Masing-masing fraksi
di KLT dengan menggunakan eluen terbaik yaitu etil asetat:kloroform 1:9 dengan
tujuan untuk pemantauan pola pemisahan. Berdasarkan data hasil KLT, sub fraksi 1
memiliki profil kromatografi yang cukup baik karena terdiri dari banyak campuran
fraksi yang berbeda tingkat kepolarannya. Hasil sub fraksi 1 dapat dilanjutkan ke
metode berikutnya.
5.2.7 KLT Preparatif
Meskipun data hasil KLT sub fraksi 1 memiliki profil kromatografi
yang cukup baik, akan tetapi masih memiliki pemisahan yang kurang baik, maka
dilanjutkan pada KLT Preparatif. Pada metode ini, pelat silica harus di panaskan
dalam oven bersuhu 105oC selama 15-30 menit untuk menghilangkan air yang terikat
secara fisik. Apabila terdapat lapisan air pada permukaan silika gel, maka pemisahan
komponen yang terjadi adalah partisi antara lapisan air pada permukaan silika gel dan
fase gerak, padahal yang diinginkan adalah pemisahan adsorpsi antara gugus fungsi
silika gel dan fase gerak. Fraksi 1 ditotolkan pada pelat silika gel sebanyak 15 kali,
lalu di elusi dengan menggunakan eluen terbaik etil asetat:kloroform 1:9. Sebelum
dielusi, bejana kromatografi dijenuhkan dengan uap eluen selama 15-30 menit,
dengan tujuan melancarkan gerak eluen dan komponen, dan memperkecil penguapan
pelarut. Hasil menunjukkan adanya fluoresensi di bawah sinar UV 254 dan 365 nm
yang menunjukkan adanya flavonoid (setelah disemprot sitroborat dan uap NH3).
5.2.8 KLT dengan 3 Pengembang
Pita berwarna biru yang terlihat di bawah sinar UV 366 nm yang
terpilih (hasil dari KLT Preparatif), kemudian dikerok, lalu dilarutkan dalam air untuk
mendapatkan isolat. Uji kemurnian dilakukan dengan KLT Pengembangan tunggal.
KLT Pengembangan tunggal menggunakan 3 jenis campuran eluen, yaitu yang
bersifat non polar, semi polar, dan polar. Dari ketiga pengembangan di peroleh 2
bercak yang menunjukkan bahwa isolat tersebut memang mengandung flavonoid tapi
masih belum murni, sehingga harus dilakukan pengulangan KLT Preparatif dan KLT
dengan 3 Pengembang.
5.2.9 Spektrofotometri UV-Vis
Untuk mengidentifikasi senyawa flavonoid hasil isolasi digunakan
metode Spektrofotometri UV-Visible. Isolat ditambahkan metanol pro analisis
sebagai pengencer, dan diukur dengan menggunakan panjang gelombang maksimum
201,6 nm. Berdasarkan data yang diperoleh, tidak ada bentuk spektrum khas yang
dihasilkan dan nilai A sebesar 1,871 yang lebih besar dari 0,8 (ketentuan A=0,2-0,8).
Hal ini dapat di sebabkan oleh isolat yang masih bercampur dengan pelat silika, dan
isolat tersebut masih belum murni.
 BAB VI

PENUTUP

6.1 Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang dilakukan, diduga merupakan golongan
flavonoid berdasarkan hasil identifikasi kualitatif yaitu:
1. Penapisan fitokimia, positif flavonoid ditandai dengan adanya warna
kuning hingga merah pada lapisan amil alcohol
2. Pada ekstraksi menggunakan pelarut semi polar, fraksinasi menggunakan
pelarut semi polar dan KLT menggunakan penampak bercak spesifik
sitroborat dan AlCl3 5% metanol menunjukan adanya fluoresensi berwarna
biru pada lampu UV 365 nm, menandakan hasil positif adanya flavonoid.
 DAFTAR PUSTAKA

Cook, N. C. and S. Samman. (1996). Review Flavonoids-Chemistry,

Metabolism, Cardioprotective Effect, And Dietary Sources, J. Nutr. Biochem
(7)
Dalimartha S. Tanaman Obat di Lingkungan Sekitar. Jakarta: Puspa Swara;
2005.
DepKes RI. 1986. Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik
Indonesia.
Harborne JB. Metode fitokimia. Bandung: ITB; 2006.
Kurniawati N, Tim Redaksi Qanita. Sehat & cantik alami berkat khasiat
bumbu dapur. Jakarta: qanita; 2010.
Lelono RAA, Tachibana S, Itoh K. 2009. In vitro antioxidative activities
and polyphenol content of Eugenia polyantha wight grown in Indonesia.
Pak. J. Biol. Sci. 12 (24): 1564-1570.
Pourmorad F, Hosseinimehr SJ, Shahabimajd N. 2006. Antioxidant
activity,phenol, and flavonoid contents of some selected Iranian medicinal
plants. African Journal of Biotechnology 5(11): 1142-1145.
Utami P, Puspaningtyas DE. The miracle of herbs. Jakarta: AgroMedia
Pustaka; 2013.
Winarto WP, Tim Karyasari. Mememanfaatkan bumbu dapur untuk mengatasi
aneka penyakit. Jakarta: Agromedia Pustaka; 2004.
Zuhra CF, Tarigan JB, Sihotang H. 2008. Aktivitas antioksidan senyawa
flavonoi dari daun katuk (Sauropus androgunus (L) Merr.). Jurnal Biologi
Sumatera: 7-10.
Bahari, F., Jurnal Ilmiah. , pp.184.
Effect, H., Etanolic, O.F. & Of, E., Aktivitas hipoglikemik ekstrak etanolik
daun salam (.
Koenigii, M. et al., YIELDALKALOID DARI DAUN SALAM INDIA. ,
20(2), pp.16.
Rizki, M.I. & Hariandja, E.M., 2016. Review: Aktivitas Farmakologis ,
Senyawa Aktif , dan Mekanisme Kerja Daun Salam ( Syzygium
 polyanthum ... , (July).

LAMPIRAN

Penapisan Fitokimia
1. alkaloid
Serbuk
simplisia
+ ammonia
+kloroform
gerus

ammonia kloroform
+ HCl 2N
-dikocok kuat

HCl kloroform

mayer dragendroff blanko

 2. Polifenol, tannin, flavonoid, dan kuinon.

3. Monoterpen-seskuiterpen dan steroid-triterpenoid

Serbuk simplisia
-digerus dengan eter

Steroid-terpenoid Monoterpen-seskuiterpen

Lieberman-bouchard Vanillin-H2SO4

Metode ekstraksi-refluks
246 g simplisia

+ 1000 ml n-heksan
-diekstraksi selama 4 jam
-disaring
-diangin-anginkan
-diangin-anginkan
+etil
+metanol
asetat 1000
1000 mlml
-reekstraksi
residu -reekstraksi
dengan n-heksan
dengan -direfluks
-direfluks
etilasetat
2x 2xselama
selama 4 4jam
Filtrate jam
n-hexan
Filtrate etilasetat -disaring -disaring
residu
residu -disaring
residu
residu-disaring Filtrate metanol
Filtrate n-hexan

Filtrate etil asetat

Ekstraksi cair-cair (ECC)

5 g ekstrak

+100 mL air:etanol (90:10)

+n-heksan sama banyak
-dikocok
-didiamkan
-dipisahkan

Fraksi n-heksan Fraksi air

+etilasetat sama banyak
-dikocok
-didiamkan
-dipisahkan

Fraksi etilasetat Fraksi air

 Kromatografi kolom

Sampel fraksi daun salam

-dimasukkan ke kolom
-elusi dari eluen yang
kepolaran rendah hingga
yang tinggi

Subfraksi Subfraksi Subfraksi

n-heksan etil-asetat
Kromatografi Lapis tipis Preparatif metanol

Sampel subfraksi daun salam

-ditotolkan pada pelat

KLT preparative
-dielusi dalam chamber
Hasil
-kerok pita, dilarutkan
-diuapkan
Dokumentasi -dianalisis dengan KLT
Hasil

Proses refluks
menggunakan gradient
pelarut selama 4 jam
Proses penyaringan
untuk mendapatkan Proses penyaringan
filtrate n-hexan untuk mendapatkan
filtrate metanol

Proses fraksinasi Penenuhan kolom Proses elusi pada

menggunakan untuk kromatografi kromatografi kolom
Ekstraksi cair-cair kolom klasik klasik
 Penimbangan sampel
untuk digunakan pada
proses kromatografi kolom