PERHITUNGAN JUMLAH BAKTERI

(Laporan Praktikum Mikrobiologi Laut)

Oleh
Rifqa Atamaii Putri
1714221014
Kelompok 5

LABORATORIUM PERIKANAN DAN KELAUTAN

PROGRAM STUDI ILMU KELAUTAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS LAMPUNG
2018
 LEMBAR PENGESAHAN

Judul Praktikum : Perhitungan Jumlah Bakteri

Tempat Praktikum : Laboratorium Perikanan dan Kelautan
Tanggal Praktikum : 10 Oktober 2018
Nama : Rifqa Atamaii Putri
NPM : 1714221014
Program Studi : Ilmu Kelautan
Jurusan : Perikanan dan Kelautan
Fakultas : Pertanian
Universitas : Universitas Lampung
Kelompok : 5 (Lima)

Bandar Lampung, 17 Oktober 2018

Mengetahui,
Asisten Dosen

Falqi Aljizi
NPM. 1514111042

Nilai Catatan
 PERHITUNGAN JUMLAH BAKTERI
Oleh
RIFQA ATAMAII PUTRI
1714221014

ABSTRAK

Praktikum Perhitungan Jumlah Bakteri dilaksanakan pada hari Rabu, tanggal 10

Oktober 2018 di Laboratorium Perikanan dan Kelautan, Jurusan Perikanan dan
Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung. Praktikum ini bertujuan agar
mahasiswa mengetahui berbagai cara menghitung jumlah sel dari biakan suatu
bakteri. Perhitungan jumlah bakteri adalah bagaimana menghitung bakteri biakan,
menghitung jumlah sel bakteri baik individu maupun koloni sangatlah penting
dilakukan agar dapat diketahui tingkat kepadatan bakteri dalam biakan. Secara
umum, ada dua cara dalam menghitung jumlah bakteri, yaitu total plate count atau
metode hitung cawan dan dengan turbidimetri atau tingkat kekeruhan. Metode
hitung cawan dilakukan dengan mengencerkan sampel bakteri lalu meratakannya
pada cawan yang selanjutnya diinkubasi lalu dapat dilihat bakteri yang tumbuh.
Metode turbidimetri yaitu melihat kekeruhan sampel bakteri dengan gelombang
spektrofotometer.

Kata Kunci: bakteri, perhitungan bakteri, plate count, turbidimetri

I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Ketika ingin diketahui tingkat
kepadatan sel individu maupun
koloni dari bakteri, maka harus
dilakukannya perhitungan jumlah
bakteri. Banyak metode yang dapat
dilakukan untuk mengetahui jumlah
bakteri. Diantara banyak metode
perhitungan jumlah bakteri, ada
metode total plate count atau yang
biasa dikenal dengan metode hitung
cawan dan metode turbidimateri atau
yang biasa dikenal metode tingkat
kekeruhan. Kedua metode tersebut
memiliki perbedaan prinsip
meskipun pada akhirnya hasil
perhitungan bakteri yang dilakukan
kedua metode tersebut sangat mirip.
Metode total plate count atau metode
hitung cawan merupakan metode
perhitungan jumlah bakteri yang
terdiri dari pengenceran sampel
dengan PBS (phospate buffer saline)
steril hingga bakteri cukup untuk
dihitung secara akurat. Jumlah koloni
yang dapat dihitung secara akurat
pada pengenceran terakhir berjumlah
50-250 koloni. Jika hasil akhir
jumlah bakteri kurang dari 25 koloni
maka tidak dapat diterima untuk
alasan statistik, dan jika hasil
perhitungan bakteri berjumlah lebih
dari 250, maka ada kemungkinan ada
koloni yang terlalu dekat satu dengan
yang lainnya.
Metode turbidimetri atau bakteri adalah CFU/mL atau
peningkatan kekeruhan dalam kultur CFU/gram. Persyaratan jumlah
adalah indeks lain dari pertumbuhan bakteri yang dapat dihitung antara
bakteri dan jumlah atau biomassa. lain jumlah koloni per cawan petri
Dengan menggunakan adalah 25-250, perbandingan
sprektrofotometer, cahaya yang pengenceran antara yang lebih tinggi
ditransmisikan menurun ketika dengan yang lebih rendah apabila
populasi selnya meningkat. Ketika dirata-rata menghasilkan jumlahnya
cahaya ditransmisikan, cahaya yang kurang dari 2 atau menghasilka
ditransmisikan tersebut akan diubah perhitungan lebih dari 2 maka data
menjadi energi listrik dan kemudian yang digunakan adalah data yang
diindikasikan pada sebuah lebih rendah, tidak spreader, jika
galvanometer. Pembacaan secara jumlah koloni tidak ada yang
tidak langsung mencerminkan memenuhi syarat maka yang
jumlah bakteri. Metode ini lebih digunakan yang mendekati 250, jika
cepat daripada total plate count ada ulangan maka hasilnya dirata-
tetapi terbatas karena tingkat rata terlebih dahulu, penulisan
sensitifitasnya dibatasi untuk laporan menggunakan 1 angka di
suspensi bakteri. depan koma dan satu angka desimal
di belakang koma, jika desimal di
1.2 Tujuan bawah lima maka dibulatkan ke
Praktikum perhitungan jumlah bawah, dan jika lebih besar atau
bakteri bertujuan agar mahasiswa sama dengan lima maka dibulatkan
mengetahui berbagai cara ke atas (Hidayat et al., 2018).
menghitung jumlah sel dari biakan
suatu bakteri Sel bakteri dalam individu maupun
koloni dapat dihitung dalam suatu
II. TINJAUAN PUSTAKA medium biakan. Metode-metode
perhitungan bakteri diantaranya
2.1 Perhitungan Bakteri adalah hitung cawan atau plate
Jumlah sel dari bakteri yang dibiakan count, filtrasi atau penyaringan,
dapat dihitung. Berbagai cara metode MPN (Most Propable
perhitungan bakteri yang dapat Number), pengukuran kekeruhan
dilakukan antara lain perhitungan atau turbidy, pengukuran aktivitas
jumlah koloni, perhitungan dengan metabolisme (matabolic activity),
metode MPN, perhitungan dengan pengukuran berat kering sel (dry
pengecetan negatif, metode weight), dan pengukuran konsumsi
haemacytometer, ataupun metode nutrien. Metode hitung cawan
Petroff Hauser Cunter. Satuan yang merupakan cara perhitungan sel
digunakan dalam perhitungan jumlah dengan mengkultur sejumlah bahan
pada media kultur dalam cawan petri
dan jumlah sel dinyatakan sebagai
CFU (Colony Farming Unit).
Penyaringan merupakan metode
perhitungan sel dengan cara
menyaring sejumlah volume bahan
pada suatu membran berpori. Metode
MPN merupakan metode
perhitungan sel terutama untuk
perhitungan bakteri coliform
berdasarkan jumlah perkiraan
terdekat. Pengukuran kekeruhan
merupakan pengukuran massa sel
berdasarkan OD atau Optical
Density. Pengukuran aktivitas
metabolisme merupakan pengukuran
produk metabolit primer atau
sekunder. Pengukuran berat kering
sel merupakan pengukuran
berdasarkan perhitungan kadar air
sel. Terakhir, pengukuran konsumsi
nutrien merupakan mengukur nutrien
dari bakteri terutama kadar nitrogen,
karbon, oksigen dan mineral (Harti,
2015).
Perhitungan jumlah sel bakteri
dilakukan untuk melihat
pertumbuhan bakteri pada media atau
biakan. Pertumbuhan bakteri
mengacu pada perubahan jumlah
total massa sel dan bukan perubahan
individu organisme. Pertumbuhan
menyatakan pertambahan jumlah dan
atau massa sel melebihi yang ada di
inokulum asalnya. Ada berbagai cara
untuk menghitung jumlah sel bakteri,
diantaranya adalah hitungan cawan
(plate count), hitungan mikroskopis
langsung (direct microscopis count),
dan menggunakan bantuan alat
penghitung coulter (counler counter).
Contoh penerapan metode hitungan
cawan adalah perhitungan bakteri
dalam susu, air, makanan, tanah,
biakan dan sebagainya. Penerapan
hitungan mikroskopis langsung
misalnya perhitungan bakteri dalam
susu dan vaksin dan perhitungan
bakteri dengan bantuan alat
penghitung coulter dapat memakai
sampel bakteri dari mana saja
(Lestari & Hartati, 2017).
2.2 Metode Total Plate Count
(TPC)
Pengenceran sampel dengan PBS
(phospate buffer saline) steril hingga
bakteri cukup untuk dihitung secara
akurat merupakan bagian dari
metode plate count standar. Untuk
pengukuran yang akurat, jumlah
koloni yang dapat dihitung pada
pengenceran terakhir. Pada
pengenceran terakhir jumlah bakteri
sekitar 25-250 koloni atau 30-300
koloni. Jika bakteri yang dihitung
ternyata kurang dari 25 koloni, maka
perhitungan tersebut tidak dapat
diterima untuk alasan statistik, dan
jika perhitungan menyatakan lebih
dari 250 koloni pada cawan petri
maka ada kemungkinan ada koloni
yang terlalu dekat satu dengan
lainnya untuk dibedakan sebagai
colony-forming unit (CFU). Syarat
koloni yang ditentukan untuk
dihitung adalah adalah satu koloni
dihitung 1 koloni, dua koloni yang
bertumpuk dihitung 1 koloni,
beberapa koloni yang berhubungan
dihitung 1 koloni, dua koloni yang
berhimpitan dan masih dapat
dibedakan dihitung 2 koloni, koloni
yang terlalu besar (lebih besar dari
setengah luas cawan) tidak dihitung,
dan koloni yang besarnya kurang
dari setengah luas cawan dihitung 1
koloni (Harpeni et al., 2017).
Salah satu cara menghitung jumlah
sel bakteri adalah dengan metode
hitung cawan (plate count). Hitung
cawan (plate count) atau total plate
count adalah salah satu cara
perhitungan sel bakteri dengan
mengkultur sejumlah bahan atau
sampel pada media kultur dalam
cawan petri. Jumlah sel yang
dihitung pada cawan petri dinyatakan
sebagai CFU (Colony Farming Unit).
Kultur bakteri pada cawan petri
dapat dilakukan dengan metode
serial dilutions (pengenceran), pour
plates (metode taburan), dan spread
plates (metode perataan). Metode
pengenceran sampel pada total plate
count dapat dilakukan hingga 5
sampai 6 kali pengenceran. Hal ini
bertujuan agar sel bakteri yang
terdapat di cawan petri tidak terlalu
banyak sehingga mudah
dilakukannya perhitungan (Harti,
2015).
Salah satu cara untuk menghitung
jumlah bakteri dapat dilakukannya
metode total plate count atau metode
hitung cawan, metode ini dilakukan
dengan cara Semua peralatan
disterilkan dengan menggunakan
autoclave pada tekanan 15 psi selama
15 menit pada suhu 121oC.
Kemudian ditimbang media PCA,
kemudian dimasukkan ke dalam
Erlenmeyer dan diberi aquades
sebanyak 250 ml setelah itu
dihomogenkan dengan magnet putar.
pH media diatur pada pH 7,0,
selanjutnya direbus sampai agar larut
dan disterilkan dengan autoclave
pada tekanan 15 psi dengan suhu
121oC selama 15 menit. Lalu
disiapkan larutan pengencer 0,9%
NaCl, masing-masing untuk
pengenceran tingkat pertama 90 ml
dan mulut Erlenmeyer ditutup
dengan aluminium foil, sedangkan
untuk tingkat pengenceran kedua dan
ketiga masing-masing diambil 9 ml
NaCl 0,9% kemudian dimasukkan ke
dalam tabung Hush yang dilengkapi
dengan penutup. Semua larutan
pengenceran disterilkan dengan
autoclave pada suhu 121o C tekanan
15 psi selama 15 menit. Sampel
diblender dan timbang 10 gram
secara aseptis kemudian dimasukkan
ke dalam 90 ml NaCl 0,9% steril
sehingga diperoleh larutan dengan
tingkat pengenceran 10-1. Dari
pengenceran 10-1 dipipet 1 ml ke
dalam tabung reaksi 2 kemudian
dihomogenkan sehingga diperoleh
pengenceran 10-2. Dari setiap
pengenceran diambil 1 ml pindahkan
ke cawan petri steril yang telah diberi
kode untuk tiap sampel pada tingkat
pengenceran tertentu. Ke dalam
semua cawan petri dituangkan secara
aseptis PCA sebanyak 15 ml - 20 ml. kekeruhan adalah larutan standar Mc
Setelah penuangan, cawan petri Farland (Murwani, 2015).
digoyang perlahan-lahan sambil
diputar 3 kali ke kiri, ke kanan, lalu Metode turbidimetri berarti metode
ke depan, ke belakang, kiri dan perhitungan jumlah bakteri dengan
kanan, kemudian didinginkan sampai mengukur tingkat kekeruhan dari
agar mengeras. Setelah PCA padat biakan bakteri. Peningkatan
dimasukkan ke dalam inkubator kekeruhan dalam kultur adalah
selama 24 jam pada suhu 35 oC indeks lain dari pertumbuhan bakteri
(Nanlohy, 2014). dan jumlah sel atau biomassa.
Sejumlah cahaya yang
2.3 Metode Turbidimetri ditransmisikan menurun ketika
Salah satu perhitungan konsentrasi populasi sel meningkat (ini dapat
sel bakteri dapat dengan perhitungan dilihat dengan spektrfotometer).
sel dengan dasar turbiditas Cahaya yang ditransmisikan akan
(kekeruhan) yang disebut diubah menjadi enegeri listrik, dan
turbidimetri. Ketika melakukan kemudian diinokulasikan pada
metode turbidimetri, perlu diingat sebuah galvanometer. Pembacaan
bahwa antara kekeruhan dengan secara tidak langsung mencerminkan
jumlah bakteri yang hidup memiliki jumlah bakteri metode ini lebih cepat
kolerasi yang bervariasi. Hal ini daripada standar plate count tetapi
disebabkan oleh bervariasinya terbatas karena tingkat sensitifitasnya
tingkat pertumbuhan dan kematian dibatasi untuk suspensi bakteri 107
bakteri. Tingkat kekeruhan suspensi CFU atau lebih (Harpeni et al.,
biasanya tidak dipengaruhi oleh 2017).
jumlah sel yang masih hidup atau
yang sudah mati, sehingga dalam Tingkat kekeruhan atau turbiditas
perhitungan semua sel terhitung. diukur dengan metode turbidimetri.
Untuk terlaksananya beberapa Metode ini untuk menghitung jumlah
tujuan, kekeruhan dapat diukur bakteri menurut kekeruhan medianya
dengan spektrofotometer dengan yang biasa diukur dengan
panjang gelombang 490 nm dalam sprektrofotometer. Suatu
bentuk optical density (OD). Dalam spektrofotometer standar terdiri atas
menggunakan spektrofotometer, spektrofotometer untuk
dapat dilakukan perhitungan jumlah menghasilkan cahaya dengan
sel yang masih hidup, apabila panjang gelombang terseleksi yaitu
ditampilkan dalam kurva atau standar bersifat monokromatik serta suatu
baku. Biasanya larutan standar yang fotometer yaitu suatu piranti untuk
dijadikan untuk pengamatan mengukur intensitas berkas
monokromatik, penggabungan
bersama dinamakan Teknik pengenceran sangat penting
sespektrofotometer. Penggabungan dalam analisa bakteri karena hampir
alat optik ini merupakan elektronika semua metode penelitian dan
sifat kimia dan fisiknya serta perhitungan jumlah sel bakteri
detektor yang digunakan secara menggunakan teknik pengenceran
langsung mengukur intensitas dari ini. Salah satu metode untuk
cahaya yang dipancarkan dan secara menghitung kepadatan atau
tidak lansung cahaya yang kerapatan jumlah bakteri dalam suatu
diabsorbsi. Kemampuan ini biakan adalah dengan menggunakan
bergantung pada spektrum metode Total Plate Count atau TPC.
elektromagnetik yang diabsorb oleh Untuk melakukan metode Total Plate
benda (Tampedje et al., 2016). Count ini, perlu dilakukannya
pengenceran. Teknik pengenceran
2.4 Pengertian dan Fungsi bertujuan untuk melarutkan atau
Pengenceran melepaskan bakteri dari substratnya
Teknik pengenceran biasanya ke dalam air sehingga lebih mudah
dilakukan untuk memperoleh kultur penanganannya. Sampel yang telah
murni dari berbagai bakteri yang diambil kemudian disuspensikan
belum berhasil dilakukan kultivasi dalam aquades steril. Teknik
pada medium padat dan hanya pengenceran yang dipakai untuk
ditumbuhkan pada media cair. Teknik perhitungan bakteri dengan Total
pengenceran (serial dilution Plate Count adalah teknik
methods) merupakan salah satu cara pengenceran bertingkat (Sudjito,
yang dapat dilakukan untuk 2018).
melakukan perhitungan bakteri
dalam cawan (total plate count) dan Metode pengenceran dapat dilakukan
salah satu cara isolasi bakteri dalam untuk pengukuran bakteri atau
pure form yang menjadi predominan perhitungan jumlah sel bakteri per
dalam suatu kultur campuran. individu ataupun koloni.
Pengenceran berarti suatu sampel Pengenceran dilakukan dengan dari
yang telah didapatkan, diencerkan volume bakteri awal atau bagian dari
dengan suatu larutan. Pengenceran padatan, digunakan pengenceran
dapat dilakukan ke medium cair yang misalnya 10 kali pada larutan buffer
steril dalam jumlah besar dari dan dicampur atau dihomogenkan
tabung-tabung medium steril yang secara sempurna. Pada kebanyakan
diinokulasi dari setiap pengenceran pengenceran yang dilakukan, sebuah
selanjutnya (Winarno & Winarno, porsi 0,1-1,0 ml pada pengenceran
2017). pertama kemudian diencerkan lebih
lanjut sebanyak 10 kali, sheingga
total pengencerannya adalah 100
kali. Proses pengenceran ini diulangi
sampai konsentrasi bakteri
diperkirakan menjadi 1000 sel per ml
tercapai. Pada teknik sebarang pada
cawan petri, beberapa pengenceran
tertinggi (kerapatan bakteri terendah)
kemudian diambil dan disebar
tangkai gelas steril pada sebuah
medium padat yang akan membantu
bakteri untuk tumbuh. Perlu
dipastikan bahwa cairan disebar akan
terendam pada akar. Pengenceran
dilakukan agar mencegah tersisanya
cairan pada permukaan yang
menyebabkan koloni menumpuk
menjadi satu (Wignyanto & Hidayat,
2017).
2.5 Mc Farland
Larutan standar Mc Farland atau
larutan baku Mc Farland adalah
suatu larutan standar untuk menguji
suatu suspensi bakteri. Larutan
standar Mc Farland dapat dibuat
dengan 2 komponen, yaitu larutan
BaCl2 1% dan larutan H2SO4 1%.
larutan BaCl2 1% sebanyak 0,05 mL
dicampur dengan larutan H2SO4 1%
sebanyak 9,95 mL dan dikocok
hingga homogen dan terbentuk
larutan yang keruh. Nilai absorbansi
larutan standar Mc Farland harus
berada di kisaran 0,08 sampai dengan
0,13. Larutan standar Mc Farland 0,5
ekuivalen dengan suspensi sel bakteri
dengan konsentrasi 1,5x108
CFU/mL. Kekeruhan inilah yang
akan dipakai sebagai standar
suspensi bakteri uji (Tampedje et al.,
2016).
Larutan standar Mc Farland adalah
larutan standar yang biasa digunakan
untuk menjadi tolak ukur tingkat
kekeruhan media pembiakan bakteri.
Mc Farland adalah peyetaraan
konsentrasi bakteri dengan
menggunakan larutan BaCl2 1% dan
H2SO4 1%. Standar kekeruhan Mc
Farland ini dimaksudkan untuk
menggantikan perhitungan bakteri
satu per satu dan untuk
memperkirakan kepadatan sel yang
akan digunakan pada prosedur
pengujian antibakteri (Sudjito, 2018).
Keuntungan dari penggunaan standar
Mc Farland adalah tidak
dibutuhkannya waktu ikubasi yang
cukup untuk memperoleh jumlah
kepadatan bakteri yang diinginkan.
Sedangakan kerugiannya, akan
terjadi perbedaan pandangan untuk
menilai tingkat kekeruhan dari sel
bakteri. Untuk menilai kekeruhannya
dapat digunakan spektrofotometer
dengan panjang gelombang 600 nm
(Harti, 2015).
2.6 Kelebihan dan Kekurangan
Metode TPC dan Turbidimetri
Turbidimetri merupakan metode
yang cepat untuk menghitung jumlah
bakteri dalam suatu larutan
menggunakan spektrofotometer.
Bakteri menyerap cahaya sebanding
dengan volume total sel (ditentukan
oleh ukuran dan jumlah). Ketika
mikroba bertambah jumlahnya atau
semakin besar ukurannya dalam
biakan cair, terjadi peningkatan adalah bakteri yang dihitung dapat
kekeruhan dalam biakan. Kekeruhan berupa bakteri hidup maupun bakteri
dapat disebut optical density mati, tidak hanya bakteri hidupnya
(absorbsi cahaya, biasanya diukur saja (Winarno & Winarno, 2017).
pada panjang gelombang 520 nm –
700 nm). Untuk mikroba tertentu, III. METODOLOGI
kurva standar dapat memperlihatkan
jumlah organisme/ml (ditentukan 3.1 Waktu dan Tempat
dengan metode hitungancawan) Praktikum Perhitungan
hingga pengukuran optical Jumlah Bakteri dilaksanakan
density/ditentukan dengan pada hari Rabu dan Kamis,
spektrofotometer (Wignyanto & 10 dan 11 Oktober 2018
Hidayat, 2017). pukul 15.00-17.00 WIB, di
Laboratorium Perikanan dan
Salah satu keuntungan yang didapat Kelautan, Jurusan Perikanan
dari perhitungan jumlah bakteri dan Kelautan, Fakultas
melalui cawan hitung yaitu bakteri Pertanian, Universitas
yang terdapat di cawan agar yang Lampung.
berisi cairan suspensi terakhir dari
proses pengenceran adalah jumlah 3.2 Alat dan Bahan
bakteri yang dihitung tidak terlalu Alat dan bahan yang
banyak, sesuai dengan syaratnya digunakan untuk praktikum
yaitu bakteri yang ‘sah’ untuk Perhitungan Jumlah Bakteri
dihitung yaitu bakteri yang adalah sampel bakteri, Plate
berjumlah 25-250 koloni saja. Tetapi Count Agar (PCA) dalam
salah satu keuntungan metode tabung reaksi 10 ml,
turbidimetri adalah kita dapat dengan petridish, PBS (Phosphate
cepat menghitung bakteri tanpa harus Buffer Saline), larutan
mengkulturnya lagi (Harpeni et al., standard Mc Farland, bunsen,
2017). spreader, alkohol, pipet tetes,
dan spektrofotometer.
Kekurangan dari perhitungan jumlah
3.3 Cara Kerja
bakteri dengan metode cawan hitung Praktikum perhitungan
ialah tidak semua bakteri yang
jumlah bakteri dilakukan
dibiakan dapat terhitung semua.
dengan 2 cara, yaitu dengan
Bakteri yang dihitung hanyalah
cara standar plate count dan
bakteri yang masuk melalui proses
dengan metode turbidimetri.
pengenceran terlebih dahulu.
Standar plate count dilakukan
Sedangkan salah satu kekurangan
dengan mengencerkan 2
dilakukannya metode turbidimetri
tabung PCA dalam air
mendidih, dinginkan agar dimasukkan ke dalam petri
dalam penangas air (50oC) hanya 0,1 ml) dan terakhir
selama 5-10 menit, tuang hasil akhir pengalian
agar ke dalam petridish dan merupakan jumlah bakteri
biarkan membeku (10-15 yang hidup dalam satuan
menit), tandai petri dengan colony-farming unit/ml
nama dan tingkat (CFU/ml).
pengenceran, buat seri
pengenceran 10 sampai 10-5
-1 Teknik turbidimetri dilakukan
dari sampel bakteri, pipet 0,1 dengan cara membuat
ml cairan masing-masing larutan standar Mc Farland,
pengenceran ke dalam nyalakan alat
petridish yang sesuai, spektrifotometer, mengukur
gunakan spreader untuk absorbansi dari masing-
meratakan suspense di atas masing larutan Mc Farland
permukaan lempengen agar, pada panjang gelombang
bungkus petridisg dengan 560-600 nm, membuat kurva
kertas-kertas pembungkus regresi dimana y= kepadatan
dan masukan ke dalam bakter (sel/ml) dan x=
inkubator 35oC dalam posisi absorbansi, ukur absorbansi
terbalik, inkubasi selama 24- suspensi bakteri pada
48 jam, hitung koloni pada panjang gelobang 550-600
petri yang mempunyai nm lalu masukkan hasil
kisaran 25-250 koloni, hitung absorbansi suspensi bakteri
jumlah bakteri hidup dengan ke dalam rumus regresi,
cara mengalikan faktor hasilnya adalah jumlah
pengenceran yang digunakan kepadatan semua sel bakteri
dengan 10 (karena volume dalam suspensi dengan
suspense bakteri yang satuan sel/ml.

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil
Hasil perhitungan jumlah bakteri adalah sebagai berikut:

Tabel 1. Hasil perhitungan bakteri metode turbidimetri

Kelompok Absorbansi (x) Kepadatan bakteri (sel/ml)

1 0,782 1,49 x 109

 2 0,773 1,47 x 109

3 0,723 1,37 x 109

4 0, 661 1,25 x 109

5 0,788 1,5 x 109

6 0,131 1,98 x 108

Tabel 2. Hasil perhitungan bakteri metode Total Plate Count (TPC)

Kelompok Jumlah Koloni CFU/ml

1 15 6 x 107

2 23 9,2 x 107

3 120 4,8 x 108

4 98 3,92 x 108

5 28 1,4 x 108

6 2 8 x 106

4.2 Pembahasan 109, kelompok ketiga memiliki

Bakteri yang dikultur untuk
percobaan perhitungan jumlah
bakteri adalah bakteri yang sama
yaitu bakteri dari genus Vibrio. Pun
metode perhitungan jumlah bakteri
yang dilakukan oleh setiap kelompok
adalah 2 metode yang sama yaitu
metode standar plate count dan
metode turbidimetri. Tetapi, hasil
yang didapatkan oleh masing-masing
kelompok sangatlah berbeda. Pada
perhitungan metode turbidimetri,
didapatkan hasil kelompok pertama
memiliki kepadatan bakteri yaitu
1,49 x 109, kelompok kedua 1,47 x
kepadatan sebesar 1,37 x 109,
kelompok keempat yaitu 1,25 x 109,
kelompok kelima mendapatkan
kepadatan bakteri 1,5 x 109, dan
kelompok terakhir mendapatkan
kepadatan bakteri sebesar 1,08 x 108
sel/ml. Sedangkan pada metode
hitung cawan didapatkan hasil
kelompok pertama memiliki
kepadatan bakteri yaitu 6 x 107,
kelompok kedua 9,2 x 107, kelompok
ketiga memiliki kepadatan sebesar
4,8 x 108, kelompok keempat yaitu
3,92 x 108, kelompok kelima
mendapatkan kepadatan bakteri 1,4 x
108, dan kelompok terakhir
mendapatkan kepadatan bakteri
sebesar 8 x 106 CFU/sel.
Hasil dari kedua metode (hitung
cawan dan turbidimetri) dapat dilihat
dengan sangat jelas, karena
perbedaannya cukup tinggi,
kepadatan yang didapat tidak begitu
mirip. Contohnya pada kelompok 1,
kepadatan bakteri yang didapat
ketika menggunakan turbidimetri
mendapatkan hasil sebanyak 1,49 x
109, sedangkan ketika menggunakan
perhitungan dengan metode hitung
cawan mendapatkan hasil 6 x 107.
Hasil yang didapatkan dengan
menggunakan metode turbidimetri
jelas akan mendapatkan lebih banyak
bakteri karena pada saat
menggunakan metode turbidimetri,
bakteri yang dihitung adalah bakteri
yang sudah mati maupun bakteri
yang sudah hidup. Sedangkan pada
metode hitung cawan, hanya bakteri
yang hidup dan tumbuh saja yang
dapat dihitung.
Terjadi perbedaan hasil antara
metode hitung cawan dengan metode
turbidimetri. Hal ini tentu saja
menjadi hal yang sangat wajar
karena kedua metode tersebut
dilakukan dengan alat, bahan, serta
prosedur kerja yang berbeda. Metode
turbidimetri dihasilkan dari tingkat
kekeruhan biakan bakteri, artinya
bakteri yang sudah dibiakan, dilihat
tingkat kekeruhannya menggunakan
alat elektrik sprektofotometer dan
dapat dihitung jumlah bakterinya.
Ketika menghitung jumlah bakteri
menggunakan metode turbidimetri,
maka yang termasuk ke dalam
hitungan adalah bakteri hidup
maupun bakteri mati. Metode hitung
cawan dilakukan dengan cara
mengencerkan media biakan lalu
menorehkan hasil pengenceran di
atas permukaan agar cawan untuk
dikembangbiakan dan didapatkan
bakteri yang hidup dan dapat
dihitung.
Pada saat menggunakan metode
hitung cawan, salah satu yang
dilakukan sebelum mendapatkan
cairan suspensi yang diratakan di
media cawan adalah mengencerkan
media cair bakteri. Teknik
pengenceran yang dilakukan yaitu
dengan mengencerkan sebanyak 10-1
sampai 10-5, ketika sudah diencerkan
sebanyak 5 kali dalam 100
mikroliter, maka dituangnya media
bakteri tersuspensi ke dalam
permukaan agar cawan.
Dilakukannya pengenceran sebelum
dilakukannya metode hitung cawan
adalah agar bakteri yang dihitung
tidak terlalu banyak.
Kegagalan yang bisa saja terjadi
pada saat praktikum adalah,
kurangnya steril alat, bahan, maupun
ruangan yang dipakai praktikum.
Bisa juga terjadi karena praktikan
kurang hati-hati dalam melakukan
spread bakteri. Praktikum
perhitungan jumlah bakteri juga
dapat gagal ketika praktikan terlalu
banyak melakukan pengenceran
ataupun kurang steril pada saat
melakukan pengenceran. Bukan
hanya itu, kegagalan yang terjadi
juga bisa jadi karena kurang
seriusnya praktikan dalam
menjalankan praktikum.
V. PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Dapat disimpulkan bahwa
perhitungan jumlah bakteri dilakukan
dengan 2 cara, yaitu cara total plate
count atau menghitung bakteri yang
ada di cawan, dan metode
turbidimetri yaitu menghitung
bakteri berdasarkan tingkat
kekeruhan. Metode hitung cawan
dilakukan dengan mengencerkan
sampel bakteri lalu meratakannya
pada cawan yang selanjutnya
diinkubasi lalu dapat dilihat bakteri
yang tumbuh. Metode turbidimetri
yaitu melihat kekeruhan sampel
bakteri dengan gelombang
spektofotometri.
5.2 Saran
Saran untuk praktikum selanjutnya
adalah agar praktikum selanjutnya harus
lebih tertib dari praktikum saat ini
DAFTAR PUSTAKA
Harpeni, E., Setyawan, A., Ali, M.,
Susanti, O & Elisdiana, Y.
2017. Petunjuk Praktikum
Mikrobiologi Laut. Fakultas
Pertanian Universitas
Lampung. Bandar Lampung.
Harti, A. S. 2015. Mikrobiologi
Kesehatan: Peran
Mikrobiologi dalam Bidang
Kesehatan. Penerbit ANDI.
Yogyakarta.
Hidayat, N., Meitiniarti, I & Yuliana,
N. 2018. Mikroorganisme dan
Pemanfaatannya. Universitas
Brawijaya Press. Malang.
Lestari, P. B & Hartati, T. W. 2017.
Mikrobiologi Berbasis Inkuiry.
Penerbit Gunung Samudera.
Malang.
Murwani, S. 2015. Dasar-dasar
Mikrobiologi Veteriner.
Universitas Brawijaya Press.
Malang.
Nanlohy, E. E. E. M. Analisa Total
Bakteri pada Ikan Tuna Asap
yang Direndam dengan Asap
Cair “WAA SAGU” Selama
Penyimpanan pada Suhu
Kamar. Jurnal Majalah BIAM
X(2), 90-95.
Sudjito, Y. L. 2018. Smart Book
Biologi SMA Kelas X, XI, XII.
Penerbit PT Grasindo. Jakarta.
Tampedje, A. A. D., Tuda, J. S. B &
Leman, M. A. 2016. Uji Efek
Anti Bakteri Ekstrak Daun
Jambu Biji (Psidium guajava
Linn.) Terhadap Pertumbuhan
Koloni Streptococcus mutans.
Jurnal Ilmiah Farmasi Unsrat
V(3), 222-228.
Wignyanto & Hidayat, N. 2017. Kesehatan Tubuh: Peran
Bioindustri. Universitas Probiotik, Prebiotik,
Brawijaya Press. Malang. Paraprobiotik. Penerbit PT
Winarno, F. G & Winarno, W. 2015. Gramedia Pustaka Utama.
Mikrobioma Usus Bagi Jakarta.
LAMPIRAN
 Dokumentasi Cara Kerja

1. Metode Turbidimetri
No Gambar Keterangan
.
1. Larutan sampel bakteri dimasukkan ke dalam
kuvet kaca spektrofotometer sampai 3/4

2. Dimasukkan ke dalam spektrofotometer untuk

mendapatkan nilai absorbansi dari larutan
sampel bakteri

3. Setelah mendapatkan nilai absrobansi dari

larutan sampel bakteri, dapat dihitung
kepadatan jenis bakteri
2. Metode Total Plate Count (TPC)
No Gambar Keterangan
.
1. Disterilisasi alat dan bahan menggunakan
bunsen di laminar air flow

2. Diambil sampel bakteri menggunakan

mikropipet

3. Dimasukkan bakteri ke Plate Count Agar

(PCA)

4. Digunakan spreader untuk meratakan suspense

bakteri di permukaan agar

5. Ditutup PCA yang telah dibiakkan bakteri

menggunakan plastik warp
 Tabel dan Grafik Regresi

Konsentrasi Absorbansi

0,5 0,116
1 0,205
2 0,264
3 0,47
4 0,661
5 0,81
6 0,913
7 1,11
8 1,23

Larutan Mc Farland
1.4

1.2 1.23
f(x) = 0.15x + 0.03 1.11
1 R² = 0.99
0.91
Absorbansi

0.8 0.81
0.66
0.6
0.47
0.4
0.26
0.2 0.21
0.12
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Konsentrasi (ppm)
Format Laporan