Pensinyalan Purinergik (2019) 15: 85-93 https://doi.org/10.

1007/s11302-018-9638-z
ARTIKEL ASLI

Jalur adenosin untuk Mengurai 2A danhistamin depolarisasi-

membangkitkan H3 reseptor berinteraksi [3H] -GABA di rilis

cAMP / PKA
dari tikus striato-pallidal terminal
Guadalupe-Elide Morales-Figueroa1 & Nayeli Rivera-Ramírez1 & Raúl González-Pantoja1 & Juan Escamilla-
Sánchez1 & Ubaldo García-Hernández1 & Emilio J. Galvan2 & José -Antonio Arias-Montaño1
Menerima: 31 Juli 2018 / Diterima: 20 November 2018 / Diterbitkan online: 18 Desember 2018 © Springer Nature BV 2018

Abstrak Kami sebelumnya melaporkan bahwa aktivasi reseptor histamin H3 (H3Rs) secara selektif melawan

fasilitator. aksiadenosin A2A reseptor(A2ARs) pada pelepasan GABA dari tikus globus pallidus (GP) terminal

saraf terisolasi (synaptosomes). Dalam karya ini, kami memeriksa mekanisme yang mungkin mendasari interaksi
fungsional ini. Tiga kemungkinan dieksplorasi: (a) perubahan dalam reseptor afinitas Ca2+ entri, untuk agonis dan (c) yang

diinduksi A2AR / Holeh 3R fisik interaksi A2AR / Hat 3interaksi tingkatR, adenosin (b ) berlawanan 3′, 5′aksi

siklik monofosfat dari A2ARs dan (cAMP) H3Rs pada pembentukan. depolarisasi yang diinduksi Dalamsinapsis

GP membran,H3aktivasiR dengan immepip mengurangiA2AafinitasR untuk agonis 2-p- (2-karboksetil)

fenetilamino-5′-N- etilcarboxamidoadenosine hidroklorida hidrat (CGS-21680) (Ki mengontrol 4,53 nM; + immepip

9,32 nM), sedangkanA2AaktivasiR meningkatkanH3afinitasR untuk immepip (Ki mengontrol 0,63 nM; + CGS-

21680 0,26 nM). BaikA2AaktivasiR maupunH3stimulasiR termodifikasi yang dimediasi masuknya kalsium dari
depolarisasi-ditimbulkan melalui tegangan-gated [2,3-kalsium 3H] -γ-aminobutirat saluran dalam sinaptosom asam GP,

([3H] -GABA) sebagai rilis dievaluasi dari oleh mikrofluorometri GP. sinaptosom (130,4 A 2AR- ± 3,6% dari nilai kontrol)
dicegah oleh inhibitor PKA H-89 dan ditiru oleh adenylyl cyclase activator forskolin atau oleh 8- Bromo-cAMP, sebuah
membran yang memungkinkan fasilitasi [3H] - Analog rilis cAMP GABA (169,5 ± 17,3 dan 149,5 ± 14,5% dari

kontrol).H3AktivasiR gagal mengurangi induksi oleh 8-Bromo-cAMP. Dalam irisan GP,A2AaktivasiR menstimulasi

akumulasi cAMP (290% basal) dan efek ini berkurang (-75%) olehH3aktivasiR. Hasil ini menunjukkan bahwa di

terminal saraf striato-pallidal, A2ARs dan H3Rs berinteraksi pada tingkat pembentukan cAMP untuk

memodulasi aktivitas PKA dan dengan demikian melepaskan GABA.

Kata kunci Adenosine A2Areceptor . Histamin . histamin H3Reseptor . Globus pallidus . Ganglia basal .Pelepasan

GABA
Singkatan A2AR Adenosine A2A receptor GABA γ-Aminobutyric acid GP Globus pallidus H3R Histamine H3

receptor receptor
 Pendahuluan
Adenosine adalah modulator penting dari fungsi sistem saraf pusat mamalia (CNS) [1]. Adenosine diproduksi oleh
pemecahan ATP ectoenzymatic bersama dengan beberapa neurotransmiter klasik dan neuromodulator, seperti asetilkolin,
noradrenalin, γ- asam butirat amino (GABA), glutamat, dan dopamin [2]. Selain itu, neuron dan astrosit dapat langsung
melepaskan aden- * José-Antonio Arias-Montaño
osine yang terbentuk secara intraseluler melalui transporter nukleosida [3]. jaarias@fisio.cinvestav.mx
Empat reseptor berpasangan protein G (A1, A2A, A2B, dan A3)

1 Departamento de Fisiología, Biofísica y Neurociencias, Centro de

Investigación de de Estudios Avanzados del IPN, AV. IPN 2508, Ciudad de México, México

memediasi tindakan adenosine dalam SSP[4],dan ekspresi yang tinggi A2A reseptor(A2ARs) ditemukan dalam striatum,
inti accumbens, globus pallidus (GP), dan umbi penciuman -
2 Departamento de Farmacobiología, Centro de Investigación de de
Estudios Avanzados del IPN, AV. IPN 2508,
cle, dengan tingkat ekspresi rendah di tempat lain di otak [1].
GP milik ganglia basal, sekelompok sub- 07360 MÉXICO,México yang
inti neuron kortikalterlibat dalam kontrolmotorik
perilaku, di antara fungsi-fungsi lainnya [5]. GP karena itu telah
saluran yang diaktifkan tegangan; dan (c)Afungsional 2AR /
terlibat dalam patofisiologi gangguan motorik,
untukmisalnyaParkinson,penyakitdi mana perubahan dalam polaH3interaksiR yangpada tingkat pembentukan cAMP.
dan sinkroni debit neuron pallidal telah dilaporkan[6].Input sinaptik
utama untuk GP adalah pro vided oleh sub-populasi GABAergic Akun awal dari karya ini disajikan dalam bentuk abstrak
ke Masyarakat Penelitian Histamin Eropa [17].
neuron striatal yang istimewa mengungkapkan dopamin D2

reseptor dan enkephalins [5].Neuron ini juga mengungkapkan

Metode
tingkat tinggi A2ARs[7], ditambah denganGαdan protein dengan

demikian ke adenosin 3',5'-cyclic monofosfat(cAMP) / PKAHewan

jalur[8],dan yang vasi mengaktivasi memfasilitasi GABA rilis di
GP tikus[9-13]. Tikus (jantan, galur Wistar, 250-300 g), dibiakkan di fasilitas
GP yang dipersarafi oleh serat histaminergic[14]danCinvestav, digunakan dalam percobaan. Semua prosedur telah
neuron striato-pallidal mengungkapkan kepadatan tinggi histamindisetujui oleh Komite Perawatan Hewan Cinvestav dan mengikuti
pedoman untuk perawatan dan penggunaan hewan laboratorium
H3 reseptor (H3Rs) baik pada tubuh mereka[15]dan saraf ter-yang dikeluarkan oleh Institut Kesehatan Nasional (Publikasi NIH
minals[16].Dalam penelitian sebelumnya, kami menunjukkanNo. 8023, direvisi 1978) dan Dewan Meksiko untuk Perawatan
Hewan (NOM-062 -ZOO-1999). Semua upaya dilakukan untuk
bahwa aktivasi H3Rs, digabungkan denganGαi / o protein,
meminimalkan penderitaan hewan dan menggunakan hanya karena
aksi fasilitasiA2A banyak hewan diperlukan untuk analisis statistik yang tepat.
secara selektif menangkal stimulasiR pada
3
depolarisasi - membangkitkan [2,3- H] -γ-aminobutyricasamPersiapan irisan dan sinaptosom
([3pelepasanH] -GABA) dari terminal saraf terisolasi GP tikus
(sinaptosom) [16], dan dalam penelitian ini, kami telah memeriksaHewan dipenggal, otak dengan cepat dikeluarkan dari tengkorak,
mekanisme yang mungkin mendasari interaksi fungsional yangdan otak depan dipotong dan direndam dalam larutan Krebs-
dilaporkan. Tiga kemungkinan dibahas: (a) modulasiHenseleit yang sedingin es. Irisan300 μkoral (tebalm) kemudian
diperoleh dengan vibratome (World Precision Instruments,
olehH3aktivasiR dari A2AafinitasR untuk agonis, karenafisik
Sarasota, FL), dan jaringan pallidal dengan hati-hati dibedah dari
A2AR / H3interaksiR ; (B) tindakan yang berlawanan dari A2ARsirisan [16]. Komposisi
2+ yang larutan Krebs-Henseleit adalah (mM) NaCl 116, KCl 3, MgSO4 1,
dan H3Rs pada Cadiinduksi depolarisasi entrimelalui
 membran pra-inkubasi (15 menit, 30 ° C) dengan adenodine
KH2PO4 1.2, NaHCO3 25, dan D-glukosa 11 (pH 7,4 setelahdeaminase (2 U / ml) untuk menghilangkan adenosin endogen dan
3
saturasi dengan O2/ CO2, 95 : 5% v/v). Solusi ini tidakkemudian diinkubasi dengan [ H] -CGS-21680 (~ 4 nM) dan
peningkatan konsentrasi (10-10-10-5 M) dari 2-berlabelp- (2-
mengandung CaCl2 untuk mengurangi eksitotoksisitas.karboksetil) tak-fenetilamino-5′-N-ethylcarboxamidoadenosine
Synaptosom dibuat dari irisan GP (tujuh tikus per percobaan)hidroklorida hidrat (CGS-21680). Setelah 2 jam pada 25 ° C,
seperti yang dijelaskan sebelumnya [16]. inkubasi diakhiri dengan penyaringan melalui kertas serat gelas
Whatman GF / B, yang direndam dalam 0,3% polietilenaimin. Filter
Ikatan radioligand pada membran direndam dalam scintillator 3-ml dan konten tritium ditentukan oleh
synaptosomal GP tikus penghitungan kilau.
Data pengikatan saturasi dipasang pada hiperbola oleh
Pelet synaptosomal diresuspensi dalam 20 ml larutan hipotoksik (10regresi non-linear dengan GraphPad Prism 5 (Graph Pad Software,
mM Tris-HCl, 1 mM EGTA, pH 7,4, 4 ° C). Setelah 20 menit padaSan Diego, CA). Kurva inhibisi dipasang ke logistik (Hill)
4 ° C, suspensi disentrifugasi (32.000 ×g,20 menit, 4 ° C) dan peletpersamaan dan nilai-nilai untuk konstanta
(brane synaptosomal mem-) itu resuspended dalam inkubasiinhibisi(Ki) edmenurut persamaan[19]: Ki IC50
beradaCalculat- = /
penyangga (50 mM Tris- HCl, 5 mMMgCl2 pH 7.4). Kandungan
1 +{[D]/ Kd, di mana [D]adalah konsentrasi radioligand hadir
protein ditentukan oleh uji asam bicinchoninic (BCA; Pierce,
dalam uji dan Kd nilai rata-rata untuk kesetimbangan disosiasi
Rockford, IL), menggunakan bovine serum albumin (BSA) sebagai
konstan diperkirakan dari analisis saturasi yang sesuai.
standar.
Pengikatan N-α- [metil3H] -histamine([3H] -NMHA) untuk
Depolarisasi yang ditimbulkan [3H] -GABA rilis
H3Rs hadir dalam membran synaptosomal (~ 50 μgdari GP synaptosomes
aliquotsprotein)dilakukan seperti yang dijelaskan secara rinci di
tempat lain[18].Untuk[3pengikatanH] -CGS-21680 keEksperimen dilakukan seperti yang dijelaskan secara rinci di tempat
lain [16]. Secara singkat, sinaptosom disuspensikan dalam larutan
A2ARs,saturasi analisisdilakukan dalam 100 μlbuffer yang
Krebs-Ringer-Hepes yang dilengkapi dengan 10 μM asam
mengandung [3H] - CGS-21680 (0,01-12 nM) dan ~ 50μg protein.aminooksiasetat, 2 U / ml adenosin deaminase, dan campuran [ 3H]

Ikatan spesifik ditentukan sebagai tidak sensitif terhadapA -

2AR

antagonisZM-241385 (10 μM). Untuk percobaan penghambatan,

86 Purinergic Signaling (2019) 15: 85-93
GABA / GABA (80 nM / 3 μM). Setelah inkubasi selama 30 menit13 untuk CGS - 21680, 8-Br-cAMP dan forskolin, dan fraksi 5-13
pada suhu 37 ° C, suspensi sinaptosomal dibagi secara acak antarauntuk immepip dan H-89). Protokol nadi ganda memungkinkan
ruang-ruang peralatan superfusi (15 meter secara paralel; 100 μlperuntuk sampel synaptosomal yang sama menjadi kontrol untuk efek
ruang) dan perfusi (1 ml / menit) dengan Krebs- Solusi Ringer-obat yang diuji.
Hepes. Komposisi larutan ini adalah (mM) NaCl 113, NaHCO3 25, Untuk memungkinkan variasi antara ruang, nilai fraksional
ditransformasikan ke persentase fraksi pertama. Untuk menguji
KCl 4.7, MgCl2 1.2, KH2PO4 1.2, CaCl2 1.8, D-glukosa 15, danperbedaan statistik antara perlakuan, setelah pengurangan rilis
basal, area di bawah kurva rilis untuk enam fraksi setelah perubahan
Hepes 20, pada pH 7,4 dengan NaOH. ke Ktinggi+ (yaitu, fraksi 3-8 dan 12-17) ditentukan untuk setiap
Sinaptosom disempurnakan selama 20 menit sebelumkamar individu dan rasio yang kedua dariKpertama+ stimulasi(S2 /
pengumpulan 17 fraksi masing-masing 1 ml (1 menit). [3H] -GABAS1) dihitung.
rilis distimulasi dengan beralih ke solusi Krebs-Ringer-Hepes yang
mengandung Ktinggi+ (20 mM, KCl disubstitusi untuk NaCl) untukUji akumulasi akumulasi
fraksi 4 dan 13, kembali ke solusi normal antara fraksi ini dancAMP Pukulan
setelahKkedua+ stimulus. Obat-obatan yang diuji hadir 5 menit
(CGS-21680, 8-Br-cAMP, dan forskolin) atau 8 menit (immepipGP (diameter 2 mm) diperoleh dari irisanotak (300
dan H-89) sebelum dan sepanjangKkedua+ stimulus(yaitu, fraksi 8-μkoronertebalm) dalam larutan Krebs-Henseleit tanpaCaCl2
 dengan mikrofluorometer RF-F3010 (Photon Technology
ditambahkan. Setelah kesetimbangan selama 30 menit pada
International, South Brunswick, NJ). Perubahan pada [Ca2+]saya
37 ° C dalam larutan yang sama yang mengandung 1,8 mM CaCl2,
ditentukan dengan mengukur rasio fluoresensi (510 nm) setelah
pukulan ditempatkan dalam tabung plastik (dua per tabung) dan eksitasi dengan lampu dengan panjang gelombang 340 atau 380 nm.
diinkubasi (15 menit, 37 ° C) dalam 200 μllarutan Krebs-HenseleitRekaman Fura 2 diperoleh pada frekuensi 20 Hz dan fluoresensi
yang mengandung adenosin dekaminase (0,5 U / ml) dan 1 mM 3- latar belakang pada 340 dan 380 nm ditentukan dari area bebas
isobutyl-1-methylxantine (IBMX). Obat-obatan yang diuji synaptosome dari bilik.
ditambahkan dalam10μlvolumedan inkubasi dilanjutkan selama 30 Sinaptosom disempurnakan dengan larutan Krebs-Ringer-
menit. Reaksi dihentikan dengan menambahkan 1 ml larutan Krebs- Hepes pada kecepatan 1 ml / menit. Untuk percobaan dua-pulsa,
Henseleit sedingin es, tabung ditempatkan di atas es, dan larutan obat-obatan atau KCl (25 mM, disubstitusi untuk NaCl)
disedot sebelum menambahkan 25 μlHCl sedingin es (1 M). Setelah diaplikasikan dalam larutan perfusi. Untuk menguji efek obat,
30 menit pada 4 ° C, sampel dinetralkan (25 μl 1 M NaOH dan 100setelah pengurangan dari fluoresensi basal, area di bawah kurva
μl1M Tris-HCl pH 7.0) dan disentrifugasi (15.000 ×g,3 menit, 4 °untuk K+- diinduksi peningkatan fluoresensi ditentukan dan rasio
C). kedua atas K pertama+ stimuli (S2 / S1) dihitung.
CAMP endogen ditentukan oleh uji kompetisi [20]. Secara
singkat, sampel dari ekstrak (50 μl) dicampur dengan 75 μl inkubasi
Analisis statistik
buffer yang mengandung supernatan mentah dari medula adrenal
sapi dan [2,8-3H] -adenosine 3',5'fosfat -cyclic([3H ] -cAMP; 10
Data yang disajikan adalah mean ± standard error (SEM), kecuali
nM). Setelah 2,5 jam pada suhu 4 ° C, inkubasi diakhiri dengan
dinyatakan sebaliknya. Perbandingan statistik dilakukan
filtrasi pada filter GF / B yang direndam dalam 0,3% polietilenimin
denganStudents t 'ujiatau satu arah ANOVA dan post hocDunnett's
diikuti oleh tiga kali pencucian dengan 1 ml air deionisasi es dingin.
atau Tukey'stes (GraphPad Prism 5.0) sebagai appropri- makan.
Radioaktivitas yang ditahan
Signifikansi statistik ditetapkan pada P ≤ 0,05.
ditentukan oleh kilau cair, dan jumlah cAMP yang ada di setiap
sampel dihitung dengan ekstrapolasi ke kurva cAMP standar (10-
-10-5 M). Komposisi buffer inkubasi adalah 50 mM Tris-HCl, 100ObatOb
12

mM NaCl, 5 mM EDTA, dan 5 mg / ml BSA, pH 7,0 pada 4 ° C. at

-obatan-obatan berikut dibeli dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO):

Mikrofluorometri
adenosine deaminase (dari bovine spleen), asam aminooksiat
hemihidroklorida, cAMP, CGS-21680, histamin dihidroklorida,
Synaptosomes disuspensikan kembali dalam larutan Krebs-Ringer-IBMX, dan immepip dihydrobromide. Fura 2-AM berasal dari
Hepes yang mengandungCa2+ pewarna indikatorFura 2- AM (1Probe Molekul (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). [ 3H] -
μM) dan 3% BSA dan dilapisi pada ruang plastik rekaman yang
GABA (82 Ci / mmol), N-α- [metil-3H]-histamin (83,4 Ci / mmol),
sebelumnya dilapisi dengan concanavalin A (2 mg / ml ). Setelah 3
[ H] -camp (34 Ci / mmol), dan [3H] -CGS-21680 (35,2 Ci / mmol)
60 menit pada 37 ° C dalam gelap, sinaptosom dibilas dengan
larutan Krebs-Ringer-Hepes. Ruang rekaman diposisikan padaberasal dari PerkinElmer (Boston, MA). Untuk uji akumulasi
mikroskop terbalik TMD (Nikon, Jepang) yang dipasangkancAMP, digunakan supernatan kasar dari medula adrenal sapi.
Pensinyalan Purinergik (2019) 15: 85-93 87
Hasil konstan(Kd)3,98 nM (pKd 8.40 ± 0.08), mirip ke Ki yang
diperoleh dalam eksperimen penghambatan homolog (lihat di
[3H] -CGS-21680 mengikat ke membran bawah).
synaptosomal GP spesifik [3PengikatanH] -CGS-21680 dihambat dalam cara
yang bergantung pada konsentrasi oleh unlabelled CGS-21680
Kejenuhan pengikatanA2AagonisR [3H] -CGS-21680 [21] ke(Gbr. 1b), dengan nilai pK
i (-log Ki) 8,34 ± 0,10 (Ki 4,53 nM;
membran dari GP synaptosomes ( Gambar. 1a) menghasilkan max-
tiga percobaan). Selektif H3R agonis immepip (30 nM) berkurang
imum spesifik mengikat(Bmax)454 ± 77 fmol / mg protein (rata-
rata ± SEM, lima percobaan) dan kesetimbangan disosiasisederhana tetapi secara signifikan A2AR afinitas untuk CGS-
 forskolin (10 μM), aktivator siklase adenylyl langsung, dan oleh 8-
21680(Ki 9,32 nM; pKi 8.03 ± 0,07; P = 0,002, Mahasiswa's t,
Bromo-cAMP (500 μM), analog cAMP permeant membran (Gbr.
uji empat percobaan). 2a, b). Dalam irisan GP, studi electrophysiological menunjukkan
Kepadatan tinggi H3Rs sebelumnya terdeteksi fasilitasi A2AR-dimediasi pelepasan GABA bergantung pada
3 jalur cAMP / PKA [11, 22], dan pada sindrom GP, inhibitor PKA
dalamGP membran synaptosomal(maksimum [ H] -NMHA
H-89 (10 μM) mencegah efekA2AaktivasiR (Gbr. 2c). Bersama-
mengikat, 1327 ± 79 fmol / mg protein) [16]. A2AR agonis CGS-
21.680 (3 dan 6 nM) meningkat secara sederhana tapi signifikan: Kisama, data ini menunjukkan bahwa jalur cAMP / PKA mendasari

dari H3R agonis immepip dari 0,63 nM (pKi 9.20 ± 0.01)efek peningkatanA2AaktivasiR pada depolarisasi [3H] -
pelepasan GABA dari sinaptosom GP.
menjadi 0,50 dan 0,26 nM (pKi 9,30 ± 0,02; P <0,05 dan 9,58
Untuk menguji apakah tindakan
± 0,02; P <0,01; ANOVA satu arah dan Tukey'suji; tiga
3
percobaan). Gambar 1c menggambarkan efek 6 nM CGS-21680. penghambatanH3aktivasiR pada fasilitasi[ pelepasanH] -GABA
yang diinduksi oleh jalur cAMP / PKA diberikan pada atau
pembentukan cAMP hilir, efek dari 8-Bromo-cAMP adalah
Efek stimulasi dariA2AaktivasiR padadepolarisasi
dievaluasi dengan ada atau tidak adanyaH3R. immepip
[3pelepasan yang dipicuH] -GABA dari GP
synaptosomes melibatkan jalur cAMP / PKA agonisGambar 2d menunjukkan bahwaH3aktivasiR tidak memiliki
efek yang signifikan pada tindakan fasilitasi 8- Bromo-cAMP pada
3
The Ca2+-dependent [3H] -GABA release from synapto GP yang depolarisasi [ H] -GABA yang dikeluarkan dari sinaptosom GP.
diinduksi oleh depolarisasi dengan 20 mM KCl ditingkatkan

EfekA2AR dan H3aktivasiR pada peningkatan

yang diinduksi depolarisasi dalamCaintraseluler2+
konsentrasi([Ca2+] i) dari sinaptosom GP.

Meningkatkan konsentrasiK+ iondalam larutan perfusi dari 4,7

menjadi 25 mM menghasilkan peningkatan [Ca2+] i dari sinaptosom
GP. Gambar 3 menunjukkan bahwa dalam protokol dua-pulsa,
perfusi denganA2AagonisR CGS-21680 (10 nM) tidak
berpengaruh pada rasio S2 / S1 (kontrol 0,985 ± 0,007; CGS- 21680
. Gambar. 1 Pada membran sinaptosomal GP,H3aktivasiR 0,979 ± 0,008; P = 0,656). Ko-perfusi CGS-21680 danH
3immepip

menurunkanA2AR afinitasuntuk agonis CGS-21680, sedangkanA2AaktivasiR

agonisR (100 nM) juga gagal pada
meningkatkanH3afinitasR untuk immepip agonis. sebuah Saturation

pengikatan[3H] -CGS- 21.680 ke A2A.Rs Pengikatan reseptor spesifik

ditentukan dengan mengurangi pengikatan di hadapanA2AantagonisR ZM-

241385 (10 μM) dari pengikatan total. Poin adalah ± rentang dari duplikat dari
satu percobaan, yang diulang empat kali lebih jauh. Garis yang ditarik adalah
yang paling cocok untuk hiperbola. -Nilai terbaik-fit untuk kesetimbangan

disosiasi konstan(Kd)dan maksimum mengikat(Bmax)diberikan dalam teks.

oleh A2AaktivasiR[16].Dalam penelitian ini, efek fasilitasi

CGS-21680 (3 nM, 130,4 ± 3,6% dari nilai kontrol) ditiru oleh
 sebagai persentase pengikatan kontrol dan sesuai dengan rata-rata ± SEM dari
H3immepip agonisR (30 nM) menurunkan potensi CGS-21680 untuk
tiga ulangan dari eksperimen yang representatif. Garis yang ditarik adalah yang
menghambat pengikatan spesifik [3H] -CGS -21680 ke A2ARs. c A2AAgonisRpaling cocok untuk persamaan logistik untuk model satu situs. Analisis nilai Ki
CGS-21680 (6 nM) meningkatkan potensi immepip untuk menghambat [ 3H] -
NMHA yang berikatan dengan H3Rs. Untuk panelb danc, nilai dinyatakandan pK
i yang dihitung dariICpaling cocok50 perkiraandisajikan dalam teks.

88 Purinergic Signaling (2019) 15: 85-93

Gambar 4a menunjukkan bahwa pada irisan GP,A2AagonisR CGS-

21680 merangsang akumulasi cAMP dengan cara yang tergantung
pada konsentrasi (EC50 3.1 nM ; efek maksimal 281% dari
akumulasi basal pada 10 nM). Dalam serangkaian percobaan yang
berbeda, efek CGS-21680 (10 nM, 290% dari akumulasi
basal)H3diturunkan oleh immepip agonisR (penghambatan

75% pada 100 nM, IC50 8,6 nM; Gbr. 4)b).

Gambar. 2 Keterlibatan jalur cAMP / PKA dalamdepolarisasi [ 3pelepasanH] -
GABA dari synaptosomes globus pallidus tikus. a Ilustrasi percobaan
perwakilan. Sinaptosom berlabel disempurnakan dengan larutan Krebs-Ringer-
Hepes dan [3H] -GABA dikeluarkan dengan menaikkanK+ konsentrasidari 4
hingga 20 mM untuk periode yang ditunjukkan oleh batang abu-abu vertikal.
Obat yang diuji hadir untuk periode yang ditunjukkan oleh bilah terbuka. Nilai
dinyatakan sebagai persentase[3pelepasan GABAH] dalam fraksi 1 dan
mewakili rata-rata ± SEM dari empat hingga enam ulangan. b Forskolin dan 8-
Br-cAMP meningkatkandepolarisasi [3pelepasanH] -GABA. Setelah
pengurangan rilis basal, area di bawah kurva rilis untuk fraksi 3-8 (S1) dan 12-
17 (S2) ditentukan untuk setiap ruang individu dan rasio S2 / S1 dihitung. Nilai
dinyatakan sebagai persentase kontrol [3H] -GABA rilis (tidak ada obat yang
ditambahkan)

Diskusi

Dalam irisan GP,A2AaktivasiR memfasilitasi rilis GABA [9,

12], dan studi elektrofisiologis menunjukkan efek ini tergantung
pada cAMP / Jalur PKA [11, 22]. Kami sebelumnya melaporkan

bahwa H3Rs hadir di kepadatan tinggi padaGP tosomessynap-

,di mana aktivasi mereka selektif menetral aksi fasilitasi
memodifikasi rasio S2 / S1 (kontrol 1,023 ± 0,003; CGS- 21680 /
[3
immepip 1,001 ± 0,010; P = 0,2759). Hasil ini menunjukkan bahwaA2AstimulasiR pada depolarization- membangkitkan H] -
GABA rilis[16].Dalam karya ini, kami menganalisis tiga
efekA2AR atau H3aktivasiR pada pelepasan GABA tidak
melibatkan tindakan modulasi padaCadiaktifkan tegangan 2+ yangmekanisme yang dapat mendasari efek H3R dan menunjukkan
saluran. bahwa kemungkinan besar bergantung pada penghambatan
pembentukan cAMP.

PengaruhH3aktivasiR padaA2Apeningkatan Pengaruh H3aktivasi R pada afinitas A2ARs

untuk agonis CGS-21680
yang diinduksiR dalam akumulasi cAMP pada
irisan GP
 Antagonis PKA H-89 (10 μM) mencegah efek fasilitasiA2AagonisR CGS-21680
Pada sel transfected, H3Rs membentuk heteromers dengan
(3 nM) padaK+rilis-evoked [3H] -GABA. Nilai adalah rata-rata ± SEM dari
empat percobaan. d H3R agonis immepip (100 nM) tidak menghambat efek
dopamin D1 dan D2 reseptor, dan dalam membran striatal,
fasilitasi dari 8-Br-cAMP (500 μM) pada depolarisasi-membangkitkan[3H] -

H3aktivasi R menurunkan afinitasD2 Reseptoruntuk agonisGABA rilis. Nilai adalah rata-rata ± SEM dari lima percobaan. Untuk panel b
dan c,analisis statistik dilakukan dengan ANOVA dan Dunnett'suji; ns, tidak
ada perbedaan yang signifikan, *P <0,05, **P <0,01 versus nilai kontrol. Untuk
[23], panel d,nilai-nilai dibandingkan dengan ANOVA dan Tukey'suji;ns,tidak
dan merupakan rata-rata ± SEM dari tiga percobaan dengan empat hingga enamsignifikan berbeda, *P <0,05
ulangan. Analisis statistik dilakukan denganANOVA dan Dunnettuji's. c
Purinergic Signaling (2019) 15: 85-93 89
kedua (25 mM KCl,

Gambar. 4 Pengaruh A2AR dan H3aktivasi R pada akumulasi cAMP pada

tikus globus iris pallidus. yang Stimulasioleh Sebuah2AR agonis CGS-21680.

Slices diinkubasi dengan CGS-21680 selama 30 menit di Krebs-Henseleit solusi
(1 mM IBMX). Nilai adalah sarana ± SEM dari lima percobaan. b
Penghambatan oleh H3aktivasi R dari A2AR- diinduksi cAMP akumulasi.
penghambatan pembentukan cAMP[24].Kami baru-baru
menunjukkan bahwa endogen dan transfected H3 dan A2A

reseptormembentuk
20 s, bar hitam). b Kurangnya efekA2AagonisR CGS-21680 (10 nM). Rasio
kedua terhadapKpertama+ rangsangan(S2 / S1) dihitung seperti yang dijelaskan
dalam BMetode^ dan dinyatakan sebagai rata-rata ± SEM dari empat percobaan.
AUC, area di bawah kurva. c Kurangnya efek CGS-21680 (10 nM) dan H3R
agonis immepip (100 nM). Nilai adalah rata-rata ± SEM dari empat percobaan.
Analisis statistik per- dibentuk denganStudent's t uji

sedangkan di sel SK-N-MC menggeser kopling D1 reseptor dari

Gαs untukGαi / o protein dan karena itu dari stimulasi pada

Gambar. 3 Kurangnya efekA2AR dan H3aktivasipada peningkatan yang
diinduksi depolarisasi padaCaintraseluler2+ konsentrasi([Ca2+]i) pada globus
pallidus synaptosomes. a Representative menelusuri. Synaptosomes dimuat
dengan Fura 2-AM yang perfusi dengan larutan Krebs-Ringer-Hepes (1 ml /
menit), dan perubahan fluoresensi ditentukan oleh mikrofluorometri. Obat yang
diuji hadir dalam larutan (bar terbuka) sebelum dan selama stimulus depolarisasi
Slicesdiinkubasi selama 30 menit dengan CGS-21680 (10 nM) dengan tidakkonsentrasiatau setengah penghambatan (IC50, b) diperoleh dengan regresi
adanya atau kehadiran konsentrasi ditunjukkan dari H3R agonis immepip,nonlinear dengan GraphPad Prism 5

tambah 5 menit sebelum CGS- 21680. Nilai untuksetengah stimulasi (EC50, a)

90 Purinergic Signaling (2019) 15: 85-93
heterodimer [25], yang dapat oleh karena itu mendasari interaksi
dioperasikan tegangan tipe N dan P / Q [28-30]. Peningkatan A2AR-
H3R / A2AR dalam rilis GABA. mediated dari kedua pelepasan asetilkolin dari striatal
synaptosomes dan pelepasan GABA dari hippocampal synapto-
Hasil kami menunjukkan bahwaH3aktivasiR
somes melibatkan, setidaknya sebagian, jalur cAMP / PKA
mengurangiA2AafinitasR untuk agonis CGS-21680 dan,danCatipe P2+ saluran[31, 32], dan D1 reseptor dimediasi fasilitasi

sebaliknya, bahwaA2AaktivasiR meningkatkanH3afinitasR untukdan H3penghambatan R-dimediasi GABA rilis dari terminal
2+
immepip agonis. Meskipun data ini mendukungH3R /striatal muncul untuk berkumpul di P-jenis Ca saluran[33,

A2AdimerisasiR ditikus terminal saraf GP,34].Salah satu penjelasan yang masuk akal untuk interaksi H3R /

penguranganA2AafinitasR (~ 2 kali lipat) menyiratkan efekA2AR dalam[3rilisH] -GABA dari terminal striato pallidal
sederhana pada hunian reseptor oleh adenosin, terutama padadengan demikian bahwaGβ yang kompleksdilepaskan dariGαi / o
konsentrasi tinggi modulator.
proteinpada saatH aktivasiR menghambat tegangan yang
3
Voltametri siklik cepat menunjukkan bahwa pada tikus
diaktifkan Ca2+ saluran yang pembukaannya difasilitasi
yang dianestesi, transien adenosin spontan menghasilkan 170 dan
190 nM untuk striatum dan korteks prefrontal [26], sedangkan padaolehA2AstimulasiR, mungkin oleh fosforilasi yang dimediasi
irisan, transien ini menghasilkan 110, 160, dan 240 nM untuk
korteks pre-frontal, thalamus , dan hippocampus, masing-masingoleh PKA . Namun, dalam percobaan kami, aktivasi A2ARs gagal
meningkatkan peningkatan [Ca2+] yang diinduksi oleh depo-
[27]. Sebuah2AafinitasR untuk adenosin mendekati 150 nM[1].
lariisasi di sinaptosom GP, menunjukkan bahwa tindakan fasilitasi
Dengan asumsi bahwa dalam transien adenosin GP spontan
mereka pada rilis GABA dan karenanya efisiensi modulasi
menghasilkan nilai yang dilaporkan untuk striatum (170
Pengaruh H3Rs tidak terjadi padaCadiaktifkan tegangan2+ yang
nM),A2AhunianR oleh adenosin akan menjadi 53% dan penurunan
dua kali dalam afinitas untuk agonis yang diinduksisaluran , setidaknya di bawah kondisi eksperimental yang
digunakan dalam
olehHpenempatan3aktivasiR akan mengurangi reseptor ke 36%.
penelitian ini. Kesimpulan ini sesuai dengan data elektro-fisiologis
Seperti disebutkan di atas, efek ini akan berkurang dan akhirnya
Shindou et al. [11], yang menunjukkan bahwa memblokirCa2+
dihapuskan pada konsentrasi adenosin yang tinggi. Titik ini
diilustrasikan oleh Gambar. 1b, di mana pergeseran ke kanan dalam salurandengan CdCl2 tidak mencegaholeh A2Afasilitasi yang
kurva konsentrasi-respons diamati untuk konsentrasi CGS-21680
antara 1 dan 30 nM menghilang pada konsentrasi 100 nM dan di dimediasiR untuk pelepasan GABA dalam irisan GP.
atas. Jadi, dimerisasi saja tampaknya tidak cukup untuk

menjelaskan interaksi fungsional antara H3Rs dan A2ARs.

[3H] -GABA melepaskan dan modulasi jalur cAMP

/ PKA oleh A2ARs dan H3Rs

Kurangnya efekA2AaktivasiR pada
peningkatan [Cadiinduksi depolarisasi Shindou et al. [11, 22] menunjukkan bahwaA2AmodulasiR
pada2+] yang efekpada pelepasan GABA yang diamati pada irisan GP tergantung
pada aktivasi jalur cAMP / PKA, karena aktivator adenylyl cyclase
forskolin meningkatkan pelepasan GABA dan kedua penghambat
H3Rs hingga Gαi / o proteinmembuat kemungkinan bahwa efekadenylyl cyclase SQ22536 dan PKA inhibitor H-89 mencegah
penghambatannya pada pelepasan neurotransmitter melibatkan
peningkatan frekuensi GABAA yang diperantarai reseptor
penurunan depolarisasi-diinduksiCa2+ entrimelalui saluran yang
 redistribusi vesikel sinaptik, dan efek metilprednisol ditandai
miniatur penghambatpostsinaptik arus(mIPSCs).
Dengan
dengan efek samping dikurangi dengan inhibisi PKA [35]. Pada sel
pendekatan neurokimia, kami menunjukkan di sini bahwa forskolinneuroblastoma manusia SH-SY5Y yang berbeda,
dan 8-Bromo-cAMP meniru peningkatan A2AR- mediated dariaktivasiAendogen2A
reseptormemfasilitasidepolarisasi
depolarisasi yang diinduksi [3H] - pelepasan GABA dari[3pelepasanH] -noradrenalin, dan efek ini juga dicegah dengan
sinaptosom GP dan bahwa penghambatan PKA mencegah efekpenghambatan PKA [36]. Informasi ini mendukung bahwa efek
A2AR (Gbr. 2c), mendukung partisipasi jalur cAMP / PKA. fasilitator dariA2A reseptorpadaneurotransmitter
pelepasanterutama dimediasi oleh jalur cAMP / PKA.
Efek fasilitatif dariA2A reseptorpada pelepasan GABA
juga telah dilaporkan untuk sinaptosom hippocampal, di mana Dalam karya ini,H3aktivasiR gagal untuk menghambat
CGS-21680 (1-10 nM; jelas EC50 3 nM) meningkatkanK+-
efek 8- Bromo-cAMP pada rilis GABA (Gambar 2d),
membangkitkan [3rilisH] -GABA dengan fasilitasi maksimal dari
menunjukkan bahwa aksi H3R pada A2AR-mediated
34 ± 4% pada 10 nM. Efek ini ditiru oleh forskolin (tetapi tidak
dengan analognya yang tidak aktif 1,9-dideoxyforskolin), analog
peningkatan GABA re- leasing diberikan di tingkat pembentukan
cAMP dibutyryl-cAMP dan 8-bromo-cAMP, dan rolipram inhibitor
fosfodiesterase inhibitor. Selain itu, efek konsentrasi submaksimalcAMP. Hypoth- ESIS ini didukung oleh H3penghambatan R-
CGS-21680 (1 nM) secara signifikan tersumbat oleh dibutyryl-
cAMP, 8-bromo-cAMP, dan forskolin dan diperkuat olehdimediasi A2AR- akumulasi diinduksi cAMP diamati di iris GP
phosphodiesterase inhibitor rolipram [32]).
(Gambar. 4).KarenaA2AaktivasiR tidak berpengaruh pada
Sehubungan dengan neurotransmiter lain, untuk transmisi
neuromuskuler, fasilitasi oleh metilprednisolon dari eksositosis[Ca2+] i dalamGP sinaptosom(Gbr. 3), jalur cAMP / PKA dapat
dan[3pelepasan asetilkolinH] melibatkan aktivasi reseptorbertindak dengan

presinaptik A2A oleh adenosin endogen yang mengarah ke

Purinergic Signaling (2019) 15: 85-93 91
hilir Ca2+ entri, for example on exocytosis proteins such as synapsin
1, SNAP-25, rabfilin 3A, syntaxin, and RIM1a/2a, whoseAcknowledgements G.-EM-F. and NRR held Conacyt pre-doctoral
phosphorylation by PKA leads to redistri- bution of synapticscholarships.
vesicles [35, 37, 38]. In this regard, in neurons of rat medulla
Author contributions G.-EM-F., EJG, and J.-AA-M. designed the study. G.-
oblongata in primary culture, A2AR activation enhanced exocytosisEM-F., JE-S., RG-P., UG-H., and NR-R. conducted ex- periments. G.-EM-F.
and the phosphorylation of synapsin I and the latter effect wasand J.-AA-M. performed data analysis. G.-EM- F. and J.-AA-M. wrote the
manuscript.
prevented by the PKA inhibition [38].
Funding This study was supported by Cinvestav and Conacyt (grant 220448 to
J.-AA-M.).
Conclusion
Compliance with ethical
The GP has emerged as a key point in the control of the basalstandards
ganglia motor output [5, 6]. In this work, we showed that the
Conflict of interest The authors declare they do not have any actual or
opposite effects of A2ARs and H3Rs on GABA release from
potential conflict of interest.
striato-pallidal afferents rely on the stimulation and inhibition of the
cAMP/PKA pathway, respectively. Recent work shows that cAMPEthical approval All procedures were approved by the Cinvestav Animal Care
formation in striato-pallidal neurons increases their spiking activityCommittee and followed the guidelines for the care and use of laboratory
leading to inhibition of the spontaneous firing of GP neurons andanimals issued by the National Institutes of Health (NIH Publications No. 8023,
reduced motor activity [39]. Through the activation of presynapticrevised 1978) and the Mexican Council for Animal Care (NOM-062-ZOO-
1999).
H3Rs, histamine could therefore con- tribute to the regulation of
Publisher's Note Springer Nature remains neutral with regard to juris-
the activity of GP neurons and thus of basal ganglia function.
dictional claims in published maps and institutional affiliations.
References Br J Pharmacol 136:296–302 12. Floran B, Gonzalez B, Floran L, Erlij D,
Aceves J (2005) Interactions between adenosine A2A and dopamine D2

1. Stockwell J, Jakova E, Cayabyab FS (2017) Adenosine A1 and A2A 3

receptors in the control of [ H]GABA release in the globus pallidus of the rat.
receptors in the brain: current research and their role in neu- rodegeneration.
Eur J Pharmacol 520:43–50 13. Diao HL, Xue Y, Han XH, Wang SY, Liu C,
Molecules 22:676 2. Burnstock G (2006) Historical review: ATP as a Chen WF, Chen L (2017) Adenosine A2A receptor modulates the activity of
neurotransmitter.
globus pallidus neurons in rat. Front Physiol 8:897 14. Panula P, Pirvola U,
Trends Pharmacol Sci 27:166–176 Auvinen S, Airaksinen MS (1989) Histamine- immunoreactive nerve fibers in
3. Wall MJ, Dale N (2007) Auto-inhibition of rat parallel fibre- Purkinje cell
the rat brain. Neuroscience 28:585–610 15. Pillot C, Heron A, Cochois V,
synapses by activity-dependent adenosine release. J Physiol 581:553–565 4. Tardivel-Lacombe J, Ligneau X, Schwartz JC, Arrang JM (2002) A detailed
Fredholm BB, IJzerman AP, Jacobson KA, Linden J, Müller CE (2011) mapping of the hista- mine H3 receptor and its gene transcripts in rat brain.
International Union of Basic and Clinical Pharmacology. LXXXI.
Neuroscience 114:173–193 16. Morales-Figueroa GE, Márquez-Gómez R,
Nomenclature and classification of adenosine receptors- an update.
González-Pantoja R, Escamilla-Sánchez J, Arias-Montaño JA (2014)
Pharmacol Rev 63:1–34 5. Bolam JP, Hanley JJ, Booth PA, Bevan MD
Histamine H3 re- ceptor activation counteracts adenosine A2A receptor-
(2000) Synaptic orga-
mediated en- hancement of depolarization-evoked [3H]-GABA release from rat
nisation of the basal ganglia. J Anat 196:527–542 6. Chan CS,
globus pallidus synaptosomes. ACS Chem Neurosci 5:637–645 17. Morales-
Surmeier DJ, Yung WH (2005) Striatal information sig- naling and integration
Figueroa GE, González-Pantoja R, Escamilla-Sánchez J, Arias-Montaño JA
in globus pallidus: timing matters. Neurosignals 14:281–289 7. Bogenpohl JW,
(2017) Functional interaction between hista- mine H3 receptors and adenosine
Ritter SL, Hall RA, Smith Y (2012) Adenosine A2A receptor in the monkey A2A receptors in rat striato- pallidal nerve terminals. 46th Annual Meeting,
European Histamine Research Society. Inflamm Res 66 (Suppl. 1), S21 18.
basal ganglia: ultrastructural localization and colocalization with the Osorio-Espinoza A, Alatorre A, Ramos-Jimenez J, Garduño-Torres B, García-
metabotropic glutamate receptor 5 in the striatum. J Comp Neurol 520:570– Ramírez M, Querejeta E, Arias-Montaño JA (2011) Pre- synaptic histamine H3
589 8. Fredholm BB, IJzerman AP, Jacobson KA, Klotz KN, Linden J (2001)
International Union of Pharmacology. XXV. Nomenclature and classification receptors modulate glutamatergic transmis- sion in rat globus pallidus.
of adenosine receptors. Pharmacol Rev 53:527–552 9. Mayfield R, Suzuki F, Neuroscience 176:20–31 19. Cheng Y, Prusoff WH (1973) Relationship
Zahniser NR (1993) Adenosine A2A receptor modulation of electrically between the inhibition constant (KI) and the concentration of inhibitor
evoked endogenous GABA release from slices of rat globus pallidus. J
Neurochem 60:2334–2337 10. Dayne Mayfield R, Larson G, Orona RA, which causes 50 per cent inhibition (I50) of an enzymatic reaction. Biochem
Zahniser NR (1996) Opposing actions of adenosine A2a and dopamine D2 Pharmacol 22:3099–3108 20. Flores-Clemente C, Osorio-Espinoza A,
receptor acti- vation on GABA release in the basal ganglia: evidence for an Escamilla-Sánchez J, Leurs R, Arias JM, Arias-Montaño JA (2013) A single-
A2a/D2 receptor interaction in globus pallidus. Synapse 22:132–138 11. point mu- tation (Ala280Val) in the third intracellular loop alters the signalling
Shindou T, Nonaka H, Richardson PJ, Mori A, Kase H, Ichimura M (2002) properties of the human histamine H3 receptor stably expressed in CHO-K1
Presynaptic adenosine A2A receptors enhance GABAergic synaptic cells. Br J Pharmacol 170:127–135
transmission via a cyclic AMP dependent mechanism in the rat globus pallidus.
92 Purinergic Signalling (2019) 15:85-93
21. Alexander SPH, Christopoulos A, Davenport AP, Kelly E, Marrion NV, (1998) Histamine modulates high-voltage-activated cal- cium channels in
Peters JA (2017) The concise guide to PHARMACOLOGY 2017/2018: G neurons dissociated from the rat tuberomammillary nucleus. Neuroscience
protein-coupled receptors. Br J Pharmacol 174:S17– S129 22. Shindou T, Mori87:797–805 29. Molina-Hernandez A, Nunez A, Sierra JJ, Arias-Montano JA
A, Kase H, Ichimura M (2001) Adenosine A2A receptor enhances GABAA- (2001) Histamine H3 receptor activation inhibits glutamate release from rat
mediated IPSCs in the rat globus pallidus. J Physiol 532:423–434 23. Ferrada striatal synaptosomes. Neuropharmacology 41:928–934 30. De Waard M,
C, Ferré S, Casadó V, Cortés A, Justinova Z, Barnes C, Canela EI, Goldberg Hering J, Weiss N, Feltz A (2005) How do G proteins directly control neuronal
2+
SR, Leurs R, Lluis C, Franco R (2008) Interactions between histamine H 3 and Ca channel function? Trends Pharmacol Sci 26:427–436 31. Gubitz AK,
Widdowson L, Kurokawa M, Kirkpatrick KA, Richardson PJ (1996) Dual
dopamine D2 receptors and the implications for striatal function. signalling by the adenosine A2a
Neuropharmacology 55: 190–197 24. Ferrada C, Moreno E, Casadó V, receptor involves activation of both N- and P-type calcium chan- nels by
Bongers G, Cortés A, Mallol J, Canela EI, Leurs R, Ferré S, Lluís C, Franco R different G proteins and protein kinases in the same striatal nerve terminals. J
(2009) Marked changes in signal transduction upon heteromerization of Neurochem 67:374–381 32. Cunha RA, Ribeiro JA (2000) Purinergic
dopamine D1 and histamine H3 receptors. Br J Pharmacol 157:64–75 25. modulation of [3H]GABA release from rat hippocampal nerve terminals.
Márquez-Gómez R, Robins MT, Gutiérrez-Rodelo C, Arias JM, Olivares- Neuropharmacology 39:1156–1167 33. Arias-Montano JA, Floran B, Garcia
Reyes JA, van Rijn RM, Arias-Montaño JA (2018) Functional histamine H3 M, Aceves J, Young JM (2001) Histamine H3 receptor-mediated inhibition of
and adenosine A2A receptor heteromers in recombinant cells and rat striatum. depolariza- tion-induced, dopamine D1 receptor-dependent release of [3H]-
Pharmacol Res 129:515–525 26. Nguyen MD, Lee ST, Ross AE, Ryals M, gamma-aminobutyric acid from rat striatal slices. Br J Pharmacol 133:165–171
Choudhry VI, Venton BJ (2014) Characterization of spontaneous, transient 34. Arias-Montano JA, Floran B, Floran L, Aceves J, Young JM (2007)
adenosine release in the caudate-putamen and prefrontal cortex. PLoS One
Dopamine D1 receptor facilitation of depolarization- induced release of
9:e87165 27. Lee ST, Venton BJ (2018) Regional variations of spontaneous,
gamma-amino-butyric acid in rat striatum is mediated by the cAMP/PKA
tran- sient adenosine release in brain slices. ACS Chem Neurosci 9:505– 513
pathway and involves P/Q-type cal- cium channels. Synapse 61:310–319 35.
28. Takeshita Y, Watanabe T, Sakata T, Munakata M, Ishibashi H, Akaike N
Oliveira L, Costa AC, Noronha-Matos JB, Silva I, Cavalcante WL, Timóteo
MA, Corrado AP, Dal Belo CA, Ambiel CR, Alves-do- Prado W, Correia-de-
MA, Fior-Chadi DR (2014) Protein kinase a mediates adenosine A2a receptor
Sá P (2015) Amplification of neuromuscular transmission by
methylprednisolone involves activation of presyn- aptic facilitatory adenosine
modulation of neurotransmitter release via synapsin I phosphorylation in
A2A receptors and redistribution of syn- aptic vesicles. Neuropharmacology
cultured cells from medulla oblongata. Neurosci Res 85:1–11 39. Bouabid S,
89:64–76 36. Ibrisimovic E, Drobny H, Yang Q, Höfer T, Boehm S, Nanoff C, Zhou FM (2018) Cyclic AMP-producing chemogenetic activation of indirect
Schicker K (2012) Constitutive activity of the A2A adenosine re- ceptor and pathway striatal projection neurons and the downstream effects on the globus
compartmentalised cyclic AMP signalling fine-tune nor- adrenaline release. pallidus and subthalamic nucleus in freely moving mice. J Neurochem
Purinergic Signal 8:677–692 37. Seino S, Shibasaki T (2005) PKA-dependent 145:436–448
and PKA- independent pathways for cAMP-regulated exocytosis. Physiol Rev
85:1303–1342 38. Matsumoto JP, Almeida MG, Castilho-Martins EA, Costa
Purinergic Signalling (2019) 15:85-93 93