LAPORAN KEGIATAN PPDH

ROTASI DIAGNOSA LABORATORIK

MIKROBIOLOGI
Yang dilaksanakan di
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI
FKH UNIVERSITAS AIRLANGGA SURABAYA

Oleh :
PPDH GELOMBANG XII KELOMPOK 6
Ilham Akbar Helmy Kurniawan, S.KH 180130100011002
Muhammad Habibie Robbie, S.KH 180130100011006
Ahya Nur Afida Alfarid, S.KH 180130100011008
Firatul Hayana Batry, S.KH 180130100011020
Seruni Ummi Aziizalita, S.KH 180130100011034
Abdul Haris Anafi, S.KH 180130100011035
Anis Aniqoh, S.KH 180130100011042
Dyah Ayu Puspitasari, S.KH 180130100011049
Desy Safitri, S.KH 180130100011057
Yohana Maria Karo, S.KH 180130100011070
Febry Sysdityawan Ramadhan, S.KH 180130100011083
Yohanes Surya Pamungkas, S.KH 180130100011086
Muhammad Jalaudin Fida, S.KH 180130100011087
Restifa Argiandani, S.KH 180130100011011
Nadila Dwi Patria Westri, S.KH 180130100011048
Esti Lutfi Oktaviani, S.KH 180130100011091

PENDIDIKAN PROFESI DOKTER HEWAN (PPDH)

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2019

1
 KATA PENGANTAR

Ucapan syukur kami haturkan kepada Tuhan Yang Maha Esa karena atas
limpahan rahmat, hidayah dan pertolongan-Nya lah sehingga kami dapat
menyelesaikan kegiatan koasistensi diagnosa laboratoris dan laporan hasil
pengujian di Laboratorium Bakteriologi dan Mikologi Veteriner Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Kami menyampaikan terima kasih kepada seluruh pihak yang telah
membantu dalam melaksanakan kegiatan koasistensi diagnosa laboratoris di
Laboratorium Bakteriologi dan Mikologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Airlangga, para dosen pengampu, laboran, serta teman sejawat PPDH
yang telah bekerja sama dengan baik dalam mengumpulkan sampel dan
melaksanakan berbagai macam pengujian.
Kami berharap semoga Tuhan Yang Maha Esa membalas segala kebaikan
dan bantuan telah diberikan kepada kami selama melaksanakan koasistensi
diagnosa laboratoris di Laboratorium Bakteriologi dan Mikologi Veteriner
Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Kami sadar bahwa laporan ini jauh dari
sempurna. Kami berharap semoga laporan hasil pengujian koasistensi diagnose
laboratoris ini dapat digunakan sebagaimana mestinya, dapat memberikan manfaat
serta menambah pengetahuan tidak hanya bagi kami tetapi juga bagi pembaca,
Aamiin.

Surabaaya, Mei 2019

Penulis

2
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL............................................................................................ i
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ ii
KATA PENGANTAR ......................................................................................... iii
DAFTAR ISI......................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR ..........................................................................................viii
BAGIAN 1. MIKROBIOLOGI .......................................................................... 1
BAB I PENDAHULUAN...................................................................................... 2
1.1 Latar Belakang......................................................................................... 2
1.2 Rumusan Masalah................................................................................... 3
1.3 Tujuan ..................................................................................................... 3
1.4 Manfaat ................................................................................................... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................... 4
2.1Tinjauan Umum Bakteri............................................................................5
2.2 Media Pertumbuhan Bakteri .................................................................. 5
2.3 Penyakit Pernafasan Oleh Bakteri Pada Ayam........................................ 7
2.3.1 Chronic Respiratory Disease (Mycoplasma gallisepticum).............. 8
2.2.2 Coryza (Hemophilus gallinarum)...................................................... 9
2.3.3 Staphylococcus aureus ....................................................................10
2.4 Ayam.......................................................................................................12
2.5 Susu........................................................................................................13
2.6 Mastitis...................................................................................................13
2.7 Mikrobiologi Susu..................................................................................14
2.8 Definisi Kapang (mould/filamentous fungi)..........................................17
2.9 Definisi Khamir (yeast)..........................................................................18
2.10 Penyakit Bakteri pada Unggas..............................................................20
2.10.1 Collibacilosis..................................................................................20
2.10.2 Fowl Typhoid..................................................................................20
2.10.3 Pullorum.........................................................................................21
2.10.4 Paratifoid ......................................................................................26
2.10.4. 1 Etiologi....................................................................................26
2.10.4. 2 Gejala Klinis............................................................................27
2.10.4. 3 Patologi....................................................................................28
2.10.4. 4 Pengobatan..............................................................................30

BAB III METODOLOGI................................................................................... 31

3.1 Pemeriksaan Sampel Mastitis.................................................................31
3.1.1 Asal Sampel yang diperiksa............................................................31
3.1.2 Langkah-langkah pemeriksaan bakteri...........................................33
3.2 METODE PENCERNAAN....................................................................33
3.2.1 Tempat dan Waktu..........................................................................35
3.2.2 Alat dan Bahan...............................................................................35
3.2.3 Nekropsi Ayam dan Pengambilan Sampel......................................35
3.2.4 Inokulasi.........................................................................................36
3.2.4.1 Inokulasi Bakteri pada Media Tetrathionate broth....................36

3
 3.2.4.2 Inokulasi Bakteri pada media MCA dan EMBA.......................36
3.2.5 Identifikasi Bakteri.........................................................................37
3.2.5.1 Pemeriksaan Makroskopis.........................................................37
3.2.5.2 Pemeriksaan Mikroskopis.........................................................38
3.2.5.2.2 Salmonella dan Shigella Agar (SSA)...................................39
3.2.5.2.3Triple Sugar Iron Agar (TSIA)..............................................40
3.2.5.2.4 Sulfide Indol Motility (SIM)................................................40
3.2.5.2.5 Simon Citrat Agar (SCA).....................................................41
3.2.5.2.6 Urea Agar.............................................................................41
3.2.5.2.7 Gula – Gula..........................................................................41
3.3.2 Motode Permeriksaan Pernafasan.......................................................41
3.3.2.1 Waktu dan Tempat.......................................................................41
3.3.3.2 Alat dan Bahan.............................................................................42
3.3.3.3 Prosedur Nekropsi dan Isolasi Organ..........................................42
3.3.3.4 Kultur Bakteri pada Media Agar..................................................42
3.3.3.4 Isolasi Biakan Murni....................................................................42
3.3.3.5 Indentifikasi Bakteri....................................................................43
3.3.3.6 Pewarnaan Gram..........................................................................43
3.3.3.6 Uji Katalase.................................................................................43
3.3.3.2 Uji Koagulase.............................................................................44
3.4 Metode Pemeriksaan Jamur....................................................................44
3.4.1 Tempat dan Waktu Kegiatan...........................................................44
3.4.2 Identifikasi Jamur Pada Pakan........................................................45
3.4.2.1 Alat dan Bahan..........................................................................45
3.4.2.2 Pembuatan media SDA (Sabaround Dextrose Agar)................45
3.4.2.3 Metode pemeriksaan..................................................................45

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAAN.......................................................... 48

4.1 METODE SUSU...................................................................................48
4.1.1 Hasil Pengamatan...........................................................................48
4.1.1.1 Sinyalemen................................................................................48
4.1.1.2Anamnesa.................................................................................. 48
4.1.1.3 Temuan klinis............................................................................48
4.1.1.4 Pemeriksaan Penunjang.............................................................49
4.1.2 Hasil Pemeriksaan
4.1.2.1 Pemeriksaan Makroskopis Hasil Isolasi Primer Bakteri...........50
4.1.2.2 Pemeriksaan Makroskopis Hasil Isolasi Primer Bakteri...........55
4.1.2.3 Uji katalase................................................................................55
4.1.2.4 Uji Biokimia..............................................................................56
3.2 METODE PENCERNAAN.................................................................63
3.2.1 Tempat dan Waktu..........................................................................63
3.2.2 Alat dan Bahan...............................................................................63
3.2.3 Nekropsi Ayam dan Pengambilan Sampel......................................63
3.2.4 Inokulasi.........................................................................................64
3.2.4.1 Inokulasi Bakteri pada Media Tetrathionate broth....................64
3.2.4.2 Inokulasi Bakteri pada media MCA dan EMBA.......................64
3.2.5 Identifikasi Bakteri.........................................................................65
3.2.5.1 Pemeriksaan Makroskopis.........................................................65

4
 3.2.5.2 Pemeriksaan Mikroskopis.........................................................66
3.2.5.3 Uji Biokimiawi..........................................................................66
3.2.5.4 Salmonella dan Shigella Agar (SSA)........................................66
3.2.5.4 Triple Sugar Iron Agar (TSIA)..................................................67
3.2.5.5 Sulfide Indol Motility (SIM).....................................................68
3.2.5.6 Simon Citrat Agar (SCA)..........................................................68
4.3 METODE PERNAFASAAN................................................................70
4.3.1 Anamesa..........................................................................................70
4.3.2 Signalement.....................................................................................70
4.3.3 Gejala Klinis...................................................................................70
4.3.4 Pemeriksaan Patologi Anatomi.......................................................71
4.3.6 Pemeriksaan Laboratorium Identifikasi..........................................73
4.3.6.1 Uji Lanjutan Gram Positive.......................................................73
4.4. METODE JAMUR..............................................................................74
4.4.1 Hasil................................................................................................74
4.4.1.1 Signalement sampel...................................................................74
4.4.1.2 Hasil Pemeriksaan.....................................................................75
4.4.1.3 Peniccilium sp...........................................................................76
BAB V PENUTUP .............................................................................................. 79
5.1 Kesimpulan ........................................................................................... 79
5.2 Saran ..................................................................................................... 79
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 80

5
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman
Bagian Mikrobiologi
4.1 Pemeriksaan Patologi Anatomi........................................................................73
4.2 Pemeriksaan Laboratorium Isolasi...................................................................73
4.3 Identifikasi Pewarnaan Gram...........................................................................74

6
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman
Bagian Mikrobiologi
2.1 Ligamen suspensi ambing.............................................................................. 16
2.1 laring dan trachea, pulmo...................................................................................6
2.2 Alur pernafasan pada avian................................................................................6
2.3 Bentuk bakteri Mycoplasma gallisepticum........................................................7
2.4 Mikroskopis dari bakteri Hemophilus gallinarum.............................................8
2.5. Koloni bakteri di media BAP (Kiri)..................................................................9
4.1 Sapi FH ...........................................................................................................45
4.2 Hasil uji menggunakan reagen detergen .........................................................46
4.3 Hasil isolasi primer.........................................................................................47
4.4 Hasil isolasi primer diluar streak ...................................................................48
4.5 Hasil isolasi primer .........................................................................................49
4.6 Hasil isolasi primer .........................................................................................50
4.7 Hasil pemeriksaan mikroskopis pada media MSA..........................................51
4.8 Hasil pemeriksaan mikroskopis pada media EMBA.......................................52
4.8 Hasil uji katalase..............................................................................................53
4.9 Hasil uji media.................................................................................................54
4.10 Hasil uji media urease terlihat adanya perubahan warna...............................55
4.11 Hasil uji media sitrat tidak adanya perubahan warna menjadi biru...............56
4.12 Hasil uji media SIM.......................................................................................57
4.13 Hasil uji Gula-gula ........................................................................................58
4.15 Ayam yang dilakuakan pemeriksaan bakteri.................................................59
4.17 negative uji katalase.......................................................................................70
4.18 Biakan Roti A.Makroskopis pada media SDA..............................................71
4.19 Biakan Pakan A.Makroskopis pada media SDA............................................72

7
 BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Unggas dan sapi memiliki peran penting dalam memenuhi kebutuhan
pangan masyarakat Indonesia. Peternakan ungags di Indonesia memiliki peranan
yang penting dalam pembangunan peternakan, karena merupakan ujung tombak
dalam peternakan, karena merupakan ujung tombak dalam pemenuhan kebutuhan
pangan hewani. Pada saat-saat ini ternak ungags memberikan kontribusi terbesar
terhadap daging yaitu sekitar 60,73 % kemudian disusul daging sapi sebesar 21,94
%. Untuk ungags sendiri sekitar 67% disediakan oleh ayam ras dan hanya sekitar
23 % disediakan oleh ayam local, sisanya oleh jenis ungags lainnya (Direktorat
Jendral Peternakan, 2008)

Tentunya dalam usaha ternak unggas dan sapi memili tantangan dalam
membudidayakannya. Tantangan tersebut tentunya berhubungan dengan penyakit-
penyakit tertentu yang menyerang dan dapat menurunkan produktivitas. Pada sapi
produksi susu terdapat penyakit yang berkaitan dengan mastitis. rendahnya
higienitas di peternakan menyebabkan produk peternakan ini seringkali dice-mari
oleh bakteri. Salah satu bakteri cemaran susu adalah Staphylococcus aureus.
Kontaminasi Staphylococcus aureus dalam susu tidak menyebabkan perubahan
fisik susu, sehingga sering-kali keberadaanya tidak disadari konsumen. bakteri
Staphylococcus aureus merupakan bakteri patogen penyebab peradangan pada
ambing atau mastitis. Infeksi mastitis diawali dari kondisi peternakan yang tidak
higienis sehingga mendukung perkembangan bakteri Staphylococcus aureus
(Aprilia, 2016).
Pada unggas pada bagian pencernaan dan pernafasan sering terinfeksi
penyakit. Infeksi pada sistem pernafasan dan pencernaan unggas dapat
menyebabkan kerugian yangcukup besar. Hal ini disebabkan oleh pengaruh
infeksi penyakit yang dapatmenyebabkan stres, penurunan produksi dan kematian
pada unggas. Oleh sebab ituperlu dilakukan tindakan pencegahan dan pengobatan
yang tepat terhadap penyakitinfeksius tersebut agar kerugian yang disebabkan
oleh agen infeksi penyakit dapatdihindari. Pengobatan merupakan salah satu
alternatif yang sering digunakan untukmengatasi infeksi saluran pernafasan pada
unggas. Namun pengobatan yang dilakukan saat ini dalam penerapanya masih
kurang didukung dengan identifikasiterhadap agen penyebab penyakit saluran
pernafasan, sehingga hasil diagnose terkadang kurang tepat. Hal inilah yang
menyebabkan kejadian penyakit akan terusmewabah meski sudah dilakukan
pengobataan Kerugian yang ditimbulkan penyakit ayam dapat berbentuk
kematian, pertumbuhan terlambat, produksi telur turun atau terhenti sama sekali.

1
Selain itu ayam yang pernah terserang penyakit dapat menjadi sumber penyakit
(Moenek, 2016).
Beberapa penyakit mikosis yang perlu diwaspadai pada unggas adalah
aspergilosis, kandidiasis dan aflatoksikosis. Mycosis dibagi menjadi dua macam
yaitu mikosis superfisialis dan mikosis sistemik. Mycosis superfisialis merupakan
infeksi fungi pada permukaan kulit atau mukosa. Mikosis sistemik merupakan
infeksi fungi yang sudah menyebar ke seluruh tubuh. Penyebab terjadinya
mycosis adalah karena paparan secara langsung dari hewan yang terinfeksi fungi
ataupun dari pakan yang sudah ditumbuhi fungi karena sudah disimpan lama dan
dalam keadaan lembab (Tarmudi,2003).
Penanganan kasus penyakit pada unggas maupun pada sapi harus
diketahui agen penyebab dengan melihat gejala klinis yang terlihat dan anmesa
dari pemilik serta adanya perubahan patologis. Perubahan patologis yang kurang
jelas tentunya diperlukan pemerisaan lanjutan (isolasi dan identifikasi) pada agen
penyebabnya. Pengujian mikrobiologi diharapkan untuk seorang calon dokter
hewan dapat mengetahui agen pathogen dapat menyebabkan penyakit diternak.

1.2 Rumusan masalah

1.2.1 Bakteri apakah yang menjadi penyebab terjadinya mastitis?

1.2.2 Bagaimana cara mengisolasi serta mengindentifikasi bakteri

penyebab penyakit pernafasan pada ungags?

1.2.3 Bagaimana cara mengisolasi serta mengindentifikasi bakteri

penyebab penyakit saluran pencernaan ungags?

1.2.4 Bagaimana melaukan isolasi dan identifikasi jamur berbagai

sampel pakan ternak?

1.3 Tujuan

1.3.1 Untuk mengetahui bakteri pada sampel susu yang terjadinya

mastitis

1.3.2 Untuk mengetahui cara mengisolasi dan mengindentifikasi bakteri

penyebab penyakit saluran pernafasaan ungags

1.3.3 Untuk mengetahui cara mengisolasi dan mengidentifikasi bakteri

penyebab penyakit saluran pencernaan ungags

1.3.4 Untuk mengetahui bagaimana cara mengisolasi dan identifikasi

jamur dan jamur apa saja yang dapat mengkontaminasi pakan ternak
dan pakan.

2
1.4 Manfaat

Dapat memahami dan menjelaskan bakteri penyebab mastitis, penyakit

pernafasaan dan pencernaan pada ungags dan jamur dapat mengkintaminasi pakan
ternak dengan pengujian secara mikrologis dan makrologis

3
 BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Umum Bakteri

Anthony Van Leeuwenhoek pada tahun 1674 menemukan bakteri pertama
dengan menggunakan miksoskop buatannya sendiri. Kata bakteri berasal dari
bahasa Yunani, yaitu bacterion yang berate tongkat atau batang. Bakteri
berkembang biak dengan pembelahan diri serta demikian kecilnya sehinga hanya
tampak dengan mikroskop. Berbagai jenis bakteri dapat dibedakan menurut
bentuknya yang kadang tercemin di namanya (Dzen, 2004).
Ukuran bakteri bervariasi baik penampang maupun panjangnya, pada
umunya bakteri memiliki ukuran sekitar 0,7- 1,5 μm dan panjangnya 1-6 μm.
Bakteri memiliki tiga bentuk:
1. Kokus (Coccus) adalah bakteri yang berbentuk bulat seperti bola dan
mempunyai beberapa variasi sebagai berikut :
a. Mikrococcus, jika kecil dan tunggal.
b.Diplococcus, jika bergandanya dua-dua.
c. Tetracoccus, jika bergandengan empat dan membentuk bujursangkar.
d. Sarcina, jika bergerombol membentuk kubus.
e. Staphylococcus, jika bergerombol.
f. Streptococcus, jika bergandengan membentuk rantai.
2. Basil (Bacillus) adalah kelompok bakteri yang berbentuk batang atau
silinder dan mempunyai variasi sebagai berikut :
a. Diplobacillus, jika bergandengan dua-dua.
b.Streptobacillus, jika bergandengan membentuk rantai.
3. Spiril (Spirilium) adalah bakteri yang berbentuk lengkung dan mempunyai
variasi sebagai berikut :
a. Vibrio (bentuk koma), jika lengkung kurang dari setengah lingkaran.
b. Spiral, jika lengkung lebih dari setengah lingkaran

Berdasarkan perbedaan respons terhadap prosedur pewarnaan gram

(klasifikasi ini dilakukan oleh ahli histology Hans Christian Gram) dan struktur
dinding bakteri, bakteri diklasifikasikan menjadi bakteri gram negatif dan bakteri
gram positif.
- Bakteri Gram Positif :
a. Dinding sel mengandung peptidoglikan yang tebal serta diikuti pula
dengan adanya ikatan benang-benang teichoic acid dan teichoronic acid,
yang merupakan 50 % dari berat kering dinding sel dan 10% dari berat
kering keseluruhan sel.
b. Pada umumnya berbentuk bulat (coccus).
c. Pada pewarnaan Gram, bakteri jenis ini berikatan dengan zat warna utama
(primary Strain) yaitu Gentian Violet dan tidak luntur (decolorized) bila
dicelupkan ke dalam larutan alkohol.

4
 d. Di bawah mikroskop tampak berwarna ungu.
- Bakteri Gram Negatif :
a. Mengandung “sedikit sekali” ikatan peptidoglikan dan tidak terdapat
ikatan benang-benang teichoic acid dan teichoronic acid.
b. Pada umumnya berbentuk batang (basil), kecuali Bacillus anthrasis dan
Bacillus sereus.
c. Pada pewarnaan Gram, bakteri jenis ini tidak mampu berikatan dengan
zat warna utama yaitu Gentian Violet dan luntur bila dicelupkan ke dalam
larutan alkohol.
d. Di bawah mikroskop tampak berwarna merah, apabila diberi zat warna
safranin/fusin.
2.2 Media Pertumbuhan Bakteri

2.2.1 BAP (Blood Agar Plate)

Media untuk memberdakan cara menghemolisa darah segar.

Bakteri yang memiliki enzim hemolisin dapat menghemolisa darah.
Sedangkan bakteri yang tidak memiliki enzim hemolisin tidak dapat
menghemolisa darah (Broks, 2001).

- Alpha- hemolysis : membentuk zona kehijauan hingga

coklat muda disekitar koloni, bakteri menghemolisa sebagian
hemoglobin sehingga meninggalkan pimen hija daribiliverdin
- Beta- hemolysis : membentuk zona
transparan/ jernihdi sekitar koloni, bakteri memproduksi “beta-
hemolisisn (streptolysin O atau S), yang melisiskan sel darah merah
di media secara sempurna
- Gamma- Hemolisis (no hemolysis): tidak menghemolisa
darah, bakteri tidak memproduksi hemolisin.
2.2.2 MSA

Media selektif untuk staphyloccus aureus. Semua genus

staphylococcus dapat tumbuh di MSA akan tetapi S.Aureus saja yang
memecah mannitol memberi susasana asam dengan indicator phenol
red, media menjadi kuning (Cappucino, 2005).

Meskipun telah dijabarkan berbagai macam jenis dari medium,

perlu diingat bahwa tidak ada satupun perangkat kondisi yang
memuaskan bagi kultivasi untuk semua bakteri dilaboratorium.
Bakteri amat beragam, baik dari persyaratan nutrisi maupun fisiknya.
Bebrapa bakteri memiliki persyaratan nutrisi maupun fisiknya.
Beberapa bakteri memiliki persyaratan yang rumit. Karena alasan ini
kondisi harus disesuaikan sedemikian rupa sehingga bias

5
 menguntungkan bagi kelompok bakteri yang sedang ditelaah
(Quinn,2002).

2.2.3 MCA (Mac Conkey Agar)

Media ini untuk membedakan bakteri yang memecah laktosa

(koloni merah muda) dengan bakteri yang tidak memecah laktosa
(koloni tidak bewarna) Komposisi: laktosa, crystal violet, neutral red,
bile salt. Indicator: neural red pH suasana asam : warna merah.
Suasana basa: warna kuning. Mac conkey agar adalah medium kultur
yang dirancang unuk menumbuhkan bakteri gram negative dan
memfermentasis laktosa. Adanya garam empedu, Kristal ungu violet
akan menghambat pertumbuhan mikroorganisme gram positif
(Broks,2001).

2.2.4 SCA (Simon Citrat Agar)

Media ini untuk mengetahui suatu organime yang mempunyai

sumber karbon utama. Simon citrate agar digunakan untuk
mengindentifikasi bakteri golongan enterobacteriaceae dan beberapa
bakteri gram negative. Interpretasi hasil dari SCA pertumbuhan warna
biru. (Cappucino, 2005)

2.2.5 SIM

Media ini digunakan untuk mengetahui motilitas organisme,

adanya pembebasan H2S (sulfide) dan terbentuknya indol. Interpresai
dari media ini bewarna hitam karna reaksi dari H 2S dengan Fe menjadi
FeS. Motilitas terlihat adanya warna keruh dan adanya penyebaran
dan pertumbuhan yang menjalar dari bawah ke atas di sekitar tusukan
(pohon cemara terbalik). Sulfur H2S (+): bakteri dalam media
bewarna hitam contoh salmonela

2.2.6 TSIA (Triple Sugar Agar)

Komposisi dari triple sugar Agar (TSIA) yaitu beef extract, yeast
extract, peptone, glucose lactose. Sucrose , Nacl, Sodium thiosulfate,
agar, Phenol red, ferrous sulfat. Media ini digunakan untuk
membedakan sifat bakteri secara biokimiawi. Umumnya media ini
digunakan untuk membedakan bakteri yang tergolong ke dalam
Enterobactericae yaitu kemampuan bakteri dalam memfermentasi
karbohidrat membentuk asam gas dan H2S. jika media berubah
menjadi wana kuning glukosa dan sukrosa dana tau laktosa. Jika
media bewana merah (Alkalis): glukosa , sukrosa dan laktosa tidak
difermentasi.

6
 2.2.7 UREA

Media ini digunakan untuk mengetahui adanya aktivitas urease

pada mikroorganisme. Interpretasi dari media ini yaitu apabila urea
dihidrolisis, amoniak akan dibebaskan dan menyebabkan medium
berubah menjadi alkalis. Indicator positif bila bewarna merah.
Negative bila bewarna kuning atau tidak ada perubahan warna
(Brooks,2001).

2.3 Penyakit Pernafasan Oleh Bakteri Pada Ayam

Sistem respirasi pada ayam meliputi dari nares, infra orbital sinus, laring,
trachea, pulmo, bronkus, bronkiolus, parabronkus, alveolus, dan khusus pada
avian memiliki kantung udara (air sac) yang menggantikan kerja dari diafragma.
Selain itu juga ada organ syrinx yaitu kotak penghasil suara (Mclelland, 1990).

Gambar 2.1 (kiri) laring dan trachea, (kanan) pulmo (Mclelland, 1990).

Pernafasan pada bangsa avian memiliki perbedaan jika dibandingkan

dengan mamalia, dimana fungsi inspirasi dan ekspirasi sangat bergantung dari
kondisi dari air sac. Sehingga kondisi dari lingkungan yang kurang baik, dapat
menyebabkan kinerja dari system pernafasan menurun.

Gambar 2.2 Alur pernafasan pada avian (Bishop, 1998).

Penyakit pada pernafasan disebabkan oleh berbagai faktor dan penyebab.

Contoh penyakit yang umum ditemukan adalah seperti avian influenza, new castle

7
diseases, snot (coryza), fowl cholera, hingga Chronic Respiratory Disease (CRD)
(Shane, 2005). Dari beberapa penyakit tersebut, ada yang diakibatkan oleh
bakteri. Penyakit pernafasan yang disebabkan bakteri pada avian antara lain
adalah Snot (Coryza), Chronic Respiratory Disease (CRD), fowl cholera, dan juga
bakteri lain seperti Staphylococcus aures, dan juga E.coli. Bakteri seperti E.coli
dapat menyebabkan penyakit pernafasan, dimana respiratory collibacilosis
disebabkan oleh infeksi sekunder (Glisson, 1998). E.coli juga menyebabkan
penyakit pada lower respiratory tract (Elghazaly, 2017). Bakteri Staphylococcus
sp merupakan floral normal yang ada pada kulit, saluran pencernaan, dan juga
system pernafasan. Tetapi jika ditemukan bakteri dengan spesies yang patogen,
maka dapat menimbulkan penyakit. Menurut Elghazaly (2017), bakteri yang
terdapat pada saluran pernafasan selain dari Staphylococcus sp (Staphylococcus
aureus dan coagulase negative Staphylococcus ) dan E.coli, adalah bakteri
Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteriditis, dan Pasteurella multocida.

2.3.1 Chronic Respiratory Disease (Mycoplasma gallisepticum)

Bakteri Mycoplasma gallisepticum merupakan bakteri gram positif

dengan bentuk pleomorfik. Menurut Levisohn (2000), bentukan secara
mikroskopiknya adalah seperti telur ceplok, dan juga pleomorfik. Ukuran dari
bakteri ini adalah 0,25-0,50 mikron (Pudjiatmoko, 2014). Bakteri ini tidak
memiliki dinding sel yang jelas (Vogl, 2008), dan akan mati jika berada diluar
host dalam 24 jam (Shane, 2005). Bakteri ini berbahaya, karena bisa melakukan
invasi pada eritrosit (Vogl, 2008).

Gambar 2.3 Bentuk bakteri Mycoplasma gallisepticum (Domermuth, 1964).

Mycoplasma gallisepticum dapat ditumbuhkan pada media buatan padat

dengan pH 7,8 pada suhu 37-38ºC dan ditambahkan dengan CO 2 . Koloninya amat
kecil bergaris tengah 0,20-0,30 mm, halus, bulat jernih dengan daerah yang
menebal dan menonjol di tengahnya. Pada media glukosa dan maltose, akan
memfermentasi menjadi asam tanpa adanya gas. Bakteri ini resisten terhadap
penicillin (1000 lU/ml) dan thalium acetate berkadar 1:4000, sehingga dalam
pembiakan bakteri dapat ditambahkan untuk menghindari kontaminasi dari bakteri
yang lain (Pudjiatmoko, 2014).

8
 Penyakit ini dapat menyebabkan gejala seperti batuk, nasal discharge,
penurunan produksi telur. Dalam kasus parah, dapat terlihat adanya edema pada
bagian kepala dari ayam (Dinev, 2007). Pada hasil nekropsi, ditemukan adanya
sekresi katar pada bagian nasal, sinus, sampai air sac. Jika infeksi bakteri berat,
dapat timbul juga pericarditis dan perihepatis (Pudjiatmoko, 2014).

Transmisi dari penyakit ini adalah secara vertikal dan horizontal.

Transmisi secara vertikal yaitu perpindahan penyakit dari induk ke anak (telur)
(Levisohn, 2000). Transmisi horizontal dapat berupa kontak langsung antara
hewan sakit dan hewan sehat, kontak antara peralatan-peralatan yang sudah
tercemar bakteri, kemudian terkena hewan sehat, hingga kontak dari burung liar
atapun hewan pengerat yang membawa bakteri tersebut masuk ke daerah kandang
(Shane, 2005).

2.2.2 Coryza (Hemophilus gallinarum)

Hemophilus gallinarum atau dengan nama lain Avibacterium

paragallinarum merupakan bakteri gram negatif, non-motile, dengan bentukan
short rods atau coccobacilli dengan panjang 1-3µm dan lebar 0.4-0.8µm (Akter,
2013). Serotype dari bakteri ini ada 3 yaitu serotype A, serotype B, dan serotype C
(Wahyuni, 2018). Bakteri ini menyebabkan gangguan pada saluran pernafasan
atas pada avian.

Gambar 2.4 Mikroskopis dari bakteri Hemophilus gallinarum (Akter, 2013).

Isolasi dari Hemophilus gallinarum, dapat ditumbuhkan pertama pada

media Chocolate Agar Plate (CAP) yang ditambahkan CO2 5% dan diinkubasi
selama 24-48 jam dalam suhu 37ºC (Wahyuni, 2018). Coloni yang diduga
Hemophilus gallinarum, dikultur pada media BAP. Selanjutnya ditambahkan
bakteri Staphylococcus aureus, dimana akan menghasilkan NAD (bacteria feeder)
yang diperlukan untuk menumbuhkan Hemophilus gallinarum (Akter, 2013). Cara
melakukannya adalah ambil biakan dari Staphylococcus aureus dan lakukan
streak perpendicular loop pada bagian streak dari bakteri Hemophilus gallinarum
(cross-streak), dilakukan inkubasi pada CO2 5% selama 24-48 jam dalam suhu

9
37ºC. Uji lanjutan yang dapat dilakukan adalah pewarnaan gram, uji oksidase, uji
katalase, motility test, urease test, dan uji fementasi karbohidrat (Wahyuni, 2018).

Gambar 2.5. Koloni bakteri Hemophilus gallinarum dan Staphylococcus aureus

media BAP (Kiri) dan koloni bakteri Hemophilus gallinarum pada media CAP
(kanan) (Wahyuni, 2018).

Gejala klinis yang tampak adalah rhinitis, edema pada wajah, anorexia,
perkembangan tubuh yang kurang baik (Wahyuni, 2018). Selain itu adalah adanya
eksudat pada nasal (Pudjiatmoko, 2014). Pada hasil nekropsi adalah
ditemukannya eksudat mucoid pada nasal, frothy oculo-nasal discharge, dan
kongesti pada trakea (Akter, 2013). Transmisi penyakit berupa horizontal, yaitu
kontak langsung antara hewan sehat dengan hewan yang sakit. Tertular secara
tidak langsung melalui peralatan (Shane, 2005).

2.3.3 Staphylococcus aureus

Staphylococcus sp merupakan bakteri gram positif, dengan ukuran

diameter 0,5-1,5µm, dan berbentuk coccus (bulat). Masing individu coccus akan
berkumpul dan berbentuk seperti anggur. Bakteri ini merupakan bakteri non motil,
tidak ber spora, dan falkutatif anaerob. Bakteri ini adalah bakteri katalase positif
dan oxidase negatif, dimana hal ini membedakan antara Staphylococcus sp dengan
Streptococcus sp yang merupakan katalase negatif. Staphylococcus sp toleran
terhadap kadar garam yang tinggi, dan tahan terhadap panas. Patogenitasnya
dilihat dari kemampuan memproduksi koagulase yang dapat menggumpalkan
darah (Harris, 2002). Dari koagulase ini akan dibedakan menjadi dua yaitu positif
koagulase yang terdiri dari Staphylococcus aureus (patogen pada manusia),
Staphylococcus intermedius dan Staphylococcus hyicus (patogen pada hewan),
dan negatif koagulase yaitu Staphylococcus epidermidis (Harris, 2002).

Menurut Elghazaly (2017), bakteri Staphylococcus sp yang terdapat pada

saluran pernafasan adalah Staphylococcus aureus dan coagulase negative
Staphylococcus. Koloni dari Staphylococcus aureus saat dibiakkan pada media
solid adalah berwarna keemasan. Koloni dari coagulase negative Staphylococcus
(CoNS) saat dibiakkan pada media solid, akan terlihat putih pucat dan translucent

10
(Harris, 2002). Staphylococcus aureus normal ditemukan pada kulit, bulu, saluran
pencernaan, dan saluran pernafasan. Tetapi menurut Casey (2007),
Staphylococcus aureus dapat menyebabkan abses pada pulmo. Staphylococcus sp
dapat menyebabkan gejala klinis lain yaitu dermatitis, osteomyelitis, arthritis,
synovitis, tenosynovitis, omphalitis, femoral head necrosis dan bumble foot
(Bakheet, 2018).

Staphylococcus aureus memiliki kemampuan untuk adesi pada plasma dan

extracellular matrix. Reseptor adesi ada pada bagian permukaan bakteri, dan
dapat berinteraksi pada protein dari hospes yaitu protein fibronectin, fibrinogen,
collagen, vitronectin dan laminin. Staphylococcus aureus memproduksi
extracellular toxins, yaitu enterotoxin A-E, toxic shock syndrome toxin1 (TSST-1)
dan exfoliative toxins A and B (Harris, 2002).

Menurut Dewi (2013), Staphylococcus aureus menghasilkan tujuh tipe

enterotoksin, yaitu: A, B, C, C1, C2, D dan E. Faktor virulensi S. aureus yang
dapat menyebabkan infeksi meliputi:

1. Protein permukaan yang mempromosikan kolonisasi dalam jaringan

hospes (protein A, adesin, hemaglutinin, glikoprotein, fibrionectin),

2. Invasin membantu bakteri menyebar dalam jaringan (leukocidin, kinase,

hyaluronidase),

3. Faktor permukaan yang menghalangi fagositosis (kapsul, protein A),

4. Faktor biokimia yang meningkatkan ketahanan bakteri di dalam fagosit

(carotenoid, produksi katalase),

5. Reaksi imunologis (protein A, coagulase, clotting factor),

6. Toksin perusak membran (hemolysin, leukotoxin, leukocidin) dan

7. Eksotoksin dalam jaringan menimbulkan kerusakan dan gejala penyakit

(SEA-G, TSST, ET)

Media pertumbuhan yang dapat digunakan adalah media solid seperti NA

ataupun TSA. Media di inkubasi 24 jam dalam suhu 37ºC. Sifat Staphylococcus
sp yang tahan terhadap kadar garam yang tinggi, maka diinokulasikan pada media
selektif yaitu MSA. Staphylococcus aureus pada media mannitol salt agar (MSA)
menunjukkan pertumbuhan koloni berwarna putih kekuningan dikelilingi zona
kuning karena kemampuan memfermentasi mannitol. Bakteri yang tidak mampu
memfermentasi mannitol tampak zona berwarna merah atau merah muda. Zona
kuning menunjukkan adanya fermentasi mannitol, yaitu asam yang dihasilkan,
menyebabkan perubahan phenol red pada agar yang berubah dari merah menjadi
berwarna kuning (Dewi, 2013). Ketika sudah didapatkan isolat murni dari

11
Staphylococcus aureus, maka dilakukan uji katalase untuk membuktikan bahwa
bakteri itu benar-benar Staphylococcus aureus. Jika positif, maka ditanam koloni
pada media cair Nutrient broth. Selanjutnya dilakukan uji koagulase
menggunakan plasma kelinci. Hasil positif Staphylococcus aureus jika plasma
kelinci menggumpal (Dewi, 2013).

2.4 Ayam

Ayam merupakan bangsa unggas yang terdiri dari ayam ras (ayam ras
petelur/ layer, ayam ras pedaging/broiler dan ayam bukan ras (buras). Ayam buras
atau ayam kampung merupakan ayam lokal di Indonesia yang dijumpai baik di
kota maupun desa dengan penampilan dan sifat genetiknya yang beragam. Ayam
buras memiliki potensi yang tinggi dalam meningkatkan gizi masyarakat.
Pertumbuhan populasi ayam kampung semakin meningkat dari tahun ke tahun
(Bakrie dkk., 2003). Hal ini terlihat dari meningkatnya produksi ayam kampung
dari tahun ke tahun. Menurut Aman (2011), pada tahun 2005 – 2009, konsumsi
ayam kampung meningkat dari 1,49 juta ton menjadi 1,52 juta ton.
Salah satu ciri ayam kampung yaitu sifat genetiknya tidak seragam
meliputi warna bulu, ukuran tubuh dan kemampuan produksinya. Menurut Rasyaf
(1998), badan ayam kampung kecil dan mirip dengan bobot badan ayam ras
petelur tipe ringan. Sedangkan. Ayam broiler merupakan jenis ayam ras yang
pertumbuhan cepat dengan bobot badan yang tinggi dalam waktu relatif yang
pendek yaitu pada umur 4 – 5 minggu dengan bobot badan sekitar 1,2 – 1,9 kg
(Suprijatna dan Kartasudjana, 2006). Selain itu, ayam broiler mengalami
pertumbuhan bulu dengan cepat, berdada lebar, daging lunak dan umumnya warna
kulit terang (Murtidjo, 1987).
Fase pemeliharaan broiler meliputi fase pemeliharaan awal (strarter)
meliputi anak broiler yang berumur 1 hari (DOC) sampai 3 atau 4 minggu dan
fase pemeliharaan akhir (finisher) meliputi broiler dengan umur lebih dari 4
minggu (Rasyaf, 2004). Kelebihan ayam ras ini dibandingkan jenis ayam ras yang
lain yaitu dapat diproduksi secara cepat dengan daging yang bermutu tinggi
karena penampilan yang seragam maupun ukurannya. Umur yang masih muda 4

sehingga tidak ada perbedaan mutu antara daging ayam broiler jantan
maupun betina (Rasyaf, 2004). Beberapa contoh ayam broiler meliputi Hubbard,
Cornish, Cobb, Sussex dan Dorking, serta Cochin dan Langshan (Hardjoswaro
dan Rukhminasih, 2000).

2.5 Susu

12
 Susu merupakan cairan yang berasal dari pemerahan hewan menyusui
yang sehat dan bersih, diperoleh dengan cara yang benar dan kandungan dari susu
itu sendiri tidak dikurangi atau ditambah bahan-bahan lain (Hadiwiyoto, 1994).
Susu merupakan salah satu bahan pangan yang kaya akan zat gizi. Kandungan
protein, glukosa, lipida, garam mineral, dan vitamin dengan pH sekitar 6,80
menyebabkan mikroorganisme mudah tumbuh dalam susu (Suwito, 2010).

Secara alami, susu mengandung mikroorganisme kurang dari 5 x 10 3 per

ml jika diperah dengan cara yang benar dan berasal dari sapi yang sehat (Jay,
1996). Berdasarkan SNI 01-6366-2000, batas cemaran mikroba dalam susu segar
adalah Total Plate Count (TPC) < 3 x 104 cfu/ml, koliform < 1 x 101 cfu/ml,
Staphylococcus aureus 1 x 101 cfu/ml, Escherichia coli negatif, Salmonella
negatif, dan Streptococcus group B negatif. Beberapa bakteri seperti Listeria
monocytogenes, Camphylobacter jejuni, E.coli, dan Salmonella sp. dilaporkan
mengontaminasi susu dengan prevalensi kecil (Jayarao et al., 2006).

2.6 Mastitis

Dalam tatalaksana usaha peternakan sapi perah di beberapa negara

berkembang, mastitis merupakan masalah utama karena dapat menyebabkan
penurunan produksi susu dalam jumlah besar. Mastitis adalah peradangan jaringan
internal kelenjar ambing dengan berbagai penyebab dan derajat keparahan, lama
penyakit serta akibat penyakit yang ditimbulkan sangat beragam. Manifestasi
penyakit mastitis pada sapi perah dibedakan menjadi dua macam yaitu mastitis
klinis dan subklinis. Kasus mastitis seringkali bermula dari mastitis subklinis yang
terjadi pada saat laktasi. Mastitis klinis selalu diikuti tanda klinis, baik berupa
pembengkakan, pengerasan ambing, rasa sakit, panas serta kemerahan bahkan
sampai terjadi penurunan fungsi ambing. Namun demikian, kedua Spesies mastitis
baik subklinis maupun klinis dapat menyebabkan penurunan produksi dan
penurunan kualitas susu. Susu yang dihasilkan oleh sapi penderita mastitis dapat
mengalami perubahan secara fisik, kimiawi, patologis dan bakteriologis, demikian
pula dengan jaringan kelenjar ambingnya (Samad, 2008).

13
 Sapi perah yang terserang, mengalami penurun produksi susu dalam
bentuk kualitas dan kuantitas serta meningkatkan ongkos produksi, pakan dan
terjadi kematian. Mastitis pada industri sapi perah merupakan hal yang umum
(Spanamberg et al., 2008).

2.7 Mikrobiologi Susu

Kelompok bakteri yang penting dalam mikrobiologi pangan termasuk susu

meliputi Pseudomonodaceae, Bacillaceae, Enterobacteriaceae, Lactobacillaceae,
Streptococcaceae, dan Micrococcaceae (Volk dan Wheeler, 1993).

Enterobacteriaceae

a) Escherichia coli

E. coli dapat diklasifikasikan sebagai berikut:

Filum : Procaryota

Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Famili : Enterobacteriaceae

Genus : Escherichia

Spesies : Escherichia coli

Morfologi dan identifikasi E. coli adalah bakteri gram negatif yang

berbentuk pendek (kokobasil), berukuran 0,4-0,7 µm, bersifat anaerobik fakultatif
dan mempunyai flagella peritrikal. Bakteri ini banyak ditemukan di dalam usus
manusia sebagai flora normal (Jawetz et al., 2001).

b) Shigella

Shigella dapat diklasifikasikan sebagai berikut:

Filum : Procaryota

14
 Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Famili : Enterobacteriaceae

Genus : Shigella

Spesies : Shigella sp

Morfologi dan identifikasi Shigella adalah bakteri Gram negatif berbentuk

batang, berukuran 0,5-0,7 µm x 2-3 µm dan tidak berflagel, tidak membentuk
spora, bila ditanam pada media agar tampak koloni yang konveks, bulat,
transparan dengan pinggirpinggir utuh. Shigella merupakan bakteri dengan habitat
alamiah usus besar manusia. Disentri basiler atau Shigellosis adalah infeksi usus
akut yang disebabkan oleh Shigella (Karsinah et al., 1994).

c) Enterobacter

Enterobacter dapat diklasifikasikan sebagai berikut :

Filum : Procaryota

Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Enterobacteriales

Famili : Enterobacteriaceae

Genus : Enterobacter

Spesies : Enterobacter aerogenes

Enterobacter merupakan bakteri aerob berbentuk batang pendek, bersifat

Gram negatif, membentuk rantai, mempunyai kapsul kecil, motil dengan flagel
peritrik, pada media padat koloni bersifat kurang mukoid dan cenderung
menyebar ke seluruh permukaan dapat membentuk asam dan gas (Jawetz et al.,
2001).

d) Klebsiella

15
 Klebsiella dapat diklasifikasikan sebagai berikut :

Filum : Procaryota

Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Famili : Enterobacteriaceae

Genus : Klebsiella

Spesies : Klebsiella pneumonia

Klebsiella merupakan kelompok bakteri Gram negatif berbentuk batang,

non motil, koloni besar, sangat mukoid dan cenderung bersatu pada pergerakan
yang lama, meragikan laktosa dan banyak karbohidrat, negatif terhadap tes merah
motil (Jawetz et al., 2001).

e) Pseudomonas

Pseudomonas dapat diklasifikasikan sebagai berikut:

Filum : Procaryota

Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Pseudomonadales

Famili : Pseudomonadaceae

Genus : Pseudomonas

Spesies : Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas sp. adalah bakteri aerob tetapi dapat mempergunakan nitrat

dan arginin sebagai aseptor elektron dan tumbuh sebagai anaerob yang berbentuk
batang, Gram negatif, bergerak dengan flagel polar, tidak berkapsul, berukuran
0,8-1,2 µm, tidak memfermentasi laktosa, tumbuh baik pada 37°C-42°C (Jawetz
et al., 2001).

16
Micrococcaceae

Dua genus yang penting dalam bahan pangan adalah Micrococcus dan
Staphylococcus. Kelompok Staphylococcus yang terpenting dalam makanan
adalah Staphylococcus aureus. Pada waktu pertumbuhan, organisme ini mampu
memproduksi suatu enterotoksin yang cukup berbahaya yang menyebabkan
terjadinya peristiwa keracunan makanan (Buckle et al., 1987).

Klasifikasi Staphylococcus aureus sebagai berikut :

Filum : Protophyta

Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Famili : Micrococcaceae

Genus : Staphylococcus

Spesies : Staphylococcus aureus

Staphylococcus merupakan gram positif, tumbuh dalam kelompok seperti

anggur, berbentuk bulat, tidak motil, tidak membentuk spora dan tersusun dalam
kelompok-kelompok tidak teratur, mudah tumbuh pada berbagai media
pembenihan. Pada pembenihan Staphylococcus aureus berwarna kuning emas,
selain itu bakteri ini bersifat anaerob, meragikan glukosa, tidak meragikan
manitol, koagulasi negatif dan pada media agar darah tidak mengalami hemolisis
(Jawetz et al., 1986).

2.8 Definisi Kapang (mould/filamentous fungi)

Merupakan mikroorganisme anggota Kingdom Fungi yang membentuk

hifa. Kapang merupakan jenis jamur multiseluler yang bersifat aktif karena
merupakan organisme saprofit dan mampu memecah bahan-bahan organik
kompleks menjadi bahan yang lebih sederhana. Di bawah mikroskop dapat dilihat
bahwa kapang terdiri dari benang yang disebut hifa, kumpulan hifa ini dikenal
sebagai miselium. Kapang tersebut mudah dijumpai pada bagian-bagian ruangan

17
yang lembab, seperti langit-langit bekas bocor, dinding yang dirembesi air, atau
pada perabotan lembab yang jarang terkena sinar matahari. Kapang melakukan
reproduksi dan penyebaran menggunakan spora. Spora kapang terdiri dari dua
jenis, yaitu spora seksual dan spora aseksual (Hadioetomo,1990).

Kapang bukan merupakan kelompok taksonomi yang resmi, sehingga

anggota-anggota dari kapang tersebar ke dalam filum Glomeromycota,
Ascomycota, dan Basidiomycot. Kapang memiliki spesies sekitar 10.000 spesies.
Habitat kapang sangat beragam, namun pada umumnya kapang dapat tumbuh
pada substrat yang mengandung sumber karbon organic.

Kapang terdiri dari suatu thallus yang tersusun dari filamen yang
bercabang yang disebut dengan hifa. Kumpulan dari hifa disebut dengan
miselium. Hifa tumbuh dari spora yang melakukan germinasi membentuk suatu
tuba germ, dimana tuba akan tumbuh terus membentuk filamen yang panjang dan
bercabang yang disebut hifa, kemudian seterusnya akan membentuk suatu massa
hifa yang disebut miselium. Pembentukan miselium merupakan sifat yang
membedakan grup-grup didalam fungi (Pelczar,2005).

Hifa dapat dibedakan menjadi dua macam yaitu hifa vegetatif atau hifa
tumbuh dan hifa fertile yang membentuk bagian reproduksi. Pada kebanyakan
kapang hifa fertil tumbuh di atas permukaan, tetapi pada beberapa kapang
mungkin terendam. Penyerapan nutrien terjadi pada permukaan miselium
(Syamsuri, 2004).

Sifat-sifat kapang baik penampakan makroskopik ataupun mikroskopik

digunakan untuk identifikasi dan klasifikasi kapang. Kapang dapat dibedakan
menjadi dua kelompok berdasarkan struktur hifa yaitu hifa tidak bersekat atau
nonseptat dan hifa bersekat atau septat yang membagi hifa dalam ruangan-
ruangan, dimana setiap ruangan mempunyai satu atau lebih inti sel (nukleus).
Dinding penyekat yang disebut septum tidak tertutup rapat sehingga sitoplasma
masih bebas bergerak dari suatu ruangan ke ruangan lainnya.

2.9 Definisi Khamir ( yeast)

18
 merupakan jasad renik (mikroorganisme) yang pertama yang digunakan
manusia dalam industri pangan. Orang-orang Mesir zaman dahulu telah
menggunakan yeast dan proses fermentasi dalam memproduksi minuman
beralkohol dan membuat roti pada lebih dari 5000 tahun yang lalu.

Khamir merupakan jenis jamur uniseluler. Istilah khamir umumnya

digunakan untuk bentuk-bentuk yang menyerupai jamur dari kelompok
Ascomycetes yang tidak berfilamen tetapi uniseluler berbentuk ovoid atau
spheroid. Bentuk khamir dapat sperikal sampai ovoid, kadang dapat membentuk
miselium semu. Ukuran juga bervariasi. Struktur yang dapat diamati meliputi
dinding sel, sitoplasma, vakuol air, globula lemak dan granula. Kebanyakan
khamir melakukan reproduksi secara aseksual melalui pembentukan tunas secara
multilateral ataupun polar.

Sel kamir mempunyai ukuran bervariasi, yaitu dengan panjang 1-5 mm

sampai 20-50 mm dan lebar 1-10 mm. Bentuk khamir dapat berbentuk bulat oval,
seperti jeruk, silindris, segitiga, memanjang seperti miselium sejati atau meselium
palsu, ogival yaitu bulat panjang dengan salah satu ujung runcing, segitiga
melengkung, dan lain-lain. Bagian struktur yang terlihat adalah dinding sel,
sitoplasma, vakuola, butir lemak, albumin, dan pati. Pewarnaan khusus akan
membantu kita melihat intinya. Khamir tidak bergerak karena itu tidak
mempunyai struktur tambahan di bagian luarnya seperti flagella (Pelczar,2005).

Beberapa jenis khamir membentuk kapsul di sebelah luar. Tipe endospora

aseksual yang tahan panas seperti yang diproduksi bakteri Bacillus dan
Clostridium tidak dihasilkan oleh khamir. Ukuran dan bentuk sel dalam kultur
yang sama mungkin berbeda karena pengaruh perbedaan umur dan kondisi
lingkungan selama pertumbuhan. Sel muda mungkin berbeda bentuknya dari
yang tua karena adanya proses ontogeny, yaitu perkembangan individu sel.
Contoh Khamir yang berbentuk apikulat umumnya berasal dari tunas berbentuk
bulat sampai bulat oval yang terlepas dari induknya, kemudian tumbuh dan
membentuk tunas sendiri.

19
 Seperti bakteri, sel-sel khamir mempunyai lapisan dinding luar yang terdiri
dari polisakarida kompleks dan di bawahnya terletak membran sel. Sitoplasma
mengandung suatu inti yang bebas (discreate nucleus dan bagian yang berisi
sejumlah besar cairan yang disebut vakuola.

2.10 Penyakit Bakteri pada Unggas

2.10.1 Collibacilosis
Colibacillosis adalah penyakit yang disebabkan oleh bakteri Escherichia
coli (E.coli). Pada unggas, infeksi E.coli dapat menyebabkan penyakit seperti
omphalitis, air sacculitis, peritonitis dan salphingitis. E.coli tergolong Gram
positif, tidak tahan asam, motil, memfermentasi laktosa, merupakan basil yang
tidak membentuk spora, berbentuk batang dengan ukuran 0,5x1.0-3.0 mikrometer.
E.coli mudah ditumbuhkan pada berbagai media laboratorium. Biakan di atas
media padat berbentuk granular halus (dengan diameter 1-3 mm) yang menjadi
kasar bila umur biakan menjadi bertambah tua. Pada medium agar Mac Conkey
pertumbuhan E.coli berwarna merah dadu. Dalam media cair pertumbuhannya
ditandai dengan kekeruhan dan adanya endapan dibagian bawah tabung.
Colisepticemia dapat menyerang ayam pada berbagai tingkatan umur, tetapi
biasanya menyerang ayam petelur berumur 3-5 minggu. Selain menyerang ayam,
colisepticemia juga dilaporkan dapat menyerang kalkun, dan itik.
E.coli tidak tahan terhadap keadaan kering atau desinfektan biasa. Kuman
inimati pada suhu 60°C selama 30 menit. Bakteri E.coli keluar bersama feses
daritubuh dalam jumlah besar dan mampu bertahan untuk beberapa hari sampai
beberapa minggu. Secara individual sel bakteri ini mampu bertahan sampai 6
bulan dalam es. Faktor-faktor predisposisi untuk timbulnya colibacillosis antara
lain infeksi CRD dan IB. Diketahui bahwa adanya infeksi dengan virusND juga
merupakan salah satu faktor predeposisi infeksi E.coli. Penyakit dapat
berkembang cepat dengan derajat kematian yang tinggi. Colibacillosis mempunyai
dampak yang penting dalam industri perunggasan, karena menyebabkan adanya
gangguan pertumbuhan, penurunan produksi, peningkatan jumlah ayam afkir,
penurunan kualitas karkas dan telur, penurunan daya tetas telur dan kualitas anak
ayam, dan menyebabkan mudahnya terjadinya kompleks penyakit yang

20
melibatkan sistem pernafasan sistem pencernaan atau sistem reproduksi yang sulit
untuk ditanggulangi.
2.10.2 Fowl Typhoid

Fowl typhoid merupakan penyakit yang disebabkan oleh bakteri

Salmonella enterica subspecies enterica serovars Gallinarum biovars Gallinarum.
Penyakit ini dapat menyebabkan kematian pada unggas semua golongan umur.
Penyebaran penyakit dapat melalui vertikal maupun horizontal. Penularan secara
vertikal dapat ditularkan dari induk ke anaknya melalui telur (egg transmitted),
sedangkan penularan secara horisontal terjadi secara oral atau respirasi
(Kementan, 2014)

Morfologi bakteri Salmonella mempunyai ciri-ciri umum sebagai berikut

berbentuk batang atau silindris. bersifat gram negatif berkembang biak dengan
cara membelah diri. Salmonella gallinarum juga memiliki faktor virulensi berupa
antigen O dan antigen H (Sannat et al., 2016)

Gejala klinis penyakit fowl typhoid ditandai dengan adanya septicaemia,

anemia, depresi, kesulitan bernafas, dan diare yang tidandai dengan adanya feses
yang menempel pada sekitar lubang kloaka. Penyakit pada unggas dewasa bersifat
akut septicemia. Lesi yang ditimbulkan pada hati dapat berupa pembengkakan,
rapuh, dan berwarna seperti empedu tanpa adanya fokal nekrosa. Pembengkakan
juga terjadi pada limpa dan ginjal, anemia serta enteritis (OIE, 2018)

Salmonella pullorum merupakan diagnosa banding utama karena gejala

yang ditimbulkan hampir sama. Pencegahan dapat dilakukan dengan
meningkatkan biosekuriti. Sama seperti infeksi Salmonella yang lain, unggas yang
sembuh dapat menjadi pembawa penyakit (carrier). Vaksin fowl typhoid dapat
berupa vaksin inaktif dan vaksin killed. Eliminasi reaktor positif pullorum dapat
menurunkan infeksi S.gallinarum. Evaluasi serologis untuk mengetahui kejadian
penyakit tersebut pada parent stock perlu dilakukan secara rutin (Kementan, 2014)

2.10.3 Pullorum

21
 Salmonella pullorum termasuk dalam keluarga bakteri enterobacteriae dan
sangat tinggi adaptasinya terhadap host (inangnya). Bakteri ini tergolong dalam
serogroup D sesuai dengan skema kauffman-whiite. Umumnya strain dari
Salmonella pulorum sama pada level kromosom. Penyakit pullorum sudah sejak
lama tersebar di seluruh dunia. Di Indonesia pullorum sering ditemukan terutama
di daerah yang banyak memelihara ayam ras, dengan angka kematian tertinggi
pada anak ayam yang baru menetas (Wigley et al., 2001).

Hewan-hewan yang rentan adalah ayam, kalkun, selain itu juga burung
gereja, itik, angsa, merpati, burung puyuh, termasuk juga burung liar. Faktor-
faktor predisposisi seperti udara kotor, sistem sanitasi yang tidak merata,
penyediaan makanan yang tidak baik, dan penyakit-penyakit lain pada waktu
bersamaan. Banyak menyerang pada anak ayam yang baru menetas dengan angka
morbiditas mencapai lebih dari 40% dan angka mortalitas tinggi dapat mencapai
85-100%. Pullorum lebih banyak menyerang pada anak ayam yang baru menetas
terutama pada umur minggu ke-2 dan ke-3, namun penyakit juga dapat menyerang
semua umur ayam (Barrow etc, 2011)

Cara penularan pullorum dapat terjadi melalui secara vertikal atau

kongenital yaitu penularan dari induk ayam betina kepada anaknya melalui telur,
secara horizontal penularan terjadi melalui kontak langsung yaitu antara unggas
yang secara klinis sakit dengan ayam carrier atau ayam sehat, secara tidak
langsung dapat terjadi melalui oral yakni melalui makanan dan minuman yang
tercemar, peralatan, kandang, litter dan pakaian, dari pegawai kandang yang
terkontaminasi. Secara aerogen, biasanya penularan terjadi dalam mesin tetas
melalui debu, bulu-bulu anak ayam, pecahan kulit telur, dan sebagainya.

Masa inkubasi penyakit pullorum berkisar 1 minggu. Gejala penyakit

yang terlihat pada ayam ialah kelihatan mengantuk (mata menutup), jengger
kebiruan, bergerombol, pada suatu tempat dan nafsu makan berkurang. Pada
umumnya memperlihatkan diare putih atau coklat kehijau-hijauan dan terdapat
gumpalan seperti pasta di sekitar kloaka disertai kelemahan kaki, sayap
menggantung kusam, lumpuh karena arthritis, dan nampak sesak nafas. Terjadi
pembengkakan pada sendi merupakan gambaran umum pullorum. Ayam-ayam

22
yang tahan hidup mengalami hambatan pertumbuhan. Pada ayam dewasa gejala
penyakit sukar dilihat, tetapi kadang-kadang terlihat adanya tanda-tanda depresi,
kekurusan, anemia, diare, dan produksi telur menurun (OIE, 2008).

Sedikit diketahui patogenesis penyakit pulorum, kemungkinan sehubungan

dengan tingginya kesuksesan dalam pembasmian penyakit tersebut. Ragamnya
bakteri salmonella, termasuk S pullorum yang mampu bertahan dan
bermultiplikasi dalam macam-macam organ sehubungan dengan tidak diketahui
mekanisme kontrol meliputi sistem retikuloendotelial. Lebih lanjut , S. pulorum
menunjukkan terget organnya pada bursa fabrisius terlebih dahulu untuk
mengeluarkan respon inflamasi di dalam usus halus anak ayam. Faktor molekuler
dari sifat patogen seperti adanya respon plasmid terhadap virulens dan faktor
virules seperti gene palsmid virulens dan gene invasi serta gen fimbrial. Virulens
merupakan kemampuan relatif dari parasit yang menyebabkan penyakit, faktor
ukurannya adalah daya invasi dan daya racunnya (toxicity). Salmonella umumnya
menggunakan kombinasi toksin dan factor virulens lainnya untuk meningkatkan
sifat patogenitasnya yaitu paling sedikit ada tiga macam toksin yaitu :
enterotoksin (AB) menghambat sintesis protein dan mengakibatkan diare,
endotoksin, cytotoksin (CT) : mengakibatkan hilangnya larutan dari sel, reaksinya
2+
diikuti dengan kehilangan Ca dari sel. Invasi bakteri menentukan sifat adhesi
atau sifat melekatnya bakteri pada permukaan sel. Faktornya adalah adanya
antigen O Polysacharida pada 9 permukaan sel. Dan antigen H pada flagelanya.
Adanya fimbria/flagella juga meningkatkan sifat adhesinya. Antigen vi capsule
(polysacharida) menghambat ikatan pelengkap dan membunuh media antibody.
Gen Inv salmonella sedikitnya terkode 10 macam protein yang berbeda dalam
inangnya masing-masing seperti : InvH, InvC, InvG, InvI, dan InvJ, dll. Gen
OxyR menetralisir oksigen racun yang dikeluarkan oleh makrofag, sehingga
salmonella dapat hidup didalam sel makrofag. Gen phoP dan phoQ menetralisir
molekul antimikroba dari makrofag yaitu defensin dan menetralisis produk
lainnya. Siderosphore, protein pengikat besi untuk rekasi pertama kali saat
menginfeksi sel. Siderophores dalam tubuh inang akan bersaing dalam
memanfaatkan besi yang juga dibutuhkan dalam pembentukan darah dan
pertumbuhan sel. Hal ini yang mendukung sifat adherencenya meningkat saat

23
memasuki dan menempel pada permukaan sel inangnya. Reaksi pengikatannya
seperti pada gambar dibawah ini. Lipopolisacharida yang terdapat pada
permukaan sel bakteri juga mengandung antigen O yang spesifik, pada bagian
corenya terdiri dari ketoxyoctonate (KDO), 7 gula carbon (heptosa), glukosa,
galaktosa, dan N asetylglusamin (Eckmann etc, 2001).

Prosedur manajemen yang dapat dilakukan untuk mengurangi kejadian

pullorum sebagai berikut : Ayam yang dihasilkan dari sumber yang bebas dari
pullorum, tidak ada pencampuran kelompok unggas yang bebas pullorum dengan
kelompok unggas yang dinyatakan bebas fowl typoid, sanitasi kandang dan
lingkungan, menggunakan pakan berbentuk pellet atau crumble untuk mengurangi
infeksi salmonella dalam pakan, menggunakan program biosecurity untuk
meminimalkan masuknya salmonella dari luar seperti : burung liar, tikus, kelinci,
anjing, dan kucing. Pengontrolan serangga, menggunakan air minum portable,
menggunakan 18 footwear dan pakaian yang selalu distrerilisasi saat masuk
kandang, perlengkapan, truk prosesing dan perlatan lain juga harus disterilkan dari
infeksi salmonella. Usaha pencegahan lainnya yaitu pengurangan ewan carriers
dan melakukan uji tes serologis pada kelopok hewan yang diduga terinfeksi
salmonella pullorum (OIE, 2008)

Pengambilan sampel dilakukan untuk menguatkan diagnosa apabila pada

pengujian pullorum di lapangan didapatkan hasil reaksi positif atau dubius. Dalam
hal ini sampel yang dikirim adalah ayam dalam keadaan hidup minimal 6 ekor.
Bila dijumpai kasus akut pada ayam muda atau dewasa di lapangan, dalam hal ini
yang dikirim adalah bangkai segar dalam keadaan dingin. Bila pengiriman
bangkai segar masih tidak mungkin dilaksanakan, maka sebagai gantinya dapat
beberapa organ tubuh, seperti jantung beserta pericard dan isinya, hati berikut
kantong empedu yang sudah dikeluarkan isinya, limpa, pancreas, ovarium, saluran
telur dan testis, usus dengan isinya. Organ-organ tubuh tersebut diambil secara
aseptic dimasukkan dalam botol steril dimasukkan ke dalam termos berisi es, atau
dimasukkan dalam botol yang berisi phosphate buffer glycerin atau glycerin NaCl
fisiologis dengan volume sama banyak. Selain organ tubuh tersebut yang perlu
dikirim juga adalah dinding tembolok, duodenum, dan bagian usus lain berikut

24
isinya serta tonsil caeca. Bersamaan dengan pengiriman organ-organ tersebut
harus juga dikirim darah dan serum secara terpisah yang berasal dari hewan-
hewan sekandang sejumlah 10% atau lebih dari populasi dan diambil sampel
diambil secara acak.

Pullorum tumbuh cepat pada media beef agar atau beef broth atau media
nutrien lainnya. Bakteri tersebut adalah aerobik dan anaerobik fakultatif dan
tumbuh baik pada suhu 37 oC. Salmonella pullorum kadang-kadang juga gagal
untuk tumbuh pada media selektif yang sudah pasti seperti Salmonella–shigela
tetapi tumbuh secara nyata diatas agar bismuth sulphite dan MacConkey agar.
Samonella tersebut tumbuh pada medium non selektif dan medium selektif yang
kaya nutrien akan mengandung bahan-bahan yang menghambat pertumbuhan
mikroorganisme lain. Untuk efisiensi digunakan media selektif dan non selektif
karena beberapa media mempunyai efek inhibitory tertentu dan bakteri ini
bervariasi dalam koloninya.

Media noninhibitory termasuk NA dan BA, koloni akan tampak halus,

transparan, tipis, dan diameternya kurang lebih 2 mm. Media-media selektif
seperti : MacConkey agar menghambat organisme nonenterik, membedakan
bakteri yang memfermentasi laktosa, (berkoloni merah muda) dan yang tidak bisa
memfermentasi laktosa (tidak berwarna). NaCl yang terkandung dapat
menghambat koloni bakteri proteus. Koloni salmonella halus dan tak berwarna.
Agar desoxycholate citrate menghambat mikroorganisme nonenterik, Pullorum
akan nampak berkoloni sangat kecil dan tumbuh tipis. Bakteri proteus dapat
tumbuh seperti pseudomonas. Agar brilliant green menghambat coliform dan
hampir semua strain proteus, baik untuk membedakan koloni mikroorganisme
enterik. Agar brilliant green sulphapyridine menghambat coliform dan proteus,
Sulphapyridine ditambahkan untuk menambah selektivitas. Media Liquid
enrichment dan media selektif lainnya yaitu : Selenite F Broth : menghambat
coliform tapi tidak menghambat proteus. Dikembangkan dengan menambahkan
brilliant green. Kehilangan aktifitas setelah 24 jam. Selenite csytein broth lebih
stabil. Tetrathionate/brilliant green broth: menghambat coliform dan proteus tapi
mungkin juga menghambat pullorum. Rappaport/Vassiliadis Soya Peptone broth

25
untuk selektivitas pengkayaan yang mengikuti pra-pengkayaan menggunakan 1
bagian inokulum terhadap 100 bagian media (Wigley, 2001).

Koloni typical salmonella pada media noninhibitory berbentuk bundar,

seperti kubah, halus dan 1-2 mm diameternya setelah 24-48 jam inkubasi. Pada
media selektif tampak bervariasi. Koloninya dapat lebih lanjut diuji dengan cara
serologis dan biokomia dan dilihat motilitasnya. Setelah inkubasi 20-24 jam,
subkultur distrik di atas NA, BA atau media selektif. Jika pertumbuhannya tipis
setelah 24 jam maka diinkubasi lagi selama 24 jam diuji lagi. Untuk uji biokimia
dan serologis dapat dikonfirmasikan dari setiap palet, lima koloni dipilih untuk
diuji. Jika ada koloni yang lebih dari koloni yang dimakasud maka diambil semua
untuk diuji.. Kemudian di strik di atas NA dalam wilayah yang terpisah. Laktosa
dan sukrosa juga ada yang bisa difermentasi. Saat ini juga sudah ditemukan
adanya S pullorum yang memiliki flagella dan bersifat motil, hal ini diduga terjadi
peningkatan patogenitas pullorum didalam tubuh organisme inangnya. Salmonella
pullorum dikategorikan dalam bakteri gram negatif saat dilakukan pewarnaan,
karena koloninya tampak berwarna merah setelah dilakukan pewarnaan gram, hal
ini tentunya menunjukkan bahwa kandungan lipid yang tinggi pada dinding selnya
yang larut dalam alkohol dan aseton sehingga terjadi pemucatan dan berwarna
merah muda. Disamping itu secara biokimia salmonella pullorum juga ternyata
mempunyai kemampuan untuk mengikat besi, hal ini terlihat terjadi reaksi
blackening diatas medium EMB (Barrow etc. 2011).

2.10.4 Paratifoid

2.10.4. 1 Etiologi

Salmonellosis atau paratifoid disebabkan oleh Salmonella sp. Selain

Salmonella pullorum dan Salmonella gallinarum yang merupakan suatu kelompok
bakteri yang tidak mempunyai host yang spesifik. Kelompok Salmonella sp.
Penyebab paratifoid bersifat fakultatif anaerobe dan dapat tumbuh dengan mudah
pada agar daging sapi dan kaldu. Kelompok Salmonella yang menyebabkan
paratifoid bersifat gram-negatif, tidak membentuk spora dan mempunyai
keterkaitan pada uji serologisk. Kelompok Salmonella sp. berbentuk bacilli

26
dengan ukuran 0,4- 0,6x1-3 um, tetapi kadang-kadang kelompok bakteri tersebut
berbentuk filamen panjang. Kelompok bakteri tersebut bersifat motil, walaupun
bentuk varian yang bersifat non-motil dengan atau tanpa flagella dapat juga
ditemukan pada kondisi alami. Suhu optimum untuk pertumbuhan kelompok
Salmonella adalah 37o C. Salmonella enteritidis di berbagai negara merupakan
masalah dihubungkan dengan pencemaran pada telur yang diduga dapat menular
ke manusia. Beberapa jenis Salmonella sp. Lainnya mempunyai potensi untuk
menimbulkan infeksi pada manusia, walaupun tidak menimbulkan kerugian yang
signifikan pada peternakan ayam. Salmonella typhimurium bersifat lebih
patogenik pada ayam dan kalkun dibandingkan dengan jenis Salmonella sp.
penyebab paratifoid lainnya (Quiin et al, 2002).

Penyebab paratifoid Salmonella sp. bersifat peka terhadap panas dan

berbagai jenis desinfektan. Beberapa ahli melaporklan bahwa Salmonella
typhimurium akan mati dalam waktu 5 menit pada temperatur 60 o C. Salmonella
dapat hidup selama 13 bulan pada karkas yang disimpan pada temperatur -21 o C
setelah terlebih dahulu dibekukan pada temperatur -37o C. Beberapa desinfektan
yang sering digunakan pada peternakan ayam dapat digunakan untuk
memusnahkan Salmonella. Formaldehida atau campuran formadehida bersifat
sangat efektif untuk membunuh Salmonella pada tanah ataupun kandang sehingga
penggunaan desinfektan ini yang banyak digunakan di lapangan. Litter yang
menganding amoniak mempunyai efek “salmonellacidal” oleh karena dapat
membunuh bakteri tersebut. Beberapa ahli melaporkan bahwa Salmonella
typhimurium dapat hidup lebih lama pada temperatur 4oC dibandingkan dengan
pada temperatur kamar. Salmonella typhimurium dapat hidup di dalam pakan dan
litter selama paling sedikit 18 bulan pada temperatur 11 oC; dan sekitar 40 hari
dalam pakan dan 13 hari dalam litter pada temperatur 38 oC. Salmonella sp. dapat
hidup selama berbulan-bulan di dalam kotoran pada suatu lapangan terbuka dan
selama 28 bulan di dalam feses unggas yang terinfeksi secara alami. Bakteri
Salmonella typhimurium dapat hidup dengan baik di dalam tanah yang
mengandung material organik (Direktur Kesehatan Hewan, 2014).

27
 Salmonella sp. yang menginfeksi unggas mempunyai suatu variasi dalam
struktur antigenik somatik dan flagellar. Sifat patogenik dari Salmonella sp.
Dihubungkan dengan adanya endoktoksin yang erat hubungannya dengan bagian
somatik dari organisme tersebut. Beberapa ahli melaporkan bahwa Salmonella
enteritidis mempunyai kemampuan untuk menghasilakn enterotoksin pada kondisi
yang sesuai dengan kebutuhan kehidupannya.

2.10.4. 2 Gejala Klinis

Gejala klinis yang ditimbulkan oleh paratifoid sangat mirip dengan gejala
yang ditimbulkan oleh pulorum, fowl typhoid dan avian arizonosis. Ayam muda
yang terserang Salmonella sp. dapat menunjukkan gejala dan lesi yang mirip
dengan penyakit sistemik akut yang disebabkan oleh bakteri, misalnya
Escherichia coli. Infeksi persendian yang ditimbulkan oleh paratifoid dapat
dikelirukan dengan infectous synovitis atau arthritis yang disebabkan agen
infeksius lainnya. Pada dasarnya infeksi paratifoid merupakan penyakit pada
ayam muda, yang dipengaruhi oleh berbagai faktor, misalnya lingkungan,
frekuensi kontak dengan bakteri dan adanya infeksi campuran dengan agen
infeksius lainnya. Pada penyakit akut, yang disertai oleh kematian anak ayam di
dalam inkubator atau beberapa hari setelah menetas, biasanya tidak ditemukan
gejala tertentu. Pada keadaan tersebut, infeksi biasanya terjadi akibat penyebaran
melalui telur atau infeksi awal di dalam inkubator. Infeksi Salmonella sp. yang
tidak mempunyai host spesifik, biasanya ditemukan pada anak ayam dengan umur
<2 minggu dan jarang pada umur >4 minggu. Infeksi akut dapat ditemukan pada
ayam umur 7-21 hari, dengan puncak kematian sekitar umur 7-14 hari. Masa
inkubasi antara 4-5 hari dan biasanya gejala penyakit ini berlangsung 3-5 minggu
(Direktur Kesehatan Hewan, 2002).

Gejala klinis kadang tidak spesifik, anak ayam terlihat mengantuk, berdiri
pada satu kaki dengan kepala tertunduk, mata tertutup, sayap menggantung dan
bulu berdiri. Anak ayam akan kehilangan nafsu makan, tetapi konsumsi air
meningkat; diare prufus yang encer, disertai oleh material menyerupai pasta yang
melekat di daerah kloaka dan sekitarnya. Disamping itu, terlihat juga anak ayam
yang kedinginan dan cenderung untuk mengumpul dibawah pemanas. Kadang-

28
kadang terlihat adanya konjungtivis dan kebutaan akibat kekeruhan pada kornea
dan adanya eksudat kaseus di dalam bola mata. Infeksi pada ayam dewasa
umumnya tidak menunjukkan gejala klinis tertentu. Infeksi akut pada ayam dara
atau ayam dewasa jarang terjadi pada kondisi alami. gejala klinis yang terlihat
pada ayam yang terinfeksi dengan Salmonella typhimurium, meliputi diare yang
disertai oleh depresi dan kelemahan umum, sayap menggantung dan bulu berdiri
(Direktur Kesehatan Hewan, 2002).

2.10.4. 3 Patologi

Pada ayam muda lesi mungkin tidak terlihat pada kasus yang sangat akut.
Pada kasus yang kurang akut, lesi yang terlihat meliputi emasiasi, dehidrasi,
kongesti hati dan limpa dengan jalur-jalur hemoragik atau foki nekrotik, kongesti
ginjal dan perikarditis yang disertai oleh perlekatan antara perikardium dan
jantung. Jika anak ayam yang terserang, maka akan dijumpai adanya yolk sac
yang belum terserap dan berisi eksudat radang berwarna cokelat kehijauan. Ayam
yang belum mati pada fase septisemik akut akan menunjukkan daerah nekrosis
yang multifokal di dalam paru, hati dan jantung. Terlihat juga adanya
perihepatitis, perikarditis, peritonitis dan enteritis hemoragika. Pada sekitar
sepertiga dari ayam yang mati karena salmonelosis, dapat ditemukan adanya
sekum yang mengalami distensi dengan lumen yang mengandung massa
menyerupai pasta, yang terdiri atas jaringan nekrosis yang mengeras dan berwarna
kelabu (Quinn et al, 2002).

Pada ayam yang terinfeksi Salmonella enteritidis biasanya ditemukan lesi

yang bersifat septisemik, perikarditis dan perihepatitis. Perikarditis ditandai oleh
penebalan dan peningkatan vaskularisasi perikardium dan adanya cairan yang
keruh di dalam kanting perikardium. Kadang-kadang terlihat juga adanya
panoftalmitis purulenta yang disertai oleh hiperplasia kornea. Lesi pada mata
dapat ditemukan pada konjungtiva, kornea dan pupil; didalam sudut mata anterior
dapat dijumpai adanya suatu massa berbentuk bulat berwarna kuning kelabu
(Quinn et al, 2002).

29
 Pada ayam dewasa yang terinfeksi secara akut dapat menunjukkan adanya
pembengkakkan dan kongesti pada hati, limpa dan ginjal; enteritis hemoragika
atau enteritis nekrotikan, perikarditis dan peritonitis. Beberapa ahli melaporkan
tentang infeksi Salmonella stanley yang ditandai oleh lesi nekrotik dan
hiperplastik pada oviduk dan lesi nekrotik supuratif pada ovarium. Lesi pada
oviduk dan ovarium kerapkali melanjut menjadi peritonitis difus dan dapat
mendukung timbulnya infeksi Salmonella pullorum. Ayam dewasa yang terinfeksi
secara kronis dan merupakan carrier paratifoid biasanya menunjukkan lesi yang
meliputi emasiasi dan ulser pada usus, pembesaran hati, limpa dan ginjal, noduli
pada jantung dan bentuk abnormal pada ova. Perubahan pada jaringan ovarium
yang ditimbulkan oleh penyakit ini tidak separah lesi yang ditimbulkan oleh
pullorum. Ayam dewasa yang terinfeksi

secara kronis, terutama yang merupakan carrier intestinalis sering tidak

menunjukkna adanya lesi yang menciri (Direktur Kesehatan Hewan, 2014).

2.10.4. 4 Pengobatan

Obat-obatan yang dapat dipergunakan untuk ayam yang terserang

salmonelosis adalah antibiotik ataupun antibakteri. Jika kesembuhan tidak tuntas,
maka risiko terjadinya carrier akan sangat besar. Uji sensivitas antibiotik
merupakan cara yang paling tepat untuk memilih obat yang sesuai. Berbagai jenis
obat yang dapat digunakan untuk menanggulangi paratifoid

antara lain adalah furazolidon, gentamisin, spektinomisin, sulfametazin dan

kelompok kuinolon (asam nalidiksik atau asam oksolinat, flumekuin,
enrofloksasin, norfloksasin). Pengobatan sebaiknya disertai oleh eliminasi faktor
pendukung terjadinya infeksi dan pelaksanaan sanitasi atau desinfeksi yang ketat
(Subronto, 2008).

30
 BAB III MATERI DAN METODE

3.1 Pemeriksaan Sampel Mastitis

3.1.1 Asal Sampel yang diperiksa

Sampel yang digunakan yaitu susu mastitis yang diperoleh dari daerah
Kaliwaron

3.1.1 Persiapan dan Pembuatan Media

a. EMBA (Eosin Methylen Blue Agar)
Pembuatan media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA) dilakukan
dengan melarutkan bubuk media EMBA ke dalam aquades steril. Perbandingan
antara bubuk media EMBA dengan aquades steril adalah 37.5 gram: 1000 mL
aquades. Larutan kemudian ditutup dengan aluminium foil. Larutan diaduk
hingga merata, dipanaskan dan diaduk kembali hingga larutan mendidih dan
berwarna bening. Larutan media EMBA lalu di didinginkan pada suhu ruang,
setelah itu di-autoclave selama ± 1 jam hingga suhu mencapai 121 oC. Setelah
selesai, larutan media EMBA dituang ke dalam cawan petri dalam laminar
flow. Disterilisasi dengan api bunsen dan sinar UV sebelum serta setelah
penggunaan laminar flow. Media kemudian didinginkan pada suhu ruang
hingga menjadi agar. Agar kemudian disimpan di kulkas jika tidak langsung
digunakan, dan ketika akan digunakan media terlebih dahulu di masukkan ke
dalam incubator hingga suhu normal.

Secara umum, media EMBA adalah media isolasi untuk membedakan

bakteri Enterobacteriaceae. EMBA adalah media yang digunakan untuk
mengetahui ada atau tidaknya bakteri coliform di dalam suatu sampel. Media
EMBA ini mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk
membedakan mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S. aureus, P.
aerugenosa, dan Salmonella. Mikroba yang memfermentasi laktosa
menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap dengan kilap logam.
Sedangkan, mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya tidak berwarna.

b. MCA (Mac Conkey Agar)

Pembuatan media Mac Conkey Agar (MCA) dilakukan dengan

melarutkan bubuk media MCA ke dalam aquades steril. Perbandingan antara
bubuk media MCA dengan aquades steril adalah 52 gram: 1000 mL aquades.
Larutan kemudian ditutup dengan aluminium foil. Larutan diaduk hingga
merata, dipanaskan dan diaduk kembali hingga larutan mendidih dan berwarna
bening. Larutan media MCA lalu di didinginkan pada suhu ruang, setelah itu di

31
autoclave selama ± 1 jam hingga suhu mencapai 121 oC. Setelah selesai,
larutan media MCA dituang ke dalam cawan petri dalam laminar flow.
Sterilisasi dengan api bunsen dan sinar UV sebelum serta setelah penggunaan
laminar flow. Media kemudian didinginkan pada suhu ruang hingga menjadi
agar. Agar kemudian disimpan di kulkas jika tidak langsung digunakan dan
ketika akan digunakan media terlebih dahulu di masukkan ke dalam incubator
hingga suhu normal.

c. Media MSA (Manitol Salt Agar)

Media MSA ditimbang 54 gram. Media ditaruh di tabung erlemeyer
untuk dihomegen dengan akuades 500 mL kemudian ditutup dengan
alumunium foil. Selanjutnya diautoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit.
Dituang ke dalam cawan petri ± 20mL. Dilakukan uji strelitas dengan
menginkubasi selama 24 jam pada suhu 370C.

d. Media BA (Blood Agar)

Bubuk media Blood Agar Base ditimbang sebanyak 15gram kemudian

ditaruh pada tabung erlemeyer dan dilarutkan dengan 375 mL aquades
kemudian dihomogenkan. Botol kaca yang berisi media ditutup dengan tutup
botol yang dilapisi aluminum foil dan diikat dengan benang. Media disterilisasi
dengan autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit.

Media yang telah steril didinginkan hingga mencapai suhu 45-50 0C.
Ditambahkan 5-7% darah kelinci dan dihomognkan. Media dituang ke dalam
plate dan ditunggu hingga padat. Dilakukan uji strelitas dengan menginkubasi
selama 24 jam pada suhu 370C.

e. Media selektif SSA (Salmonella-Shigella agar)

Komposisinya terdiri dari beef extraxt 5 gram, pepton 5 gram, laktosa

10 gram, bile salts 8.5 gram, sodium citrate 8.5, sodium thiosulfate 8.5 gram,
agar 13.5 gram, brilliant green 0,00033 gram, neutral red 0,025. pH akhir yang
diukur 7.0 pada media. Selanjutnya, sebanyak 60 gram SSA dilarutkan dalam
dalam aquades hingga mencapai 1000 ml, campur dengan baik hingga
homogen. Kemudian, dipanaskan hingga semua larut dalam kompor listrik
selama 1 menit. Media didinginkan sampai suhu 45-50 ºC dituang dalam cawan
petri dan simpan pada suhu 8-15 ºC.

e. Media uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar)

Komposisinya terdiri dari beef extract 3 gram, yeast extract 3 gram,
pepton 15 gram,laktosa 10 gram, sukrosa10 gram, dextrose 1 gram, agar 12
gram, sodium cloride (NaClO2) 5 gram, dan sodium thiosulfate (Na2S2O3) 0,3
gram, phenol red 0,024 untuk mendukung pertumbuhan bakteri. Sebanyak 65
gram medium Triple Sugar Iron Agar (TSIA) dilarutkan dalam aquades hingga

32
 mencapai volume 1000 ml, kemudian dipanaskan hingga semua bahan larut.
medium dimasukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing sebanyak 5-10 ml.
pH yang diukur 7,4 kemu, media disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 ºC
selama 15 menit, medium yang sudah steril ditanamkan memadat dalam posisi
tegak kemudian diinkubasi 24-48 jam pda suhu 37 ºC.

f. Media uji SIM (Sulfide indol motility)

Komposisi media pepton 30 gram, amonium iron citrate 0,2 gram,
sodium thiosulfate (Na2S2O3) 0,025gram, dan agar 3 gram. pH akhir media
yang diukur 7,3. Sebanyak 36 gram ditambahkan aquades hingga mencapai
volume 1000 ml, kemudian dipanaskan hingga semua bahan larut . tersebut
dimasukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing sebanyak 5-7 ml. Medium
disterilisasi kedalam autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit. Dan
diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37C.

g. Media uji Simmons citrat agar

Komposisi media terdiri dari magnesium sulfate (MgSO4-) 0,2 gram,
monoammonium phosphate (NH3PO4-) 1 gram, dippottasium phosphate 1
gram, sodium citrate 2 gram, sodium cloride (Nacl) 5 gram, agar 15 gram, dan
brotymol blue 0,08 gram. Selanjutnya, sebanyak 24.2 gram medium citrat agar
dilarutkan dalam aquades hingga mencapai volume 1000 ml, dipanaskan
hingga semua bahan larut, kemudian ditambahkan dengan indikator
bromotimol biru 0,2%. pH diukur menjadi 6.8, media tersebut dimasukkan
kedalam tabung reaksi masing-masing sebanyak 5-7 ml. Medium disterilisasi
kedalam autoklaf pada suhu 121ºC selama 15 menit.

h. Tetrathionate Broth Base

Komposisi media terdiri dari Lab-Lemco Powder 0,9 gram, peptone 4,5
gram, yeast extract 1,8 gram, sodium chloride 4,5 gram, calcium carbonate 25
gram, sodium thiosulfate 40,7 gram. Selanjutnya, sebanyak 77 gram medium
dilarutkan dalam aquades hingga mencapai volume 1000 ml, dipanaskan
hingga semua bahan larut, tambahkan 20 cc larutan sodium, campur dengan
baik dan tuang kedalam tabung reaksi masing-masing sebanyak 5-7 ml.
Medium disterilisasi kedalam autoklaf pada suhu 121ºC selama 15 menit.

3.1.2 Langkah-langkah pemeriksaan bakteri:

a. Pertumbuhan bakteri pada media (isolasi primer)

1. Persiapan media MCA (Mc conkay agar), MSA (manitol salt agar), BA (Blood
Agar) dan EMBA (Eosin Methylen Blue Agar), setelah itu dilakukan inokulasi
dengan pembenihan murni dengan cara membagi media menjadi 4 kuadran.

33
2. Melakukan inkubasi media pada inkubator dengan suhu 37oC selama 24 jam

3. Melakukan pengamatan hasil morfologi konoli yang terbentuk.

b. Pemurnian Bakteri (Isolasi Sekunder)

1. Menyediakan media MSA (Manitol Salt Agar), dan media EMBA

2. Melakukan penanaman koloni pada media MSA yang berasal dari koloni
bewarna kuning pada media MSA yang pertama dan dilakukan pemurnian pada
media EMBA yang berasal dari koloni berwarna hitam dengan pendar hijau
metalik dari media EMBA pertama

3. Melakukan inkubasi media pada inkubator dengan suhu 37oC selama 24 jam.

4. Melakukan pengamatan hasil morfologi koloni pada media.

c. Pewarnaan Gram

Setelah didapatkan koloni murni pada media MSA dan EMBA lalu
dilakukan identifikasi dengan menentukan gram bakteri dengan pewarnaan
Gram. Prosedur dalam pewarnaan Gram sebagai berikut:

1. Object glass dibersihkan sehingga bebas dari lemak dan kotoran, dengan cara
membakar object glass di atas api.

2. Koloni dioleskan dengan menggunakan ose, lalu ditambahkan aquadest sampai

membentuk suspensi.

3. Suspensi tersebut dikeringkan dengan cara menghangatkan jauh di atas api.

4. Dilakukan fiksasi di atas api kecil tiga kali berturut-turut selama satu detik agar
organisme mati dan menempel lekat pada object glass.

5. Object glass didinginkan.

6. Sediaan apus dituangi kristal violet, lalu dibiarkan selama 2 menit, setelah itu
dibilas.

7. Sediaan ditetesi lugol selama 1 detik, lalu dibilas.

34
8. Sediaan ditetesi dengan aceton alkohol, lalu dibilas.

9. Sediaan ditetesi dengan safranin selama 1 menit, dan dibilas

10. Diamati pada mikroskop dengan perbesaran total 1000x

d. Uji Lanjutan

Uji lanjutan yang dilakukan yaitu berupa uji katalase dan koagulase pada
media MSA, dan uji biokimia pada media EMBA.

3.2 METODE PENCERNAAN

3.2.1 Tempat dan Waktu
Pemeriksaaan dan isolasi bakteri dari saluran pencernaan dilaksanakan di
Laboratorium Bakteriologi dan Mikologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Airlangga Surabaya pada tanggal 29 April 2019-6 Mei 2019.

3.2.2 Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan yaitu cawan petri, ose bulat, ose lurus, bunsen,
mikroskop, objek glass, nampan, gunting, pinset, pipet, tabung reaksi, dan rak
tabung. Bahan yang digunakan yaitu media identifikasi bakteri MCA (Mac.
Conkey Agar), EMBA (Eosin Methylene Blue Agar), SSA (salmonella Shigella
Agar), TSIA (Triple Sugar Iron Agar), SCA (Simmons Citrat Agar), Urea, SIM
(Sulfide Indol Motility), media gula-gula seperti laktosa, maltosa, sukrosa,
manitol, dan glukosa, pewarnaan gram kristal violet 1%, lugol, aceton alkohol,
dan safranin.

3.2.3 Nekropsi Ayam dan Pengambilan Sampel

Isolasi bakteri dari saluran pencernaan dilakukan dengan cara memilih
ayam dengan gejala klinis diare. Prosedur nekropsi dilakukan untuk melihat

35
saluran pencernaan untuk diisolasi, ayam dimatikan terlebih dahulu dengan cara
emboli pada foramen magnum. Ayam diletakkan pada nampan dengan posisi
rebah dorsal. Insisi didaerah kulit yang longgar diantara permukaan medial dari
tiap paha dan abdomen. Kaki dilebarkan lateral dan kuakkan sendi coxofemoral.
Insisi kulit secara transversal di tengah abdomen dan kuakkan kulit lalu hadapkan
bagian cranial menuju thoraks dan bagian caudal menuju abdomen. Buat insisi
longitudinal pada musculus pectoralis pada setiap sisi sternum sehingga
costochondral junction cavum abdomen dibuka dengan gunting, lanjutkan
area insisi ke anterior melalui costoschondral junction, potong os. coracoid dan
os. Clavicula. Lakukan insisi kebagian dalam sampai semua organ terlihat dan
periksa organ-organ target yang mengalami atau tampak adanya perubahan
patologis. Saluran pencernaan dikeluarkan dengan cara memotong esophagus
kemudian tarik seluruh saluran pencernaan ke arah posterior dengan memotong
kloaka (Weli, 2011). Diamati bagian saluran pencernaan yang mengalami
perubahan patologi. Sampel organ yang diambil yaitu usus halus dan colon
dengan cara memotong bagian yang mengalami perubahan ±2 cm. Spesimen
isolasi diletakkan dalam cawan petri streril.

3.2.4 Inokulasi
3.2.4.1 Inokulasi Bakteri pada Media Tetrathionate broth
Media Tetrathionate broth merupakan media enrichment yang digunakan
sebagai media pertumbuhan bakteri. Penanaman pada media tetrathionate
dilakukan dengan mengambil potongan organ usus halus kemudian dimasukkan
ke dalam media tetrathionate broth. Inkubasi selama 24 jam dengan suhu 37oC.
Dilakukan pengamatan koloni yang tumbuh ditandai dengan adanya perubahan
kekeruhan pada media Tetrathionate broth. Kemudian dilanjutkan isolasi bakteri
ke media Salmonella Shigella Agar (SSA).

3.2.4.2 Inokulasi Bakteri pada media MCA dan EMBA

Media Mac Conkey Agar (MCA) merupakan media selektif dan
differensial jenis mikroba tertentu akan membentuk koloni dengan ciri khas
tertentu. Media MCA mengandung laktosa, garam empedu, dan merah netral

36
sebagai indikator warna. Garam empedu akan menghambat pertumbuhan bakteri
Gram positif, sedangkan bakteri Gram negatif yang tumbuh dapat dibedakan
berdasarkan kemampuan dalam memfermentasi laktosa. Koloni bakteri yang
dapat memfermentasi laktosa memiliki warna merah bata sedangkan bakteri yang
tidak dapat memfermentasi laktosa tidak memperlihatkan perubahan pada media
dan warna koloninya sama dengan media. Bakteri yang positif dalam
memfermentasi laktosa misalnya Escherichia coli warna koloni merah dikelilingi
zona keruh, Klebsiella dan Enterobacter warna koloni merah muda dengan
mukoid. Sedangkan bakteri yang tidak memfermentasi laktosa (colourless)
misalnya Salmonella, Shigella, Proteus, Psuedomonas.
Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) juga merupakan media
selektif diferensial yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri Gram negatif
dari golongan Enterobacteriaceae. untuk membedakan antara koloni bakteri yang
dapat memfermentasi laktosa dengan yang tidak dapat memfermentasi laktosa. Di
media EMB juga ditambahkan sukrosa untuk membedakan antara koloni bakteri
coliform yang mampu memfermentasi sukrosa lebih cepat dari laktosa dengan
koloni bakteri yang tidak mampu memfermentasi sukrosa. Bakteri gram negatif
yang memfermentasi laktosa (umumnya bakteri usus) dapat menghasilkan asam,
dalam kondisi asam akan menghasilkan warna kompleks berwarna ungu gelap
atau warna hijau metalik. Warna hijau metalik ini merupakan indikator dari
bakteri yang dapat memfermtasi laktosa dengan kuat dan/atau bakteri yang dapat
memfermentasi sukrosa (khas pada bakteri coliform fecal). Pada bakteri yang
memfermentasi laktosa dengan lambat akan menghasilkan asam dengan jumlah
yang sedikit sehingga koloni akan berwarna coklat atau merah muda. Pada bakteri
yang tidak dapat memfermentasi laktosa koloni akan berwarna merah muda atau
transparan.

Berikut ini tahapan isolasi bakteri pada media MCA dan EMBA

1. Ose bulat yang telah dipanaskan ditempelkan pada mukosa saluran

pencernaan yang telah diisolasi yaitu duodenum dan kolon
2. Penanaman dilakukan dengan cara streak pada media MCA dan EMBA
3. Inokulasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37C

37
3.2.5 Identifikasi Bakteri
3.2.5. 1 Pemeriksaan Makroskopis
Pemeriksaan makroskopis dilakukan dengan cara mengamati koloni
bakteri yang tumbuh pada media MCA dan EMBA. Pemeriksaan makroskopis
koloni yang dinilai dari bentuk (punciform, irregular, filamentous, atau rhizoid),
ukuran (besar, sedang, kecil), warna (putih, kuning, hitam, merah, hijau),
permukaan (datar, cembung, cekung, kasar/rough, halus/smooth, mukoid), sifat
(keruh, jernih, kering, hemolitis, anhemolitis).

3.2.5.2 Pemeriksaan Mikroskopis

Pemeriksaan mikroskopis dilakukan dengan mengamati bentuk dan sifat

gramnya yaitu bakteri Gram positif atau bakteri Gram negatif. Sehingga dilakukan
pewarnaan Gram sebagai berikut :

1. Diambil satu ose NaCl Fisiologis dan diletakkan pada objek glass
2. Ose disterilkan kembali dengan cara dipanaskan pada api bunsen sampai
berpijar, setelah dingin diambil sedikit bakteri dan disuspensikan dengan
NaCl Fisiologis.
3. Dibuat apusan setipis mungkin.
4. Dilakukan fiksasi dengan melewatkan preparat di atas api bunsen.
5. Preparat ditetesi pewarna kristal violet dan dibiarkan selama 1 menit.
6. Pewarna dibuang dan dibilas dengan air.
7. Preparat ditetesi dengan Lugol dan dibiarkan selama 1 menit.
8. Lugol dibuang dan dibilas dengan air.
9. Preparat ditetesi dengan alkohol dan dibiarkan selama 1 menit.
10. Alkohol dibuang dan dibilas dengan air.
11. Preparat ditetesi dengan pewarna safranin dan dibiarkan selama 1 menit.
12. Pewarna dibuang dan dibilas dengan air.
13. Preparat dikeringkan dengan kertas penghisap atau tissue halus.
14. Preparat diamati menggunakan mikroskop perbesaran 1000x dengan
bantuan minyak emersi.

3.2.5.2.1 Uji Biokimiawi

Uji biokimia bakteri bertujuan untuk mengidentifikasi sifat bakteri

berdasarkan reaksi biokimianya pada berbagai macam media seperti SS agar,
Triple Sugar Iron Agar (TSIA), Urea Agar, Simmons Citrat Agar (SCA), Sulfide

38
Indol Motility (SIM), media gula-gula (Glukosa, Sukrosa, Laktosa, Maltosa,
Manitol).

3.2.5.2.2 Salmonella dan Shigella Agar (SSA)

Media Salmonella dan Shigella Agar (SSA) merupakan media selektif

untuk mengisolasi bakteri Salmonella dan Shigella. Media ini digunakan setelah
isolasi bakteri menggunakan media enrichment seperti Tetrathinate broth. Media
ini digunakan sebelum pengujian menggunakan media Triple Sugar Iron Agar
(TSIA), Urea Agar, Simmons Citrat Agar (SCA), Sulfide Indol Motility (SIM),
media gula-gula (Glukosa, Sukrosa, Laktosa, Maltosa, Manitol). SSA
mengandung garam empedu Na-sitrat, dan brilliant green yang menghambat
pertumbuhan bakteri Gram Positif dan beberapa Gram negative. Jika bakteri
tumbuh dan memfermentasikan laktosa pada media ini maka akan menghasilkan
asam dan mengubah indicator warna menjai merah muda atau merah. Berikut
merupakan cara pemeriksaan menggunakan media Salmonella dan Shigella Agar
(SSA):

1. Ose bulat dipanaskan, setelah dingin dimasukkan ke dalam media

Tetrathionate Broth yang telah dimasukkan potongan organ dan diinkubai
sebelumnya.
2. dilakukan pengadukan kemudian ose dipindah dan dilakukan streak pada
media SSA.
3. Inkubasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37oC.
4. Dilakukan pengamatan.

3.2.5.2.3Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Media Triple Sugar Iron Agar (TSIA) digunakan untuk mengetahui

karakter bakteri dalam memanfaatkan 3 (tiga) macam gula yaitu glokosa , laktosa
dan sukrosa. Indikator yang digunakan adalah phenol red untuk menunjukan
perubahan pH dan ferro sulfat untuk mengetahui produksi H 2S. Berikut metode
pemeriksaan dengan media TSIA :

1. Koloni tunggal diambil dengan menggunakan ose lurus

2. Ditusukkan sampai ± 0,2 cm dari dasar tabung, kemudian cabut tusukkan
secara perlahan lalu streak pada permukaan miring pada media TSIA

39
 3. Inkubasi dilakukan pada suhu 37oC selama 24 jam
4. Dilakukan pengamatan

Interpretasi hasil pada media ini yaitu :

1. Asam (warna kuning) : Jika bakteri dapat memproduksi asam dari hasil
fermentasi gula glukosa, dan atau laktosa, dan atau sukrosa
2. Alkalis (warna merah) : jika bakteri memproduksi alkalis dari gula,
laktosa, atau sukrosa yang tidak difermentasi
3. Asam/alkali (kuning/merah) : jika bakteri hanya dpat memfermentasikan
satu jenis gula
4. Gas positif/negatif : adannya gas dapat dideteksi dengan terbentuk
gelembung udara pada agar, agar pecah atau terangkat pada bagian tegak.
5. H2S positif/negative : adanya H2S dapat dideteksi dari adanya endapan
hitam pada tabung.

3.2.5.2.4 Sulfide Indol Motility (SIM)

Media Sulfide Indol Motility (SIM) digunakan untuk mengetahui motilitas

bakteri, pembebasan sulfit (H2S), dan pembentukan indol. Berikut metode
pemeriksaan menggunakan media SIM :

1. Koloni tunggal diambil dengan menggunakan ose lurus

2. Ose ditusukkan sampai 2/3 dari permukaan media
3. Inkubasi dilakukan pada suhu 37oC selama 24 jam
4. Dilakukan pengamatan
5. Setelah diamati motilitasnya, dilakukan uji indol dengan cara
menambahkan 1 ml chloroform dan 1ml reagen Kovacs
6. Diamati ada tidaknya cincin merah

Berikut merupakan interpretasi pada media ini :

1. Adanya H2S ditandai dengan perubahan warna pada bagian dasar media
menjadi warna hitam. Hal ini merupakan hasil reaksi H 2S dengan Fe
menjadi FeS
2. Motilitas terlihat adanya penyebaran pertumbuhan bakteri di sekitar
tusukan dengan bentuk menjalar, serta adanya warna keruh pada agar
3. Indol positif apabila terbentuk cincin merah

3.2.5.2.5 Simon Citrat Agar (SCA)

Berikut metode pemeriksaan menggunakan Simon Citrat Agar (SCA) :

40
1. Diambil koloni tunggal dengan menggunakan ose ujung bulat.

2. Dilakukan streak pada permukaan miring media.

3. Dilakukan inkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam.

4. Dilakukan pengamatan pada media.

3.2.5.2.6 Urea Agar

Berikut metode pemeriksaan dengan media Urea Agar :

1. Ambil koloni tunggal dengan menggunakan ose ujung bulat.

2. Dilakukan streak pada permukaan miring media.

3. Dilakukan inkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam.

4. Dilakukan pengamatan pada media.

3.2.5.2.7 Gula - Gula

Berikut metode pemeriksaan menggunakan media gula-gula:

1. Diambil koloni tunggal dengan menggunakan ose ujung bulat.

2. Dilakukan penanaman pada media dengan megaduk-aduk pada larutan gula-

gula.

3. Dilakukan inkubasi pada suhu 37 oC selama 24 jam.

4. Dilakukan pengamatan.

3.3.2 Motode Permeriksaan Pernafasan

3.3.2.1 Waktu dan Tempat

Kegiatan PPDH rotasi diagnostik laboratorium Mikrobiologi dilaksanalan

pada tanggal 29 April-6 Mei 2019 di laboratorium bakteriologi dan mikologi,
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga.

3.3.3.2 Alat dan Bahan

41
 Alat yang digunakan adalah peralatan bedah, cawan petri steril, tabung
steril, ose bulat, ose lurus, bunsen, rak tabung, kapas steril, objek glass,
mikroskop, dan autoclave. Bahan yang digunakan adalah ayam hidup yang
selnajutnya akan dinekropsi dan diambil sampel organnya, plasma kelinci, alcohol
75%, Kristal violet, lugol, safranin, aceton alcohol, H 2O2 , PZ, minyak emersi,
media NA (Nutrient Agar), media TSA (Tryptose Agar) , media MSA (Manitol
Salt Agar), dan media NB (Nutrient Broth).

3.3.3.3 Prosedur Nekropsi dan Isolasi Organ

Dilakukan persiapan peralatan untuk melakukan nekropsi seperti pinset,

gunting, scalpel blade harus dilakukan sterilisasi terlebih dahulu untuk
mencegah adanya kontaminasi. Pertama ayam yang hidup dilakukan prosedur
euthanasia dengan emboli udara pada foramen magnum, lalu bulu ayam
dibasahi dengan alkohol. Ayam diposisikan rebah dorsal dengan kaki
mengarah ke pemeriksa, lebarkan sayap ayam ke belakang. Insisi kulit
diantara bagian permukaan medial masing-masing paha dan abdomen. Kaki
dilebarkan lateral dan kuakkan sendi coxofemoral. Insisi kulit secara
transversal di tengah abdomen dan kuakkan kulit lalu hadapkan bagian
cranial menuju thorax dan bagian caudal menuju abdomen. Buat insisi
longitudinal pada musculus pectoralis pada setiap sisi sternum sehingga
costochondral junction dari cavum abdomen dibuka dengan gunting,
lanjutkan area insisi ke anterior melalui costochondral junction, potong os.
Coracoid dan os. Clavicula (Merck, 2013).

Tahap selanjutnya dilakukan pengamatan bagian mana yang mengalami

kelainan. Koleksi dari organ yang akan diamati harus aseptis (Pattison et al.,
2008). Organ yang akan diambil yaitu bagian saluran pernafasan dikarenakan
ditemukan gejala klinis terhadap penyakit yang mengarah pada saluran
pernafasan. Selain itu menurut Ressang (1984), menyebutkan bahwa alat
pernafasan merupakan organ tubuh yang mudah terserang penyakit karena
adanya hubungan langsung antara lubang/rongga hidup dengan alveoli di
dalam paru-paru. Oleh karena itu, organ yang diambil yaitu organ trachea dan
paru-paru. Jaringan atau organ yang sudah dikoleksi kemudian di
homogenisasi dengan pestle dan mortar (Public Health England, 2013).

3.3.3.4 Kultur Bakteri pada Media Agar

Organ trachea dan pulmo yang sudah diisolasi ini kemudian dilakukan
swab dengan cotton bud. Hasil swab tersebut kemudian dilakukan penanaman
pada media agar Tryptone Soya Agar (TSA), Nutrient Agar (NA), dan
Mannitol Salt Agar (MSA). Pada masing-masing media dibagi menjadi 4

42
 kuadran, pada kuadran pertama menggunakan cotton swab steril, kemudian
pada kuadran selanjutnya hingga keempat menggunakan ose bulat. Kultur
pada media harus dilakukan secara aseptis. Media yang sudah di kultur
kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C.

3.3.3.4 Isolasi Biakan Murni

Koloni yang terbentuk setelah 24 jam inkubasi kemudian diamati

morfologi koloninya. Kemudian dilakukan pengamatan dengan pewarnaan
gram untuk diamati morfologinya secara mikroskopis. Pada koloni yang
terpisah dan sudah terlihat adanya morfologi yang berbeda dilakukan rekultur
pada media tersebut seperti halnya yang didapat adalah gugusan bakteri
Coccus maka dimurnikan dengan menggunakan media MSA.

3.3.3.5 Indentifikasi Bakteri

Isolasi atau penanaman bakteri yang digunakan untuk sampel pernafasan

adalah sebagai berikut.
1. Sampel trachea dan pulmo diambil dengan menggunakan ose steril.
2. Penanaman bakteri dilakukan pada media TSA, dan MSA.
3. Penanaman sampel pada media dilakukan dengan cara streak menggunaka
n ose yang sebelumnya sudah dibakar di atas api bunsen.
4. Memberi label pada setiap media yang telah di streak.
5. Media diinkubasi dalam inkubator dengan suhu 37 C selama 18-24 jam.
3.3.3.5 Pewarnaan Gram

Identifikasi morfologi bakteri dengan pewarnaan gram dapat

dilakukan dengan cara sebagai berikut.
1. Tiap koloni terpisah yang tumbuh pada masing-masing media diambil
menggunakan ose steril kemudian dilakukan pewarnaan gram.
2. Koloni diletakkan pada object glass yang sudah ditambahkan larutan
PZ steril dan dihomogenkan.
3. Object glass difiksasi di atas api hingga kering.
4. Object glass kemudian ditetesi dengan kristal violet dan didiamkan
selama 1 menit.
5. Kristal violet dibilas dengan air mengalir dan diteteskan lugol pada
object glass dan diamkan selama 1 menit.
6. Lugol dibilas dengan air mengalir, lalu diteteskan alkohol aseton pada
object glass, bilas dengan air mengalir.

43
 7. Safranin diteteskan pada object glass dan diamkan selama 1 menit,
kemudian dibilas dengan air mengalir.
8. Hasil diamati menggunakan mikroskop pada perbesaran 400x, dicatat
bentuk, struktur dan warna dari bakteri.
3.3.3.6 Uji Katalase

Uji katalase bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri dalam m

enghasilkan enzim katalase dan membedakan genus Staphylococcus dan Stre
ptococcus. Uji katalase dilakukan dengan cara mencampurkan H2O2 dengan k
oloni bakteri yang tumbuh dan kemudian amati pada object glass. Apabila ter
bentuk gelembung-gelembung gas yang besar dan cepat, maka menunjukkan
bakteri genus Staphylococcus. Jika tidak menimbulkan gelembung-gelembun
g gas, maka menunjukkan pertumbuhan bakteri genus Streptococcus. Selanjut
nya, dilakukan uji koagulase untuk melanjutkan identifikasi bakteri genus Sta
phylococcus.
3.3.3.2 Uji Koagulase
Uji koagulase dilakukan dengan menggunakan media NB (Nutrient Br
oth). Prinsip dari uji koagulase adalah dengan menanam bakteri pada media N
B dan diinkubasi selama ½ - 4 jam dengan suhu 37°C. Setelah diinkubasi, lak
ukan pencampuran plasma darah kelinci dan isolat bakteri yang sudah ditana
m pada media NB dengan jumlah yang sama. Pengamatan dilakukan selama
½ hingga 24 jam (setiap ½ jam dilakukan pengamatan). Semakin cepat meng
gumpal maka menunjukkan bakteri yang semakin patogen. Jika koagulase po
sitif, maka menunjukkan bahwa koloni bakteri yang tumbuh adalah Staphyloc
occus aureus.
3.4 Metode Pemeriksaan Jamur

3.4.1 Tempat dan Waktu Kegiatan

Pelaksanaan koas rotasi mikrobiologi dilakukan di laboratorium

Bakteriologi dan Mikologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga,
Surabaya yang dilaksanakan pada tanggal 29 April – 6 Mei 2019.

3.4.2 Identifikasi Jamur Pada Pakan

3.4.2.1 Alat dan Bahan

44
 Alat yang digunakan untuk pemeriksaan jamur meliputi cawan petri,
tabung reaksi, ose bulat, autoclave, object glass, tissue, aluminium foil, bunsen,
korek api, kertas label, tabung Erlenmeyer. Bahan yang digunakan dalam
pemeriksaan jamur meliputi sampel jamur pakan, media pertumbuhan jamur SDA
(Sabouroud Dextrose Agar), aquades, alcohol, dan pewarna Lactophenol cotton
blue.

3.4.2.2 Pembuatan media SDA (Sabaround Dextrose Agar)

Media isolasi ini umum digunakan untuk budidaya jamur patogenik dan non
patogenik khususnya dermatofita. Sabaraoud Dextrose Agar adalah media pepton
yang ditambahkan dextrose untuk mendukung pertumbuhan jamur. Media dengan
pH yang rendah merupakan kondisi yang baik untuk pertumbuhan jamur. Cara
pembuatan media SDA, yaitu:

1. Ditimbang bahan media SDA 6,5 gram menggunakan timbangan analitik.

Media SDA yang diperlukan untuk 100 ml aquades.
2. Dibuat suspensi 6,5 gram SDA dalam 100 ml aquades pada tabung
erlenmeyer dan tutup menggunakan aluminium foil.
3. Panaskan bahan diatas kompor sambil digoyang dengan arah memutar
sehingga semua bahan terlarut homogen. Pencampuran dilakukan hingga
serbuk media SDA larut yang ditandai dengan tidak adanya kristal putih
(tidak boleh sampai mendidih).
4. Disterilkan media dengan autoclave pada tekanan 1 atm, temperatur
121oC selama 20 menit.
5. Ditunggu media dalam erlenmeyer hingga hangat-hangat kuku, kemudian
ditambahkan antibiotik sebanyak 50 mg chloramphenicol yang dilarutkan
dalam 20 ml aquades, dan setiap 100 ml SDA = 2 ml suspense
chloramphenicol.
6. Dilakukan homogenisasi larutan SDA yang telah ditambahkan larutan
antibiotik chloramphenicol dengan cara menggoyang-goyangkan
erlemeyer searah jarum jam.
7. Dituangkan larutan SDA secara aseptik hingga merata pada cawan petri
(±20 ml setiap cawan petri).
8. Dilakukan uji sterilitas dengan inkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam
dalam incubator steril.
9. Media SDA yang telah lolos uji sterilitas disimpan pada lemari es sampai
diperlukan.

3.4.2.3 Metode pemeriksaan

A. Isolasi hamur metode streak

45
 1. Disiapkan media Sabaround Dextrose Agar (SDA) yang telah di bagi
menjadi tiga quardan.
2. Dilakukan pengambilan sampel dengan cara melihat kualitas sampel
yang terlihat sudah lama dan terceari jamur.
3. Dilarutkan dengan NaCL 2 Ml dalam tabung reaksi.
4. Dilarutkan dengan menggunakan vortex sampai homogen, di diamkan
selama 15 menit.
5. Diisolasi sampel yangn telah dibuat dengan melakukan streak pada
media yang telah dibagi tiga quardan.
6. Dilakukan inkubasi pada suhu 37ºC selama 3 hari degan dilakukan
pengamatan setiap hari dari pertumbuhan jamur.
7. Dilakukan identifikasi koloni jamur pada masing-masing perbedaan
sampel dimedia SDA.

B. Isolasi Jamur Metode Tanam

1. Disiapkan media Sabaroud Dextrose Agar (SDA)
2. Dilakukan pengambilan sampel dengan cara melihat kualitas sampel
yang terlihat sudah lama dan tercemari jamur
3. Diisolasi sampel dengan metode tabor atau meletakkan ampel pada
media SDA
4. Dilakkukan inkubasi pada suhu 37ºC selama 3 hari dengan dilakukan
pengamatan setiap hari pertumbuhan jamur.
5. Dilakukan identifikasi koloni jamur pada masing-masing perbedaan
sampel dimedia SDA.

C. Identifikasi Jenis Jamur

Setelah melakukan isolasi pda media SDA, maka langkah selanjutnya

identifikasi dengan teknik pewarnaan kristal violet dan lactophenol catton blue
dengan tujuan untuk melihat bentuk dan termasuk jenis kapang atau khamir.
Bentukan makroskopis yang berhifa atau berbentuk beludru dilakukan pewarnaan
menggunakan lactophenol catton blue, sedangkan yangberlendir dan tidak ada
bentukan hifa dan beludru dilakukan pewarnaan menggunakan Kristal violet.

Langkah-langkah pewarnaan menggunakan lactophenol catton blue:

1. Disiapkan object glass yang akan dipakai.

2. Diteteskan pewarnaan lactophenol catton blue.
3. Diambil sedikit koloni dari biakan pada cawan petri dengan
solatip dan diletakkan pada larutan laktofenol pada object glass.
4. Dilakukkan pemeriksaan dibawah mikroskop dengan perbesaran
100x, 400x, dan 1000x.

46
 Langkah-langkah pewarnaan menggunakan kristal violet:

1. Disiapkan object glass yang akan dipakai.

2. Diteteskan aquades pada object glass.
3. Panaskan ose hingga membara, dinginkan sebenatar dan ambil
kloni dari biakan pada cawan petri menggunakan ose dan
letakkan pada object glass.
4. Object glasss difiksasi diatas Bunsen.
5. Diwarnai dengan Kristal violet dan diamkan 2 menit.
6. Dicuci dengan aquades mengalir
7. Ditunggu hingga kering.
8. Dibaca dibawah mikroskop.

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Metode Susu

47
4.1.1 Hasil Pengamatan

4.1.1.1 Sinyalemen

Hewan : Sapi

Jenis Kelamin : Betina

Umur : ± 4 Tahun

Jenis : Friesian Holstein (FH)

Asal Hewan : Peternakan Bumifarm, Kota Surabaya

Gambar 4.1 Sapi FH (Dokumentasi Pribadi, 2019).

4.1.1.2 Anamnesa

Sampel susu diambil dari Sapi yang telah 3 kali partus, sapi mengalami
penurunan jumlah produksi susu 50% dari 7L/hari/ekor menjadi
3,5L/hari/ekor.

4.1.1.3 Temuan Klinis

Susu berwarna putih, body score 3.

48
 4.1.1.4 Pemeriksaan Penunjang
Pemeriksaan penunjang dilakukan menggunakan reagen deterjen 1:1 susu
sapi. Kemudian dilihat adanya perubahan. Hasil positif menunjukkan adanya
gumpalan susu, sedangkan negatif tidak terdapat gumpalan.

Gambar 4.2 Hasil uji menggunakan reagen detergen didapatkan hasil positif pada
sampel susu (Dokumentasi Pribadi, 2019).

Pada sampel susu sapi menunjukkan hasil positif. Surfaktan atau deterjen ini
dapat menyebabkan rusaknya membran sel dan inti sel, melalui ikatan yang
dibentuk melalui sisi hidrofobik deterjen dengan protein dan lemak pada
membran, membentuk senyawa “lipid protein-deterjen komplek”. Senyawa
tersebut dapat terbentuk karena protein dan lipid memiliki ujung hidrofilik dan
hidrofobik, demikian juga dengan deterjen, sehingga dapat membentuk suatu
ikatan kimia. Rusaknya membran sel menyebabkankeluarnya DNA dari inti sel
kemudian surfaktan akan mendenaturasi histon yang mengikat DNA
menyebabkan viskositas susu/DNA/surfaktan meningkat sehingga susu akan
terlihat lebih kental (Xia, 2006).

4.1.2 Hasil Pemeriksaan

4.1.2.1 Pemeriksaan Makroskopis Hasil Isolasi Primer Bakteri

49
 Sampel susu dilakukan pemeriksaan mikrobiologi dengan melakukan isolasi
dan identifikasi pada NAP (Nutrient Agar Plate), MCA (Mac Conkey Agar), MSA
(Manitol Salt Agar) dan EMBA (Eosin Methalic Blue Agar) yang diinkubasi pada
suhu 37ºC selama 18-24 jam untuk mendapatkan koloni terpisah. Media yang
digunakan yaitu media steril dan bebas kontaminasi yang disterilisasi dengan
inkubator selama 24 jam. Uji sterilitas adalah suatu pengujian yang dilakukan
untuk mengetahui ada tidaknya mikroorganisme hidup atau yang mempunyai daya
hidup dalam suatu sediaan yang telah disterilkan untuk menghindari kontaminasi
mikroorganisme. Prinsip uji sterilitas adalah menginokulasikan atau membiakan
mikroorganisme yang terdapat di dalam sediaan uji pada media perbenihan yang
sesuai (Tambayong, 2009).
a. Nutrient Agar Plate (NAP)
Hasil penanaman di media Nutrient Agar Plate tampak terlihat adanya
pertumbuhan bakteri berukuran kecil warna kuning dan besar berwarna putih
(Gambar 4.3).

Susu A

Gambar 4.3 Hasil isolasi primer menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri

berukuran kecil, berwarna kuning, dan bakteri berukuran besar berwarna putih
(Dokumentasi Pribadi, 2019).

Nutrient Agar Plate (NAP) merupakan media umum untuk penanaman

bakteri. Media NAP berfungsi untuk mengidentifikasi pertumbuhan dan biakan
murni dari bakteri sehingga dapat menentukan karakteristik bakteri, mulai dari

50
mofologi, sifat pewarnaan, sifat biokimiawi, reaksi serologis maupun kepekaan
bakteri pada media NAP.

b. Mac Conkey Agar (MCA)

Hasil penanaman pada media Mac Conkey Agar (MCA) tampak terlihat
adanya koloni bakteri yang berwarna merah namun pertumbuhannya berada diluar
streak yang dapat diartikan bahwa terjadi kontaminasi. Daerah streak yang tidak
ditumbuhi oleh bakteri kemungkinan akibat ose yang masih panas kemudian
dilakukan tumbuh pengambilan sampel dan ditanam dalam media sehingga
bakteri yang diharapkan tumbuh telah mati, kesalahan lainnya yaitu pengerjaan
yang kurang steril sehingga bakteri kontaminan menempel dan tumbuh pada
media (Gambar 4.4).

Susu A

Gambar 4.4 Hasil isolasi primer menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri

berwarna merah diluar streak (Dokumentasi Pribadi, 2019).

Mac Conkey Agar (MCA) merupakan media deferensial yang digunakan

untuk mengisolasi bakteri gram negatif Enterobacteriaceae dengan
menghambat bakteri golongan gram positif, juga membedakan antara laktosa
fermenter dan non laktosa fermenter. Koloni yang tumbuh pada cawan Mac
Conkey Agar (MCA) berwarna merah atau merah muda berarti air sampel
mengandung bakteri Coliform fekal, tetapi jika medium pengujian ditumbuhi
koloni yang berwarna tidak seperti warna diatas berarti sampel tidak
mengandung Bakteri Coliform fekal (Cappuccino and Sherman, 2002).

51
c. Manitol Salt Agar (MSA)
Pada media Manitol Salt Agar (MSA) tampak terlihat adanya pertumbuhan
bakteri berukuran kecil warna kuning serta media mengalami perubahan warna
menjadi kuning dan ada yang tidak mengalami perubahan (Gambar 4.5).

Susu A

Gambar 4.5 Hasil isolasi primer menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri

berukuran kecil, berwarna kuning, dan media mengalami perubahan warna
menjadi kuning (Dokumentasi Pribadi, 2019).
Media MSA (Mannitol Salt Agar) merupakan media selektif dan diferensial
untuk identifikasi Staphylococcus aureus. Media ini mengandunng garam natrium
klorida 7,5% sehingga media ini menjadi media selektif. Karena sebagian besar
bakteri tidak dapat tumbuh pada konsentrasi garam 7,5% kecuali Staphylococcus.
Selain itu, MSA mengandung manitol dan indikator pH phenol red yang membuat
media ini menjadi media diferensial. Uji mannitol salt agar (MSA), merupakan
uji yang dilakukan untuk mengetahui kemampuan memfermentasi manitol pada
Staphylococcussp. Hasil positif ditunjukkan perubahan warna pada medium dari
warna merah menjadi kuning karena adanya fenol acid dan hasil negatif tidak ada
perubahan warna.Hasil penelitian yang diperoleh menunjukkan hasil positif MSA
adalah Staphylococcus aureus sejumlah 7/15 (46%) dan Staphylococcus
intermediussejumlah 4/15 (27%) sedangkan Staphylococcus epidermidis sejumlah
3/15 (20%) menunjukkan hasil negatif (Toelle dan Viktor, 2014).

52
d. Eosin Methalic Blue Agar (EMBA)
Eosin Methylen Blue Agar (EMBA) merupakan media diferensial untuk
bakteri Escherichia coli (E. coli), untuk mendeteksi dan membedakan kelompok
bakteri coliform (Pommerville, 2011). Media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA)
mengandung Eosin Y dan methylene blue yang merupakan inhibitor untuk spesies
bakteri gram positif. Hasil isolasi primer pada media Eosin Methylen Blue Agar
(EMBA) terlihat pertumbuhan koloni hitam yang menunjukkan bahwa bakteri
tersebut termasuk dalam kelompok bakteri coliform yang ditunjukkan pada
(Gambar 4.6).

Susu A

Gambar 4.6 Hasil isolasi primer menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri

berukuran kecil, berwarna hitam (Dokumentasi Pribadi, 2019).

Aktivitas bakteri coliform yang memfermentasi laktosa dan sukrosa pada

media membentuk koloni bewarna gelap. Presipitasi warna gelap ini
dimungkinkan Eosin Y dan methylene blue yang dipresipitasi sebagai akibat dari
pH rendah yang berada disekitar koloni yang menfermentasi laktosa atau sukrosa.
Larutan gelap terabsorbsi ke dalam koloni yang tidak menfermentasi mungkin
menaikkan pH media disekitarnya karena deaminasi oksidatif protein yang
melarutkan kompleks Eosin Y dan methylene blue dan menghasilkan koloni tidak
bewarna (Erni dkk., 2011).

4.1.2.2 Pemeriksaan Makroskopis Hasil Isolasi Primer Bakteri

Pada hasil pemeriksaan mikroskopis pada sampel susu sapi 1 dan sampel
susu sapi 2 yang telah diinokulasikan pada media MSA dan EMBA kemudian di

53
lakukan pewarnaan gram. Pewarnaan gram ini menetahui jenis dinding sel bakteri
serta bentuk bakteri secara mikroskopis. Hal ini sependapat dengan Benson
(1973), Cara pewarnaan ini merupakan cara pewarnaan diferensial, di mana
dengan cara ini bakteri dapat dibedakan menjadi dua grup, yaitu bakteri gram
positif dan gram negatif. Perbedaan dari kedua grup bakteri tersebut disebabkan
oleh perbedaan dalam lapisan-lapisan dinding selnya. Pada pemeriksaan ini
dilakukan penambahan zat warna violet dan yudium yang kemudian di bilas
dengan alkohol dan diwarnai dengan safranin. Bakteri dengan gram positif
sebagian besar mengandung peptidoglikan akan menyerap warna kristal violet dan
pada bakteri geram negatif lebih sedikit peptidoglikan. Zat warna violet yang
digunakan dalam pewarnaan gram sangat mudah hilang pada bakteri gram negatif,
akan tetapi selnya tetap menahan warna merah (safranin) (Campbell, 2003).
Berikut ini hasil pemeriksaan mikroskopis pada media MSA dan EMBA :

Gambar 4.7 Hasil pemeriksaan mikroskopis pada media MSA

(Dokumentasi Pribadi, 2019).

54
 Gambar 4.8 Hasil pemeriksaan mikroskopis pada media EMBA

(Dokumentasi Pribadi, 2019).

Hasil pemeriksaan mikroskopis sampel susu sapi 1 pada media MSA,

didapatkan bakteri berbentuk kokus, Gram positif atau berwarna ungu yang
ditunjukkan pada Gambar 4.7. Pada media EMBA, didapatkan bakteri berbentuk
basil pendek, Gram negatif atau berwarna merah yang ditunjukkan pada Gambar
4.8.

Pada media pada media MSA tersebut merupakan bakteri Staphylococcus

sp. Staphylococcus merupakan sel yang berbetuk bola dengan diameter 1 µm yang
tersusun dalam bentuk kluster bergerombol menyerupai buah anggur (Carter and
Wise, 2004). Sedangkan bakteri yang tumbuh pada media EMBA merupakan
bakteri yang termasuk dalam Enterobactericeae sp.

4.1.2.3 Uji katalase

Uji Katalase dilakukan untuk membedakan susunan dari bakteri kokus

apakah termasuk staphylococcus atau streptococcus. Uji ini dilakukan dengan cara
diambil 1 ml hydrogen peroksida kemudian dituang di atas gelas obyek, lalu
diambil koloni bakteri dari media MSA dengan menggunakan ose berujung
bundar lalu disentuhkan ke cairan hydrogen peroksida tersebut. Apabila terjadi
reaksi berupa munculnya buih maka bakteri tersebut memiliki enzim katalase.

55
Didapatkan hasil positif pada sampel susu sapi (media MSA) yang ditunjukkan
pada Gambar 4.8.

Gambar 4.8 Hasil uji katalase (Dokumentasi Pribadi, 2019).

Menurut Cappucino and Sherman (2005), Staphylococcus memiliki reaksi

positif terhadap uji katalase yang menandakan bahwa bakteri tersebut memiliki
enzim katalase. Pada uji ini dapat di lihat sampel susu sapi pada media MSA
berbuih. Reaksi yang terjadi akibat adanya enzim katalase yang dimiliki oleh
bakteri. Maka dapat disimpulkan bahwa bakteri yang tumbuh pada media MSA
sampel susu merupakan bakteri Staphylococcus sp.

4.1.2.4 Uji Biokimia

Uji biokimia digunakan untuk menentukan spesies dari famili
Enterobactericeae yang telah ditemukan maka diperlukan uji lanjutan yaitu
dengan melakukan uji biokimia.

a. Uji TSIA
Media TSIA yang digunakan juga dapat digunakan untuk mengetahui
kemampuan bakteri memfermentasi karbohidrat (glukosa, sukrosa, dan manitol).
Untuk mengkonfirmasi hasilnya, seringkali disertai dengan uji fermentasi
karbohidrat (Ulfa dkk, 2016). Warna dasar media TSIA adalah kuning. Jika terjadi
fermentasi karbohidrat, media akan berubah menjadi kuning (asam). Pembacaan
hasil uji biasanya diawali dari bagian lereng media. Jika hasil uji menunjukkan
B/A (lereng berwarna kuning, dasar berwarna merah), hal ini berarti bakteri hanya

56
dapat memfermentasi sebagian karbohidrat. Hasil uji A/A berarti bakteri dapat
memfermentasi semua jenis karbohidrat (lereng berwarna kuning, dasar
berwarnakuning), sedangkan hasil B/B berarti bakteri uji tidak dapat
memfermentasi semua jenis karbohidrat. Sedangkan untuk uji fermentasi
karbohidrat, hasil positif ditunjukkan dengan adanya perubahan warna medium
dari merah menjadi kuning hingga jernih, sedangkan hasil negatif dilihat dari
tidak adanya perubahan warna medium (Mahmudah dkk, 2016).

Gambar 4.9 Hasil uji media TSIA (media kuning : asam, adanya gas, tidak
adanya H2S ) (Dokumentasi Pribadi, 2019).

b. Uji Urease
Uji Urease bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri mengubah urea
menjadi amoniak. Media untuk uji urease menggunakan Urea Base Agar. Hasil
positif ditunjukkan dengan adanya perubahan warna media dari warna kuning
menjadi merah muda (Ulfa dkk, 2016).

57
 Gambar 4.10 Hasil uji media urease terlihat adanya perubahan warna

(Dokumentasi Pribadi, 2019).

Mikroorganisme yang menghasilkan enzim urease akan mengurai urea

menjadi ammonium dan CO2. Bila urea dihidrolisis, maka media biakan yang
mengandung urea dan indicator pH (phenol red) akan mengakumulasikan
ammonium dalam media biakan dan menyebabkan pH menjadi basa. Perubahan
warna dari merah-jingga menjadi merah ungu merupakan petunjuk terjadinya
hidrolisis urea (Mahmudah dkk, 2016).

c. Uji Sitrat
Uji sitrat dilakukan dengan menginokulasi isolat pada media Simmon’s
Citrate (SC). Pengujian ini bertujuan untuk melihat kemampuan bakteri dalam
menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi. Hasil positif
akan ditunjukkan dengan adanya perubahan warna media dari hijau menjadi biru.
Hal ini disebabkan karena penggunaan sitrat oleh bakteri menyebabkan asam
menghilang dari biakan sehingga terjadi peningkatan pH dan mengubah warna
media dari hijau menjadi biru (Ulfa dkk, 2016).

Bakteri yang memanfaatkan sitrat sebagai sumber karbon akan

menghasilkan natrium karbonat yang bersifat alkali, sehingga dengan adanya
indikator brom thymol blue menyebabkan warna biru pada media (Suyati, 2010).

58
 Gambar 4.11 Hasil uji media sitrat tidak adanya perubahan warna menjadi biru
(Dokumentasi Pribadi, 2019).
Uji sitrat pada isolat bakteri memberikan hasil negatif berupa warna media
yang tidak mengalami perubahan yaitu warna hijau. Uji sitrat digunakan untuk
melihat kemampuan mikroorganisme menggunakan sitrat sebagai satu-satunya
sumber karbon dan energi. Pada penelitian ini, digunakan medium Simmon’s
citrate agar yang merupakan medium sintetik dengan trinatrium sitrat sebagai
satu-satunya sumber karbon, amonium (NH4+) sebagai sumber nitrogen dan brom
timol biru sebagai indikator pH. Bila mikroorganisme mampu menggunakan
sitrat, maka asam akan dihilangkan dari medium biakan, sehingga menyebabkan
peningkatan pH dan mengubah warna medium dari hijau menjadi biru. Perubahan
warna dari hijau menjadi biru menunjukkan bahwa mikroorganisme mampu
menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon (Mahmudah dkk, 2016).
d. Uji SIM
Uji SIM merupakan uji yang menggunakan media untuk membedakan tiga
parameter yaitu Reduksi Sulfur untuk membedakan bakteri enterik, Uji Indol
untuk bagian dari uji IMViC, untuk membedakan family Enterobacteriaceae dan
Uji Motilitas untuk membedakan jenis bakteri secara umum.

59
 Gambar 4.12 Hasil uji media SIM didapatkan tidak ada perubahan warna,
terdapat motilitas bakteri (Dokumentasi Pribadi, 2019).
Menurut Volk (1988) kemampuan suatu organisme untuk bergerak sendiri
disebut motilitas. Hampir semua sel bakteri spiral dan sebagian dari sel bakteri
basil bersifat motil, sedangkan bakteri yang berbentuk kokus bersifat immotil.
Sifat ini diakibatkan oleh adanya alat motor cambuk yang disebut flagela sehingga
sel bakteri dapat berenang di dalam lingkungan air. Motilitas sebagian besar jenis
bakteri motil pada suhu relatif rendah 15-25oC dan mungkin tidak motil pada suhu
37oC. Beberapa bakteri dapat melakukan gerakan meluncur yang sangat mulus
yang hanya terjadi kalau persentuhan dengan benda padat. Kebanyakan bakteri
yang motil dapat mendekati atau menjauhi berbagai senyawa kimia yang disebut
kemotaksis.

e. Uji Gula-gula (Glukosa, Manitol, Maltosa, Laktosa, Sukrosa)

Menurut Cappucino dkk., (2002) uji gula-gula ini merupakan salah satu uji
biokimia untuk mengisolasi bakteri dengan cara mengetahui kemampuan bakteri
tersebut memfermentasi karbohidrat. Uji gula-gula yang di gunakan ini adalah
sukrosa, manitol, glukosa dan sukrosa. Uji gula-gula menunjukkan reaksi positif
dengan terjadinya perubahan warna menjadi kuning dan menghasilkan gas. Ini
menunjukkan bahwa bakteri ini mampu memfermentasi karbohidrat.
Uji reaksi fisiologis pada fermentasi karbohidrat adalah glukosa, sukrosa,
laktosa, dan manitol. Glukosa dapat langsung masuk dalam jalur fermentasi tahap
pertama sedangkan sukrosa, laktosa. manitol dan maltosa akan dihidrolisis

60
 A

terkebih dahulu menjadi monosakarida penyusunnya, Laktosa dihidrolisis menjadi

galaktosa dan glukosa. Sukrosa dihidrolisis menjadi glukosa dan fruktosa. Manitol
diubah menjadi manosa atau galaktosa. Sedangkan maltosa akan dihidrolisis
menjadi dua molekul glukosa.Selain dapat memfermentasikan karbohidrat jenis
glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa dan manitol, kedua isolat bakteri juga dapat
menghasilkan enzim selulase yang dapat menguraikan polisakarida jenis selulosa
menjadi unit-unit glukosa (Wahyuni dkk, 2014).

D
Gambar 4.13 Hasil uji Gula-gula : (a) Uji glukosa: berwarna kuning dan tidak ada gelembung
gas, (b) Uji manitol: berwarna kuning dan tidak ada gelembung gas,(c) Uji maltosa : berwarna
merah dan tidak ada gelembung, (d) Uji laktosa: berwarna merah dan tidak ada gelembung gas,
(e) Uji sukrosa: berwarna kuning dan ada gelembung di dalam tabung durham (Dokumentasi
Pribadi, 2019).

4.1.2.3 Hasil Uji Biokimia

ED
TSI Sitra SIM Ureas Gula-Gula
A t e Glukos Manito Maltos Laktos Sukros
a l a a a
Asa - + + + + - - +
m motilita
Gas+ s
Agar

61
a. Diagnosa

Berdasarkan anamnesa, pemeriksaan fisik, gejala klinis yang tampak

serta pemeriksaan secara mikrobiologis, sampel susu menderita mastitis.
Mastitis tersebut disebabkan oleh bakteri Staphylococcus sp. non pathogen
dan Enterobacter aerogenes. Staphylococcus adalah agen penyebab utama
penyebab mastitis yang umumnya diikuti oleh Streptococcus dan
Escherichia coli yang menyebabkan mastitis subklinis pada sapi (Kabir et al.,
2017).

b. Penjabaran Diagnosa
Berdasarkan isolasi dan indentifikasi 1 dengan berbagai uji penyebab
mastitis yaitu Staphylococcus sp. non pathogen penyebab dan Enterobacter
aerogenes. Bakteri Enterobacter aerogenes merupakan bakteri penyebab
mastitis klinis, merupakan bakteri gram negatif yang berbentuk batang
dengan panjang 1,2 - 3,0 µm dan lebar 0,6 – 1,0 µm. Enterobacter aerogenes
bersifat aerob fakultatif dan kemoorganotrof. Karena bersifat aerob fakultatif
maka bakteri ini dapat hidup pada pH 3,3 secara aerob dan pH 4 secara
anaerob. Mastitis yang disebabkan oleh S. aureus merupakan bentuk mastitis
terpenting pada peternakan sapi perah karena mikroorganisme ini terdapat
dimana-mana seperti kulit sapi, lingkungan, pemerah, peralatan yang
digunakan, air dan udara. Infeksi S.aureus pada ambing dapat melalui tangan
pemerah. Tangan pemerah berpotensi sebagai perantara penularan S.aureus
dari ambing ke ambing lainnya. Keadaan tersebut dapat terjadi karena saat
diperah otot spinter dari ambing dalam keadaan terbuka sehingga bakteri
mudah masuk dan menginfeksi (Suwito dkk, 2013). Apabila dalam
pemeriksaan kulit dapat diisolasi bakteri S. aureus, terdapat kemungkinan
kandang tersebut ada sapi yang menderita mastitis oleh S. aureus (Subronto,
2003). Infeksi S. aureus semakin sulit ditangani dengan antibiotik karena
bakteri ini banyak yang resisten terhadap berbagai jenis antibiotik. Selain itu,
pemakaian antibiotik akan menimbulkan masalah baru yaitu adanya residu
antibiotik di dalam susu atau pengolahannya.

62
3.2 METODE PENCERNAAN
3.2.1 Tempat dan Waktu
Pemeriksaaan dan isolasi bakteri dari saluran pencernaan dilaksanakan di
Laboratorium Bakteriologi dan Mikologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Airlangga Surabaya pada tanggal 29 April 2019-6 Mei 2019.

3.2.2 Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan yaitu cawan petri, ose bulat, ose lurus, bunsen,
mikroskop, objek glass, nampan, gunting, pinset, pipet, tabung reaksi, dan rak
tabung. Bahan yang digunakan yaitu media identifikasi bakteri MCA (Mac.
Conkey Agar), EMBA (Eosin Methylene Blue Agar), SSA (salmonella Shigella
Agar), TSIA (Triple Sugar Iron Agar), SCA (Simmons Citrat Agar), Urea, SIM
(Sulfide Indol Motility), media gula-gula seperti laktosa, maltosa, sukrosa,
manitol, dan glukosa, pewarnaan gram kristal violet 1%, lugol, aceton alkohol,
dan safranin.

3.2.3 Nekropsi Ayam dan Pengambilan Sampel

Isolasi bakteri dari saluran pencernaan dilakukan dengan cara memilih
ayam dengan gejala klinis diare. Prosedur nekropsi dilakukan untuk melihat
saluran pencernaan untuk diisolasi, ayam dimatikan terlebih dahulu dengan cara
emboli pada foramen magnum. Ayam diletakkan pada nampan dengan posisi
rebah dorsal. Insisi didaerah kulit yang longgar diantara permukaan medial dari
tiap paha dan abdomen. Kaki dilebarkan lateral dan kuakkan sendi coxofemoral.
Insisi kulit secara transversal di tengah abdomen dan kuakkan kulit lalu hadapkan
bagian cranial menuju thoraks dan bagian caudal menuju abdomen. Buat insisi
longitudinal pada musculus pectoralis pada setiap sisi sternum sehingga
costochondral junction cavum abdomen dibuka dengan gunting, lanjutkan
area insisi ke anterior melalui costoschondral junction, potong os. coracoid dan
os. Clavicula. Lakukan insisi kebagian dalam sampai semua organ terlihat dan
periksa organ-organ target yang mengalami atau tampak adanya perubahan
patologis. Saluran pencernaan dikeluarkan dengan cara memotong esophagus
kemudian tarik seluruh saluran pencernaan ke arah posterior dengan memotong

63
kloaka (Weli, 2011). Diamati bagian saluran pencernaan yang mengalami
perubahan patologi. Sampel organ yang diambil yaitu usus halus dan colon
dengan cara memotong bagian yang mengalami perubahan ±2 cm. Spesimen
isolasi diletakkan dalam cawan petri streril.

3.2.4 Inokulasi
3.2.4.1 Inokulasi Bakteri pada Media Tetrathionate broth
Media Tetrathionate broth merupakan media enrichment yang digunakan
sebagai media pertumbuhan bakteri. Penanaman pada media tetrathionate
dilakukan dengan mengambil potongan organ usus halus kemudian dimasukkan
ke dalam media tetrathionate broth. Inkubasi selama 24 jam dengan suhu 37oC.
Dilakukan pengamatan koloni yang tumbuh ditandai dengan adanya perubahan
kekeruhan pada media Tetrathionate broth. Kemudian dilanjutkan isolasi bakteri
ke media Salmonella Shigella Agar (SSA).

3.2.4.2 Inokulasi Bakteri pada media MCA dan EMBA

Media Mac Conkey Agar (MCA) merupakan media selektif dan
differensial jenis mikroba tertentu akan membentuk koloni dengan ciri khas
tertentu. Media MCA mengandung laktosa, garam empedu, dan merah netral
sebagai indikator warna. Garam empedu akan menghambat pertumbuhan bakteri
Gram positif, sedangkan bakteri Gram negatif yang tumbuh dapat dibedakan
berdasarkan kemampuan dalam memfermentasi laktosa. Koloni bakteri yang
dapat memfermentasi laktosa memiliki warna merah bata sedangkan bakteri yang
tidak dapat memfermentasi laktosa tidak memperlihatkan perubahan pada media
dan warna koloninya sama dengan media. Bakteri yang positif dalam
memfermentasi laktosa misalnya Escherichia coli warna koloni merah dikelilingi
zona keruh, Klebsiella dan Enterobacter warna koloni merah muda dengan
mukoid. Sedangkan bakteri yang tidak memfermentasi laktosa (colourless)
misalnya Salmonella, Shigella, Proteus, Psuedomonas.
Media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) juga merupakan media
selektif diferensial yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri Gram negatif
dari golongan Enterobacteriaceae. untuk membedakan antara koloni bakteri yang

64
dapat memfermentasi laktosa dengan yang tidak dapat memfermentasi laktosa. Di
media EMB juga ditambahkan sukrosa untuk membedakan antara koloni bakteri
coliform yang mampu memfermentasi sukrosa lebih cepat dari laktosa dengan
koloni bakteri yang tidak mampu memfermentasi sukrosa. Bakteri gram negatif
yang memfermentasi laktosa (umumnya bakteri usus) dapat menghasilkan asam,
dalam kondisi asam akan menghasilkan warna kompleks berwarna ungu gelap
atau warna hijau metalik. Warna hijau metalik ini merupakan indikator dari
bakteri yang dapat memfermtasi laktosa dengan kuat dan/atau bakteri yang dapat
memfermentasi sukrosa (khas pada bakteri coliform fecal). Pada bakteri yang
memfermentasi laktosa dengan lambat akan menghasilkan asam dengan jumlah
yang sedikit sehingga koloni akan berwarna coklat atau merah muda. Pada bakteri
yang tidak dapat memfermentasi laktosa koloni akan berwarna merah muda atau
transparan.

Berikut ini tahapan isolasi bakteri pada media MCA dan EMBA

4. Ose bulat yang telah dipanaskan ditempelkan pada mukosa saluran

pencernaan yang telah diisolasi yaitu duodenum dan kolon
5. Penanaman dilakukan dengan cara streak pada media MCA dan EMBA
6. Inokulasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37C

3.2.5 Identifikasi Bakteri

3.2.5.1 Pemeriksaan Makroskopis
Pemeriksaan makroskopis dilakukan dengan cara mengamati koloni
bakteri yang tumbuh pada media MCA dan EMBA. Pemeriksaan makroskopis
koloni yang dinilai dari bentuk (punciform, irregular, filamentous, atau rhizoid),
ukuran (besar, sedang, kecil), warna (putih, kuning, hitam, merah, hijau),
permukaan (datar, cembung, cekung, kasar/rough, halus/smooth, mukoid), sifat
(keruh, jernih, kering, hemolitis, anhemolitis).

3.2.5.2 Pemeriksaan Mikroskopis

Pemeriksaan mikroskopis dilakukan dengan mengamati bentuk dan sifat

gramnya yaitu bakteri Gram positif atau bakteri Gram negatif. Sehingga dilakukan
pewarnaan Gram sebagai berikut :

65
 15. Diambil satu ose NaCl Fisiologis dan diletakkan pada objek glass
16. Ose disterilkan kembali dengan cara dipanaskan pada api bunsen sampai
berpijar, setelah dingin diambil sedikit bakteri dan disuspensikan dengan
NaCl Fisiologis.
17. Dibuat apusan setipis mungkin.
18. Dilakukan fiksasi dengan melewatkan preparat di atas api bunsen.
19. Preparat ditetesi pewarna kristal violet dan dibiarkan selama 1 menit.
20. Pewarna dibuang dan dibilas dengan air.
21. Preparat ditetesi dengan Lugol dan dibiarkan selama 1 menit.
22. Lugol dibuang dan dibilas dengan air.
23. Preparat ditetesi dengan alkohol dan dibiarkan selama 1 menit.
24. Alkohol dibuang dan dibilas dengan air.
25. Preparat ditetesi dengan pewarna safranin dan dibiarkan selama 1 menit.
26. Pewarna dibuang dan dibilas dengan air.
27. Preparat dikeringkan dengan kertas penghisap atau tissue halus.
28. Preparat diamati menggunakan mikroskop perbesaran 1000x dengan
bantuan minyak emersi.

3.2.5.3 Uji Biokimiawi

Uji biokimia bakteri bertujuan untuk mengidentifikasi sifat bakteri

berdasarkan reaksi biokimianya pada berbagai macam media seperti SS agar,
Triple Sugar Iron Agar (TSIA), Urea Agar, Simmons Citrat Agar (SCA), Sulfide
Indol Motility (SIM), media gula-gula (Glukosa, Sukrosa, Laktosa, Maltosa,
Manitol).

3.2.5.4 Salmonella dan Shigella Agar (SSA)

Media Salmonella dan Shigella Agar (SSA) merupakan media selektif

untuk mengisolasi bakteri Salmonella dan Shigella. Media ini digunakan setelah
isolasi bakteri menggunakan media enrichment seperti Tetrathinate broth. Media
ini digunakan sebelum pengujian menggunakan media Triple Sugar Iron Agar
(TSIA), Urea Agar, Simmons Citrat Agar (SCA), Sulfide Indol Motility (SIM),
media gula-gula (Glukosa, Sukrosa, Laktosa, Maltosa, Manitol). SSA
mengandung garam empedu Na-sitrat, dan brilliant green yang menghambat
pertumbuhan bakteri Gram Positif dan beberapa Gram negative. Jika bakteri
tumbuh dan memfermentasikan laktosa pada media ini maka akan menghasilkan
asam dan mengubah indicator warna menjai merah muda atau merah. Berikut

66
merupakan cara pemeriksaan menggunakan media Salmonella dan Shigella Agar
(SSA):

5. Ose bulat dipanaskan, setelah dingin dimasukkan ke dalam media

Tetrathionate Broth yang telah dimasukkan potongan organ dan diinkubai
sebelumnya.
6. dilakukan pengadukan kemudian ose dipindah dan dilakukan streak pada
media SSA.
7. Inkubasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37oC.
8. Dilakukan pengamatan.

3.2.5.4 Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Media Triple Sugar Iron Agar (TSIA) digunakan untuk mengetahui

karakter bakteri dalam memanfaatkan 3 (tiga) macam gula yaitu glokosa , laktosa
dan sukrosa. Indikator yang digunakan adalah phenol red untuk menunjukan
perubahan pH dan ferro sulfat untuk mengetahui produksi H 2S. Berikut metode
pemeriksaan dengan media TSIA :

5. Koloni tunggal diambil dengan menggunakan ose lurus

6. Ditusukkan sampai ± 0,2 cm dari dasar tabung, kemudian cabut tusukkan
secara perlahan lalu streak pada permukaan miring pada media TSIA
7. Inkubasi dilakukan pada suhu 37oC selama 24 jam
8. Dilakukan pengamatan

Interpretasi hasil pada media ini yaitu :

6. Asam (warna kuning) : Jika bakteri dapat memproduksi asam dari hasil
fermentasi gula glukosa, dan atau laktosa, dan atau sukrosa
7. Alkalis (warna merah) : jika bakteri memproduksi alkalis dari gula,
laktosa, atau sukrosa yang tidak difermentasi
8. Asam/alkali (kuning/merah) : jika bakteri hanya dpat memfermentasikan
satu jenis gula
9. Gas positif/negatif : adannya gas dapat dideteksi dengan terbentuk
gelembung udara pada agar, agar pecah atau terangkat pada bagian tegak.
10. H2S positif/negative : adanya H2S dapat dideteksi dari adanya endapan
hitam pada tabung.

3.2.5.5 Sulfide Indol Motility (SIM)

67
 Media Sulfide Indol Motility (SIM) digunakan untuk mengetahui motilitas
bakteri, pembebasan sulfit (H2S), dan pembentukan indol. Berikut metode
pemeriksaan menggunakan media SIM :

7. Koloni tunggal diambil dengan menggunakan ose lurus

8. Ose ditusukkan sampai 2/3 dari permukaan media
9. Inkubasi dilakukan pada suhu 37oC selama 24 jam
10. Dilakukan pengamatan
11. Setelah diamati motilitasnya, dilakukan uji indol dengan cara
menambahkan 1 ml chloroform dan 1ml reagen Kovacs
12. Diamati ada tidaknya cincin merah

Berikut merupakan interpretasi pada media ini :

4. Adanya H2S ditandai dengan perubahan warna pada bagian dasar media
menjadi warna hitam. Hal ini merupakan hasil reaksi H 2S dengan Fe
menjadi FeS
5. Motilitas terlihat adanya penyebaran pertumbuhan bakteri di sekitar
tusukan dengan bentuk menjalar, serta adanya warna keruh pada agar
6. Indol positif apabila terbentuk cincin merah

3.2.5.6 Simon Citrat Agar (SCA)

Berikut metode pemeriksaan menggunakan Simon Citrat Agar (SCA) :

1. Diambil koloni tunggal dengan menggunakan ose ujung bulat.

2. Dilakukan streak pada permukaan miring media.

3. Dilakukan inkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam.

4. Dilakukan pengamatan pada media.

3.2.5.7 Urea Agar

Berikut metode pemeriksaan dengan media Urea Agar :

1. Ambil koloni tunggal dengan menggunakan ose ujung bulat.

2. Dilakukan streak pada permukaan miring media.

3. Dilakukan inkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam.

68
4. Dilakukan pengamatan pada media.

3.2.5.8 Gula - Gula

Berikut metode pemeriksaan menggunakan media gula-gula:

1. Diambil koloni tunggal dengan menggunakan ose ujung bulat.

2. Dilakukan penanaman pada media dengan megaduk-aduk pada larutan gula-

gula.

3. Dilakukan inkubasi pada suhu 37 oC selama 24 jam.

4. Dilakukan pengamatan.

69
4.3 Metode Pernafasan

4.3.1 Anamesa

Ayam yang diambil merupakan ayam yang yang berasal dari Pasar
Keputran Surabaya, ayam terlihat lemas, kepala menunduk, dan bulu kusam.

Gambar 4.15 Ayam yang dilakuakan pemeriksaan bakteri (Dokumentasi

Pribadi, 2019)

4.3.2 Signalement

Jenis Hewan : Ayam Ras

Jenis Kelamin : Jantan

Umur : (Samain sama kelompok pencernaan)

Jumlah : 1 ekor

Lokasi : Pasar keputran, Surabaya

Tanggal Nekropsi: Senin, 27 April 2019

4.3.3 Gejala Klinis

Gejala klinis yang terlihat pada ayam tersebut adalah anorexia, letargi dan
sulit bernafas.

4.3.4 Pemeriksaan Patologi Anatomi

70
 Nama Organ Patologi Anatomi
- Hemoragi

Pulmo
- adanya mucus pada saluran

Trachea
Tabel 4.1 Pemeriksaan Patologi Anatomi

4.3.5 Pemeriksaan Laboratorium Isolasi

Sampel organ diletakan dalam cawan petri steril kemudian ditanam pada
media yang telah disediakan. Organ yang diambil untuk dilakukan isolasi dan
identifikasi bakteri adalah pangkaltenggorakan (laring) hingga trakea dan paru-
paru.

No Sampel Media Isolasi

1 Trakea TSA, MSA,NA
2 Paru-Paru TSA,MSA, NA
Tabel 4.2 Pemeriksaan Laboratorium Isolasi

Medi Sampe Koloni Pewarnaan Gram

a l

71
MSA Pulmo

(Memfermentasi mannitol) (Cocus, gram positif)

TSA Trakea

(Koloni bewarna putih)

(Cocus, gram positif)
TSA Pulmo

(Koloni bewarna putih)

Cocus, gram positif
MSA Trakea

Cocus, gram positif

(Memfermentasi mannitol)
Tabel 4.3 Identifikasi Pewarnaan Gram

4.3.6 Pemeriksaan Laboratorium Identifikasi

4.3.6.1 Uji Lanjutan Gram Positive (Uji Katalase dan Koagulase)

72
 Isolat bakteri diambil satu ose, kemudian dioleskan pada object glass.
Object glass ditetesi dengan larutan H2O2 3%. Diamati terbentuknya gelembung
gas pada object glass.

Gambar 4.16 Positive uji katalase ditandakan dengan gelembung

menandakan adanya Staphylococcus sp

Koloni Bakteri pada media MSA (Mannitol salt agar) yang bewarna
kekuningan dibiakkan lagi pada media NB (Nutrient Brooth) untuk dilakukan uji
koagulase. Uji koagulase ini digunakan untuk mengetahui bakteri yang tumbuh
staphylococcus atau Streptocuccus. Koloni bakteri dibiakkan pada media NB
(Nutrient Brooth) dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37°C. Plasma
kelinci disiapkan sebanyak 0,5cc dan ditambahkan dengan bakteri yang terdapat
pada media NB (Nutrient Brooth) sebanyak 0,5 cc dan dicampur rata kemudian 20
diinkubasi selama 4 jam pada suhu 37°C. Pada Uji koagulase didapatkan hasil
sebagai berikut:

Gambar. 4.17 negative uji katalase ditandakan

dengan tidak ada penggumpalan (Dokumentasi
Pribadi, 2019)

4.4. Metode Jamur

4.4.1 Hasil
4.4.1.1 Signalement sampel

73
A. Jenis sampel : Roti
Tempat : Laboratorium Bakteriologi dan Mikologi UNAIR

Inokulasi : 27, April, 2019

Pengamatan : 30, April, 2019

B. Jenis sampel : Pakan

Tempat : Laboratorium Bakteriologi dan Mikologi UNAIR

Inokulasi : 27, April, 2019

Pengamatan : 30, April, 2019

4.4.1.2 Hasil Pemeriksaan

A B

74
Gambar 4.18 Biakan Roti A.Makroskopis pada media SDA; B. Mikroskopis 400x
pewarnaan LPCB (Penicillium sp.)

A B

75
 Gambar 4.19 Biakan Pakan A.Makroskopis pada media SDA; B. Mikroskopis 400x
pewarnaan LPCB (Penicillium sp.)

4.4.1.3 Peniccilium sp

A. Taksonomi

Kingdom : Myceteae (Fungi)

Division : Ascomycota

Kelas : Euascomycetes

Ordo : Eurotyales

Famili : Trichomaceae

Genus : Pencillium

Spesies : Peniccilium sp

B. Morfologi

Ciri morfologi Penicillium yaitu memiliki hifa bersepta, konidia, sterigma,

dan konidiospora (Kurasein, 2009). Kapang Penicillium sp. mempunyai hifa
bersepta, miselium bercabang, konidiospora yang muncul di atas permukaan,
spora dengan sterigma yang berkelompok, dan konidia membentuk rantai
(Fardiaz, 1989). Penicillium sp. pada beberapa spesies, miselium berkembang
menjadi sklerotium (Pelczar, 2005).

Kapang Penicillium sp. mempunyai hifa vegetative yang disebut dengan

hifa udara (aerial hyphae). Penicillium sp. berkembang biak secara aseksual
dengan membentuk spora yang dihasilkan dalam suatu kantong (askus) yang
disebut askospora dan secara aseksual dengan membentuk konidiospora, yaitu

76
spora yang dihasilkan secara berantai pada ujung suatu hifa (Pohan, 2009).
Bentuk sel konidiospora pada kapang Penicillium sp. adalah seperti botol dengan
leher panjang atau pendek, jamur ini berwarna hijau kebiruan. Penicillium sp.
termasuk jamur yang tidak bersifat patogen kecuali Penicillium marneffei
(Gandjar et. al., 2006).

Ada dua macam bentuk Penicillium sp. yang dapat diamati secara
makroskopis dan mikrokopis. Secara makroskopis, ciri-ciri yang dapat dilihat
adalah koloni tumbuh sekitar 4 hari pada suhu 25oC pada medium saboroud
dextrose agar dan koloni mula-mula berwarna putih kemudian akan berwarna
kehijauan, sedang secara mikroskopis dengan ciri-ciri yang sapat dilihat adalah
hifa bersepta dan konidiofor mempunyai cabang yang disebut dengan metula, di
atas metula terdapat fialid (Pohan, 2009).

Pertumbuhan kapang Penicillium sp. dipengaruhi oleh faktor-faktor yang

penting, yaitu : substrat, kelmbaban, suhu, dan pH. Penicillium sp. dapat hidup
pada kelembaban yang rendah yaitu 80%. Suhu yang optimum untuk
pertumbuhannya adalah 25oC (Gandjar e.t al., 2006). Menurut penelitian
Indahwati (2009), pH optimum yang dihasilan oleh 25oC berkisar 3,15-4,34.
Gambar 3. Penicillium sp. (Martens, 2005)

Reproduksi

Penicillium sp. Berkembang biak secara aseksual dengan membentuk

spora yang dihasilkan dalam suatu kantong (askus) yang disebut askospora dan
secara aseksual dengan memebntuk konidiaspora, yaitu spora yang dihasilkan
secara berantai pada ujung suatu hifa, bentuk sel konidiaspora pada kapang
penicillium sp. Adalah seperti botol dengan leher panjang atau pendek, jamur ini
berwarna hijau kebiruan. Penicillium sp, termasuk jamur yang tidak bersifat
pathogen kecuali penicillium marneffei (Gandajar et al., 2006).

77
 Pertumbuhan kapang penicillium dipengaruhi oleh faktor-faktor yang
penting yaitu: substrat, kelembapan, suhu, dan Ph, penicillium sp, dapat hidup
pada kelembapan yang rendah yaitu 80%, suhu yang optimum untuk
pertumbuhannya adalah 25ºC (Gandajar et al., 2006).

Keuntungan dan Kerugian

Menurut hasil penelitian (suryani dkk., 2012) penicillium sp, memiliki

daya selulitik yang cukup tinggi dimana kapang ini mampu mneghasilkan enzim
selulose yang mampu mendegradasi selulosa, menjadi senyawa karbon sederhana,
walaupun secara umum merupakan kapang yang petensial dalam bidang industry
dan pangan, yaitu berpotensi dalam prodeuksi antibiotic (penicillium sp, dan
Eupenicilium) namaun dapat juga menimbulkan efek yang merugikan bagi
manusia karena dapat menkontaminasi makanan yanga menyebabkan makanan
menjadi jamuran dan busuk, serta spora yang dihasilkan bila termakan dapat
menyebabkan alergi bagi orang-orang tertentu (Noverita,2009) penicillium sp,
merupakan jamur cemaran yang menghasilkan mikotoksin berbahaya bagi
konsumen. Mikotoksin merupakan metabolit sekunder hasil metabolit jamur yang
bersifat sitotoksik, meruak struktur sel seperti membrane dn merusak proses
pembentukan sel yang penting seperti protein, DNA, dan RNA (Ahmad, 2009).

BAB VI PENUTUP

6.1 Kesimpulan

Pada pemeriksaan sampel susu mastitis didapatkan hasil koloni bakteri

yang didapat yaitu Staphylococcus sp. dan Enterobacter aerogene, Pada sampel
sistem respirasi ayam bakteri yang didapat yaitu Staphylococcus sp, Pada sampel
sistem digestive ayam bakteri yang di dapat Eschericia coli dan Proteus sp. dan
pada sampel pakan ternak ditemukan jenis jamur penicillium sp.

6.2 Saran

78
 Seharusnya dilakukan uji lanjutan hingga dapat ditentukan spesies bakteri
yang didapat sehingga akan memudahkan terapi yang akan di berikan.

DAFTAR PUSTAKA
Agustina, D., C, Yulvizar, N. Risa. 2013. Isolasi dan karakterisasi bakteri pada
ikan kembung (Rastrelliger sp) asin Berkitosan. Biospecies Vol. 6(1): 15-
19
Akter S., M. Ali, M. Das. 2013. Isolation and identification of Avibacterium
paragallinarum, the causal agent of infectious coryza (IC) from layer
Arulanantham, R., Pathmanathan, S., Ravimannan, N., & Niranjan, K. (2012).
Alternative Culture Media for Bacterial Growth Using Different
Formulation of Protein Sources. Journal of Natural Product and Plant
Resourse, 2 (6): 697-700

Aprilia, Patricia.R., Agus, B.S., Dian, W.H.2016. Jumlah Staphyloccus aureus dan
Kandungan Nutrien Susu Akibat Dipping Putting Menggunakan Daun

79
 Belimbing Wuluh pada Sapi Perah Penderita Mastitis Subklinis. Fakultas
Peternakan UB: Malang
Bakheet Aml A., Omar Amen, Sayed H.AL. Habaty, and Samah F. Darwish. 2018.
Prevalence of Staphylococcus aureus In Broiler Chickens with Special
Reference to Beta-Lactam Resistance Genes in the Isolated Strains. AJVS.
Vol. 57 (2): 25-33
Barrow PA, Freitas Neto OC. 2011. Pullorum disease and fowl typhoid—new
thoughts on old diseases: a review. Avian Pathol. 40:1–13.
Barrow, G.I and Feltham, R.K.A. 2003. Cowan and Steel’s, Manual for The
Identification of Medical Bacteria. Cambridge University Press.
Cambridge.
Benson, H.J. (1973). Microbiological Applications, A Laboratory Manual in
General Microbiology 2nd ed.WM.C. Brown Co. Publ. Dubuque, Iowa.
Bishop C.M. 1998. Avian Physiology. United Kingdom
Bergey. 1974. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. Baltimore.
Amerika Serikat.

Blossom C. 2014. Penyimpanan Bahan Makanan Hewani. [diunduh 16 Mei 2019].

Tersedia pada http://elyunizar.blogspot.com/2014/03/penyimpanan-bahan-
makanan-hewani.html,
Brooks, G. F., Butel, J. S., & Morse, S. A., 2001, Mikrobiologi Kedokteran
(Medical Microbiology) Edisi XXII, diterjemahkan oleh Bagian
Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga, Penerbit
Salemba Medika, Jakarta.

Brown. 2006. A survey of foodborne pathogens in bulk tank milk and raw milk
consumption among farm families in Pennsylvania. J. Dairy Sci. (89):
24512458
Cappucino, JG, N. Sherman. Microbiology A Laboratory Manual Edition 9th.
California: The Benjamin Cummings Publishing Company; 2012. P 323-327

Casey A.L., P.A. Lambert, and T.S.J. Elliot. 2007. Staphylococci. International
Journal of Antimicrobial Agents 29 Suppl. 3 (2007) S23–S32

Campbell, Neil A, jane B Reece, Lawrence G. Mithchell. Biologi Edisi lima jilid
2. Jakarta: Erlangga.
Cherry WB, Lentz PL, and Barnes LA. 1946. Implication of Proteus mirabilis in
an Outbreak of Gastroenteritis. Am J Public Health Nations Health. May
1946; 36(5): 484–488. PMCID: PMC1625797

Cappucino, J.G. and N. Sherman. 2005. Microbiology: A Laboratory Manual. 7th

Edition. Pearson Education Inc. USA.
Cappuccino, J.G and N. Sherman, 2002, Microbiology a Laboratory Manual.The
Benjamin/Cumming Publishing Company, Inc. Menlo Park, California.

80
Carter, G.R. and D.J. Wise, 2004. Essentials of Veterinary Bacteriology and
Micology. Sixth Edition. Lowa State Press. Lowa. USA.

Direktur Kesehatan Hewan, 2002. Manual Penyakit Hewan Unggas. Direktorat

Kesehatan Hewan, Direktorat Bina Produksi Peternakan, Departemen
Pertanian RI, Jakarta Indonesia.

Direktur Kesehatan Hewan, 2014. Manual Penyakit Hewan Unggas. Direktorat

Kesehatan Hewan, Direktorat Bina Produksi Peternakan, Departemen
Pertanian RI, Jakarta Indonesia.

Dewi Amalia Krisna. 2013. Isolasi, Identifikasi dan Uji Sensitivitas

Staphylococcus aureus terhadap Amoxicillin dari Sampel Susu Kambing
Peranakan Ettawa (PE) Penderita Mastitis Di Wilayah Girimulyo,
Kulonprogo, Yogyakarta. JSV 31 (2)

Direktorat Jendral Peternakan.2008. Statistik Peternakan. Dapartemen Pertanian

R.I.Jakarta

Domermuth C.H., M. Nielsen, et.all. 1964. GROSS MORPHOLOGY AND

ULTRASTRUCTURE OF MYCOPLASMA GALLISEPTICUM.
JOURNAL OF BACTERIOLOGY Vol. 88, No. 5, p. 1428-1432

Dzen, Sjoekoer M. 2004. Bakteriologi Medik, Malang: Bayumedia Publishing.

pp:187-274

Eckmann L, Kagnoff MF. 2001. Cytokines in host defense against Salmonella.

Microb. Infect. 3: 1191–1200.

Elghazaly Eman M.M., Eman K. Sedeek, and Samy A. Khalil. 2017. Molecular
Characterization of Some Bacteria Isolated from Broiler Chickens
Showing Respiratory Manifestations. AJVS. Vol. 55 (2): 98-106.

Fakhoury, M., Negrulj, R., Mooranian, A., and Al-Salami, H. 2014. Inflammatory
Bowel Disease : Clinical Aspects and Treatments. Journal of Inflammation
Research, Dove Press Journal. Montreal.

Fatimawati, A. G. Bambang dan N. S. Kojong. 2014. Analisis cemaran bakteri

coliform dan identifikasi E. coli pada air isi ulang dari depot di Kota
Manado. Jurnal ilmiah Farmasi UNSRAT.

Glisson John R. 1998. Bacterial Respiratory Diseases of Poultry. Poultry Science

77:1139–1142

81
Gupta RK, Ali S, Shoket H, Mishra VK. 2014. PCR-RFLP Differentiation of
Multidrug Resistant Proteus sp. Strains from Raw Beef. Current Research
inMicrobiology and Biotechnology Vol. 2, No. 4 (2014): 426-430

Gyles, CL. 1983. Escherichia coli. Dalam Pathogenesis of Bacterial Infection in

Animal. 2nd Edition. Ames: Iowa State University Press. Hal. 164-187.

Hadioetomo, R, S., 1990. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Gramedia. Jakarta.

Harti, A. S. 2015. Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: Penerbit Andi

Harris L.G., S.J. Foster, R.G. Richard. 2002. AN INTRODUCTION TO

STAPHYLOCOCCUS AUREUS, AND TECHNIQUES FOR
IDENTIFYINGAND QUANTIFYING S. AUREUS ADHESINS IN
RELATION TO ADHESION TO BIOMATERIALS: REVIEW. European
Cells and Materials Vol 4. Pages 39-60

Hosseini, M.J., R. Ranjbar, H. Ghasemi, dan H.R. Jalalian. 2007. The prevalence
and antibiotic resistance of Shigella sp recovered from patients admitted to
bouali hospital, tehran, iran during 1999-2001. Pakistan Journal of
Biological Sciences. 10(160):2778-2780

Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E. A., 1986, Mikrobiologi Kedokteran,

diterjemahkan oleh Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas
Airlangga, 205-209, Penerbit Salemba Medika, Jakarta

Jay, M.J. 1996. Modern Food Microbiology. Fifth Ed. International Thomson
Publishing, Chapman & Hall Book, Dept. BC. p. 469471.

Jawetz, Melnick, dan Adelberg. 2005. Medical Microbiologi. Salemba Medica

Page: 353-357

Jayarao, B.M., S.C. Donaldson, B.A. Straley, A.A. Sawant, N.V. Hegde, and J.L.

Kabir, Md. Humayun., Ershaduzzaman, Md., Giasudding, Md., Islam, Md.

Rafiqul., Nazir, K. H. M. Nazmul Hussain Nazir., Islam, Mohammed
Sirajul., Karim, Md. Rezaul., Rahman, Md. Hafizur., and Ali, Md. Yousuf.
2017. Prevalence and Identification f Subclinical Mastitis in Cows at
BLBRI Regional Station, Sirajganj, Bangladesh.

Kementerian Pertanian. 2014. Manual Penyakit Unggas. Direktorat Jenderal

Peternakan dan Kesehatan Hewan. Jakarta : hlm 133-135.

Lampel KA, Maurelli AT . 2003. Shigella Species Chapter 11. Dalam: Miliotis
MD, Bier JW, penyunting. International Handbook Of Foodborne
Pathogens. Marcel Dekker. New York. 167–180

82
Levisohn S., and S.H. Kleven. 2000. Avian mycoplasmosis (Mycoplasma
gallisepticum). Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 2000, 19 (2), 425-442

Lewerissa, F dan Kaihena, M., 2014. Analisis kualitatif Bakteri Coliform dan
Fecal Coliform Pada Mata Air Desa Saparua Kecamatan Saparua
Kabupaten Maluku Tengah.

Mclelland John. 1990. Avian Anatomy. Walfe Publishing LTD

Mahmudah, R., Maswati, R., Sappewali. 2016. Identifikasi Isolat Bakteri

Termofilik Dari Sumber Air Panas Lejja, Kabupaten Soppeng. Al-Kimia |
Volume 4 Nomor 1 : 131-142.

Manos J and Belas R. 2006. The Genera Proteus, Providencia, and Morganella.
Chapter 3.3.12, 10.1007/0-387-30746-x_12
Meyby ,E. 2014. Identifikasi Proteus Mirabilis Dan Resistensinya Terhadap
Antibiotik Imipenem, Klorampenikol, Sefotaksim, Dan Siprofoksasin Pada
Daging Ayam Di Kota Makassar. Makassar. Universitas Hasanuddin

Moenek,Y.J.A.,2016. Manajemen Penyakit Infectious Coryza (Snot). Progam

Studi Kesehatan Hewan Politeknik Pertanian Negeri Kupang:Kupang

Nygren Bl, Schilling KA, Blanton EM, Silk BJ, Cole DJ, Mintz ED. 2012.
Foodborne Outbreaks Of Shigellosis. Dalam : Epidemiology And Infection.
The USA. New York. 141(2): 233–241.

Samad MA. 2008. Animal husbandry and veterinary science. Vol. II. Mymensingh
(Bangladesh): Bangladesh Agricultural University

Shane Simon M., and Emeritus. 2005. Handbook on Poultry Disease. American
Soybean Association

Syamsuri, Istamar. 2004. Biologi. Penerbit Erlangga. Jakarta.

Suyati. 2010. Identifikasi Dan Uji Antibiotik Bakteri Gram-Negatif Pada Sampel
Urin Penderita Infeksi Saluran Kemih (Isk)”. Skripsi. Fakultas MIPA.
Universitas Papua.

Spanamberg A, Wünder EA, Pereira DIB, Argenta J, Sanches EMC, Valente P,

Ferreiro L. 2008. Mastitis in Southern Brazil Diversity of yeasts from
bovine. Review Iberoam Mycology 25: 154-156

Suwito, W. 2010. BAKTERI YANG SERING MENCEMARI SUSU: DETEKSI,

PATOGENESIS, EPIDEMIOLOGI, DAN CARA

83
 PENGENDALIANNYA. Balai Pengkajian Teknologi Pertanian
Yogyakarta

OIE (Office International des Epizooties). 2008. Fowl typhoid and pullorum
disease. OIE Terrestrial Manual, Office International des Epizooties, Paris,
France.

Pelczar, M. W., 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi 1. UI Press. Jakarta.

Pudjiatmoko. 2014. Manual Penyakit Unggas. Subdit Pengamatan Penyakit

Hewan Direktorat Kesehatan Hewan Direktorat Jenderal
Peternakan dan Kesehatan Hewan Kementerian Pertanian

Tarmudji, 2003. Kolibasilosis pada Ayam: Etiologi, Patologi dan

Pengendaliannya. Balai Penelitian Veteriner. Wartazoa Vol.13 No.2. Bogor.

Tambayong, J. 2009. Mikrobiologi untuk Keperawatan.Widya Medika, Jakarta.

Toelle, N.N. dan Viktor, L. 2014. Identifikasi dan Karakteristik Staphylococcus

Sp. dan Streptococcus Sp. dari Infeksi Ovarium Pada Ayam Petelur
Komersial (Identification and Characteristics of Staphylococcus Sp. and
Streptococcus Sp. Infection of Ovary in Commercial Layers). Jurnal Ilmu
Ternak, VOL. 1, NO. 7, 32 – 37.

Ulfa, Aula., Endang, S., Mimien, H.I. 2016. Isolasi dan Uji Sensitivitas Merkuri
pada Bakteri dari Limbah Penambangan Emas di Sekotong Barat
Kabupaten Lombok Barat : Penelitian Pendahuluan. Proceeding Biology
Education Conference (ISSN:2528-5742), Vol 13(1): 793-799.

Vogl Gunther, Astrid Plaickner, Susan Szathmary, et.all. 2008. Mycoplasma

gallisepticum Invades Chicken Erythrocytes during Infection.
INFECTION AND IMMUNITY, Jan. 2008, p. 71–77

Wahyuni Agnesia Endang Tri Hastuti, Charles Rangga Tabbu, Sidna Artanto, Dwi
Cahyo Budi Setiawan, dan Sadung Itha Rajaguguk. Isolation,
identification, and serotyping of Avibacterium paragallinarum from quails
in Indonesia with typical infectious coryza disease symptoms.
Veterinary World, EISSN: 2231- 0916

Wahyuni, Sri., Lianto., Andi, Khaeruni. 2014. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri
Manolitikasal Bonggol Pohon Sagu. Jurnal Vol. 4 No. 3. Hal 174-179
ISSN: 2087-7706.

Xia, Stephen S. 2006. The rheology of gel formed during the California Mastitis
Test. The University of Waikato.

84
Zainuddin Ahmad Riza,(2009), Cemaran Kapang Pada Pakan dan
Pengendaliannya,Jurnal Litbang Pertanian, 28(1), 2009 : hal15

Quinn PJ, Markey BK, Carter ME, Donnelly WJC, Leonard FC and Maghire D
2002. Veterinary Microbiology and Microbial Disease. Blackwell Science
Ltd. Australia.

Sannat, Chandrahas., Anil Patyal., Nidhi Rawat., R. C. Ghosh., D. K. Jolhe., R.

K. Shende., S. D. Hirpurkar1 and Sanjay Shakya. 2016. Characterization of
Salmonella Gallinarum from an outbreak in Raigarh, Chhattisgarh.
Veterinary World, EISSN: 2231-0916

Subronto dan Tjahajati 2008. Ilmu Penyakit Ternak III Farmakologi Veteriner:
Farmakodinami dan Farmakokinesis Farmakologi Klinis. Gadjah Mada
University Press. Yogyakarta Indonesia.

Tarmudji, 2003. Kolibasilosis pada Ayam: Etiologi, Patologi dan

Pengendaliannya. Balai Penelitian Veteriner. Wartazoa Vol.13 No.2.Bogor.

Vandekerchove, Laevens H, Pasmans F 2004. Colibacillosis In Caged Layer

Hens: Characteristics Of The Disease and The Aetiological Agent. Avian
Pathology Volume 33, Issue 2 pages 117-125

Wigley P, Berchieri A Jr, Page KL, Smith AL, Barrow PA. 2001.Salmonella
enteric serovar Pullorum persists in splenic macrophages and in the
reproductive tract during persistent disease-free carriage in chickens. Infect.
Immun. 69:7873–7879.

World Organisation For Animal Health. 2018. Fowl Thypoid and Pullorum
Disease. Chapter 2. 3. 11.

Zimro MJ, Power DA, Miller SM, Wilson GE, Johnson JA. 2009. Difco and BBL
Manual of Microbiology Culture Media. United States (ISBN 0-9727207-
1- 5):Becton, Dickinson and Company. Ed. Ke-2

85