WHO / CDS / WHOPES / GCDPP / 2005,13

PEDOMAN
LABORATORIUM DAN
LAPANGAN UJI
NYAMUK larvasida

ORGANISASI KESEHATAN DUNIA

Pemberantasan Penyakit Menular, PENCEGAHAN
DAN PEMBERANTASAN
WHO PESTISIDA EVALUASI SKEMA
Organisasi Kesehatan © Dunia 2005

Seluruh hak cipta.

Yang dipergunakan dan presentasi dari materi publikasi ini tidak

mewakili pengekspresian setiap pendapat apapun pada bagian dari
Organisasi Kesehatan Dunia mengenai status hukum dari negara, wilayah,
kota atau daerah atau otoritasnya, atau mengenai batas-batas wilayah atau
batas-batas.

Penyebutan perusahaan tertentu atau produk produsen tertentu tidak

berarti bahwa mereka didukung atau direkomendasikan oleh Organisasi
Kesehatan Dunia dalam preferensi untuk orang lain yang sifatnya serupa
yang tidak disebutkan. Kesalahan dan kelalaian dikecualikan, nama-nama
produk proprietary dibedakan dengan huruf modal awal.

Semua tindakan pencegahan telah diambil oleh Organisasi Kesehatan

Dunia untuk memverifikasi informasi yang terdapat dalam publikasi ini.
Namun, material yang diterbitkan didistribusikan tanpa jaminan apapun,
baik tersurat maupun tersirat. Tanggung jawab untuk interpretasi dan
penggunaan kebohongan bahan dengan pembaca. Dalam acara tidak akan
Organisasi Kesehatan Dunia bertanggung jawab atas kerusakan yang
timbul dari penggunaannya.
ISI

Hala
man

UCAPAN TERIMA KASIH 3

1. PERKENALAN 5

2. TAHAP I: STUDI LABORATORIUM 7

2.1 Penentuan aktivitas biologis 8
2.1.1 Larvasida selain produk bakteri dan
pengatur pertumbuhan serangga 8
2.1.2 pengatur pertumbuhan serangga 12
2.1.3 larvasida bakteri 14
2.2 Penentuan diagnostik
konsentrasi 19
2.3 penilaian resistansi silang 19

3. TAHAP II: PERCOBAAN KECIL BIDANG 20

3.1 Uji coba di tempat perkembangbiakan alami 21
3.1.1 Analisis data 24
3.2 uji coba lapangan disimulasikan 24
3.2.1 Analisis data 26
3.3 Pemilihan dosis aplikasi lapangan optimum 27

4. TAHAP III: SKALA BESAR UJI LAPANGAN 27

4.1 Pemilihan lokasi penelitian 28
4.2 Penilaian kepadatan pretreatment 28
4.3 Penerapan larvasida 29
 4.4 Penilaian kepadatan pasca perawatan 29
4,5 Efek pada organisme non-target 29
4.6 penerimaan operasional dan masyarakat 30
4.7 Analisis data 30

REFERENSI 31
LAMPIRA
N1
PRODUKSI UJI LARVA 32
LAMPIRA
N2
Pengenceran DAN KONSENTRASI 34
LAMPIRA
N3
PENGUKURAN DAN KONVERSI 35
LAMPIRA
N4
BENTUK DATA PEREKAMAN 36
UCAPAN TERIMA KASIH
Departemen Pengendalian Penyakit, Pencegahan dan
Pemberantasan (CPE) mengucapkan terima kasih kepada Dr P.
Jambulingam, Vector Kontrol Research Center, Pondicherry, India,
untuk penyusunan dokumen ini.

CPE juga mengucapkan terima kasih kepada berikut untuk

kontribusi mereka terhadap pengembangan dokumen ini.

Dr MK Cham, Roll Back Malaria Departemen, Organisasi

Kesehatan Dunia, Jenewa, Swiss.

Dr V. Corbel, Institut de recherche pour le développement (IRD) di

Montpellier, Perancis.

Dr P. Guillet, Kantor Wilayah WHO untuk Afrika, Harare,

Zimbabwe.

Dr H. Ladonni, Departemen Kedokteran Entomologi dan Vector

Control, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Teheran of
Medical Sciences, Tehran, Republik Islam Iran.

Dr C. Lagneau, Entente interdépartementale pour la démoustication

du littoral Mediterraneen, Montpellier, Perancis.

Dr HH Lee, Institute for Medical Research, Kuala Lumpur,

Malaysia.

Dr L. Manga, Kantor Wilayah WHO untuk Afrika, Harare,

Zimbabwe.

Dr M. Mazzarri, Divisi Pengendalian Vektor, Departemen

Kesehatan, Maracay, Venezuela.

3
Dr MS Mulla, Departemen Entomologi, University of California,
Riverside, California, USA.

Dr S. Nalim, Institut Nasional untuk kontrol vektor Penelitian,

Salatiga, Jawa Tengah, Indonesia.

Dr M. Nathan, Departemen Pengendalian Penyakit Menular,

Pencegahan dan Pemberantasan, Organisasi Kesehatan Dunia,
Jenewa, Swiss.

Dr SN Sharma, Institut Nasional Penyakit Menular, Delhi, India.

Dr E. Walker, Departemen Mikrobiologi dan Genetika Molekuler,

Michigan State University, East Lansing, Michigan, USA.

Dr M. Zaim, WHO Pestisida Evaluasi Skema (WHOPES),

Departemen Penyakit Menular, Pencegahan dan Pemberantasan,
Organisasi Kesehatan Dunia, Jenewa, Swiss.

Publikasi ini didanai oleh Kolaborasi Global untuk Pembangunan

Pestisida untuk Kesehatan Masyarakat (GCDPP).

4
1. PENGANTAR
Tujuan dari dokumen ini adalah untuk memberikan prosedur dan
pedoman khusus dan standar untuk pengujian larvasida, termasuk
larvasida bakteri dan pengatur pertumbuhan serangga (IGRs),
terhadap nyamuk. Tujuannya adalah untuk menyelaraskan prosedur
pengujian dilakukan di laboratorium dan lembaga yang berbeda
untuk menghasilkan data untuk pendaftaran dan pelabelan larvasida
oleh otoritas nasional.

Dokumen ini versi yang diperluas dan diperbarui dari pedoman

yang direkomendasikan oleh WHO Pestisida Evaluasi Scheme
(WHOPES) Informal Konsultasi evaluasi dan pengujian insektisida,
diadakan di WHO markas (HQ), Jenewa, 7-11 Oktober 1996 (1).
Pedoman ditinjau dan direkomendasikan oleh Kedelapan WHOPES
Pertemuan kelompok kerja, yang diadakan di WHO-HQ, Geneva,
01-03 Desember 2004 (2).

Dokumen ini memberikan pedoman penelitian laboratorium dan

skala kecil dan uji coba lapangan skala besar untuk menentukan
kemanjuran, tingkat aplikasi lapangan dan kelayakan operasional
dan penerimaan dari larvasida nyamuk. Tabel di bawah urutan dan
tujuan dari studi dan uji coba. Prosedur memberikan beberapa
informasi tentang keamanan dan toksisitas dari larvasida untuk
organisme non-target, tetapi dianggap bahwa awal eko-toksisitas
dan penilaian manusia telah dilakukan sebelum penelitian lapangan
dilakukan - pengobatan rinci dan analisis ini data tambahan berada
di luar lingkup dokumen ini.

5
tabel 1.1
Urutan tahap evaluasi larvasida nyamuk

Tahap Jenis Tujuan

belajar
tahap I Laboratorium • Biopotency dan aktivitas
studi • konsentrasi diagnostik dan
penilaian resistansi silang

tahap II Skala kecil • Khasiat bawah yang berbeda

uji coba
lapangan lingkungan ekologi
• Metode dan tingkat aplikasi
• kegiatan awal dan residual
• Efek pada organisme non-target

tahap III Besar-besaran • Khasiat dan aktivitas residual

uji coba
lapangan • Operasional dan masyarakat
penerimaan
• Efek pada organisme non-target

6
2. TAHAP I: STUDI LABORATORIUM
Tujuan dari pengujian laboratorium untuk menentukan biopotency
yang melekat pada bahan teknis atau, dalam kasus larvasida
dirumuskan, aktivitas mereka. Hal ini diasumsikan bahwa modus
senyawa ini tindakan telah ditetapkan. Informasi tentang kecepatan
aktivitas penting, karena ini akan menentukan jenis prosedur
pengujian untuk dipekerjakan.

Untuk mengevaluasi aktivitas biologis dari larvasida nyamuk, larva

nyamuk laboratorium-dibesarkan dari usia yang diketahui atau
instar (referensi strain atau F1 nyamuk lapangan dikumpulkan)
yang terkena selama 24 jam sampai 48 jam atau lebih lama di air
yang diolah dengan larvasida pada berbagai konsentrasi dalam
jangkauan aktivitasnya, dan kematian dicatat. Untuk IGRs dan
bahan lainnya dengan aktivitas tertunda, kematian harus dinilai
sampai munculnya dewasa. Hal ini penting untuk menggunakan
populasi homogen dari jentik nyamuk atau instar diberikan. Ini
diperoleh dengan menggunakan metode membesarkan standar (lihat
Lampiran 1).

Tujuan dari tes adalah:

• untuk membangun jalur dosis-respons (s) terhadap spesies
vektor rentan;
• untuk menentukan konsentrasi letal (LC) dari larvasida untuk
50% dan% kematian 90 (LC50 dan LC90) Atau untuk 50% dan
90% penghambatan munculnya dewasa (IE50 dan IE90);
• untuk membangun konsentrasi diagnostik untuk memantau
kerentanan terhadap larvasida nyamuk di lapangan; dan
• untuk menilai resistensi silang dengan insektisida yang umum
digunakan.

7
 2.1 Penentuan aktivitas biologis

2.1.1 Larvasida selain produk bakteri dan pengatur

pertumbuhan serangga

2.1.1.1 Bahan yang dibutuhkan untuk pengujian

• Salah satu pipet memberikan 100-1000 ml.

• kiat sekali pakai (100 ml, 500 ml) untuk mengukur Aliquot
dari larutan encer.
• Lima 1 pipet ml untuk insektisida dan satu untuk kontrol.
• Tiga tetes dengan lampu karet hisap.
• Bahan berikut untuk membuat saringan: dua loop kawat, salah
satu bagian dari nilon jaring (30 cm2) Dan satu tabung semen.
Disarankan bahwa dua buah jaring be cut dan disemen ke sisi
berlawanan dari akhir lebih besar dari loop kawat. Lebih
semen kemudian harus diterapkan di sekitar tepi loop untuk
bergabung dengan dua potong jaring. Setelah kering, kelambu
dapat dipangkas dengan gunting.
Jika saringan tidak tersedia, loop layar plastik dapat
digunakan untuk mentransfer larva uji ke cangkir tes atau
kapal.
• bentuk perekaman data (lihat Lampiran 4).
• cangkir sekali pakai (lebih disukai karena mereka
menghindari kontaminasi) atau, jika tidak tersedia, mangkuk
kaca atau gelas dari dua kapasitas: 120 ml (memegang 100
ml) dan 250 ml (memegang 200 ml).
• Lulus mengukur silinder.
• software log-probit atau kertas.

8
2.1.1.2Preparation solusi saham atau suspensi dan konsentrasi uji

Bahan-bahan teknis senyawa organik banyak yang tidak larut dalam

air. Bahan-bahan ini harus dilarutkan dalam pelarut organik yang
sesuai seperti aseton atau etanol (produsen harus berkonsultasi)
dalam rangka mempersiapkan encer solusi untuk pengujian
laboratorium. bahan yang dirumuskan, bagaimanapun, larut dengan
air. Menangguhkan atau mencampur formulasi ini dalam air tidak
memerlukan peralatan khusus - suspensi homogen dapat diperoleh
dengan lembut gemetar atau mengaduk.

Volume larutan stok harus 20 ml 1%, diperoleh dengan menimbang

200 mg bahan teknis dan menambahkan 20 pelarut ml untuk itu. Ini
harus disimpan dalam botol sekrup-topi, dengan aluminium foil atas
mulut botol. Kocok kuat untuk melarutkan atau membubarkan
materi dalam pelarut. Larutan stok kemudian serial diencerkan
(sepuluh kali lipat) dalam etanol atau pelarut lainnya (2 solusi ml
untuk 18 pelarut ml). konsentrasi uji kemudian diperoleh dengan
menambahkan 0.1- 1,0 ml (100-1000 ml) dari pengenceran yang
tepat untuk 100 ml atau 200 ml bebas klorin atau air suling (lihat
Tabel A2.1). Untuk volume air lainnya tes, aliquot dari pengenceran
menambahkan harus disesuaikan menurut Tabel A2.1. Ketika
membuat serangkaian konsentrasi, konsentrasi terendah harus
dipersiapkan terlebih dahulu. volume kecil pengenceran harus
ditransfer ke cangkir uji dengan cara pipet dengan tips pakai.
Penambahan volume kecil solusi untuk 100 ml, 200 ml atau volume
lebih besar dari air tidak akan menyebabkan variabilitas nyata
dalam konsentrasi akhir.

Ketika tes dilakukan dengan menggunakan bahan dirumuskan, air

suling digunakan dalam penyusunan larutan stok 1% atau suspensi
dan pengenceran serial berikutnya, sesuai dengan isi dari bahan
aktif.

9
2.1.1.3Bioassays

Awalnya, larva nyamuk yang terkena berbagai konsentrasi uji dan

kontrol untuk mengetahui berbagai aktivitas bahan uji. Setelah
menentukan kematian larva di berbagai ini konsentrasi, berbagai
sempit (4-5 konsentrasi, menghasilkan antara 10% dan 95% angka
kematian dalam 24 jam atau 48 jam) digunakan untuk menentukan
LC50 dan LC90 nilai-nilai.

Batch 25 larva instar ketiga atau keempat ditransfer melalui

saringan, loop layar atau tetes ke cangkir tes pakai kecil atau kapal,
masing-masing berisi 100-200 ml air. Kecil, tidak sehat atau rusak
larva harus dihapus dan diganti. Kedalaman air di cangkir atau
pembuluh harus tetap antara 5 cm dan 10 cm; level yang lebih
dalam dapat menyebabkan kematian yang tidak semestinya.

Volume sesuai pengenceran ditambahkan (lihat Tabel A2.1) untuk

100 ml atau 200 ml air di gelas untuk mendapatkan dosis target
yang diinginkan, dimulai dengan konsentrasi terendah. Empat atau
lebih ulangan ditetapkan untuk masing-masing konsentrasi dan
jumlah yang sama dari kontrol ditetapkan bersamaan dengan air
keran, yang 1 alkohol ml (atau pelarut organik yang digunakan)
ditambahkan. Setiap pengujian harus dijalankan tiga kali pada hari
yang berbeda. Untuk eksposur panjang, makanan larva harus
ditambahkan ke setiap cangkir tes, terutama jika kematian yang
tinggi dicatat dalam kontrol. Wadah uji diadakan di 25-28HaiC dan
lebih disukai penyinaran cahaya 12 jam diikuti oleh 12 h gelap
(12L: 12D).

Setelah paparan 24 jam, kematian larva dicatat. Untuk insektisida

lambat bertindak, 48 h membaca mungkin diperlukan. Hampir mati
larva dihitung dan ditambahkan ke larva mati untuk menghitung
persentase kematian. larva mati adalah mereka yang tidak dapat
diinduksi untuk bergerak
10
ketika mereka diperiksa dengan jarum di siphon atau daerah leher
rahim. Hampir mati larva adalah mereka tidak mampu naik ke
permukaan atau tidak menunjukkan reaksi diving karakteristik
ketika air terganggu. Hasil dicatat pada form yang tersedia
(Gambar. A4.1), di mana LC50, LC90 dan LC99nilai-nilai, dan
kemiringan dan analisis heterogenitas juga mencatat. Bentuknya
akan menampung tiga tes terpisah dari enam konsentrasi, masing-
masing empat ulangan.

Larva yang telah pupated selama periode pengujian akan

meniadakan tes. Jika lebih dari 10% dari kontrol larva menjadi
kepompong dalam perjalanan percobaan, tes harus dibuang dan
diulang. Jika kematian control adalah antara 5% dan 20%,
mortalitas dari kelompok perlakuan harus dikoreksi dengan rumus
Abbott (3):

X-Y
Kematian (%) = ---- 100,
X

di mana X = persentase bertahan hidup dalam kontrol yang tidak

diobati dan Y = persentase kelangsungan hidup dalam sampel
diperlakukan.

2.1.1.4 Analisis data

Data dari semua ulangan harus dikumpulkan untuk analisis. LC50

dan LC90nilai dihitung dari garis regresi log dosis-probit kematian
menggunakan program perangkat lunak komputer, atau
diperkirakan dengan menggunakan kertas log-probit. Bioassay
harus diulang setidaknya tiga kali, menggunakan solusi baru atau
suspensi dan batch yang berbeda dari larva setiap kali. Standar
deviasi atau keyakinan interval sarana LC50nilai dihitung dan
dicatat pada formulir (Gambar. A4.1). Serangkaian tes berlaku jika
standar deviasi relatif (atau koefisien variasi) kurang dari 25% atau
jika batas kepercayaan dari
11
LC50tumpang tindih (tingkat signifikan pada P <0,05). Potensi
bahan kimia terhadap larva vektor tertentu dan ketegangan
kemudian dapat dibandingkan dengan LC50 atau LC90 nilai-nilai
insektisida lainnya.

2.1.2 pengatur pertumbuhan serangga

metode pengujian untuk hormon remaja (JH) analog (juvenoids)

dan inhibitor chitin sintesis berbeda. JH analog mengganggu
transformasi larva instar terlambat untuk pupa dan kemudian ke
dewasa, sedangkan kitin inhibitor sintesis menghambat
pembentukan kutikula dan mempengaruhi semua instar dan tahap
dewasa dari nyamuk. Tindakan tertunda dari IGRs pada cara larva
diperlakukan bahwa angka kematian dinilai setiap hari atau setiap
tiga hari sampai selesainya munculnya dewasa. Pengaruh kedua
jenis IGR pada larva nyamuk yang dinyatakan dalam persentase
larva yang tidak berkembang menjadi dewasa berhasil muncul, atau
munculnya dewasa inhibisi (IE%).

2.1.2.1Preparation solusi saham atau suspensi dan konsentrasi uji

Penyusunan larutan uji atau suspensi dan bioassay set-up yang sama
seperti untuk senyawa cepat bertindak (lihat Bagian 2.1.1.1 dan
2.1.1.2). bahan teknis umumnya larut dalam pelarut organik dan
larutan stok (1%) harus dibuat dengan melarutkan 200 mg dalam 20
ml. bahan dirumuskan harus diencerkan dengan air dan
pengenceran serial yang dibuat dengan cara yang sama.

12
2.1.2.2Bioassays

larva instar ketiga digunakan untuk menguji JH analog dan inhibitor

sintesis kitin. Jumlah awal yang akurat dari larva sangat penting
karena perilaku kanibalisme atau pemulungan larva selama periode
paparan panjang. Durasi panjang tes juga berarti bahwa larva telah
harus disediakan dengan sejumlah kecil makanan (ekstrak ragi
ditumbuk halus, pelet kelinci, atau ikan tanah atau makanan mouse)
pada konsentrasi 10 mg / l pada interval dua hari sampai jumlah
kematian yang dibuat. Bubuk makanan harus ditangguhkan dalam
air dan satu atau dua tetes ditambahkan per cangkir. Larva di
kontrol diberi makan dengan cara yang sama seperti yang di batch
diobati. Jika perlu, semua tes dan kontrol cangkir harus ditutup
dengan jaring untuk mencegah berhasil muncul dewasa dari
melarikan diri ke lingkungan. Kematian atau kelangsungan hidup
dihitung setiap hari atau setiap tiga hari sampai munculnya lengkap
dewasa. Wadah uji diadakan di 25-28HaiC dan lebih disukai untuk
penyinaran dari 12L: 12D.

Pada akhir periode observasi, dampaknya dinyatakan sebagai IE%

berdasarkan jumlah larva yang tidak berkembang berhasil menjadi
dewasa yang layak. Dalam rekaman IE% untuk setiap konsentrasi,
hampir mati dan larva mati dan pupa, serta nyamuk dewasa tidak
sepenuhnya lepas dari kasus kepompong, dianggap sebagai
“terpengaruh”. Jumlah orang dewasa berhasil muncul juga dapat
dihitung dari kasus kepompong kosong. percobaan berhenti ketika
semua larva atau pupa di kontrol telah meninggal atau muncul
sebagai orang dewasa. Data yang dimasukkan pada formulir
(Gambar. A4.2). Adanya perubahan bentuk atau efek morfogenetik
yang terjadi baik di dalam nyamuk dewasa moulting atau orang
dewasa muncul juga direkam.

13
2.1.2.3 Analisis data

Data dari semua ulangan dari masing-masing konsentrasi harus

dikombinasikan. Total atau rata penghambatan munculnya dapat
dihitung atas dasar jumlah larva tahap ketiga terkena. Munculnya
keseluruhan dewasa mencerminkan kegiatan. IE% dihitung dengan
menggunakan rumus berikut (4):

T ×100
YAITU(%)= 100- .
C

dimana T = persentase kelangsungan hidup atau munculnya dalam

batch diperlakukan dan C = persentase kelangsungan hidup atau
munculnya di kontrol.

Jika munculnya dewasa di kontrol adalah kurang dari 80%, tes

harus dibuang dan diulang. Di mana persentasenya antara 80% dan
95%, data dikoreksi menggunakan rumus Abbott (lihat Bagian
2.1.1.3). nilai-nilai IE diperoleh pada setiap konsentrasi harus
dikenakan analisis regresi probit untuk menentukan IE50 dan
IE90nilai-nilai (menggunakan program perangkat lunak komputer
atau diperkirakan dari kertas probit Log-). Prosedur analisis data
yang tercantum dalam Bagian 2.1.1.4 harus diikuti.

2.1.3 larvasida bakteri

Prosedur uji hayati laboratorium untuk produk bakteri yang sama

dengan yang untuk larvasida kimia, kecuali dalam penyusunan
suspensi saham.

14
2.1.3.1 prinsip

The biopotency dari bahan yang pertama diperiksa dengan

membandingkan nyamuk kematian larva yang dihasilkan oleh
produk yang diuji dengan kematian yang dihasilkan oleh standar
referensi yang sesuai atau produk teknis atau dirumuskan lainnya.
Toksisitas persiapan berdasarkan subsp Bacillus thuringiensis.
israelensis (subsp B. thuringiensis. israelensis) dapat ditentukan
terhadap produk standar yang telah dikalibrasi menggunakan Aedes
aegypti (A. aegypti) larva. Potensi produk yang diuji ditentukan
dengan rumus berikut:
Potensi produk “X” = standar potensi (ITU) x LC50 (Mg / 1) LC
standar50 (Mg / l) dari “X”

Ketika standar acuan internasional digunakan, potensi dinyatakan

dalam Unit Toxic Internasional per miligram (ITU / mg). The
biopotency produk berdasarkan B. thuringiensis subsp. israelensis
dibandingkan dengan bubuk lyophilized referensi (IPS82, saring
1884) spesies bakteri ini menggunakan larva instar awal keempat A.
aegypti (strain Bora Bora). Potensi IPS82 telah sewenang-wenang
ditetapkan sebagai 15 000 ITU / bubuk mg terhadap strain nyamuk
larva.

The biopotency produk berdasarkan Bacillus sphaericus (B.

sphaericus) ditentukan terhadap referensi bubuk liofilisasi (SPH88,
saring 2362) spesies bakteri ini menggunakan larva instar awal
keempat Culex pipiens pipiens (C. pipiens pipiens) atau Culex
quinquefasciatus. Potensi SPH88 telah sewenang-wenang
ditetapkan pada 1700 ITU / mg bubuk terhadap ketegangan nyamuk
ini.

Penggunaan bubuk referensi larvasida bakteri lain dan / atau strain

alternatif nyamuk dalam tes ini adalah mungkin tetapi harus
didekati dengan hati-hati, karena tidak dapat dihindari bahwa hasil
yang berbeda akan
15
mendapatkan. alternatif tersebut harus menjadi subyek dari hati
lintas-kalibrasi dengan bubuk referensi dan strain diidentifikasi di
atas. Idealnya, seperti lintas-kalibrasi harus dilakukan oleh
sekelompok laboratorium ahli independen. Serbuk alternatif atau
strain, dan data cross-kalibrasi yang mendukung mereka, harus
dibuat tersedia untuk siapa saja yang ingin menggunakan, atau cek,
tes.

Secara umum, tidak perlu untuk mengkalibrasi dengan atau tes

terhadap standar tersebut jika membandingkan aktivitas produk
bakteri dengan produk larvasida lainnya. Hasil uji hayati
menyediakan LC50 dan LC90 nilai-nilai produk yang cukup untuk
memungkinkan perbandingan antara produk yang berbeda.

2.1.3.2 bahan tambahan yang diperlukan untuk pengujian

• Top-drive homogenizer atau pengaduk untuk produk

diliofilisasi
• Ice mandi (wadah es hancur) untuk menggiling atau
sonication
• Micropipette
• 10 pipet ml
• 12 tabung plastik ml dengan sumbat atau topi
• 120 ml atau 250 ml cangkir kertas plastik atau lilin-dilapisi
untuk menahan 100 ml atau 200 ml air

2.1.3.3Preparation suspensi standar acuan untuk kalibrasi

bioassays

Untuk mempersiapkan “saham suspensi”, berat 200 mg atau 1000

mg dari produk padat, tempat di vial (30 ml) atau labu volumetrik,
dan tambahkan 20 ml atau 100 ml air suling, menghasilkan 1%
suspensi saham, atau 10 mg / l. Kebanyakan bubuk tidak perlu
blending atau sonikasi. Kuat gemetar atau mengaduk akan
memfasilitasi suspensi. Jika ditempatkan di
16
tabung, suspensi saham dapat dibekukan untuk bioassay masa
depan. aliquots beku harus homogen secara menyeluruh sebelum
digunakan, karena partikel menggumpal selama pembekuan.

Dari “saham suspensi”, setiap pengenceran berikutnya yang

diperlukan (lihat Tabel A2.1) disusun oleh pengenceran serial.
Plastik atau kertas cangkir diisi dengan 100 ml air deionisasi. Dua
puluh lima akhir larva instar ketiga atau awal keempat A. aegypti
atau C. pipiens (tergantung pada spesies bakteri yang akan diuji:
Aedes larva untuk B. thuringiensis israelensis subsp dan Culex
larva untuk B. sphaericus.) Ditambahkan ke setiap cangkir .
Menggunakan micropipettes, 400 ml, 300 ml, 200 ml, 100 ml, 80
ml dan 50 ml dari suspensi yang diberikan (lihat Tabel A2.1)
ditambahkan ke cangkir dan solusi yang dicampur untuk
menghasilkan konsentrasi akhir 0,04 mg / l, 0,03 mg / l, 0,02 mg / l,
0,01 mg / l, 0,008 mg / l dan 0,005 mg / l, masing-masing, dari
referensi bubuk standar. Empat atau cangkir lebih mereplikasi
digunakan untuk setiap konsentrasi dan kontrol, yang 100 ml air
deionisasi.

2.1.3.4 Persiapan suspensi dari produk yang akan diuji

Untuk bioassay teknis produk (padat atau cair) dari potensi yang
tidak diketahui, sebuah homogenat awal dibuat hanya dengan
mencampur tanpa mengurangi ukuran partikel. Untuk tes formulasi
cair, 20 ml air ditambahkan ke 200 mg dalam botol. pengenceran
serial yang dibuat dan cangkir dan larva disusun seperti yang
dijelaskan di bagian sebelumnya.

bioassay Range-menemukan dilakukan dengan menggunakan

berbagai konsentrasi produk untuk menentukan toksisitas perkiraan
nya. Hasilnya kemudian digunakan untuk menentukan sempit dan
lebih halus rentang konsentrasi untuk bioassay yang tepat.
17
2.1.3.5Bioassays

Untuk mempersiapkan kurva dosis-respons yang valid, hanya

konsentrasi memberikan nilai antara 10% dan 95% kematian harus
digunakan. Minimal dua konsentrasi di atas dan dua di bawah
LC50tingkat harus digunakan. Setiap seri bioassay harus melibatkan
setidaknya empat konsentrasi; dan masing-masing konsentrasi harus
diuji di empat ulangan dari 25 larva instar akhir ketiga atau awal
keempat per ulangan.

Tidak ada makanan ditambahkan ke pembuluh larva saat periode

paparan adalah 24 jam. Makanan mungkin diperlukan jika periode
paparan lebih panjang. Ditumbuk halus ekstrak ragi atau mouse
tanah atau kelinci pelet tersuspensi dalam air (1,5 mg) ditambahkan
ke air dalam pembuluh tes di 10 mg / l. Kematian ditentukan pada
24 jam untuk B. thuringiensis subsp. israelensis dan 48 jam untuk
B. sphaericus dengan menghitung larva hidup yang tersisa. Hasil tes
pada konsentrasi yang berbeda (termasuk nilai-nilai LC)
dimasukkan pada formulir (Gambar. A4.1). Jika lebih dari 10% dari
larva menjadi kepompong, tes ini batal karena larva instar akhir
tidak menelan 24 jam sebelum pupation dan terlalu banyak larva
dapat bertahan hanya karena mereka terlalu tua. Semua tes harus
dilakukan pada 25-28 ° C, sebaiknya dengan 12L: 12D penyinaran.

2.1.3.6 Analisis data

Jika kematian control adalah antara 5% dan 20%, mortalitas dari

kelompok perlakuan harus dikoreksi dengan rumus Abbott (lihat
Bagian 2.1.1.3). Tes dengan lebih mortalitas kontrol dari 20% atau
pupation lebih besar dari 10% harus dibuang. Sebuah regresi
konsentrasi mortality- dibuat menggunakan log-probit analisis
perangkat lunak atau kertas log-probit. Bioassay harus dilakukan
setidaknya tiga kali dan validitas hasil dinilai sebagai untuk yang
lain
18
larvasida. nilai LC (Gambar. A4.1) ditentukan dan dibandingkan
dengan memeriksa aktivitas satu produk versus lain.

2.2 Penentuan konsentrasi diagnostik

Konsentrasi diagnostik atau diskriminasi ditentukan dari garis

regresi dosis-respons pengujian bahan teknis terhadap spesies
vektor rentan sesuai dengan prosedur yang diuraikan dalam Bagian
2.1. Konsentrasi diagnostik adalah dua kali lipat dari perkiraan
LC99..9 nilai.

2.3 penilaian resistansi silang

Baru, larvasida calon diuji secara bersamaan terhadap sejumlah
kecil yang berbeda, strain nyamuk multi-tahan dan strain rentan,
sesuai dengan prosedur yang diuraikan dalam Bagian 2.1. Jika
resistansi silang terdeteksi, sifat yang tepat yang akan ditentukan
dengan menguji larvasida terhadap strain yang masing-masing
memiliki mekanisme resistensi tunggal. Mekanisme resistensi dapat
dinilai mengikuti prosedur yang digariskan dalam WHO Teknik
dokumen untuk mendeteksi mekanisme resistensi insektisida
(lapangan dan laboratorium manual) (5).

strain rentan dari beberapa spesies nyamuk disimpan di

laboratorium. Jika tidak, setiap strain rentan harus dikumpulkan di
lapangan (jika populasi benar-benar rentan masih ada). Jika tidak,
strain rentan dapat artifisial dipilih menggunakan bioassay, tes
untuk mekanisme ketahanan individu dan seleksi antara garis yang
berasal dari betina dikawinkan secara individual.

19
Strain resisten harus diidentifikasi dengan menggunakan teknik uji
mapan. Strain sebaiknya harus homozigot untuk satu atau
mekanisme resistensi yang lebih dikenal. Jika homozigositas tidak
dapat dicapai, pemilihan periodik biasanya diperlukan untuk
mencegah seleksi alam mendukung rentan dengan mengorbankan
resisten. strain referensi didirikan harus secara teratur dipantau oleh
bioassay dan biokimia dan / atau tes molekuler sehingga setiap
perubahan dalam perlawanan atau mekanisme yang mendasari
dapat dinilai dan diperbaiki oleh seleksi.

3. TAHAP II: PERCOBAAN KECIL

BIDANG
Larvasida yang menunjukkan janji dalam penelitian laboratorium
(Tahap I) dapat dikenai skala kecil uji lapangan (Tahap II). Pada
Tahap II, uji coba lapangan dari produk yang diformulasikan
dilakukan pada skala kecil terhadap nyamuk sasaran, terutama di
tempat perkembangbiakan alami perwakilan atau, di mana
percobaan tersebut tidak layak, di bawah kondisi lapangan simulasi
(lihat Bagian 3.2).

prosedur evaluasi harus dipilih atas dasar situs pemuliaan dan

perilaku nyamuk. Formulasi diuji pada pukul lima konsentrasi dan
studi Tahap I akan memandu dosis yang dipilih untuk digunakan
dalam uji coba Tahap II. Biasanya, ini akan menjadi beberapa
konsentrasi LC90untuk spesies sasaran. Konsentrasi perlakuan
dihitung atas dasar jumlah bahan aktif per volume air (jika
diketahui atau terukur) atau luas permukaan habitat.

20
Tujuan dari uji coba lapangan skala kecil adalah:
• untuk menentukan kemanjuran, termasuk aktivitas residual,
terhadap vektor nyamuk yang berbeda di tempat
perkembangbiakan yang berbeda dan pengaturan ekologi;
• untuk menentukan aplikasi lapangan optimal dosis (s);
• untuk memantau parameter abiotik yang dapat mempengaruhi
kemanjuran produk; dan
• untuk merekam pengamatan kualitatif pada biota non-target
kumpul kebo dengan jentik nyamuk, terutama predator.

3.1 Uji coba di tempat perkembangbiakan alami

Khasiat bidang larvasida dalam berbagai kondisi ekologi ditentukan

dengan memilih habitat perkembangbiakan alami perwakilan dari
spesies sasaran. Ini termasuk saluran air stagnan (semen bergaris
dan polos), lubang-lubang soakage, cesspits, septik tank, tangki
layanan domestik mengumpulkan air limbah, kolam renang, lahan
basah, sawah irigasi dan sumur yang tidak terpakai untuk Culex spp
.; semen tangki, drum, tangki air, wadah penyimpanan air dan
pendingin udara untuk A. aegypti; dan sumur bekas, lubang taman,
kolam, menyembuhkan yard, petak-petak sawah, kolam arus, lahan
basah, rawa-rawa, irigasi ladang dan infiltrasi yang untuk
Anophelesspp.

Minimal tiga ulangan dari setiap jenis habitat harus dipilih secara
acak untuk setiap dosis formulasi, dengan jumlah yang sama
kontrol. Ukuran plot harus dicatat, dengan mempertimbangkan luas
permukaan dan kedalaman. Sejauh mungkin, plot yang dipilih harus
sama dan sebanding. Masing-masing sumber berkembang biak yang
terbatas atau kontainer dapat dianggap sebagai plot diskrit atau
ulangan. Habitat seperti saluran air, saluran irigasi, sawah irigasi,
sawah, sungai dan infiltrasi yang dapat dibagi menjadi daerah
diskrit 4-50 m2 dan direplikasi untuk pengobatan dan kontrol.

21
Pretreatment dewasa kelimpahan (larva instar pertama dan kedua,
larva instar ketiga dan keempat, dan pupa) harus dicatat di kedua
situs eksperimen dan kontrol (minimal dua pengamatan pada
interval yang sama). Metode pengambilan sampel harus sesuai
dengan jenis pemuliaan habitat, dan jumlah yang tepat dari sampel
harus diambil dari masing-masing habitat berdasarkan jenis dan
ukuran habitat. instar larva dan pupa dari setiap sampel dihitung
dan dicatat. Setidaknya tiga dosis yang berbeda dari larvasida harus
diterapkan pada habitat berkembang biak. Ini dapat diterapkan
menggunakan atomizers kecil, penyemprot kompresi atau, dalam
banyak kasus, memeras botol plastik. Butiran, pelet, tablet dan
briket dapat disiarkan secara manual atau dibuang di dalam air.

Pasca perawatan yang belum matang kelimpahan (semua tahapan)

harus dipantau pada hari 2 dan kemudian mingguan sampai
kepadatan larva instar keempat (atau kepompong dalam kasus
IGRs) di habitat diperlakukan mencapai tingkat yang sebanding
dengan yang di kontrol. Data dicatat pada formulir (Gambar. A4.3).

Karakterisasi habitat dari segi faktor abiotik dan biotik membantu

interpretasi hasil. Curah hujan dan perubahan dalam tingkat air atau
parameter lain, seperti mekar alga atau predator di habitat, harus
dicatat.

Khasiat dan sisa aktivitas larvasida pada dosis yang berbeda

ditentukan dari jumlah pasca-pengobatan larva hidup dan pupa di
diperlakukan dan situs kontrol dibandingkan dengan jumlah
pretreatment atau kontrol, dengan mempertimbangkan dinamika
perubahan yang terjadi dalam diobati dan batch control (lihat di
bawah).

22
Penilaian keberhasilan sebuah IGR didasarkan pada tingkat
penghambatan munculnya dewasa dan persentase penurunan larva
dan kepompong kepadatan. Larva dan pupa sampel seperti
dijelaskan di atas. Dewasa munculnya dapat dipantau secara
langsung di lapangan dengan mengambang perangkap munculnya
sentinel di habitat dirawat dan diobati (lihat Gambar. A4.4), oleh
pupa isolasi, atau dengan sampling dan kulit penghitungan
kepompong. Dewasa munculnya juga dapat dinilai dengan
mengumpulkan kepompong (20-40 per mereplikasi) dan membawa
mereka ke laboratorium dalam wadah kaca dengan air dari habitat
masing-masing, kemudian mentransfernya ke cangkir kecil di
dalam kandang memegang. larva mati dan pupa ditemukan di
cangkir harus dihapus dan setiap kelainan morfologi direkam.

Ketika dipantau langsung di lapangan, pretreatment dan pasca

perawatan data tentang munculnya dewasa di habitat dirawat dan
diobati dianalisis untuk IE%. Berikut ekspresi (6) digunakan untuk
menghitung IE% nilai:

YAITU(%)= C1 T2
100 - × ×100 .

T1 C2

di mana C1 adalah jumlah orang dewasa yang muncul di habitat

kontrol sebelum pengobatan, C2 jumlah orang dewasa muncul di
habitat kontrol pada interval tertentu setelah perawatan, T1 jumlah
orang dewasa muncul di habitat diobati sebelum pengobatan dan T2
jumlah orang dewasa yang muncul di diperlakukan habitat setelah
perawatan.

Ketika munculnya dewasa dimonitor di laboratorium menggunakan

kepompong dikumpulkan dari habitat dirawat dan diobati, IE%
dihitung dengan menggunakan rumus berikut, atas dasar
menentukan munculnya dewasa dari jumlah pupa terisolasi (lihat
juga Bagian 2.1.1.3):
23
 C-T
YAITU(%)= ×100 .
C

di mana C = persentase yang muncul atau yang hidup di habitat

kontrol dan T = persentase yang muncul atau yang hidup di habitat
diobati.

3.1.1 Analisis data

Jumlah rata-rata pupa atau larva dikumpulkan per dip untuk setiap
ulangan dari setiap perlakuan dan kontrol dihitung untuk setiap hari
pengamatan. Persentase penurunan larva dan pupa kepadatan, atau
IE% pada hari-hari pasca perawatan, akan diperkirakan untuk setiap
ulangan dari setiap perlakuan menggunakan rumus Mulla ini.
Perbedaan antara perawatan perawatan dapat dibandingkan dengan
analisis dua arah varians (ANOVA) dengan pengobatan dan jumlah
hari sebagai faktor independen. ANOVA harus dilakukan setelah
mengubah persentase penurunan nilai-nilai arcsine.

Hari pasca perawatan hingga yang 80% atau 90% pengurangan

diamati untuk setiap pengobatan atau dosis kemudian akan
dibandingkan untuk mengetahui pengaruh residu dan dosis aplikasi
yang optimal (lihat Bagian 3.3).

3.2 uji coba lapangan disimulasikan

Dalam uji coba tersebut, beberapa kontainer buatan (guci, ember,

bak, silinder, dll) air ditempatkan di lapangan atau di bawah kondisi
lapangan simulasi dan bahan diuji terhadap larva laboratorium
dipelihara atau lapangan-dikumpulkan. Jenis dan ukuran wadah
akan tergantung pada habitat larva alami dari spesies sasaran
nyamuk. Wadah berisi air diberikan setidaknya 24 jam untuk

24
pendingin atau penuaan. Sebuah batch 25-100 larva instar ketiga
laboratorium-dibesarkan dari spesies nyamuk yang akan diuji
dilepaskan ke dalam setiap wadah atau mereplikasi dan makanan
larva ditambahkan. Setelah 2-3 jam aklimatisasi larva, wadah
diperlakukan dengan dosis yang dipilih secara acak menggunakan
pipet atau tangan penyemprot semprotan yang tepat, atau dengan
menyiarkan bahan padat di atas permukaan air. Wadah ditutupi
dengan layar nilon mesh atau selimut yang solid untuk mencegah
nyamuk atau serangga lain dari telur peletakan dan untuk
melindungi air dari puing-puing jatuh. Tingkat air di wadah harus
dipertahankan. Sebuah minimal empat ulangan masing-masing
dosis dan empat kontrol yang akan digunakan. Untuk agen
bertindak cepat semua kontainer diperiksa setelah 48 jam dan larva
hidup dihitung untuk mencetak pasca perawatan kematian larva.
Untuk bahan lambat bertindak, seperti IGRs, kelangsungan hidup
larva, pupa dan pupa kulit dinilai tujuh hari atau lebih setelah
pengobatan, dengan waktu yang semua larva akan pupated dan
muncul sebagai orang dewasa. Kulit kepompong memberikan
pengukur terbaik dari efektivitas akhir atau keseluruhan. Untuk
menguji aktivitas residual, batch baru laboratorium-dibesarkan,
larva instar akhir sepertiga spesies nyamuk yang sama
diperkenalkan ke setiap kontainer, dan nyamuk larva makanan
ditambahkan pada hari alternatif atau mingguan. Larva hidup dinilai
48 jam pasca Selain itu, dan kulit kepompong dihitung tujuh hari
atau lebih setelah penambahan. Proses ini berlanjut sampai tidak
ada kematian dicatat. Kulit kepompong memberikan pengukur
terbaik dari efektivitas akhir atau keseluruhan. Untuk menguji
aktivitas residual, batch baru laboratorium-dibesarkan, larva instar
akhir sepertiga spesies nyamuk yang sama diperkenalkan ke setiap
kontainer, dan nyamuk larva makanan ditambahkan pada hari
alternatif atau mingguan. Larva hidup dinilai 48 jam pasca Selain
itu, dan kulit kepompong dihitung tujuh hari atau lebih setelah
penambahan. Proses ini berlanjut sampai tidak ada kematian dicatat.
Kulit kepompong memberikan pengukur terbaik dari efektivitas
akhir atau keseluruhan. Untuk menguji aktivitas residual, batch baru
laboratorium-dibesarkan, larva instar akhir sepertiga spesies
nyamuk yang sama diperkenalkan ke setiap kontainer, dan nyamuk
larva makanan ditambahkan pada hari alternatif atau mingguan.
Larva hidup dinilai 48 jam pasca Selain itu, dan kulit kepompong
dihitung tujuh hari atau lebih setelah penambahan. Proses ini
berlanjut sampai tidak ada kematian dicatat.

Data dicatat pada formulir pada Gambar. A4.2. Untuk IGRs yang
diuji, pupa dikeluarkan dari diperlakukan dan kontainer kontrol
setiap hari dan dimasukkan ke dalam botol atau cangkir dengan air
dari wadah masing-masing, kemudian ditempatkan di kandang dan
munculnya dewasa dicatat. Metode lain yang tepat menilai
munculnya adalah untuk menghitung dan menghapus kulit
kepompong dari wadah (Gambar. A4.4). Dewasa tidak dibebaskan
dari kulit kepompong dianggap mati. Tes ini dihentikan ketika tidak
ada aktivitas residual yang signifikan secara statistik dalam hal
kematian larva atau penghambatan munculnya dewasa ketika
membandingkan

25
diperlakukan (pada dosis tertinggi yang diuji) batch dan kontrol
tidak diobati. Nilai pH dan suhu air dicatat di seluruh evaluasi.

Atau, tes dapat dilakukan dengan mengekspos larva instar ketiga di

situs perkembangbiakan alami kecil untuk dosis yang dipilih
larvasida menggunakan disaring keramba apung (minimal tiga
ulangan, dua kandang per ulangan). kandang ini harus disaring
lubang intip untuk memungkinkan gerakan air dan makanan ke
dalam kandang dari luar. Untuk setiap dosis, setidaknya tiga
dirawat dan tiga habitat kontrol tidak diobati dipilih. Habitat
diperlakukan dengan dosis yang dipilih dari material yang akan
diuji. Dua puluh lima laboratorium-dibesarkan atau, sebaiknya,
larva instar ketiga bidang-dikumpulkan ditempatkan di setiap
kandang. Jumlah yang masih hidup dihitung setiap lain atau setiap
hari ketiga sampai semua larva telah pupated dan muncul.
Persentase kematian atau IE% dihitung. Untuk menguji aktivitas
residual, 25 instar ketiga ditetapkan mingguan di kandang kontrol
diperlakukan dan tidak diobati. Seperti dengan batch awal larva,
penilaian kematian harus dilakukan setiap lain atau setiap
pengenalan posting hari ketiga. Pengaturan mingguan larva
berlanjut sampai tidak ada perbedaan dalam kematian dicatat antara
kontrol yang tidak diobati dan batch diperlakukan.

3.2.1 Analisis data

Metode yang diberikan dalam Bagian 3.1.1 juga dapat digunakan

untuk menganalisis data yang dikumpulkan di bawah uji simulasi.
Namun, karena penyebut dikenal untuk percobaan simulasi, sebuah
probit atau analisis regresi logistik lebih cocok daripada ANOVA
dan dijelaskan di bawah ini.

Data pada jumlah larva hidup dan mati dan pupa dari semua
ulangan masing-masing dosis pada satu hari harus dikombinasikan
dan persentase kematian atau IE% dihitung. Logistik atau probit

26
regresi persentase kematian atau IE% pada dosis dan jumlah hari pasca
perawatan dapat digunakan untuk menentukan hari pasca perawatan
(dan yang 95% CI) sampai dengan yang 80% atau 90% (tingkat yang
diinginkan kontrol) adalah dicapai untuk dosis yang diberikan.
Analisis ini dapat dilakukan dengan menggunakan paket perangkat
lunak statistik yang sesuai.

3.3 Pemilihan dosis aplikasi lapangan optimum

Dari dosis diuji terhadap spesies target dalam skala kecil atau uji
coba lapangan simulasi, dosis minimum di mana efek maksimum
(langsung serta sisa) dicapai harus dipilih sebagai dosis aplikasi
lapangan yang optimal untuk setiap jenis habitat. Frekuensi
perawatan larvasida ditentukan berdasarkan munculnya kembali
larva instar keempat atau kepompong, dalam kasus larvasida umum
dan produk larvasida bakteri, atau pengurangan hari di
penghambatan munculnya turun di bawah 90% untuk IGRs.

4. TAHAP III: SKALA BESAR UJI

LAPANGAN
Khasiat larvasida ditemukan cocok di lapangan skala kecil
percobaan (Tahap II) harus divalidasi di uji coba lapangan skala
yang lebih besar terhadap penduduk vektor alami di habitat
perkembangbiakan alami. Pada fase ini, larvasida yang diterapkan
pada situs peternakan nyamuk target pada dosis bidang optimum (s)
dipilih dalam uji coba lapangan skala kecil menggunakan peralatan
aplikasi yang sesuai, tergantung pada formulasi.

27
Tujuan dari percobaan ini adalah:
• untuk mengkonfirmasi kemanjuran larvasida pada dosis
aplikasi lapangan yang dipilih (s) terhadap vektor sasaran bila
diterapkan plot besar-besaran di situs perkembangbiakan
alami;
• untuk mengkonfirmasi aktivitas dan aplikasi interval sisa;
• pengamatan rekor pada kemudahan aplikasi dan penyebaran
insektisida;
• untuk mengamati penerimaan masyarakat;
• untuk merekam setiap dirasakan efek samping pada operator;
dan
• untuk mengamati efek dari pengobatan pada organisme non-
target.

4.1 Pemilihan lokasi penelitian

Plot percobaan yang dipilih akan tergantung pada jenis habitat larva
dan lingkungan. Perawatan harus diambil bahwa semua habitat
wakil dari spesies vektor sasaran termasuk dalam persidangan.
Minimal 25-30 ulangan atau plot dari setiap jenis habitat larva dari
spesies target yang harus dipilih untuk kontrol dan kemudian
kembali untuk pengobatan. Sama seperti untuk uji coba skala kecil,
masing-masing habitat terbatas dapat dianggap sebagai mereplikasi
individu; habitat yang lebih besar dapat dibagi lagi menjadi ulangan
dari sekitar 10 m2.

4.2 Penilaian kepadatan pretreatment

Pretreatment larva dan pupa kelimpahan (dan munculnya dewasa

dalam kasus IGRs) dalam pengobatan dan kontrol habitat harus
dilakukan selama seminggu pada setidaknya dua kesempatan
sebelum pengobatan. Populasi dewasa dan munculnya dewasa harus
diperkirakan dalam berbagai jenis habitat larva dengan
menggunakan perangkat sampling yang sesuai (seperti dalam uji
coba lapangan skala kecil dengan populasi alami).
28
4.3 Penerapan larvasida

Semua situs pemuliaan dalam unit harus dirawat di dosis aplikasi

lapangan optimum ditentukan pada Tahap II, menggunakan
peralatan yang sesuai dengan formulasi dan penggunaan
operasional. Dosis optimum untuk habitat larva besar atau yang
paling penting dari spesies sasaran di daerah dapat digunakan untuk
semua habitat. Dimana uji coba skala kecil menemukan variasi
yang luas antara dosis optimum untuk setiap jenis habitat, dosis
optimum tertentu harus diterapkan untuk setiap jenis habitat.

4.4 Penilaian kepadatan pasca perawatan

Dampak perawatan larvasida pada larva dan pupa nyamuk (dan

penghambatan munculnya dewasa) harus dievaluasi oleh koleksi
sampel pada 48 jam dan kemudian pada interval mingguan
menggunakan sejumlah tetap dips atau kandang sentinel. Sampling
prosedur yang sama dengan yang diikuti selama uji coba skala kecil
yang dilakukan di habitat perkembangbiakan alami. Data harus
dicatat pada formulir yang relevan (Gambar. A4.3 atau A4.4).

4,5 Efek pada organisme non-target

Spesifik, percobaan terpisah telah dilaksanakan untuk menilai

dampak larvasida pada organisme non-target. Namun, selama
persidangan skala besar, dan bila sesuai, non-target organisme
hidup bersama dengan jentik nyamuk dapat dihitung dan diperiksa
untuk dampak perawatan sementara sampel larva nyamuk.
Larvivorous ikan, siput, polychaetes, udang, ikan cray, kepiting,
naiads lalat capung, copepoda, naiads capung, coleopterans dan
heteropterans,

29
ostracods dan amphipods adalah beberapa organisme non-target
yang hidup berdampingan dengan fauna nyamuk.

4.6 penerimaan operasional dan masyarakat

Selama persidangan, pengamatan harus dilakukan pada kemudahan

penyimpanan, penanganan dan penerapan formulasi insektisida
pada situs peternakan, dan efek dari formulasi insektisida pada
berfungsinya peralatan aplikasi seperti tips nozzle dan gasket, rotor,
blower, dll

Pengamatan juga dicatat pada penerimaan perawatan insektisida

untuk penduduk daerah, terutama pada situs peternakan domestik
dan peridomestic.

4.7 Analisis data

Jumlah rata-rata pupa atau larva atau non-target organisme yang

dikumpulkan per dip pada setiap hari pengamatan dihitung untuk
setiap ulangan di perlakuan dan kontrol. Analisis statistik untuk
menentukan sisa kemanjuran - termasuk jumlah hari pasca
perawatan di mana tingkat yang diinginkan kontrol dicapai pada
dosis yang dipilih - dilakukan mengikuti metode yang dijelaskan
dalam Bagian 3.1.1.

30
REFERENSI
(1) Laporan WHO Konsultasi Informal di evaluasi
Kesehata
dan pengujian insektisida. Jenewa, Dunia n
Organisasi 1996 (CTD / WHOPES / IC / 96,1).
Pertemu
(2) Laporan kedelapan WHOPES Kelompok kerja an.
Jenewa, Dunia Kesehatan Organisasi, 2005
(WHO / CDS / WHOPES /
2005,10).
(3) Abbott WS. Sebuah metode komputasi efektivitas suatu
insektisida. Jurnal Ekonomi Entomologi, 1925, 18: 265-
267.
Mulla MS, Darwazeh HA. Aktivitas dan umur panjang dari
(4) serangga
pengatur tumbuh terhadap nyamuk. Jurnal Ekonomi
Ilmu serangga, 1975, 68: 791-794.
Teknik untuk mendeteksi mekanisme resistensi insektisida
(5) (bidang
dan laboratorium manual). Jenewa, Organisasi Kesehatan
Dunia,
1998 (WHO / CDS / BPK / MAL / 98,6).
Mulla MS et al. Pengendalian pengusir hama Chironomid di
(6) rekreasi
danau. Jurnal Ekonomi Entomologi, 1971, 64: 301-307.
31
LAMPIRAN 1
PRODUKSI UJI LARVA
Penggunaan batch homogen dari jentik nyamuk adalah yang
terpenting dalam penelitian laboratorium dan sangat penting dalam
menentukan aktivitas dan biopotency larvasida sintetik, IGRs,
larvasida bakteri dan produk alami. Prosedur standar berikut
diusulkan untuk membesarkan A. aegypti dan Culex spp. spesies
lain dapat dipelihara sesuai dengan prosedur ini, tunduk pada
modifikasi yang diperlukan agar sesuai dengan syarat biologis
spesies uji.

Untuk A. aegypti, telur diletakkan dalam secangkir dilapisi dengan

strip kertas filter dan sepertiga diisi dengan deionisasi atau keran
air. Sekitar sepertiga dari strip kertas harus di dalam air. Hal ini
akan menjaga strip lembab di mana telur diletakkan di atas garis air.
Strip kertas dikeringkan pada suhu kamar dan disimpan pada suhu
kamar selama beberapa bulan dalam kantong plastik tertutup.
Ketika larva dibutuhkan, strip kertas direndam dalam air de-
diklorinasi atau suling. Untuk menyinkronkan dan mempromosikan
menetas, tambahkan makanan larva ke air 24 jam sebelum
menambahkan telur. Pertumbuhan bakteri akan de-oksigenat air dan
ini penetasan pemicu telur. Proses ini biasanya menginduksi instar
pertama yang menetas dalam waktu 12 jam dari hidrasi. Larva
menetas kemudian dipindahkan ke panci dangkal atau nampan yang
berisi 2 l de-diklorinasi air. Tujuannya adalah untuk menciptakan
populasi 500 sampai 700 larva per kontainer. Larva makanan
mungkin serpihan protein seperti yang digunakan untuk ikan
akuarium, pelet kelinci, tumbuk ayam atau bubuk kucing biskuit.
Wadah yang diadakan di 25 + 2 ° C. Adalah penting bahwa jumlah
makanan tetap rendah untuk menghindari pertumbuhan bakteri
yang kuat (yang membunuh larva), peningkatan penyediaan
makanan sebagai larva tumbuh. Beberapa feed pada interval satu
atau dua hari dan pengamatan harian larva yang optimal.
Penyediaan pelet padat (ayam tumbuk atau pelet kelinci) mencegah
kekeruhan dan sampah. Jika Adalah penting bahwa jumlah
makanan tetap rendah untuk menghindari pertumbuhan bakteri
yang kuat (yang membunuh larva), peningkatan penyediaan
makanan sebagai larva tumbuh. Beberapa feed pada interval satu
atau dua hari dan pengamatan harian larva yang optimal.
Penyediaan pelet padat (ayam tumbuk atau pelet kelinci) mencegah
kekeruhan dan sampah. Jika Adalah penting bahwa jumlah
makanan tetap rendah untuk menghindari pertumbuhan bakteri
yang kuat (yang membunuh larva), peningkatan penyediaan
makanan sebagai larva tumbuh. Beberapa feed pada interval satu
atau dua hari dan pengamatan harian larva yang optimal.
Penyediaan pelet padat (ayam tumbuk atau pelet kelinci) mencegah
kekeruhan dan sampah. Jika

32
air menjadi keruh (dalam kasus makanan bubuk), mengganti semua
air dengan menyaring larva dan kemudian mentransfernya ke
sebuah wadah bersih dengan air bersih dan makanan, sebuah proses
yang dapat mengakibatkan kematian larva. Sebuah populasi
homogen dari akhir instar ketiga atau awal keempat (berusia 5 hari
dan 4-5 mm) harus diperoleh lima sampai tujuh hari kemudian.

Bahan-bahan dan prosedur yang diperlukan untuk belakang Culex

larva, terutama yang hama atau vektor penyakit parah, pada
dasarnya sama seperti untuk A. aegypti, kecuali bahwa telur Culex
disimpan di atas air sebagai rakit telur dan akan menetas 1-2 hari
setelah endapan. Mereka tidak memerlukan pendingin dan tidak
dapat dikeringkan. Jika mereka tidak menetas dalam dua hari
mereka akan mati. Hal ini lebih sulit untuk mendapatkan populasi
homogen dari instar ketiga atau keempat Culex spp. larva. Pertama,
sejumlah besar rakit telur harus diletakkan dan dikumpulkan pada
hari yang sama. Ini dapat disimpan pada 15-18 ° C untuk
mengumpulkan lebih banyak telur untuk menetas lebih dari satu
atau dua hari. The instar pertama yang rapuh dan dengan demikian
tidak harus ditangani. Pengembangan ke instar kedua biasanya
memakan waktu 3-4 hari di 25 + 2 ° C setelah telur menetas. Dalam
nampan yang berisi 2-3 l de-diklorinasi air di kedalaman 4-6 cm,
400-600 larva per tray dipelihara. Makanan (lihat di atas)
disediakan sesuai kebutuhan. instar awal keempat cocok untuk
pengujian biasanya diperoleh dalam waktu 7 hari, meskipun
kadang-kadang 8 atau 9 hari yang diperlukan.

33
LAMPIRAN 2
Pengenceran DAN KONSENTRASI
tabel A2.1
Aliquots berbagai solusi kekuatan ditambahkan ke 100 ml air
untuk menghasilkan konsentrasi akhir

Alikuot
solusi awal (ml)Sebuah konsentrasi akhir
(PPM) di 100 ml
% PPM
1.0 10 000.0 1.0 100.0
0,5 50,0
0. 1 10,0

0. 1 1 000.0 1. 0 10,0
0,5 5.0
0. 1 1.0

0. 01 100.0 1. 0 1.0
0,5 0,5
0. 1 0,1

0,001 10,0 1.0 0,1

0,5 0,05
0. 1 0.01

0,0001 1.0 1.0 0.01

0,5 0,005
0. 1 0,001

0. 00001 0,1 1.0 0,001

0,5 0,0005
0,1 0,0001
a
Untuk 200 ml dua kali lipat volume aliquot.

34
LAMPIRAN 3
PENGUKURAN DAN KONVERSI
Volume
ll = 1000 ml
1 ml = 1000 ml
1 kubik kaki = 7,5 galon = 28 l
1 galon = 4 liter = 8 liter = 128 ons = 3785 ml

Permukaan
1 ha = 10 000 m2 = 2.2 ekar
1 acre = 43 560 kaki persegi
1 kaki persegi = 0,111 yard persegi = 0,105 m2

Panjangnya
1 km = 0,62 mil = 1093 yard
1 m = 39,7 inci
1 inci = 2,54 cm = 0,0254 m
1 kaki = 0,333 yard = 0,3048 m
1 yard = 91,44 cm = 0,9144 m
1 mil (undang-undang) = 1760 yard = 5280 ft = 1609,3 m

Berat
1 pound = 0,454 kg
1 kg = 2,2 pon
1 g = 0,035 ons

faktor konversi
inci persegi untuk sentimeter persegi, kalikan dengan 6,5.
yard persegi untuk meter persegi, kalikan dengan 0,8.
kaki persegi untuk persegi meter, kalikan dengan 0,09.
Acres untuk hektar, kalikan dengan 0,4.
Mil persegi untuk persegi kilometer, kalikan dengan 2,6.

35
LAMPIRAN 4
BENTUK DATA PEREKAMAN
Gambar. A4.1
evaluasi laboratorium khasiat larvasida terhadap larva
nyamuk

Percobaan No: __________
Bahan: ________________
Jenis: ________________
Air: Tap / Distilled
Penyidik: ________________ Lokasi: ___________________ tanggal Pengobatan: _______
Formulasi: ________________ Temp: ___________ Pencahayaan: _____________
larva instar: _________ Larva / cangkir atau kapal: _________
Makanan:
Volume air: ______ ml ______ solusi Tanggal saham dibuat: __________

Tidak ada larva mati di berbagai conc. (Mg / L) pasca paparan

(hr.)
24 jam 48 jam
Mengulang
Tanggal i 0.00 0.00
1
2
3
4

5
6
7
8

9
10
11
12

Total
Ave.
mortalitas%
LC50 (CL 95%): __________________________________ LC50 (CL 95%): _______________________________
LC90 (CL 95%): __________________________________ LC90 (CL 95%): _______________________________
LC99: ____________________________________________ LC99: ______________________________________

Lereng: _________ heterogenitas: _____________ Lereng: _________ Heterogenitas: ___________

36
Gambar. A4.2
evaluasi laboratorium khasiat pengatur
pertumbuhan serangga terhadap larva nyamuk

Percobaan No: ____________ Penyidik: _________________ Lokasi: ___________________ tanggal Pengobatan: ___________
Bahan:_________________________ Perumusan:_________________ Teknik Sampling: ____________________
Jenis: ___________________ larva instar: ________________ Jumlah larva dirilis / terkena: __________ Menetapkan tanggal: ______________
jumlah kumulatif mati / nyamuk hidup setelah pengobatan (tanggal atau hari pra atau pasca-perawatan atau L = larva, pupa P =, A = orang
pengaturan) dewasa
Tangga
l: Total keseluruhan
Conc. hidup Mati hidup Mati hidup Mati hidup Mati hidup Mati hidup Mati
SE
Reputas BU
(Mg / L) i LPA L PA LPA L PA L PA LPA L PA L P AH LPA LPA LPA L PA
0.0 1
2
3
4
Total
Berarti
T1 1
2
3
4
Total
Berarti
T2 1
2
3
4
Total
Berarti
T3 1
2
3
4
Total
Berarti
T4 1
2
3
4
Total
Berarti
T5 1
2
3
4
Total
Berarti

37
Gambar. A4.3
uji lapangan skala kecil dan evaluasi larvasida terhadap
larva nyamuk
Percobaan No: ________Starting tanggal: _________ Lokasi: ___________ Penyidik:
________________
tanggal penilaian: _________ Pre atau hari pasca-perawatan: __________ Jenis Habitat: ___________ Spesies ______________

Hidup larva (L3-4) dan pupa (P) / sampel

Total
perawatan Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 4 Rep 5 keseluruhan
dosis ( ) Mencicipi L3-4 * P * L3-4 P L3-4 P L3-4 P L3-4 P L3-4 P
Kontrol 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah
T1 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah
T2 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah
T3 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah
T4 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah
T5 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah

38
Gambar. A4.4
uji lapangan skala kecil dan evaluasi pengatur
pertumbuhan serangga terhadap larva nyamuk

Percobaan No: _____ Mulai tanggal: _____________Location: ______________ Penyidik: ____________________________

tanggal penilaian: _________ Pre atau hari pasca-perawatan: _____________ Jenis Habitat: ____________ Spesies: ___________________

Hidup larva (L3-4), pupa (P) dan munculnya dewasa (A) / sampel atau sangkar atau
perangkap
Total
perawatan Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 4 Rep 5 keseluruhan Visual count
S
SE SE SE E
SE B B B B
BU U U U U
AH A A A A kulit kepompong
Dosis () Mencicipi L3-4 * P * * L3-4 PA L3-4 P H L3-4 P H L3-4 P H L3-4 P H pupa
Kontrol 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah YAITU%
T1 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah YAITU%
T2 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah YAITU%
T3 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah YAITU%
T4 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah YAITU%
T5 1
2
3
4
5
Total
Berarti
%merah YAITU%
39