CASE SCIENTIFIC SESSION

“ Respon Sel Punca Pulpa Gigi Sulung pada Tiga Bahan Bioinduktif- Studi
Eksperimental in Vitro”

BAGIAN PAEDODONTI

Diajukan untuk memenuhi syarat dalam melengkapi

Kepaniteraan Klinik di Bagian Paedodonti

Oleh:
Putri Defri Agusti
18100707360804072

Pembimbing : drg. Rheta Elkhaira

RUMAH SAKIT GIGI DAN MULUT

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI
UNIVERSITAS BAITURRAHMAH
PADANG
2020
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis ucapkan kehadirat Allah SWT atas limpahan rahmat dan karunia-

Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan CSS untuk memenuhi salah satu syarat

dalam menyelesaikan kepanitraan klinik modul 5 dapat diselesaikan.

Dalam penulisan laporan kasus ini penulis menyadari, bahwa semua proses yang telah

dilalui tidak lepas dari bimbingan drg. Retha selaku dosen pembimbing, bantuan, dan

dorongan yang telah diberikan berbagai pihak lainnya. Untuk itu penulis mengucapkan terima

kasih kepada semua pihak yang telah membantu.

Penulis juga menyadari bahwa laporan kasus ini belum sempurna sebagaimana

mestinya, baik dari segi ilmiah maupun dari segi tata bahasanya, karena itu kritik dan saran

sangat penulis harapkan dari pembaca.

Akhir kata penulis mengharapkan Allah SWT melimpahkan berkah-Nya kepada kita

semua dan semoga laporan kasus ini dapat bermanfaat serta dapat memberikan sumbangan

pemikiran yang berguna bagi semua pihak yang memerlukan.

Padang, Maret 2020

Penulis
 MODUL 5
FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI
UNIVERSITAS BAITURRAHMAH
PADANG

HALAMAN PENGESAHAN
Telah didiskusikan CSS “ Respon Sel Punca Pulpa Gigi Sulung pada Tiga Bahan
Bioinduktif- Studi Eksperimental in Vitro” guna melengkapi persyaratan Kepaniteraan
Klinik pada Modul 5.

Padang, Maret 2020

Disetujui Oleh
Dosen Pembimbing

(drg. Rheta Elkaira)

 ABSTRAK

Pendahuluan: Sel induk memiliki kapasitas dan potensi yang baik untuk regenerasi ketika
digunakan sendiri atau dalam kombinasi dengan perancah untuk mengganti atau memperbaiki
sel yang rusak, dapat berdiferensiasi menjadi sel dewasa.
Tujuan: Untuk mengevaluasi potensi diferensiasi fungsional EMD (Enamel Matrix
Derivative),MTA (Mineral Trioxide Aggregate) dan Biodentine pada Stem Cells dari
Decfoliated Human Decid-uous teeth (SHED)
Bahan dan metode: SHED berasal dari jalur linier ke- 5 setelah sub-kultur dirawat dengan
EMD, MTA dan Biodentine secara individual dan pengaruhnya terhadap viabilitas sel
dibandingkan dan dievaluasi dengan uji MTT (3-4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,5-
diphenyltetrazolium bromide) untuk 7 hari. Pewarnaan Alizarin red S digunakan untuk
menilai potensi mineralisasi bahan-bahan ini oleh pewarnaan simpanan kalsium selama 14
hari. Hasilnya dianalisis menggunakan One-way ANOVA, PostTes huk Tukey untuk
beberapa perbandingan.
Hasil: Diamati bahwa EMD memberikan viabilitas sel tertinggi pada akhir 7 hari (p <0,001)
diikuti oleh Biodentine dan MTA. Demikian juga EMD menunjukkan potensi tertinggi untuk
peningkatan mineralisasi dan ekspresi sialoprotein dentin (p <0,001) diikuti oleh Biodentine
dan MTA pada akhir 14 hari (p <0,001)
Kesimpulan: Dapat disimpulkan bahwa semua bahan yang diuji adalah bioinduktif untuk
SHED. EMD dapat digunakan untuk berbagai terapi pulpa vital seperti yang dilakukan
Biodentine dan MTA dan dapat diprediksi untuk meningkatkan terapi pulpa.

KATA KUNCI

Bahan bioinduktif;Sitotoksisitas;Diferensiasi fungsional;SHEDs;Terapi pulpa vital

Pendahuluan

Sel induk adalah sel yang pertama kali ditemukan pada semua multi seluler organisme
yang ditandai kemampuan untuk berdiferensiasi ke semua jenis sel dewasa. Sel ini memiliki
potensi regenerasi yang tak tertandingi dan sering digunakan atau dikombinasikan dengan
perancah untuk menggantikan atau memperbaiki sel yang rusak. Sel progenitor gigi yang
ditemukan dalam jaringan pulpa memungkinkan modalitas terapi yang diterapkan untuk
dentin dan pulpa. Studi dibidang endodontik regeneratif telah menunjukkan bahwa sedikit
bahan gigi memiliki kemampuan untuk membantu penyimpanan jaringan keras dan
menjaga vitalitas pulpa yang terpapar yang disebut sebagai bahan bioinduktif.
Bahan bioinduktif bila berkontak langsung dengan dentin atau pulpa yang terbuka,
menunjukkan biokompatibilitas yang memadai dan bioaktivitas untuk menyembuhkannya.
Bahan-bahan ini memiliki kemampuan untuk menginduksi jaringan keras pembentukan.
Mereka biokompatibel dan tidak beracun, tidak resorbable, dan tidak terpengaruh oleh
kontaminasi darah / air liur. Dari beberapa tahun terakhir, bahan pulp capping lebih efektif
telah berhasil dikembangkan Dari ini, MTA (Mineral Trioxide Aggregate) dan Biodentine,
menunjukkan efek yang dapat diandalkan daripada sebelumnya.
MTA telah terbukti menginduksi proliferasi murine yang tidak berdiferensiasi sel-sel
pulpa menjadi sel mirip odontoblas dan mendukung adhesi,liferasi serta migrasi sel induk
mesenchymal manusia atau sel batang pulpa gigi manusia. Ini juga memiliki potensi tinggi
untuk mineralisasi relatif sedikit reaksi inflamasi dalam penggunaan klinis sehingga bahan itu
pilihan untuk terapi endodontik
Biodentine adalah kalsium bahan restoratif bioaktif berbasis silikat dengan seperti
dentin sifat mekanik dan dapat digunakan sebagai pengganti dentin. Ini merangsang
pembentukan dentin tersier dan memiliki potensi untuk membedakan pulpa gigi dan sel
batang mesenchymal untuk meningkatkan mineralisasi.
EMD (EnamelMatrix Derivative) adalah ekstrak protein dari babi yang tidak erupsi
kuncup gigi mengandung sekitar 90% amelogenin dan sejumlah kecil tufelin, ameloblastin,
enamelin dan lainnya protein non-amelogenin.Saat digunakan untuk tujuan terapeutik, telah
terbukti membentuk dentin seperti pulau menjembatani lebar pulpa koronal di situs
pulpotomi. Itu meningkatkan ekspresi penanda sel odontoblast / osteoblas dalam sel-sel induk
dari gigi sulung manusia yang terkelupas (SHED) dan properti ini membantu meningkatkan
perbaikan dan regenerasi jaringan pulpa eration
 Bukti dari studi eksperimental telah menunjukkan efek EMD, MTA dan Biodentine
pada pulpa gigi manusia jaringan baik secara terpisah atau dalam kombinasi dengan bahan
lain melalui berbagai modalitas pengobatan dengan tingkat keberhasilan variabel
Ada banyak sekali makalah penelitian dan laporan tersedia dalam literatur mengenai
biokompatibilitas EMD, MTA dan Biodentine, keduanya dibandingkan sendiri atau dengan
satu sama lain dalam satu atau cara lain. Namun, saat data tentang efek kontak langsung dari
bahan-bahan ini pada sel induk dari gigi sulung manusia terkelupas (SHED) dicari, data yang
sangat terbatas ditemukan.Menjaga faktor-faktor ini dalam pertimbangan, hadir in-vitro
Penelitian dilakukan untuk mengevaluasi diferensiasi fungsional EMD potensial, MTA dan
Biodentine bila ditempatkan secara langsung kontak dengan SHED melalui uji MTT dan
Alizarin Red S metode pewarnaan

Tujuan penelitian
Tujuan penelitian adalah untuk mengevaluasi diferensiasi fungsional
(osteogenik/odontogenik) potensi sel punca dari gigi sulung dibawah pengaruh EMD,MTA
biodentine.

Hipotesis penelitian

SHED di bawah pengaruh langsung biomaterial seperti EMD, MTA dan Biodentine
menunjukkan diferensiasi fungsional (osteo-potensi genik / odontogenik.

Bahan dan metode

Studi eksperimental in-vitro ini dilakukan di Depart-Departemen Kedokteran Gigi dan
Kedokteran Anak dan Pencegahan Biologi molekuler dan Imunologi setelah mendapatkan
izin dari komite etik kelembagaan.

Isolasi dan kultur SHED

Semua prosedur yang dilakukan dalam penelitian ini dilakukan mengikuti protocol
pelemahan yang diberikan oleh Goorha dan Reiter (2017). Gigi sulung bebas karies, dekat
pengelupasan, diekstraksi dari anak-anak yang berusia antara 8 dan 12 tahun di bawah aseptik
yang ketat. Rongga akses dibuat menjadi chamber menggunakan udara kecepatan tinggi dan
pendingin steril, untuk mendapatkan akses. Jaringan pulpa dengan hati-hati dibersihkan dari
ruang pulpa dengan jarum ekstirpasi steril dan excavator . Jaringan ditangguhkan dalam
tabung uji sekrup tertutup yang mengandung media pengangkutan (50:50 rasio Medium
Modifikasi Eagle's Dulbecco: F12 dengan Buffer HEPES, dan larutan aktinomikotik
antibiotik 1%, Laboratorium Himedia, Mumbai, India). Sampel dikirim ke laboratorium
untuk isolasi dan kultur sel batang. Di laboratorium, bubur kertas jaringan dicincang dalam
cawan petri menggunakan pisau steril menjadi kecil potongan dan ditempatkan di media cuci
37 ° C prewarmed

Gambar1. Isolasi SHED dari pulpa gigi setelah bagian ke-4, (a) tidak ternoda (b) H&E ternoda.

Tabel 1. Berbagai bahan bioinduktif yang digunakan dalam penelitian ini.

Grup Bahan yang digunakan
Grup 1 (negatif kontrol) Sel dipelihara dalam media kultur biasa
Grup 2 (positif kontrol) Sel dipertahankan dalam medium
osteoinduksi
Grup 3 Sel dikultur dengan MTA
Grup 4 Sel dikultur dengan biodentine
Grup 5 Sel dikultur dengan matriks enamel turunan
(endogen)

Saline buffer fosfat Delbecco tanpa kalsium atau magnesium dan 1% larutan
aktinomikotik antibiotik) untuk membersihkan semua sisa-sisa dari jaringan. media cuci
dipindahkan ke tabung centrifuge dan disentrifugasi pada 800 rpm selama 5 menit pada suhu
kamar untuk membentuk pelet jaringan. Media cuci disedot dan pelet diresus- tertunda dalam
4 ml media kultur ditambah dengan 3 mg / ml collagenase dan 4 mg / ml dispase II untuk dan
diinkubasi selama 1 jam pada 37 ° C, sampai jaringan mengalami disosiasi enzimatik. Kultur
sel selanjutnya menjadi sasaran untuk 4 langkah enzimatik pencernaan dan ditangguhkan
kembali dalam 5-10 mL buffered buffered sal-Ine untuk mendapatkan pelet sel. Pelet ini
ditangguhkan kembali pada 5 ml DMEM untuk mendapatkan suspensi sel tunggal, diinkubasi
pada 37 ° C dalam 5% CO2 dalam 24 pelat titer mikro dengan baik selama 7 hari Media
kultur diubah setiap tiga hari sampai pertemuan sel tercapai
Sel-sel yang terlalu besar pada pertemuan adalah sub-dibudidayakan di media
pertumbuhan, DMEM dilengkapi dengan 10% serum janin sapi (FSB), 2 mmol LÀ1dari L-
glutamine (Himedia, Mumbai, India) serta 1% antibiotik PSA solusi (penisilin, streptomisin
dan amfoterisin, Himedia, Mumbai, India) dan diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam atmosfer
yang lembab bola 5% CO2 dan 15% O 2 . Sel-sel diturunkan pada akhir prosedur ini
disubkultur dengan perbandingan 1: 4 dan disebut sebagai SHED (Sel Induk dari Gigi Sulung
Manusia yang Terkelupas) SHED ini selanjutnya diidentifikasi dan dikarakterisasi mengikuti
pedoman ISCT (International Society of Cel-Terapi lular) untuk mengkonfirmasi
mesenchymal sel induk primer fenotipe dengan spidol permukaan spesifik. Antigen
permukaan SHED ditentukan menggunakan antibodi terkonjugasi dengan flu rophores
menggunakan flow cytometry Penanda antibodi yang digunakan adalah CD90,CD73 dan
CD105. Estimasi ukuran sampel yang digunakan untuk penelitian ini didasarkan pada metode
sumber daya persamaan". Dalam penelitian ini, sel yang diturunkan lebih lanjut dibagi dalam
lima kelompok berdasarkan perawatan dengan bahan tes dan kelompok kontrol. Jumlah total
sel per grup yang digunakan adalah 5.000-10.000 per sumur.

Persiapan sampel
Dalam penelitian ini, SHED berasal dari jalur linier 5 setelah sub-budidaya dan
dipelihara di DMEM (laboratorium HIMEDIA,Mumbai, India) digunakan sebagai kontrol
negatif namun sel dikultur dan dipelihara dalam media osteoinduksi digunakan sebagai
kontrol positif Pasangan tes- Bahan yang digunakan dalam penelitian eksperimental ini
adalah MTA (MTA +,Angelus, Londrina, PR, Brasil), Biodentine (Septodont, St-Maur-des-
Fosses, Cedex, Prancis) dan gel EMD (enamel matrix derivative- Strauman company, Basel,
Swiss)
(Tabel 1). Bahan-bahan ini dicampur sesuai pabrikan petunjuk. Satu sendok bubuk MTA dan
setetes suling air dicampur selama 30 detik sampai konsistensi homogeny tercapai.
Biodentine dicampur dengan menambahkan lima tetes liq- di dalam kapsul yang mengandung
1 gram bubuk amalgama- untuk kecepatan 4000 rpm selama 30 detik. Biodentine dan MTA
selanjutnya ditambahkan ke media kultur untuk mencapai final konsentrasi 1 mg / ml 0,7 ml
gel Emdogain yang mengandung 30 mg / mL enamel turunan matriks diencerkan dengan air
suling steril sampai mencapai konsentrasi akhir 100 lg / ml larutan.
MTT [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-difenil
uji tetrazolium bromida

Untuk menganalisis efek bahan bioinduktif pada SHED di dalam hal viabilitas dan
tingkat proliferasi, uji MTT telah dilakukan. Dalam prosedur ini, SHED diunggulkan di
kerapatan sama dengan 5000 sel / cm 2 pada piring dan cocul 96 baik Tured dengan 200 lml
media dikondisikan oleh tes yang berbeda bahan selama 7 hari melalui kolorimetri 3- (4,5-
dimetiltiazol-2-yl) -2,5-difenil tetrazolium bromide metabolic uji aktivitas (kit uji MTT,
laboratorium Himedia, Mum-bai, India). Dengan menggunakan sistem coculture ini,
pencampuran dan mengarahkan kontak bahan untuk SHED dihindari. Pada sel hari ke 7
viabilitas diukur dengan uji MTT. Solusi MTT (1 mg / mL) ditambahkan ke masing-masing
sumur selama 2 jam dalam kultur incubator. Solusinya kemudian dibuang, dan 1 ml
isopropanol ditambahkan ke masing-masing sumur. Piring diguncang selama 30 menit suhu
kamar untuk melarutkan kristal formazan. Dua ratus mikroliter isopropanol dipindahkan ke
kultur jaringan 96-sumur piring. Spektrofotometer (RI Technologies, Bangkok, Thailand)
digunakan untuk mengukur nilai absorbansi pada gelombang panjangnya 570 nm ( Gbr. 2 )
kelayakan sel dihitung dengan menggunakan rumus :
nilai OD darieksperimental x 100
kelangsungan hidup sel :
nilai OD dari cawankontrol

Pewarnaan Alizarin red S

Untuk melakukan prosedur ini, sistem coculture serupa adalah digunakan untuk
menentukan potensi diferensiasi tes materi tentang SHED. Media kultur sel dikondisikan
dengan semua bahan uji dan kelompok kontrol dicampur dengan SHED (10.000 sel per
sumur) dalam 6 pelat sumur selama 14 hari di 400 ml media pertumbuhan, DMEM ditambah
dengan 10%
serum bovine (FSB) , 2 mmol LÀ1dari L- glutamin. Media kultur diubah setiap tiga

hari untuk mempertahankan vitalitas sel. Di akhir 14 hari, sel-sel induk yang dirawat

diperbaiki selama 10 menit dengan dingin 100% metanol (laboratorium Himedia, Mumbai,

India) dan dicuci dengan air steril dua kali dan kemudian diwarnai dengan 2% zarin red (Kit

pewarnaan Alizarin Red S - laboratorium Himedia, Mumbai, India) selama 10 menit pada

suhu kamar. Alizarin merah dihilangkan, dan spesimen dicuci dengan steril air untuk
menghilangkan warna berlebih. Spesimen divisualisasikan di bawah mikroskop cahaya untuk

keberadaan nodul yang terkalsifikasi untuk menentukan pewarnaan positif atau negatif

Analisis statistik

Hasil dari semua bahan uji dianalisis menggunakan SPSS Inc perangkat lunak

(Windows, versi 16.0 Chicago, AS) dengan menggunakan alat statistik deskriptif seperti

Mean, dan SD untuk representasi senting data kuantitatif. Tes ANOVA satu arah diterapkan

untuk membandingkan pengukuran rata-rata lima kelompok. Pos hoc analisis data yang

mengikuti ANOVA satu arah dilakukan oleh menggunakan uji perbandingan berganda Tukey

juga digunakan. Poshoc test menganalisis beberapa perbandingan individu berdasarkan

pasangan

di antara kelompok.

Hasil
5.1. Isolasi dan karakterisasi SHED
Kehadiran sel induk berasal dari pulpa gigi gigi sulung pengelupasan telah
dikonfirmasi dan ditandai menggunakan antibodi spesifik untuk CD73, CD90 dan CD105,
sebagai SHED, ke arah mana ekspresi positif direkam
Uji MTT
Inkubasi SHED dengan berbagai pengenceran bioinduksi menghasilkan proliferasi sel
yang signifikan sebagai dikupas untuk kelompok kontrol. Terbukti dari analisis bahwa,dari
tiga biomaterial yang diuji, gel EMD menunjukkan sel tertinggi viabilitas dan proliferasi
diikuti oleh biodentine. Namun, MTA menunjukkan viabilitas dan proliferasi sel paling
sedikit.dan Gambar. 4 mengungkapkan bahwa pada akhir 7 hari, jumlah tertinggi viabilitas
sel terlihat dengan kelompok EMD (absorbansi: 1.864 ± 0.272) diikuti oleh kelompok
Biodentine (absorbansi: 1.684 ± 0.186). MTA dan kelompok kontrol negatif menunjukkan
hasil yang sama viabilitas sel (absorbansi: 1,485 ± 0,04) (p <0,001).

Alizarin red S pewarnaan uji

Inkubasi SHED dengan berbagai pengenceran biomaterial mengakibatkan
pembentukan nodul termineralisasi yang signifikan. Dulu terbukti dari analisis itu, dari tiga
biomaterial yang diuji, Gel EMD menunjukkan osteoinduksi / odontoinduksi tertinggi
kapasitas diikuti oleh biodentine dan MTA masing-masing

Gambar. 2. Uji MTT dari SHED diobati dengan (a) MTA, (b) Biodentin, (c) Emdogain

Gambar 3. Alizarin Red S pewarnaan dari SHED tumbuh dengan, (a) media pertumbuhan, (b) media osteoinduksi, (c)
MTA, (d) Biodentin, (e)Emdogain

Tabel. 2. Hasil bahan bioinduktif dengan uji MTT pada SHED

Grup Mean Std deviasi Uji anova Nilai p/signifikan
Grup 1 (kontrol negatif) 1.485 0,04 F=15,909 P<0,001
Grup III MTA 1.485 0,064
Grup IV(Biodentin) 1.684 0,186
 Grup V (Endogein) 1,864 0,272
p> 0,05 tidak signifikan, p <0,05 - signifikan.
** p <0,001 - sangat signifikan

Gambar 4. Grafik yang menunjukkan hasil uji MTT dari SHED dengan bahan bioinduktif yang berbeda

Groups Mean Std deviasi Anova F P value/signifikan

test
Grup I (Kontrol negatif) 0,937 0,033 F = 96.952 p <0,001
Grup II (Kontrol Positif) 1.814 0,042
Grup III (MTA) 1.492 0,005
Grup IV (Biodentine) 1.562 0,054
Grup V (Emdogain 1.728 0,110
p> 0,05 - tidak signifikan, * p <0,05 - signifikan.
** p <0,001 - sangat signifikan
 Gambar 5. Grafik menunjukkan hasil pewarnaan Alizarin Red S dengan bahan bioinduktif yang berbeda

dan Gambar. 5 mengungkapkan bahwa pada akhir 14 hari; jumlah tertinggi aktivitas
osteoinduktif / odontogenik terlihat pada EMD kelompok (absorbansi: 1,728 ± 0,110) (p
<0,001); diikuti oleh Biodentine (absorbansi: 1,562 ± 0,054) dan MTA (absor- bance: 1,492 ±
0,005) dibandingkan dengan kontrol positif (sel dipertahankan dalam media odontogenik-
1,814 ± 0,042) dan nega-kontrol tive (sel dipertahankan dalam media biasa- 0,937 ± 0,033).
Diskusi
Prosedur pulp capping / endodontik regeneratif tradisional-dures menganjurkan
dentin untuk diobati dengan kalsium hidroksida untuk melindungi jaringan yang terluka,
menginduksi formation dentin reparatif dan menjaga vitalitas pulpa. Dengan kemajuan ilmu
material, terbaru bahan bioinduktif menunjukkan hasil yang menjanjikan dalam pulpa gigi
primer dan permanen. Yg membarui prosedur endodontik bersama dengan prinsip-prinsip
insinyur jaringan bertujuan untuk meregenerasi struktur gigi yang rusak, termasuk dentin dan
akar serta kompleks dentin pulpa membantu mengembalikan fungsi jaringan. Untuk
mencapai ini, itu perlu bagi dokter untuk memahami sifat dan perilaku batang sel dan potensi
regenerasinya. Terapi memanfaatkan prinsip-prinsip endodontik regeneratif berkonotasi
aplikasi bahan bioinduktif dalam kontak langsung dengan yang terluka komleks pulpa-dentin.
Ini memberikan promosi bioaktivitas yang memadai sel-sel punca mesenchymal
terdiferensiasi berdiferensiasi baik sel odontoblastoid, osteoblastoid atau cementoblastoid
untuk menyembuhkannya. Sitotoksisitas in vitro dan studi diferensiasi fungsional dengan sel-
sel pulpa gigi manusia merupakan alat yang berguna untuk menganalisis reaksi, perilaku dan
nasib sel saat ditempatkan dalam kontak langsung dengan bahan uji yang mempromosikan
hewan metode gratis untuk eksperimen Dalam penelitian ini, itu memutuskan untuk
menggunakan SHED karena sel-sel ini berasal langsung dari sel krista neural dan
menunjukkan kematangan kurang. Mereka punya yang lebih tinggi tingkat proliferasi
dibandingkan sumber sel punca lainnya. Itu potensi SHED untuk berdiferensiasi menjadi tipe
sel lain lebih dari sel batang pulpa gigi (DPSC) dan sumsum tulang sel batang mesenchymal
(BMMSC). Sel-sel ini dapat makan menjadi beberapa jenis sel seperti odontoblast, osteoblast,
chondroblast, adiposit dan neuron juga. Populasi nilai ganda (PD) dari SHED lebih dari 140,
yang terkait jauh lebih baik daripada DPS (60–120 PD) dan BMMSC (30–50 PD) SHED
berhasil digunakan Tanggapan SHED terhadap bahan bioinduktif. sifat diferensiasi
fungsional bahan bioinduktif seperti MTA, Biodentine dan Emdogain, melalui kontak
langsung metode. Sel-sel semacam itu bersifat multipoten dan mampu pembaruan diri
melalui diferensiasi multi-garis keturunan. Tisu berasal dari sel-sel ini termasuk komponen
mesenkimal dari gigi termasuk odontoblas, pulpa, pembuluh darah apikal dan peri-
ligamentum odontal.Meskipun ini Sel milik populasi heterogen, mereka berbagi umum
karakteristik molekul dengan sel krista neural dan sel punca in vitro. Sel-sel induk ini
menunjukkan indikator untuk antibodi terhadap MSC manusia (batang mesenchymalsel)
dengan spidol permukaan spesifik seperti CD73, CD90, CD 105.
Dalam penelitian ini, sel induk tersuspensi dalam pertumbuhan teratur media yang
mengandung DMEM ditambah dengan 10% janin bovine serum (FSB), 2 mmol L dari L
-glutamine, digunakan sebagai kelompok kontrol negatif. Sel induk tersuspensi dalam ''
osteoinduksi-media tion ”media khusus yang dikondisikan digunakan sebagai kelompok
kontrol positif. Media osteoinduksi digunakan dalam studi ini terdiri dari DMEM (Dulbecco's
Modified Eagle's Sedang), 20% FBS, asam askorbat 50 lg / ml, 50 gmol / L b gliserol fosfat
dan deksametason 10–8mol / L. Sel-sel ditangguhkan dalam media yang berisi tes bahan
daripada menginkubasi mereka langsung dengan pasangan uji real. Itu dilakukan untuk
mengurangi efek sitotoksik bahan uji terkait dengan kontak langsung dengan sel induk.
Pengalaman ini-mental set up mensimulasikan situasi klinis, di mana gigi sel-sel pulpa berada
dekat dengan pembuluh darah dan saraf serat yang menerima faktor terlarut yang dilepaskan
dari kapasitor bahan ping. Ketika gudang dikultur dalam media kultur biasa, hanya sel yang
hidup dielusi, untuk mengidentifikasi potensi diferensiasi fungsional SHED daripada di
media osteoindution
 Uji MTT dilakukan untuk menganalisis efek bioinduksi bahan tive pada viabilitas dan
tingkat proliferasi SHED. MTT adalah uji kolorimetri berbasis garam tetrazolium yang
bekerja pada prinsip pengukuran aktivitas metabolisme mitokon-mengeringkan enzim dari sel
yang hidup. Dalam pengujian ini, ada pengurangan dari kuning 3- (4, 5-dimethythiazol-2-yl)
-2,5-difenil tetrazolium bromida oleh mitokondria suksinat dehidrogenase. Kapan MTT
memasuki sel, masuk ke mitokondria di mana itu direduksi menjadi produk formazan ungu
tua yang tidak larut. Selama pemrosesan, sel-sel solubalized dengan pelarut organik (DMSO,
Iso proanol, 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) melepaskan
formazan. Produk formazan terlarut ini dengan reagen adalah diukur menggunakan
spektrofotometer. Dengan cara ini, sitotoksik-Materi tersebut dikonfirmasi melalui uji MTT,
yaitu sugestif dari aktivitas metabolisme sel induk dalam kultur media, diukur sepanjang
rentang waktu yang ditentukan. Sebagai nilai absorbansi meningkat seiring waktu, dapat
diartikan sebagai peningkatan tingkat aktivitas seluler dan kelangsungan hidup, sehingga
suatu pengukuran proliferasi sel. Di antara materi diuji dalam penelitian ini, jumlah viabilitas
sel tertinggi diamati dengan Emdogain diikuti oleh Biodentine dan paling tidak dengan MTA.
Namun sesuai hasil yang diperoleh, semua tes bahan menunjukkan biokompatibilitas yang
signifikan pada konsentrasi yang diberikan sentrasi dan mempertahankan viabilitas sebagian
besar batang sel. Dengan demikian, hasil kami sesuai dengan penelitian sebelumnya yang
melaporkan temuan serupa.
Pewarnaan Alizarin red S (ARS) adalah pewarna anthroquinone uji kalorimetri dan
fungsionalitas berbasis, digunakan secara luas untuk mengevaluasi endapan kalsium dalam
kultur sel (Guven et al., 2013 ). Itu Pewarnaan ARS cukup fleksibel karena pewarna dapat
diekstraksi dari monolayer sel yang ternoda dan siap diuji. Ini assay menyediakan alat yang
sensitif untuk pemulihan dan semi-kuantifikasi ARS dalam sel monolayer bernoda (Paranjpe
et al., 2011). Tingkat mineralisasi dinilai dengan mengekstraksi mineral terkalsifikasi pada
pH rendah, menetralkannya dengan ammonium hidroksida dan deteksi melalui analisis
kolorimetri di 405 nM dalam format 96-sumur (Wang et al., 2011 ). Pengujian ini lebih
sensitif daripada tes lain seperti cetylpyridinium chloride (CPC) metode ekstraksi, karena
dapat mendeteksi jejak kecil kalibrasi deposit fic dalam sel. Pewarna ARS yang rusak mulai
dari 30uM - 4 mM menunjukkan hubungan linier dengan absorbansi pada 405 nM, yang
membuat pengenceran sampel sebelum pengukuran tidak perlu. Dalam penelitian ini, uji
kuantifikasi ini adalah diterapkan pada media induksi osteogenik dari SHED. Sel pada
masing-masing kelompok dikultur dalam perbedaan osteogenik yang berbeda. Media tion
selama 18 hari, diperbaiki untuk pewarnaan ARS dan diukur untuk deposit mineral
menggunakan kit. Diamati bahwa Emdo- gain dipromosikan pembentukan nodul
terkalsifikasi tertinggi, diikuti oleh Biodentine dan paling tidak dengan MTA. Dari grup
Emdogain, 84% dari Sel-sel menunjukkan diferensiasi fungsional menjadi jaringan
terkalsifikasi membentuk sel diikuti oleh sel diperlakukan Biodentine (menunjukkan
Proliferasi 66%) dan paling sedikit dengan sel yang diobati MTA (59% pro liferasi).
Kelompok kontrol positif menunjukkan 93% perbedaan selasi. Jumlah tertinggi pembentukan
nodul terkalsifikasi di antara materi yang diuji terlihat dengan Emdogain mengungkapkan
bioaktivitasnya lebih tinggi daripada yang lain. Min et al. (2009) diukur pembentukan nodul
kalsifikasi dalam sel odontoblas seperti melalui ali pewarnaan zarin red. Diamati odontoblast
seperti sel menginduksi pameran dentinogenesis DMP-1, DSPP, OCN dan Ekspresi gen
MEPE. Jenis ekspresi gen yang serupa adalah dibagi oleh sel-sel osteogenik yang
berdiferensiasi dalam sumsum tulang, yang juga membentuk nodul kalsifikasi. Hasil ini
mengkonfirmasi potensi induksi itive dan immunophenotyping untuk genetic ekspresi DMP-
1, DSPP, OCN, dan MEPE odontogenik penanda dibandingkan dengan MTA menunjukkan
peran positif MTA sebagai bahan bioinduktif untuk diferensiasi odontogenik di hDPSC.
Namun, dalam penelitian ini, SHED digunakan dan hasil penelitian ini memiliki
kecenderungan yang sama dengan yang di atas satu. Chang et al. (2014) melaporkan bahwa
biodentine dapat digunakan sebagai agen pulp capping potensial dengan kompatibilitas yang
menguntungkan, memicu tingkat respons inflamasi yang serupa tetapi kemudian diferensiasi
odontoblastik dibandingkan dengan MTA di hDPSC. Hasil yang diperoleh dalam penelitian
ini sesuai untuk hasil mereka. Nowicka et al. (2013) melaporkan bahwa keduanya MTA
dan Biodentine adalah biokompatibel dan menunjukkan bioin- yang menjanjikan
potensi diferensiasi duktif (odontogenik). Di yang lain studi, ketika SHED diobati dengan
MTA, kalsium hidroksida ide dan Biodentine, peningkatan progresif tertinggi di DMP-1
ekspresi gen terlihat dengan MTA, diikuti oleh kalsium hidroksida dan paling tidak dengan
Biodentine dan hasil penelitian ini bertentangan secara parsial dengan hasil yang sebelumnya.
melaporkan efek sinergis dari Emdogain dan MTA untuk membedakan SHED menjadi
odontoblast seperti sel dan meningkatkan mineralisasi. mengamati bahwa Emdogain
meningkatkan pengendapan kalsium dan juga meningkatkan beberapa penanda mineralisasi.
Duan et al. (2011) melaporkan itu Emdogain meningkatkan diferensiasi osteogenik yang
diinduksi Sel induk berpotensi majemuk dan hasil penelitian ini juga dalam perjanjian yang
serupa dengan laporan studi di atas. Sel induk berasal dari pulpa gigi dan liga periodontal
ment menunjukkan ekspresi faktor pertumbuhan seperti BMP, FGF, dan TGF yang mengatur
pembentukan dentin, sementum dan tulang mation ( Shi et al., 2005 ). Ketika cocok dan
biokompatibel bahan penutup pulp diaplikasikan pada pulp yang terluka dengan bantuan
lingkungan yang mampu, serangkaian proses dimulai yang merangsang sel batang pulpa gigi
berdiferensiasi menjadi sel odontoblastoid mempercepat deposisi jaringan keras pada pulpa
vital. Proses ini disebut sebagai 'dentinogenesis reparatif' (Guven et al., 2013 ). Dengan
demikian, jelas terbukti bahwa, meskipun sel memiliki integral faktor pertumbuhan, bahan
yang mengandung molekul bioinduktif sama pentingnya untuk menginduksi dan
meningkatkan perbedaan sel punca tiasi menjadi sel seperti odontoblast (Lin & Rosenberg,
2011 ).Hasil ini mendukung proposisi kami bahwa EMD memiliki tertinggi kontribusi untuk
ekspresi diferensiasi odontoblastik spidol. Dengan demikian, sesuai dengan hasil penelitian
sebelumnya.ies hasil kami membuktikan bahwa EMD dapat digunakan melalui kontak
langsung metode kebijaksanaan sebagai capping pulp langsung atau agen pulpotomi untuk
meningkatkan penyembuhan pulpa dari gigi sulung. Terlepas dari bio-kompatibilitas,
penelitian ini juga menguji kemampuan diferensiasi sel untuk menyediakan data tentang
penggunaan bahan bioinduktif yang aman untuk pulp prosedur pembatasan serta terapi
regenerative
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian ini, dapat disimpulkan, bahwa semua bahan yang diuji
menunjukkan biokompatibilitas yang memuaskan untuk mempertahankan viabilitas sel dan
mendorong proliferasi dan diferensiasi fungsional dari SHED. Dari tiga biomaterial
diuji,Emdogain menunjukkan viabilitas sel tertinggi, proliferasi dan kapasitas osteoinduksi /
odorinduksi diikuti oleh biodentine dan MTA masing-masing. Namun, lanjut in-vivo studi
eksperimental harus dilakukan di masa depan untuk berinvestasi gerbang kemanjuran
mereka.
 DAFTAR PUSTAKA

Al-Hezaimi, K., Javed, F., Al- Fouzan, K., Tay, F., 2013. Efficacy of
the enamel matrix derivative in direct pulp capping procedure: A
systemic review. Aust. Endod. J. 39, 171–175.
Arau´ jo, L.B., Cosme-Silva, L., Fernandes, A.P., et al, 2018. Effects of
mineral trioxide aggregate, Biodentine and calcium hydroxide on
viability, proliferation, migration and differentiation of stem cells
from human exfoliated deciduous teeth. J. Appl. Oral. Sci. 26.
e20160629.
Becker, A.J., McCulloch, E.A., Till, J.E., 1963. Cytological demonstration
of the clonal nature of spleen colonies derived from
transplanted mouse marrow cells. Nature 197, 452–454.
Buttke, T.M., McCubrey, J.A., Owen, T.C., 1993. Use of an aqueous
soluble tetrazolium / formazan assay to measure viability and
proliferation of lymphokine-dependent cell lines. J. Immunol.
Methods 157, 233–240.
Chang, S.W., Lee, S.Y., Ann, H.J., Kum, K.Y., Kim, E.C., 2014.
Effects of calcium silicate endodontic cements on biocompatibility
and mineralization-inducing potentials in human dental pulp cells.
J. Endod. 40, 1194–1200.
Charan, J., Kantharia, N.D., 2013. How to calculate sample size in
animal studies? J. Pharmacol. Pharmacotherapeutics 4, 303–306.
Collado-Gonza´ lez, M., Garcı´a-Bernal, D., On˜ ate-Sa´ nchez, R.E., et al,
2017. Cytotoxicity and bioactivity of various pulpotomy materials
on stem cells from human exfoliated primary teeth. Int. Endod. J.
50 (Suppl 2), e19–e30.
de Menezes, J.V., Takamori, E.R., Bijella, M.F., Granjeiro, J.M.,
2009. In vitro toxicity of MTA compared with other primary teeth
pulpotomy agents. J. Clin. Ped. Dent. 33, 217–221.
Duan, X., Tu, Q., Zhang, J., et al, 2011. Application of induced
pluripotent stem (iPS) cells in periodontal tissue regeneration. J.
Cell. Physiol. 226, 150–157.
El Meligy, O.A., Allazzam, S., Alamoudi, N.M., 2016. Comparison
between biodentine and formocresol for pulpotomy of primary
teeth: A randomized clinical trial. Quint. Int. 47, 571–580.
Goorha, S., Reiter, L.T., 2017. Culturing and neuronal differentiation
of human dental pulp stem cells. Curr. Protoc. Hum. Genet. 92,
21.6.1-, 21.6.10.
Guven, E.P., Tasli, P.N., Yalvac, M.E., Sofiev, N., Kayahan, M.B.,
Sahin, F., 2013. In vitro comparison of induction capacity and
biomineralization ability of mineral trioxide aggregate and a
bioceramic root canal sealer. Int. Endodontic. J. 46, 1173–1182.
Hargreaves, K.M., Geisler, T., Henry, M., Wang, Y., 2008. Regeneration
potential of the young permanent tooth: what does the
future hold? Ped. Dent. 30, 253–260.
Ishizaki, N.T., Matsumoto, K., Kimura, Y., Wang, X., Yamashita, A.,
2003. Histopathological study of dental pulp tissue capped with
enamel matrix derivative. J. Endod. 29, 176–179.
Kaida, H., Hamachi, T., Anan, H., Maeda, K., 2008. Wound healing
process of injured pulp tissues with emdogain gel. J. Endod. 34, 26–
30.
Ke´moun, P., Laurencin-Dalicieux, S., Rue, J., Farges, J.C., Gennero,
I., Conte-Auriol, F., et al, 2007. Human dental follicle cells acquire
cementoblast features under stimulation by BMP-2/-7 and enamel
matrix derivatives (EMD) in vitro. Cell Tissue. Res. 329, 283–294.
Kuratate, M., Yoshiba, K., Shigetani, Y., Yoshiba, N., Ohshima, H.,
Okiji, T., 2008. Immunohistochemical analysis of nestin, osteopontin,
and proliferating cells in the reparative process of exposed
dental pulp capped with mineral trioxide aggregate. J. Endod. 34,
970–974.
Kwon, Y., Choi, H., Lee, H., Lee, J., Weber, H., Pae, A., 2014.
Cellular viability and genetic expression of human gingival fibroblast
to zirconia with enamel matrix derivative (Emdogain). J. Adv.
Prosthod. 46, 406–414.
Lin, L.M., Rosenberg, P.A., 2011. Repair and regeneration in
endodontics. Int. Endod. J. 44, 889–906.