Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Daftar isi tersedia diSainsLangsung

Jaringan dan Sel

beranda jurnal:www.elsevier.com/locate/tice

Pengaruh pasta gigi anak-anak yang mengandung deterjen yang berbeda

pada viabilitas, diferensiasi osteogenik dan kondrogenik sel induk
ligamen periodontal gigi manusia dan sel induk gingiva in vitro
Sinem Birantsebuah,*, Yazgul Duranb, Muazzez Gokalpb, Tunc Akkocb, Figen Seymenc
sebuahUniversitas Istanbul-Cerrahpaşa, Fakultas Kedokteran Gigi, Departemen Pedodontik, Istanbul, Turki
bUniversitas Marmara, Fakultas Kedokteran, Departemen Alergi-Imunologi Anak, Istanbul, Turki
cUniversitas Istanbul, Fakultas Kedokteran Gigi, Departemen Pedodontik, Istanbul, Turki

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Latar belakang:Deterjen adalah senyawa yang paling umum digunakan dalam pasta gigi karena kemampuan berbusa dan
Pasta gigi membersihkannya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pasta gigi anak dengan kandungan deterjen
Sel induk
yang berbeda terhadap viabilitas, potensi diferensiasi osteogenik dan kondrogenik sel punca mesenkim manusia.
Anneksin V
Deterjen
Metode:Jaringan yang diperlukan untuk isolasi sel punca mesenkimal ligamen periodontal manusia (hPDLMSCs)
SLS
dan sel punca mesenkim gingiva manusia (hGMSCs) diperoleh selama ekstraksi 10 gigi molar ketiga yang
impaksi. Kelangsungan hidup sel yang distimulasi dengan konsentrasi yang berbeda dari larutan pasta gigi
Colgate, Sensodyne, Splat, Nenedent, Perlodent dan media elang modifikasi Dulbocco lengkap (kelompok kontrol)
dievaluasi dengan menggunakan flow cytometer. Selain itu, potensi diferensiasi osteogenik dan khondrogenik
dari sel punca mesenkim gingiva dan ligamen periodontal manusia yang terpapar larutan pasta gigi diperiksa
secara morfologis. Data dianalisis dengan IBM SPSS V23. Uji one way ANOVA digunakan untuk mengetahui
perbedaan antar kelompok untuk beberapa perbandingan,

Hasil:Persentase viabilitas sel yang lebih tinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol pada 20%, 50% dan 80% (p = 0,000)
pada hGMSC. Setelah kelompok Kontrol, rasio viabilitas sel tertinggi diamati pada kelompok Splat bebas deterjen (p
= 0,000) diikuti oleh kelompok eksperimen Sensodyne yang mengandung CABP (p = 0,000). Sedangkan tingkat viabilitas sel
pada kelompok Nenedent ditemukan secara signifikan lebih tinggi dibandingkan kelompok Perlodent pada konsentrasi lain
kecuali konsentrasi 20% (p = 0,000). Kelompok colgate memiliki persentase viabilitas sel terendah di antara kelompok
eksperimen pada semua konsentrasi pada hPDMSCs (p = 0,000). Rasio sel hidup tertinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol
(p = 0,000), diikuti oleh kelompok Splat dan Sensodyne (p = 0,000). Rasio viabilitas sel pada konsentrasi 50% lebih tinggi
pada kelompok Perlodent daripada kelompok Nenedent (p = 0,000).

Kesimpulan:Sebagai hasil dari temuan, diamati bahwa pasta gigi yang mengandung SLS memiliki efek yang
lebih negatif pada kelangsungan hidup sel dan potensi diferensiasi daripada kelompok lain.

Singkatan:MSC, sel punca mesenkim; hGMSC, sel punca mesenkim gingiva manusia; hPDLMSC, sel punca mesenkim periodontal manusia; GEC, sel epitel gingiva;
LC50, konsentrasi setengah dosis mematikan; SLS, natrium lauril sulfat; PDL, ligamen periodontal; CDMEM, medium elang termodifikasi lengkap dari dulbecco; CABP,
cocoamidopropyl betaine; DPBS, saline buffer fosfat dulbecco.
* Penulis yang sesuai di: Universitas Istanbul-Cerrahpaşa, Fakultas Kedokteran Gigi, Departemen Pedodontik, Istanbul, 34093, Turki.
Alamat email:sinembirant@istanbul.edu.tr (S.Birant),yazgul.duran@gmail.com (Y.Duran),muazzez.gklp@gmail.com (M.Gokalp),tuncakkoc@marmara.
edu.tr(T.Akkoc), fseymen@istanbul.edu.tr (F.Seymen).

https://doi.org/10.1016/j.tice.2021.101538
Diterima 4 Februari 2021; Diterima dalam bentuk revisi 22 Maret 2021; Diterima 23 Maret 2021
Tersedia online 26 Maret 2021
0040-8166 /© 2021 Elsevier Ltd. Hak cipta dilindungi undang-undang.
S. Birant dkk.
1. Perkenalan
Pasta gigi adalah produk perawatan pribadi yang ideal untuk menghilangkan
plak dari permukaan gigi dan untuk menjaga kebersihan mulut. Banyaknya
komponen dalam formulasi pasta gigi masing-masing memainkan peran yang
berbeda. Deterjen adalah senyawa yang paling umum digunakan dalam pasta
gigi karena sifatnya yang berbusa dan membersihkan.Maju dkk., 2000;Petersen
dkk., 2006).
Kelas deterjen anionik dan amfoter sering digunakan dalam pasta gigi.
Selain berbusa, mereka secara rutin ditambahkan ke pasta gigi untuk sifat
antibakteri dan penghambatan plak. (Buma dkk., 2006). Senyawa yang
paling sering digunakan dalam pasta gigi adalah sodium lauryl sulfate
(SLS) dari golongan detergen anionik. Deterjen anionik lain yang
digunakan dalam pasta gigi adalah sodium lauryl sarcosinate dan sodium
C14− 16 olefin sulfanate (Healy dkk., 2000).
SLS menghambat pertumbuhan sejumlah mikroorganisme. Efek
antimikroba SLS terkait dengan adsorpsi dan penetrasinya melalui
dinding sel berpori, diikuti oleh interaksinya dengan komponen
membran sel, lipid dan protein. Penetrasi oleh SLS ke dalam
membran sel menyebabkan peningkatan permeabilitas sel bakteri,
yang dapat menyebabkan kebocoran komponen intraseluler dan lisis
sel.Hukum dan Seow, 2006;Nordstrom et al., 2009).
Terlepas dari karakteristik positif ini, beberapa efek toksik SLS telah
dilaporkan. Dalam studi klinis, kerusakan epitel mulut, ulserasi dan
peradangan telah diamati disebabkan oleh SLS.Macdonald dkk., 2015).
Studi menunjukkan bahwa SLS dalam pasta gigi dapat menyebabkan
penurunan fungsi penghalang mukosa mulut dengan mendenaturasi
glikoprotein dari lapisan musin, yang menyebabkan gusi dan mukosa
bukal menjadi lebih sensitif terhadap iritasi seperti antigen
eksogen.Neppelberg dkk., 2007; Siegel dan Gordon, 1986). Juga dilaporkan
bahwa SLS mungkin bertanggung jawab atas penurunan keratinisasi epitel
mulut manusia. Telah terbukti bahwa SLS dapat menembus lapisan
mukosa yang lebih dalam, memecah lapisan musin, menyebabkan
denaturasi protein dalam sel epitel, meningkatkan kelarutan lipid struktural
sel dan mengganggu fungsi jaringan hidup.Macdonald dkk., 2015;Siegel
dan Gordon, 1986;Healy dkk., 1999). Meskipun SLS adalah surfaktan yang
paling umum dalam pasta gigi, surfaktan dengan efek samping yang lebih
sedikit seperti betaine juga digunakan. Cocoamidopropyl betaine (CAPB)
telah terbukti menyebabkan iritasi mukosa lebih sedikit daripada natrium
lauril sulfat.Cvikl et al., 2017; Cvikl et al., 2015). Cocoamidopropyl betaine,
karena sifatnya yang lebih ringan dan tingkat iritasi kulit yang rendah, lebih
sering terjadi pada pasta gigi anak-anak daripada pasta gigi orang dewasa
(Danov dkk., 2004; Herrwerth et al., 2008;McLachlan dan Marangoni, 2006).
Selain reaksi yang mungkin dimiliki deterjen pasta gigi ini dengan
jaringan mukosa mulut, efeknya pada sel juga penting. Uji sitotoksisitas
yang digunakan untuk menentukan biokompatibilitas suatu bahan dikenal
sebagai uji lini pertama. Tes sitotoksisitas ini adalah metode dimana
jumlah sel dan viabilitas dievaluasi, dan mereka adalah tes awal yang
digunakan untuk menentukan sifat biologis suatu bahan (Turkcan dan
Nalbant, 2016;Rodriguez-Lozano dkk., 2013).
Ketika studi tentang deterjen dipertimbangkan, menjadi jelas
bahwa sangat sedikit penelitian yang menyelidiki efek toksik pasta
gigi yang mengandung deterjen berbeda pada sel dan garis sel
seperti epitel dan keratinosit (Cvikl et al., 2015,2017).
Namun, juga sangat penting untuk mengetahui efeknya pada sel punca
mesenkim (MSC). Studi telah menunjukkan bahwa MSC berkontribusi pada
regenerasi jaringan dengan mengganti sel jaringan yang rusak, mereka
mendukung produksi banyak faktor dengan fungsi anti-inflamasi dan
berdiferensiasi menjadi sel mirip epitel pada infeksi mukosa (Hermann et
al., 2006;Kuroda dkk., 2010;Roddy dkk., 2011;Prockop dan Oh, 2012).
Selain itu, ligamen periodontal (PDL) MSCs berkontribusi pada
regenerasi periodonsium dengan berperan dalam pembentukan
sementum dan jaringan PDL in vivo.Seo dkk., 2004;Wang dkk., 2011;
Zhou dkk., 2008). Sel punca mesenkim gingival (GMSCs) juga
2
Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538
sangat penting untuk studi sel induk karena mudah diakses dan
dapat diperoleh dengan teknik isolasi sel invasif minimal, sementara
mereka juga memiliki sifat regeneratif dan imunodulator (Marynka-
Kalmani dkk., 2010;Zhang dkk., 2009;Thang dkk., 2011; Zhang dkk.,
2012a; Venkatesh et al., 2017).
Oleh karena itu, jika jenis deterjen yang digunakan dalam pasta gigi tidak
merusak MSC selama penyikatan, ini merupakan keuntungan yang signifikan
dalam kaitannya dengan menjaga kesehatan mukosa mulut atau mendukung
keberhasilan proses perawatan. Dengan mempertimbangkan faktor-faktor ini,
penelitian ini adalah yang pertama memasukkan efek sitotoksik pada sel punca
mesenkim gingiva dan sel punca mesenkim ligamen periodontal. Viabilitas MSC,
mempengaruhi kemampuannya untuk berkontribusi pada perbaikan luka dan
penyembuhan serta regenerasi jaringan periodontal, akan bergantung pada
potensi diferensiasinya. Mereka membantu dalam proses penyembuhan dan
perbaikan dengan bermigrasi ke jaringan yang berbeda dan dengan
berdiferensiasi menjadi jenis sel yang berbeda (Gronthos dkk., 2000). Oleh
karena itu, efek deterjen pasta gigi spesifik pada sel punca dan pada diferensiasi
osteogenik dan kondrogenik juga diselidiki dalam penelitian ini selain uji
viabilitas. Penelitian ini juga bertujuan untuk menyelidiki pengaruh pasta gigi
anak-anak dengan kandungan deterjen yang berbeda terhadap viabilitas dan
potensi diferensiasi osteogenik dan kondrogenik dari GMSC dan PDLMSC. Studi
ini adalah yang pertama untuk menguji efek pasta gigi yang mengandung
deterjen berbeda pada sel induk primer.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
Penelitian ini disetujui oleh komite etik Universitas Istanbul,
Fakultas Kedokteran Gigi (170/2017) mengikuti pedoman
Deklarasi Helsinki.
2.1. Isolasi sel punca mesenkim primer (MSC)
10 gigi geraham ketiga manusia, yang dicabut untuk alasan impak
dari pasien yang sehat secara sistemik (berusia 18-25 tahun)
digunakan untuk biopsi jaringan dan isolasi sel ligamen periodontal
(PDL). Sementara itu, jaringan gingiva yang mengelilingi soket gigi
dikumpulkan setelah pencabutan gigi. Jaringan PDL dipisahkan dari
permukaan sepertiga tengah akar di bawah tudung laminar. PDL dan
jaringan gingiva dibagi menjadi 1 mm 3potongan dengan menerapkan
metode pemisahan mekanis dengan pisau bedah. Setelah pencernaan
mikromekanis, larutan kolagenase disiapkan dalam 1 mL DPBS
(Dulbecco's phosphate buffered saline) (Gibco, Grand Island, NY,
USA) hingga 0,003gKolagenase tipe 1 (Gibco) dan 2 mL ditambahkan
ke jaringan yang terurai secara mikromekanis dan pencernaan
enzimatik dimulai. Jaringan yang hancur secara mekanis dimasukkan
ke dalam tabung steril 15 mL diinkubasi dalam inkubator selama 45
menit-1 jam pada suhu 37◦C, 5% CO2. Tabung yang terhubung ke
rotator divortex pada interval yang sering sampai suspensi sel.
Setelah tabung dikeluarkan dari inkubator, sel disentrifugasi pada
1500 rpm selama 5 menit dan sel dipindahkan ke T-25 cm 2labu dengan
media kultur 4 mL [45 mL DMEM (media elang modifikasi Dulbecco);
Gibco, 5 mL PBS; Gibco, 500 L penisilin; Gibco]. Media kultur diganti
setiap 2 hari dan proliferasi dan penyebaran sel pada labu dipantau
secara berkala dengan miskroskop terbalik (EVOS-AMG, Thermo
Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Sel dari bagian ke-3 digunakan
untuk eksperimen viabilitas dan diferensiasi.
2.2. Karakterisasi sel punca
Fenotipe hPDLMSC dan hGMSC yang diisolasi ditentukan dengan
analisis flow cytometry untuk ekspresi CD146-FITC, CD45-FITC, CD29-
APC, CD25-APC, CD105-PE, CD90-PE, CD73-PE, CD34-PE, CD28-PE dan
penanda CD14-PE (BD Biosciences, CA, USA). Sel (5×10 5
sel untuk setiap jenis sel) diinkubasi dengan antibodi spesifik untuk
penanda manusia yang terkait dengan garis keturunan mesenkim dan
hematopoietik pada suhu kamar dalam gelap. Hasil flow cytometry adalah
S. Birant dkk.
diperiksa menggunakan flow cytometer (BD, FACS Calibur, San Jose,
CA, USA).
Potensi diferensiasi ostogenik, kondrogenik, dan adipogenik sel
dianalisis menggunakan kit diferensiasi [Kit Diferensiasi
Osteogenesis Stem Pro (Thermo Fisher Scientific), Kit Diferensiasi
StemPro Chondrogenesis (Thermo Fisher Scientific), Kit Diferensiasi
Adipogenesis Stem Pro (Thermo Fisher Scientific)] . Sel-sel dilapisi
dalam 6 pelat sumur (5×105) sel/sumur) dan media diferensiasi
diterapkan pada sel sesuai dengan instruksi pabrik. Media diferensiasi
diganti 3 kali per minggu. Setelah 14 hari chondroctes dan adipoktes
diwarnai dengan Alcian Blue (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)) dan
Oil Red (Sigma-Aldrich) masing-masing. Setelah 28 hari, pewarnaan
Alizarin Red (Sigma-Aldrich) digunakan untuk karakterisasi osteosit.
Sel-sel pewarnaan dievaluasi menggunakan mikroskop binokular
(Olympus, BH2-RFCA, Olympus, Tokyo, Jepang).
2.3. Persiapan larutan pasta gigi
Pasta gigi yang digunakan dalam penelitian ini adalah Colgate6+ (jenis
deterjen: SLS), Sensodyne Pronamel 6+ (jenis deterjen: CAPB), Nenedent
(4− 9 umur) (jenis deterjen: Sodium Lauryl Sarcosinate), Perlodent Junior
6+ (jenis deterjen: Sodium C14-C16 Olefin Sulfanate), Splat Juicy (bebas
deterjen). Spesifikasi lengkapnya bisa dibaca di Tabel 1. Empat larutan
pasta gigi yang berbeda dibuat dari pasta gigi anak-anak yang digunakan
dalam penelitian ini. Untuk proses ini, jumlah pasta gigi ditimbang dalam
timbangan sensitif dan diencerkan dalam tabung plastik sterileconical
dalam medium kultur bebas serum. Pertama,
Tabel 1
Komposisi bahan dievaluasi.
Bahan: Komposisi
Colgate 6th Sorbitol, aqua, silika terhidrasi, PEG-12,
natrium lauril sulfat, gum selulosa,
natrium sakarin, natrium fluorida (1450
ppm F− ),aroma, hidroksipropil
metilselulosa, mentol, gliserin, kayu
manis, eugenol, limonene, CI 77891, CI
42.090
Anak-anak Nened Aqua, silika terhidrasi, gliserin, xylitol,
(4¡9 usia) propilen glikol, xanthan gum, titanium
dioksida, aroma,Sodium Lauryl
Sarcosinate, dinatrium EDTA,
sodiummonofluorophophate (500 ppm F
− ),natrium klorida
Perlodent Aqua, sorbitol, silika terhidrasi, propilen
Junior 6th glikol, tetrapotassium pyrophosphate,
xanthan gum,Natrium C14− 16 Olefin
Sulfonat,aroma, titanium dioksida,
natrium fluorida (1450 ppm F− ),natrium
sakarin, fenoksietanol, etilheksil gliserin
Sensodyne Aqua, sorbitol, silika terhidrasi, gliserin, PEG-6,
nama depan Cocamidopropil Betaine, permen karet
6th xanthan, aroma, natrium fluorida (1450 ppm F
− ),natrium sakarin, sukralosa, titanium
dioksida, natrium hidroksida, limonene
Percikan Berair Aqua*, dikalsium fosfat dihidrat*, hidrolisat
pati terhidrogenasi*,
gliserin*, hidroksiapatit, gom selulosa*,
aroma, gom xanthan*, kalium
tiosianat, laktoferin*, laktoperoksidase*,
glukosa oksidase*, glukosa pentaasetat,
ekstrak daun aloe barbadensis*, natrium
mthylparaben, kasein terhidrolisis*,
ekstrak akar glycyrrhiza glabra* (*asal
alami)
Menyelesaikan %10 oranında FBS (Fötal sr serumu), % 1
DMEM penisilin/ streptomycin ilave edilmiş
(CDMEM) DMEM (Media Elang Modifikasi Dulbecco)
Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538
larutan pasta gigi diperoleh pada konsentrasi 80% dari masing-masing
pasta gigi. Kemudian, larutan pasta gigi konsentrasi 80% diencerkan
dengan DMEM (Gibco) dan disiapkan konsentrasi 50%, 20% dan 0,4%.
Solusi yang disiapkan divorteks untuk mendapatkan campuran pasta gigi
yang homogen. Larutan pasta gigi homogen diinkubasi selama 24 jam pada
suhu 37◦C dalam 5% CO . yang dilembabkan2lingkungan. untuk
mendapatkan cairan ekstraksi sesuai dengan ISO(Organisasi Internasional
untuk Standardisasi) 10993− 12 standar (2007). Selanjutnya masing-masing
tabung disentrifugasi dengan kecepatan 4200 rpm selama 10 menit. Setelah
sentrifugasi partikel padat dikumpulkan di bagian bawah tabung dan
larutan pasta gigi dilewatkan melalui filter 0,22 m 2 kali untuk
menghilangkan partikel kecil yang tersisa. Ekstrak bahan diperoleh untuk
uji viabilitas sel (ISO 10993-5, 2009).
2.4. Evaluasi viabilitas sel dengan flow cytometry
GMSC dan PDLMSC (5×105sel untuk setiap larutan pasta gigi) disepuh ke
dalam piring 48-sumur. Kemudian sel-sel tersebut diekspos selama 2 menit pada
konsentrasi pasta gigi yang berbeda, dicuci dengan PBS dan disuspensikan
dalam medium bebas serum. 4 L Annexin V (BD Biosciences) ditambahkan ke
dalam tabung dan disimpan di tempat gelap selama 10 menit. Kemudian 200 L
buffer pengikat ditambahkan dan disentrifugasi pada 1500 rpm selama 5 menit
untuk menghilangkan supernatan. Tabung divorteks dengan 200 L binding
buffer dan ditambahkan 10 L propidium iodida untuk membaca efek larutan
pasta gigi pada rasio sel apoptosis hidup, nekrosis, awal dan akhir. Eksperimen
viabilitas yang dilakukan dengan flow cytometry diulang 5 kali, dan rata-rata nilai
yang diperoleh dihitung dan proporsi sel yang viabel, apotosis awal, apoptosis
akhir dan nekrotik ditentukan.
2.5. Mengevaluasi potensi diferensiasi sel induk
Untuk pemeriksaan potensi diferensiasi sel GMSC dan PDLMSC
diunggulkan dengan 5×105sel per sumur dengan memasukkan kaca
Pabrikan
penutup berlapis kolagen tipe I ke masing-masing dari 6 pelat sumur. Sel-
Colgate Palmolive
sel pada masing-masing well distimulasi dengan media diferensiasi 2 mL
Perusahaan, Belgia
setelah distimulasi dengan larutan pasta gigi konsentrasi % 0,4 selama 2
menit. Pada akhir hari ke-21 dilakukan pewarnaan Alizarin Red; kepadatan
kalsifikasi dan morfologi sel dievaluasi pada mikroskop penelitian
binokular (Olympus, BH2-RFCA) untuk pemeriksaan potensi diferensiasi
Dentinox, Berlin, osteogenik. Pada akhir hari ke-14 dilakukan pewarnaan Alcian Blue;
Jerman kehadiran proteoglikan dan morfologi sel dievaluasi pada mikroskop
penelitian binokular (Olympus, BH2-RFCA) untuk pemeriksaan potensi
diferensiasi kondrogenik. Pada akhir hari ke-14 dilakukan pewarnaan Oil
Red O;
Rossmann,
Jerman
2.6. Analisis statistik
Data dianalisis dengan IBM SPSS V23. Uji one way ANOVA digunakan untuk
Glaxo Smith Kline, mengetahui perbedaan antar kelompok untuk beberapa perbandingan,
ABD
sedangkan uji Tukey post-hoc digunakan untuk perbandingan berpasangan
dalam menentukan kelompok mana yang berbeda.
Perdagangan Percikan SIA, 3. Hasil
Okulovka, Rusia
3.1. Isolasi dan karakterisasi sel
Sel-sel yang diisolasi dan mencapai bagian ketiga (hGMSC dan hPDLMSC)
menunjukkan morfologi seperti fibroblas berbentuk gelendong (Gambar 1,
Gambar 2Gambar. 1,2 ). Sebagai hasil analisis penanda permukaan dengan
menggunakan sitometri aliran, baik GMSC dan PDLMSC menunjukkan positif
Gibco, Grand yang kuat untuk penanda sel punca mesenkim seperti CD105, CD146, CD90,
Pulau, AS CD73 dan CD29, sedangkan ekspresi negatif penanda permukaan yang terkait
dengan sel punca hematopoietik adalah terdeteksi (CD45, CD34, CD25, CD28
dan CD14) ( Gambar 3, Gambar. 4Gambar. 3,4).
3
S. Birant dkk. Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Gambar 1.Penampilan morfologis hGMSC (x10). (A) hGMSC pada 0thbagian 0 (B) hGMSC pada 1stbagian (C) hGMSC pada 2danbagian (D) hGMSC pada 3rdjalan.

Gambar 2.Penampilan morfologis hPDLMSCs (x10). (A) hPDLMSC pada 0 thbagian 0 (B) hPDLMSC pada 1stbagian (C) hPDLMSC pada 2danbagian (D) hPDLMSC pada 3rdjalan.

Dalam uji diferensiasi osteogenik hGMSC dan hPDLMSC, pembentukan
nodul termineralisasi dan diferensiasi menjadi sel mirip osteosit terdeteksi.
Adanya endapan kalsium yang diwarnai dengan warna merah diamati.
Dalam percobaan diferensiasi adipogenik, diferensiasi menjadi sel
mirip adiposit dan pembentukan tetesan minyak di dalam sel
terdeteksi. Kehadiran intraseluler merah-merah muda cerah
tetesan minyak diamati. Dalam percobaan diferensiasi khondrogenik,
diferensiasi menjadi sel mirip kondrosit diamati dengan pembentukan
proteoglikan yang diwarnai dengan warna biru kehijauan di dalam sel (
Gambar. 5, Gambar. 6Gambar. 5,6). Dari hasil pemeriksaan morfologi,
penentuan potensi diferensiasi trilineage dan analisis penanda dengan
menggunakan flow cytometry, terbukti bahwa sel diisolasi

4
S. Birant dkk. Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Gambar 3.Penentuan karakteristik imunofenotipik hGMSC dengan flow cytometry.

Gambar 4.Penentuan karakteristik imunofenotipik hPDLMSCs oleh flow cytometry.

5
S. Birant dkk. Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Gambar 5.Analisis diferensiasi dalam hGMSC. A, Diferensiasi hGMSC menjadi osteoblas dikonfirmasi oleh pewarna merah Alizarin (x40). B, Diferensiasi hGMSC
menjadi kondroit dikonfirmasi oleh pewarnaan biru Alcian (x40). C, Diferensiasi hGMSC menjadi adiposit dikonfirmasi oleh pewarnaan Minyak merah (x40).

Gambar 6.Analisis diferensiasi dalam hPDLMSCs. A, Diferensiasi PDLMSC menjadi osteoblas dikonfirmasi oleh pewarna merah Alizarin (x40). B, Diferensiasi
PDLMSC menjadi kondroit dikonfirmasi oleh pewarnaan biru Alcian (x40). C, Diferensiasi PDLMSC menjadi adiposit dikonfirmasi oleh pewarnaan Oil red o (x40).

menunjukkan karakteristik sel punca mesenkimal (Gambar. 3, 4, 5, 6).

Tabel 3
Perbandingan viabilitas PDLMCH antar kelompok.
3.2. Viabilitas sel dalam sel yang dikultur terpapar pasta gigi anak-anak

yang mengandung kandungan deterjen yang berbeda Konsentrasi

Persentase viabilitas sel pada hGMSC diwakili dalam Meja 2. Kelompok

0,4% 20% 50% 80%
colgate dengan GMCH memiliki nilai lebih rendah dari semua kelompok pada
konsentrasi 20%, 50% dan 80% (p<0,05). Persentase viabilitas sel yang lebih
tinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol pada 20%, 50% dan 80% (p< 0,05). Colgate 6th 64.74± 42.96± 20.96± 13.05±

Setelah kelompok Kontrol, rasio viabilitas sel tertinggi diamati pada kelompok 1.33a 2.15a 2.54a 2.07a
Splat bebas deterjen diikuti oleh kelompok eksperimen Sensodyne yang Percikan Berair 80.54± 78,98± 75.38± 67.41±
mengandung CABP (p<0,05). Tidak ada perbedaan yang signifikan antara 1.65b 2.36b 1.98b 1.58b
kelompok Nenedent dan Perlodent dalam hal tingkat viabilitas 20%, sedangkan
Sensodyne 75.20± 71.68± 57.83± 52.31±
tingkat viabilitas sel pada kelompok Nenedent ditemukan secara signifikan lebih
Pronama 6th 1.87c 2.11c 1.05c 1.89c
tinggi daripada kelompok Perlodent pada konsentrasi lain kecuali konsentrasi
20% (hal.<0,05) (Meja 2). Anak-anak Nened 68.06± 50.42± 34.6± 24.4±1.5d

1.63d 1.48d 1.41d

Perlodent Junior 70.47± 53,82± 41.13± 25.6±

6th 1.89d 2.16d 2.07e 1.67d

CDMEM 84.11± 84.11± 84.11± 84.11±

1.08e 1.08e 1.08f 1.08e

p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*
Persentase viabilitas sel pada hPDLMSCs diwakili dalam abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji
ANOVA Satu Arah; Tes post-hoc Tukey.
Meja 2 * Nilai p signifikan pada taraf 0,05.
Perbandingan viabilitas GMCH antar kelompok.

Perlodent Junior 76,34± 60.4± 45.25± 26.72±

Konsentrasi
6th 1.3b 0.95d 1.21e 0.98e

CDMEM 89,54± 89,54± 89,54± 89,54±

0,40 % 20% 50% 80%
1.27d 1.27e 1.27f 1.27f
p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*
Colgate 6th 73,86± 33±2.87a 20.55± 15.05±
abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji
2.6ab 2.51a 3.07a
ANOVA Satu Arah; Tes post-hoc Tukey.
Percikan Berair 88.11± 82.93± 79,81± 75.52± * Nilai p signifikan pada taraf 0,05.
0.9d 1.23b 1.06b 1.15b

Sensodyne 80.55± 72.73± 62.8± 51.92±

Pronama 6th 1.19c 1.57c 1.21c 1.28c

Anak-anak Nened 72.21± 60.73± 49.74± 33.53±

0.92a 1.09d 1.21d 1.41d

Tabel 3. Kelompok colgate memiliki persentase viabilitas sel terendah di antara
kelompok eksperimen pada semua konsentrasi (p<0,05). Rasio sel hidup
tertinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol, diikuti oleh kelompok Splat dan
Sensodyne (p<0,05). Rasio viabilitas sel pada konsentrasi 50% lebih tinggi pada
kelompok Perlodent daripada kelompok Nenedent (p<0,05).
Persentase laju sel mati pada hPDLMSC diwakili dalam: Tabel 4. Dalam
evaluasi tingkat sel apoptosis awal, tingkat apoptosis awal terendah di
antara pasta gigi ditemukan pada kelompok Splat pada semua konsentrasi
(hal.<0,05). Dalam evaluasi tingkat sel apoptosis akhir, perbedaan yang
6
signifikan secara statistik ditemukan antara kelompok pada semua
konsentrasi. Sedangkan tingkat sel apoptosis akhir tertinggi pada
konsentrasi 0,4% dan 80% terdeteksi pada kelompok Colgate (hal.<0,05)
dan kelompok Nedent pada konsentrasi 20% (p<0,05), tidak ada perbedaan
signifikan yang ditemukan antara kelompok Colgate dan Nedent pada
konsentrasi 50%. Dalam evaluasi tingkat nekrosis pada hPDLMSC, tingkat
sel nekrotik tertinggi secara statistik ditemukan di Colgate
S. Birant dkk. Persentase laju sel mati pada hGMSC diwakili dalam: Tabel 5. Sementara
tingkat terendah dari sel-sel apoptosis awal terdeteksi pada kelompok Kontrol
Tabel 4 dan kelompok Splat di semua konsentrasi, tingkat terendah dari apoptosis awal
Perbandingan tingkat sel mati pada hPDLMSC antar kelompok. umumnya ditemukan pada kelompok Sensodyne setelah kelompok-kelompok ini
(hal.<0,05). Tingkat tertinggi dari apoptosis akhir pada semua konsentrasi
Apoptosis dini Konsentrasi
ditemukan pada kelompok Colgate (p<0,05). Tidak ada perbedaan signifikan
yang ditemukan antara kelompok Colgate, Nenedent dan perlodent pada
0,4% 20% 50% 80% konsentrasi 0,4%. Dalam evaluasi rasio sel nekrotik, rasio sel nekrotik terendah
pada semua konsentrasi ditemukan pada kelompok Splat setelah kelompok
Colgate 6th 16.29± 26.93± 42.46± 40.85± Kontrol (hal.<0,05).

2.05c 3.07 cd 6.05c 1.18d

3.3. Evaluasi potensi diferensiasi osteogenik dalam MSC
Percikan Berair 7.18± 7.82±0.3a 10.65± 17.41±

2.85a 0.6a 1.52b Potensi diferensiasi osteogenik dari hGMSC dan hPDLMSC yang
Sensodyne 11.19± 15.06± 27.18± 33.79± terpapar larutan pasta gigi yang berbeda dinilai secara kualitatif dengan
Pronama 6th 2.03b 2.37b 1.74b 2.25c pewarnaan intens untuk pewarnaan Alizarin Red dan adanya endapan
Anak-anak Nened 20.26± 26.34±2c 38.9± 41.91± kalsium ekstraseluler yang diwarnai merah oranye terang. Gambar hGMSC
0.83d 1.56c 2.52d dan hPDLMSC yang distimulasi dengan media diferensiasi osteogenik
Perlodent Junior 17.36± 30.3± 36.76± 30.72±
6th 1.72 cd 1.41d 3.49c 2.96c

CDMEM 6.91± 6.91± 6.91± 6.91±

1.13a 1.13a 1.13a 1.13a

p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*

Apoptosis terlambat Konsentrasi

0,4% 20% 50% 80%

Colgate 6th 9.88± 12.64± 18.77± 28.02±

2.03c 2.01d 2.24d 2.58d

Percikan Berair 5.63± 6.51± 6.1±0.97b 5.39±

1.12b 1.28bc 0.69ab

Sensodyne 7.2± 5.36± 6.83± 6±0.89b

Pronama 6th 0.95b 0.94ab 0.53b

Anak-anak Nened 5.38± 15.98± 18.2±1.53 20.65±

1.4ab 1.02e CD 1.83c

Perlodent Junior 6.42± 9.02± 15.47± 19.4±1.3c

6th 1.18b 1.12c 2.01c

CDMEM 2.81± 2.81± 2.81± 2.81±

1.21a 1.21a 1.21a 1.21a

p 0,001* 0,000* 0,000* 0,000*

Nekrosis Konsentrasi

0,4% 20% 50% 80%

Colgate 6th 9.1± 17.47± 17.81± 18.09±

0.81a 1.52a 1.96a 1.87d

Percikan Berair 6.65± 6.69± 7.87± 9.78±

1.42b 1.22b 0.95b 1.11b

Sensodyne 6.41± 7.9± 1.03b 8.17± 7.91±

Pronama 6th 1.5b 0.69b 0.56ab

Anak-anak Nened 6.3± 7.26± 7.91± 13.03±

0.83b 0.87b 1.15b 1.03c

Perlodent Junior 5,75± 6.85± 6.62± 24.26±

6th 1.45b 0.93b 1.61b 1.13e

CDMEM 6.17± 6.17± 6.17± 6.17±

0.97b 0.97b 0.97b 0.97a

p 0,003* 0,000* 0,000* 0,000*

abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji

ANOVA Satu Arah; Tes post-hoc Tukey.
* Nilai p signifikan pada taraf 0,05.

kelompok pada konsentrasi 0,4%, 20% dan 50% (p<0,05).

 Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Tabel 5 Nekrosis Konsentrasi

Perbandingan tingkat sel mati pada hGMSC antar kelompok.

0,4% 20% 50% 80%

Apoptosis dini Konsentrasi

Colgate 6th 11.78± 23.69± 21.73± 20.66±

0,4% 20% 50% 80%
1.63b 1.69e 2.15e 2.77c

Percikan Berair 6.97± 9.1±0.9b 11.35± 11.94±

Colgate 6th 6.55±1.29 22.17± 24.61± 21.64±
0.91a 0.59b 0.78b
CD 1.8d 2.28d 4.56c
Sensodyne 10.91± 11.44± 15.43± 19.65±
Percikan Berair 2.36±1.01a 3.71± 3.06± 6.22±
Pronama 6th 1.27b 1.27c 1.38c 1.51c
0.92a 1.02a 0.69a
Anak-anak Nened 12.92± 18.55± 19.57± 23.86±
Sensodyne 4.14± 8.96± 14.08± 15.6±
0.77b 1.57d 1.58de 1.02d
Pronama 6th 1.02abc 0.42c 0.91b 0.91b
Perlodent Junior 11.43± 20.57± 18.09± 25.87±
Anak-anak Nened 7.12± 10.17± 12,99± 21.04±
6th 1.61b 1.36d 0,95 cd 1.8d
1.67d 1.36c 1.06b 2.14c
CDMEM 6.26± 6.26± 6.26±1.11a 6.26±
Perlodent Junior 5.11± 6.44± 20.15± 26.37±
1.11a 1.11a 1.11a
6th 1.66bcd 1.09b 1.17c 2.09d
p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*
CDMEM 2.62± 2.62± 2.62± 2.62±
abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji
1.26ab 1.26a 1.26a 1.26a ANOVA Satu Arah; Tes post-hoc Tukey.
p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* * Nilai p signifikan pada taraf 0,05.

Apoptosis terlambat Konsentrasi setelah inkubasi dalam larutan pasta gigi yang berbeda untuk konsentrasi pasta
gigi 0,4% ditunjukkan pada:Gambar 7, Gambar. 9Gambar. 7 dan 9. masing-
masing. Dalam GMSC dan PDLMSC, jumlah tertinggi sel mirip osteoblas dan
0,4% 20% 50% 80%
akumulasi kalsium termineralisasi diamati pada kelompok Kontrol. Pada
kelompok Splat, konsentrasi kalsium sedikit lebih rendah daripada kelompok
Colgate 6th 7.81± 21.14± 31.13± 42.64± Kontrol tetapi jika dibandingkan dengan kelompok eksperimen lainnya, nodul
1.28c 2.18d 1.91d 2.18a kalsium paling kuat ditemukan pada kelompok ini. Pada kelompok Sensodyne,
Percikan Berair 2.57± 4.25± 5.78± 6.32± potensi diferensiasi osteogenik sedikit lebih rendah daripada kelompok CDMEM
dan Splat, tetapi ditemukan cukup tinggi pada kelompok Nenedent, Perlodent
0.45a 0,95a 0.59b 0.92b
dan Colgate. Sementara kelompok Perlodent mengandung nodul kalsium jauh
Sensodyne 4.79± 7.1±1.13b 7.66± 10.83±
lebih sedikit daripada kelompok CDMEM, Splat dan Sensodyne dalam hal adanya
Pronama 6th 1.13b 1.09b 1.12c
endapan kalsium, itu diperiksa pada gambar mikroskop yang mengandung nodul
Anak-anak Nened 7.75± 10.54± 17.69± 21.57± sedikit lebih termineralisasi daripada kelompok Nenedent dan Colgate.
0.66c 1.71c 0.95c 0.87d Keberadaan nodul kalsium pada kelompok Perlodent dan Nenedent berdekatan
Perlodent Junior 7.13± 12.59± 16.51± 21.04± satu sama lain tetapi deposit kalsium yang terdeteksi pada kelompok Nenedent
6th 0.83c 1.09c 0.62c 1.05d lebih sedikit. Jumlah terendah dari deposisi kalsium intraseluler dan adanya sel
apoptosis yang intens diamati pada kelompok Colgate. (Gambar. 7 dan 9).
CDMEM 1.58± 1.58± 1.58± 1.58±

0.73a 0.73a 0.73a 0.73e

p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*