Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Daftar isi tersedia diSainsLangsung

Jaringan dan Sel

beranda jurnal:www.elsevier.com/locate/tice

Pengaruh pasta gigi anak-anak yang mengandung deterjen yang berbeda

pada viabilitas, diferensiasi osteogenik dan kondrogenik sel induk ligamen
periodontal gigi manusia dan sel induk gingiva in vitro

Sinem Birantsebuah,*, Yazgul Duranb, Muazzez Gokalpb, Tunc Akkocb, Figen Seymenc
sebuahUniversitas Istanbul-Cerrahpaşa, Fakultas Kedokteran Gigi, Departemen Pedodontik, Istanbul, Turki
bUniversitas Marmara, Fakultas Kedokteran, Departemen Alergi-Imunologi Anak, Istanbul, Turki
c Universitas Istanbul, Fakultas Kedokteran Gigi, Departemen Pedodontik, Istanbul, Turki

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Latar belakang:Deterjen adalah senyawa yang paling umum digunakan dalam pasta gigi karena kemampuan berbusa dan
Pasta gigi membersihkannya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pasta gigi anak dengan kandungan deterjen yang
Sel induk berbeda terhadap viabilitas, potensi diferensiasi osteogenik dan kondrogenik sel punca mesenkim manusia.
Anneksin V
Deterjen
Metode:Jaringan yang diperlukan untuk isolasi sel punca mesenkimal ligamen periodontal manusia (hPDLMSCs) dan
SLS
sel punca mesenkim gingiva manusia (hGMSCs) diperoleh selama ekstraksi 10 gigi molar ketiga yang impaksi.
Kelangsungan hidup sel yang distimulasi dengan konsentrasi yang berbeda dari larutan pasta gigi Colgate,
Sensodyne, Splat, Nenedent, Perlodent dan media elang modifikasi Dulbocco lengkap (kelompok kontrol) dievaluasi
dengan menggunakan flow cytometer. Selain itu, potensi diferensiasi osteogenik dan khondrogenik dari sel punca
mesenkim gingiva dan ligamen periodontal manusia yang terpapar larutan pasta gigi diperiksa secara morfologis.
Data dianalisis dengan IBM SPSS V23. Uji one way ANOVA digunakan untuk mengetahui perbedaan antar kelompok
untuk beberapa perbandingan,

Hasil:Persentase viabilitas sel yang lebih tinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol pada 20%, 50% dan 80% (p = 0,000)
pada hGMSC. Setelah kelompok Kontrol, rasio viabilitas sel tertinggi diamati pada kelompok Splat bebas deterjen (p
= 0,000) diikuti oleh kelompok eksperimen Sensodyne yang mengandung CABP (p = 0,000). Sedangkan tingkat
viabilitas sel pada kelompok Nenedent ditemukan secara signifikan lebih tinggi dibandingkan kelompok Perlodent
pada konsentrasi lain kecuali konsentrasi 20% (p = 0,000). Kelompok colgate memiliki persentase viabilitas sel
terendah di antara kelompok eksperimen pada semua konsentrasi pada hPDMSCs (p = 0,000). Rasio sel hidup
tertinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol (p = 0,000), diikuti oleh kelompok Splat dan Sensodyne (p = 0,000). Rasio
viabilitas sel pada konsentrasi 50% lebih tinggi pada kelompok Perlodent daripada kelompok Nenedent (p = 0,000).

Kesimpulan:Sebagai hasil dari temuan, diamati bahwa pasta gigi yang mengandung SLS memiliki efek yang lebih
negatif pada kelangsungan hidup sel dan potensi diferensiasi daripada kelompok lain.

Singkatan:MSC, sel punca mesenkim; hGMSC, sel punca mesenkim gingiva manusia; hPDLMSC, sel punca mesenkim periodontal manusia; GEC, sel epitel gingiva; LC50,
konsentrasi setengah dosis mematikan; SLS, natrium lauril sulfat; PDL, ligamen periodontal; CDMEM, medium elang termodifikasi lengkap dari dulbecco; CABP,
cocoamidopropyl betaine; DPBS, saline buffer fosfat dulbecco.
* Penulis yang sesuai di: Universitas Istanbul-Cerrahpaşa, Fakultas Kedokteran Gigi, Departemen Pedodontik, Istanbul, 34093, Turki.
Alamat email:sinembirant@istanbul.edu.tr (S.Birant),yazgul.duran@gmail.com (Y.Duran),muazzez.gklp@gmail.com (M.Gokalp),tuncakkoc@marmara. edu.tr(T.Akkoc),
fseymen@istanbul.edu.tr (F.Seymen).

https://doi.org/10.1016/j.tice.2021.101538
Diterima 4 Februari 2021; Diterima dalam bentuk revisi 22 Maret 2021; Diterima 23 Maret 2021
Tersedia online 26 Maret 2021
0040-8166 /© 2021 Elsevier Ltd. Hak cipta dilindungi undang-undang.
S. Birant dkk.
1. Perkenalan
Pasta gigi adalah produk perawatan pribadi yang ideal untuk menghilangkan
plak dari permukaan gigi dan untuk menjaga kebersihan mulut. Banyaknya
komponen dalam formulasi pasta gigi masing-masing memainkan peran yang
berbeda. Deterjen adalah senyawa yang paling umum digunakan dalam pasta gigi
karena sifatnya yang berbusa dan membersihkan.Maju dkk., 2000;Petersen dkk.,
2006).
Kelas deterjen anionik dan amfoter sering digunakan dalam pasta gigi.
Selain berbusa, mereka secara rutin ditambahkan ke pasta gigi untuk sifat
antibakteri dan penghambatan plak. (Buma dkk., 2006). Senyawa yang
paling sering digunakan dalam pasta gigi adalah sodium lauryl sulfate (SLS)
dari golongan detergen anionik. Deterjen anionik lain yang digunakan
dalam pasta gigi adalah sodium lauryl sarcosinate dan sodium C14− 16
olefin sulfanate (Healy dkk., 2000).
SLS menghambat pertumbuhan sejumlah mikroorganisme. Efek
antimikroba SLS terkait dengan adsorpsi dan penetrasinya melalui
dinding sel berpori, diikuti oleh interaksinya dengan komponen
membran sel, lipid dan protein. Penetrasi oleh SLS ke dalam membran
sel menyebabkan peningkatan permeabilitas sel bakteri, yang dapat
menyebabkan kebocoran komponen intraseluler dan lisis sel.Hukum
dan Seow, 2006;Nordstrom et al., 2009).
Terlepas dari karakteristik positif ini, beberapa efek toksik SLS telah
dilaporkan. Dalam studi klinis, kerusakan epitel mulut, ulserasi dan
peradangan telah diamati disebabkan oleh SLS.Macdonald dkk., 2015). Studi
menunjukkan bahwa SLS dalam pasta gigi dapat menyebabkan penurunan
fungsi penghalang mukosa mulut dengan mendenaturasi glikoprotein dari
lapisan musin, yang menyebabkan gusi dan mukosa bukal menjadi lebih
sensitif terhadap iritasi seperti antigen eksogen.Neppelberg dkk., 2007;
Siegel dan Gordon, 1986). Juga dilaporkan bahwa SLS mungkin bertanggung
jawab atas penurunan keratinisasi epitel mulut manusia. Telah terbukti
bahwa SLS dapat menembus lapisan mukosa yang lebih dalam, memecah
lapisan musin, menyebabkan denaturasi protein dalam sel epitel,
meningkatkan kelarutan lipid struktural sel dan mengganggu fungsi
jaringan hidup.Macdonald dkk., 2015;Siegel dan Gordon, 1986;Healy dkk.,
1999). Meskipun SLS adalah surfaktan yang paling umum dalam pasta gigi,
surfaktan dengan efek samping yang lebih sedikit seperti betaine juga
digunakan. Cocoamidopropyl betaine (CAPB) telah terbukti menyebabkan
iritasi mukosa lebih sedikit daripada natrium lauril sulfat.Cvikl et al., 2017;
Cvikl et al., 2015). Cocoamidopropyl betaine, karena sifatnya yang lebih
ringan dan tingkat iritasi kulit yang rendah, lebih sering terjadi pada pasta
gigi anak-anak daripada pasta gigi orang dewasa (Danov dkk., 2004;
Herrwerth et al., 2008;McLachlan dan Marangoni, 2006).
Selain reaksi yang mungkin dimiliki deterjen pasta gigi ini dengan
jaringan mukosa mulut, efeknya pada sel juga penting. Uji sitotoksisitas
yang digunakan untuk menentukan biokompatibilitas suatu bahan
dikenal sebagai uji lini pertama. Tes sitotoksisitas ini adalah metode
dimana jumlah sel dan viabilitas dievaluasi, dan mereka adalah tes awal
yang digunakan untuk menentukan sifat biologis suatu bahan (Turkcan
dan Nalbant, 2016;Rodriguez-Lozano dkk., 2013).
Ketika studi tentang deterjen dipertimbangkan, menjadi jelas
bahwa sangat sedikit penelitian yang menyelidiki efek toksik pasta gigi
yang mengandung deterjen berbeda pada sel dan garis sel seperti
epitel dan keratinosit (Cvikl et al., 2015,2017).
Namun, juga sangat penting untuk mengetahui efeknya pada sel punca
mesenkim (MSC). Studi telah menunjukkan bahwa MSC berkontribusi pada
regenerasi jaringan dengan mengganti sel jaringan yang rusak, mereka
mendukung produksi banyak faktor dengan fungsi anti-inflamasi dan
berdiferensiasi menjadi sel mirip epitel pada infeksi mukosa (Hermann et al.,
2006;Kuroda dkk., 2010;Roddy dkk., 2011;Prockop dan Oh, 2012).
Selain itu, ligamen periodontal (PDL) MSCs berkontribusi pada
regenerasi periodonsium dengan berperan dalam pembentukan
sementum dan jaringan PDL in vivo.Seo dkk., 2004;Wang dkk., 2011;
Zhou dkk., 2008). Sel punca mesenkim gingival (GMSCs) juga
2
Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538
sangat penting untuk studi sel induk karena mudah diakses dan dapat
diperoleh dengan teknik isolasi sel invasif minimal, sementara mereka
juga memiliki sifat regeneratif dan imunodulator (Marynka-Kalmani
dkk., 2010;Zhang dkk., 2009;Thang dkk., 2011; Zhang dkk., 2012a;
Venkatesh et al., 2017).
Oleh karena itu, jika jenis deterjen yang digunakan dalam pasta gigi tidak
merusak MSC selama penyikatan, ini merupakan keuntungan yang signifikan
dalam kaitannya dengan menjaga kesehatan mukosa mulut atau mendukung
keberhasilan proses perawatan. Dengan mempertimbangkan faktor-faktor ini,
penelitian ini adalah yang pertama memasukkan efek sitotoksik pada sel punca
mesenkim gingiva dan sel punca mesenkim ligamen periodontal. Viabilitas MSC,
mempengaruhi kemampuannya untuk berkontribusi pada perbaikan luka dan
penyembuhan serta regenerasi jaringan periodontal, akan bergantung pada
potensi diferensiasinya. Mereka membantu dalam proses penyembuhan dan
perbaikan dengan bermigrasi ke jaringan yang berbeda dan dengan
berdiferensiasi menjadi jenis sel yang berbeda (Gronthos dkk., 2000). Oleh karena
itu, efek deterjen pasta gigi spesifik pada sel punca dan pada diferensiasi
osteogenik dan kondrogenik juga diselidiki dalam penelitian ini selain uji viabilitas.
Penelitian ini juga bertujuan untuk menyelidiki pengaruh pasta gigi anak-anak
dengan kandungan deterjen yang berbeda terhadap viabilitas dan potensi
diferensiasi osteogenik dan kondrogenik dari GMSC dan PDLMSC. Studi ini adalah
yang pertama untuk menguji efek pasta gigi yang mengandung deterjen berbeda
pada sel induk primer.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
Penelitian ini disetujui oleh komite etik Universitas Istanbul,
Fakultas Kedokteran Gigi (170/2017) mengikuti pedoman Deklarasi
Helsinki.
2.1. Isolasi sel punca mesenkim primer (MSC)
10 gigi geraham ketiga manusia, yang dicabut untuk alasan impak
dari pasien yang sehat secara sistemik (berusia 18-25 tahun) digunakan
untuk biopsi jaringan dan isolasi sel ligamen periodontal (PDL).
Sementara itu, jaringan gingiva yang mengelilingi soket gigi
dikumpulkan setelah pencabutan gigi. Jaringan PDL dipisahkan dari
permukaan sepertiga tengah akar di bawah tudung laminar. PDL dan
jaringan gingiva dibagi menjadi 1 mm3potongan dengan menerapkan
metode pemisahan mekanis dengan pisau bedah. Setelah pencernaan
mikromekanis, larutan kolagenase disiapkan dalam 1 mL DPBS
(Dulbecco's phosphate buffered saline) (Gibco, Grand Island, NY, USA)
hingga 0,003gKolagenase tipe 1 (Gibco) dan 2 mL ditambahkan ke
jaringan yang terurai secara mikromekanis dan pencernaan enzimatik
dimulai. Jaringan yang hancur secara mekanis dimasukkan ke dalam
tabung steril 15 mL diinkubasi dalam inkubator selama 45 menit-1 jam
pada suhu 37◦C, 5% CO2. Tabung yang terhubung ke rotator divortex
pada interval yang sering sampai suspensi sel. Setelah tabung
dikeluarkan dari inkubator, sel disentrifugasi pada 1500 rpm selama 5
menit dan sel dipindahkan ke T-25 cm2labu dengan media kultur 4 mL
[45 mL DMEM (media elang modifikasi Dulbecco); Gibco, 5 mL PBS;
Gibco, 500 L penisilin; Gibco]. Media kultur diganti setiap 2 hari dan
proliferasi dan penyebaran sel pada labu dipantau secara berkala
dengan miskroskop terbalik (EVOS-AMG, Thermo Fisher Scientific,
Waltham, MA, USA). Sel dari bagian ke-3 digunakan untuk eksperimen
viabilitas dan diferensiasi.
2.2. Karakterisasi sel punca
Fenotipe hPDLMSC dan hGMSC yang diisolasi ditentukan dengan
analisis flow cytometry untuk ekspresi CD146-FITC, CD45-FITC, CD29-
APC, CD25-APC, CD105-PE, CD90-PE, CD73-PE, CD34-PE, CD28-PE dan
penanda CD14-PE (BD Biosciences, CA, USA). Sel (5×105
sel untuk setiap jenis sel) diinkubasi dengan antibodi spesifik untuk penanda
manusia yang terkait dengan garis keturunan mesenkim dan hematopoietik
pada suhu kamar dalam gelap. Hasil flow cytometry adalah
S. Birant dkk.
diperiksa menggunakan flow cytometer (BD, FACS Calibur, San Jose, CA,
USA).
Potensi diferensiasi ostogenik, kondrogenik, dan adipogenik sel
dianalisis menggunakan kit diferensiasi [Kit Diferensiasi Osteogenesis
Stem Pro (Thermo Fisher Scientific), Kit Diferensiasi StemPro
Chondrogenesis (Thermo Fisher Scientific), Kit Diferensiasi
Adipogenesis Stem Pro (Thermo Fisher Scientific)] . Sel-sel dilapisi
dalam 6 pelat sumur (5×105) sel/sumur) dan media diferensiasi
diterapkan pada sel sesuai dengan instruksi pabrik. Media diferensiasi
diganti 3 kali per minggu. Setelah 14 hari chondroctes dan adipoktes
diwarnai dengan Alcian Blue (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)) dan
Oil Red (Sigma-Aldrich) masing-masing. Setelah 28 hari, pewarnaan
Alizarin Red (Sigma-Aldrich) digunakan untuk karakterisasi osteosit. Sel-
sel pewarnaan dievaluasi menggunakan mikroskop binokular
(Olympus, BH2-RFCA, Olympus, Tokyo, Jepang).
2.3. Persiapan larutan pasta gigi
Pasta gigi yang digunakan dalam penelitian ini adalah Colgate6+ (jenis
deterjen: SLS), Sensodyne Pronamel 6+ (jenis deterjen: CAPB), Nenedent (4−
9 umur) (jenis deterjen: Sodium Lauryl Sarcosinate), Perlodent Junior 6+
(jenis deterjen: Sodium C14-C16 Olefin Sulfanate), Splat Juicy (bebas
deterjen). Spesifikasi lengkapnya bisa dibaca di Tabel 1. Empat larutan pasta
gigi yang berbeda dibuat dari pasta gigi anak-anak yang digunakan dalam
penelitian ini. Untuk proses ini, jumlah pasta gigi ditimbang dalam
timbangan sensitif dan diencerkan dalam tabung plastik sterileconical dalam
medium kultur bebas serum. Pertama,
Tabel 1
Komposisi bahan dievaluasi.
Bahan: Komposisi
Colgate 6th Sorbitol, aqua, silika terhidrasi, PEG-12,
natrium lauril sulfat, gum selulosa,
natrium sakarin, natrium fluorida (1450
ppm F− ),aroma, hidroksipropil
metilselulosa, mentol, gliserin, kayu
manis, eugenol, limonene, CI 77891, CI
42.090
Anak-anak Nened Aqua, silika terhidrasi, gliserin, xylitol,
(4¡9 usia) propilen glikol, xanthan gum, titanium
dioksida, aroma,Sodium Lauryl
Sarcosinate, dinatrium EDTA,
sodiummonofluorophophate (500 ppm F
− ),natrium klorida
Perlodent Aqua, sorbitol, silika terhidrasi, propilen
Junior 6th glikol, tetrapotassium pyrophosphate,
xanthan gum,Natrium C14− 16 Olefin
Sulfonat,aroma, titanium dioksida,
natrium fluorida (1450 ppm F− ),natrium
sakarin, fenoksietanol, etilheksil gliserin
Sensodyne Aqua, sorbitol, silika terhidrasi, gliserin, PEG-6,
nama depan Cocamidopropil Betaine, permen karet
6th xanthan, aroma, natrium fluorida (1450 ppm F
− ),natrium sakarin, sukralosa, titanium
dioksida, natrium hidroksida, limonene
Percikan Berair Aqua*, dikalsium fosfat dihidrat*, hidrolisat
pati terhidrogenasi*,
gliserin*, hidroksiapatit, gom selulosa*,
aroma, gom xanthan*, kalium
tiosianat, laktoferin*, laktoperoksidase*,
glukosa oksidase*, glukosa pentaasetat,
ekstrak daun aloe barbadensis*, natrium
mthylparaben, kasein terhidrolisis*,
ekstrak akar glycyrrhiza glabra* (*asal
alami)
Menyelesaikan %10 oranında FBS (Fötal sr serumu), % 1
DMEM penisilin/ streptomycin ilave edilmiş
(CDMEM) DMEM (Media Elang Modifikasi Dulbecco)
Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538
larutan pasta gigi diperoleh pada konsentrasi 80% dari masing-masing pasta
gigi. Kemudian, larutan pasta gigi konsentrasi 80% diencerkan dengan
DMEM (Gibco) dan disiapkan konsentrasi 50%, 20% dan 0,4%. Solusi yang
disiapkan divorteks untuk mendapatkan campuran pasta gigi yang
homogen. Larutan pasta gigi homogen diinkubasi selama 24 jam pada suhu
37◦C dalam 5% CO . yang dilembabkan2lingkungan. untuk mendapatkan
cairan ekstraksi sesuai dengan ISO(Organisasi Internasional untuk
Standardisasi) 10993− 12 standar (2007). Selanjutnya masing-masing tabung
disentrifugasi dengan kecepatan 4200 rpm selama 10 menit. Setelah
sentrifugasi partikel padat dikumpulkan di bagian bawah tabung dan
larutan pasta gigi dilewatkan melalui filter 0,22 m 2 kali untuk
menghilangkan partikel kecil yang tersisa. Ekstrak bahan diperoleh untuk uji
viabilitas sel (ISO 10993-5, 2009).
2.4. Evaluasi viabilitas sel dengan flow cytometry
GMSC dan PDLMSC (5×105sel untuk setiap larutan pasta gigi) disepuh ke
dalam piring 48-sumur. Kemudian sel-sel tersebut diekspos selama 2 menit pada
konsentrasi pasta gigi yang berbeda, dicuci dengan PBS dan disuspensikan dalam
medium bebas serum. 4 L Annexin V (BD Biosciences) ditambahkan ke dalam
tabung dan disimpan di tempat gelap selama 10 menit. Kemudian 200 L buffer
pengikat ditambahkan dan disentrifugasi pada 1500 rpm selama 5 menit untuk
menghilangkan supernatan. Tabung divorteks dengan 200 L binding buffer dan
ditambahkan 10 L propidium iodida untuk membaca efek larutan pasta gigi pada
rasio sel apoptosis hidup, nekrosis, awal dan akhir. Eksperimen viabilitas yang
dilakukan dengan flow cytometry diulang 5 kali, dan rata-rata nilai yang diperoleh
dihitung dan proporsi sel yang viabel, apotosis awal, apoptosis akhir dan nekrotik
ditentukan.
2.5. Mengevaluasi potensi diferensiasi sel induk
Untuk pemeriksaan potensi diferensiasi sel GMSC dan PDLMSC
Pabrikan diunggulkan dengan 5×105sel per sumur dengan memasukkan kaca
penutup berlapis kolagen tipe I ke masing-masing dari 6 pelat sumur.
Colgate Palmolive
Perusahaan, Belgia
Sel-sel pada masing-masing well distimulasi dengan media diferensiasi
2 mL setelah distimulasi dengan larutan pasta gigi konsentrasi % 0,4
selama 2 menit. Pada akhir hari ke-21 dilakukan pewarnaan Alizarin
Red; kepadatan kalsifikasi dan morfologi sel dievaluasi pada mikroskop
penelitian binokular (Olympus, BH2-RFCA) untuk pemeriksaan potensi
Dentinox, Berlin, diferensiasi osteogenik. Pada akhir hari ke-14 dilakukan pewarnaan
Jerman Alcian Blue; kehadiran proteoglikan dan morfologi sel dievaluasi pada
mikroskop penelitian binokular (Olympus, BH2-RFCA) untuk
pemeriksaan potensi diferensiasi kondrogenik. Pada akhir hari ke-14
dilakukan pewarnaan Oil Red O;
Rossmann,
Jerman
2.6. Analisis statistik
Data dianalisis dengan IBM SPSS V23. Uji one way ANOVA digunakan untuk
Glaxo Smith Kline, mengetahui perbedaan antar kelompok untuk beberapa perbandingan,
ABD
sedangkan uji Tukey post-hoc digunakan untuk perbandingan berpasangan dalam
menentukan kelompok mana yang berbeda.
Perdagangan Percikan SIA, 3. Hasil
Okulovka, Rusia
3.1. Isolasi dan karakterisasi sel
Sel-sel yang diisolasi dan mencapai bagian ketiga (hGMSC dan hPDLMSC)
menunjukkan morfologi seperti fibroblas berbentuk gelendong (Gambar 1,
Gambar 2Gambar. 1,2 ). Sebagai hasil analisis penanda permukaan dengan
menggunakan sitometri aliran, baik GMSC dan PDLMSC menunjukkan positif yang
Gibco, Grand kuat untuk penanda sel punca mesenkim seperti CD105, CD146, CD90, CD73 dan
Pulau, AS CD29, sedangkan ekspresi negatif penanda permukaan yang terkait dengan sel
punca hematopoietik adalah terdeteksi (CD45, CD34, CD25, CD28 dan CD14) (
Gambar 3, Gambar. 4Gambar. 3,4).
3
S. Birant dkk. Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Gambar 1.Penampilan morfologis hGMSC (x10). (A) hGMSC pada 0thbagian 0 (B) hGMSC pada 1stbagian (C) hGMSC pada 2danbagian (D) hGMSC pada 3rdjalan.

Gambar 2.Penampilan morfologis hPDLMSCs (x10). (A) hPDLMSC pada 0thbagian 0 (B) hPDLMSC pada 1stbagian (C) hPDLMSC pada 2danbagian (D) hPDLMSC pada 3rdjalan.

Dalam uji diferensiasi osteogenik hGMSC dan hPDLMSC, pembentukan
nodul termineralisasi dan diferensiasi menjadi sel mirip osteosit terdeteksi.
Adanya endapan kalsium yang diwarnai dengan warna merah diamati.
Dalam percobaan diferensiasi adipogenik, diferensiasi menjadi sel mirip
adiposit dan pembentukan tetesan minyak di dalam sel terdeteksi.
Kehadiran intraseluler merah-merah muda cerah
tetesan minyak diamati. Dalam percobaan diferensiasi khondrogenik,
diferensiasi menjadi sel mirip kondrosit diamati dengan pembentukan
proteoglikan yang diwarnai dengan warna biru kehijauan di dalam sel (
Gambar. 5, Gambar. 6Gambar. 5,6). Dari hasil pemeriksaan morfologi,
penentuan potensi diferensiasi trilineage dan analisis penanda dengan
menggunakan flow cytometry, terbukti bahwa sel diisolasi

4
S. Birant dkk. Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Gambar 3.Penentuan karakteristik imunofenotipik hGMSC dengan flow cytometry.

Gambar 4.Penentuan karakteristik imunofenotipik hPDLMSCs oleh flow cytometry.

5
S. Birant dkk. Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Gambar 5.Analisis diferensiasi dalam hGMSC. A, Diferensiasi hGMSC menjadi osteoblas dikonfirmasi oleh pewarna merah Alizarin (x40). B, Diferensiasi hGMSC menjadi
kondroit dikonfirmasi oleh pewarnaan biru Alcian (x40). C, Diferensiasi hGMSC menjadi adiposit dikonfirmasi oleh pewarnaan Minyak merah (x40).

Gambar 6.Analisis diferensiasi dalam hPDLMSCs. A, Diferensiasi PDLMSC menjadi osteoblas dikonfirmasi oleh pewarna merah Alizarin (x40). B, Diferensiasi PDLMSC
menjadi kondroit dikonfirmasi oleh pewarnaan biru Alcian (x40). C, Diferensiasi PDLMSC menjadi adiposit dikonfirmasi oleh pewarnaan Oil red o (x40).

menunjukkan karakteristik sel punca mesenkimal (Gambar. 3, 4, 5, 6).

Tabel 3
Perbandingan viabilitas PDLMCH antar kelompok.
3.2. Viabilitas sel dalam sel yang dikultur terpapar pasta gigi anak-anak yang
Konsentrasi
mengandung kandungan deterjen yang berbeda
0,4% 20% 50% 80%

Persentase viabilitas sel pada hGMSC diwakili dalam Meja 2. Kelompok Colgate 6th 64.74± 42.96± 20.96± 13.05±
colgate dengan GMCH memiliki nilai lebih rendah dari semua kelompok 1.33a 2.15a 2.54a 2.07a
Percikan Berair 80.54± 78,98± 75.38± 67.41±
pada konsentrasi 20%, 50% dan 80% (p<0,05). Persentase viabilitas sel yang
1.65b 2.36b 1.98b 1.58b
lebih tinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol pada 20%, 50% dan 80% (p< Sensodyne 75.20± 71.68± 57.83± 52.31±
0,05). Setelah kelompok Kontrol, rasio viabilitas sel tertinggi diamati pada Pronama 6th 1.87c 2.11c 1.05c 1.89c
kelompok Splat bebas deterjen diikuti oleh kelompok eksperimen Sensodyne Anak-anak Nened 68.06± 50.42± 34.6± 24.4±1.5d
1.63d 1.48d 1.41d
yang mengandung CABP (p<0,05). Tidak ada perbedaan yang signifikan
Perlodent Junior 70.47± 53,82± 41.13± 25.6±
antara kelompok Nenedent dan Perlodent dalam hal tingkat viabilitas 20%, 6th 1.89d 2.16d 2.07e 1.67d
sedangkan tingkat viabilitas sel pada kelompok Nenedent ditemukan secara CDMEM 84.11± 84.11± 84.11± 84.11±
signifikan lebih tinggi daripada kelompok Perlodent pada konsentrasi lain 1.08e 1.08e 1.08f 1.08e
kecuali konsentrasi 20% (hal.<0,05) (Meja 2). p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*

Persentase viabilitas sel pada hPDLMSCs diwakili dalam abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji ANOVA
Satu Arah; Tes post-hoc Tukey.
*
Meja 2 Nilai p signifikan pada taraf 0,05.
Perbandingan viabilitas GMCH antar kelompok.

Konsentrasi Tabel 3. Kelompok colgate memiliki persentase viabilitas sel terendah di

antara kelompok eksperimen pada semua konsentrasi (p<0,05). Rasio sel
0,40 % 20% 50% 80%
hidup tertinggi terdeteksi pada kelompok Kontrol, diikuti oleh kelompok
Colgate 6th 73,86± 33±2.87a 20.55± 15.05± Splat dan Sensodyne (p<0,05). Rasio viabilitas sel pada konsentrasi 50% lebih
2.6ab 2.51a 3.07a
tinggi pada kelompok Perlodent daripada kelompok Nenedent (p<0,05).
Percikan Berair 88.11± 82.93± 79,81± 75.52±
0.9d 1.23b 1.06b 1.15b Persentase laju sel mati pada hPDLMSC diwakili dalam: Tabel 4. Dalam
Sensodyne 80.55± 72.73± 62.8± 51.92± evaluasi tingkat sel apoptosis awal, tingkat apoptosis awal terendah di
Pronama 6th 1.19c 1.57c 1.21c 1.28c antara pasta gigi ditemukan pada kelompok Splat pada semua konsentrasi
Anak-anak Nened 72.21± 60.73± 49.74± 33.53±
(hal.<0,05). Dalam evaluasi tingkat sel apoptosis akhir, perbedaan yang
0.92a 1.09d 1.21d 1.41d
Perlodent Junior 76,34± 60.4± 45.25± 26.72±
signifikan secara statistik ditemukan antara kelompok pada semua
6th 1.3b 0.95d 1.21e 0.98e konsentrasi. Sedangkan tingkat sel apoptosis akhir tertinggi pada
CDMEM 89,54± 89,54± 89,54± 89,54± konsentrasi 0,4% dan 80% terdeteksi pada kelompok Colgate (hal.<0,05) dan
1.27d 1.27e 1.27f 1.27f kelompok Nedent pada konsentrasi 20% (p<0,05), tidak ada perbedaan
p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*
signifikan yang ditemukan antara kelompok Colgate dan Nedent pada
abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji ANOVA konsentrasi 50%. Dalam evaluasi tingkat nekrosis pada hPDLMSC, tingkat sel
Satu Arah; Tes post-hoc Tukey. nekrotik tertinggi secara statistik ditemukan di Colgate
*
Nilai p signifikan pada taraf 0,05.

6
S. Birant dkk. Jaringan dan Sel 72 (2021) 101538

Tabel 4 Tabel 5
Perbandingan tingkat sel mati pada hPDLMSC antar kelompok. Perbandingan tingkat sel mati pada hGMSC antar kelompok.

Apoptosis dini Konsentrasi Apoptosis dini Konsentrasi

0,4% 20% 50% 80% 0,4% 20% 50% 80%

Colgate 6th 16.29± 26.93± 42.46± 40.85± Colgate 6th 6.55±1.29 22.17± 24.61± 21.64±
2.05c 3.07 cd 6.05c 1.18d CD 1.8d 2.28d 4.56c
Percikan Berair 7.18± 7.82±0.3a 10.65± 17.41± Percikan Berair 2.36±1.01a 3.71± 3.06± 6.22±
2.85a 0.6a 1.52b 0.92a 1.02a 0.69a
Sensodyne 11.19± 15.06± 27.18± 33.79± Sensodyne 4.14± 8.96± 14.08± 15.6±
Pronama 6th 2.03b 2.37b 1.74b 2.25c Pronama 6th 1.02abc 0.42c 0.91b 0.91b
Anak-anak Nened 20.26± 26.34±2c 38.9± 41.91± Anak-anak Nened 7.12± 10.17± 12,99± 21.04±
0.83d 1.56c 2.52d 1.67d 1.36c 1.06b 2.14c
Perlodent Junior 17.36± 30.3± 36.76± 30.72± Perlodent Junior 5.11± 6.44± 20.15± 26.37±
6th 1.72 cd 1.41d 3.49c 2.96c 6th 1.66bcd 1.09b 1.17c 2.09d
CDMEM 6.91± 6.91± 6.91± 6.91± CDMEM 2.62± 2.62± 2.62± 2.62±
1.13a 1.13a 1.13a 1.13a 1.26ab 1.26a 1.26a 1.26a
p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000* p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*

Apoptosis terlambat Konsentrasi Apoptosis terlambat Konsentrasi

0,4% 20% 50% 80% 0,4% 20% 50% 80%

Colgate 6th 9.88± 12.64± 18.77± 28.02± Colgate 6th 7.81± 21.14± 31.13± 42.64±
2.03c 2.01d 2.24d 2.58d 1.28c 2.18d 1.91d 2.18a
Percikan Berair 5.63± 6.51± 6.1±0.97b 5.39± Percikan Berair 2.57± 4.25± 5.78± 6.32±
1.12b 1.28bc 0.69ab 0.45a 0,95a 0.59b 0.92b
Sensodyne 7.2± 5.36± 6.83± 6±0.89b Sensodyne 4.79± 7.1±1.13b 7.66± 10.83±
Pronama 6th 0.95b 0.94ab 0.53b Pronama 6th 1.13b 1.09b 1.12c
Anak-anak Nened 5.38± 15.98± 18.2±1.53 20.65± Anak-anak Nened 7.75± 10.54± 17.69± 21.57±
1.4ab 1.02e CD 1.83c 0.66c 1.71c 0.95c 0.87d
Perlodent Junior 6.42± 9.02± 15.47± 19.4±1.3c Perlodent Junior 7.13± 12.59± 16.51± 21.04±
6th 1.18b 1.12c 2.01c 6th 0.83c 1.09c 0.62c 1.05d
CDMEM 2.81± 2.81± 2.81± 2.81± CDMEM 1.58± 1.58± 1.58± 1.58±
1.21a 1.21a 1.21a 1.21a 0.73a 0.73a 0.73a 0.73e
p 0,001* 0,000* 0,000* 0,000* p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*

Nekrosis Konsentrasi Nekrosis Konsentrasi

0,4% 20% 50% 80% 0,4% 20% 50% 80%

Colgate 6th 9.1± 17.47± 17.81± 18.09± Colgate 6th 11.78± 23.69± 21.73± 20.66±
0.81a 1.52a 1.96a 1.87d 1.63b 1.69e 2.15e 2.77c
Percikan Berair 6.65± 6.69± 7.87± 9.78± Percikan Berair 6.97± 9.1±0.9b 11.35± 11.94±
1.42b 1.22b 0.95b 1.11b 0.91a 0.59b 0.78b
Sensodyne 6.41± 7.9± 1.03b 8.17± 7.91± Sensodyne 10.91± 11.44± 15.43± 19.65±
Pronama 6th 1.5b 0.69b 0.56ab Pronama 6th 1.27b 1.27c 1.38c 1.51c
Anak-anak Nened 6.3± 7.26± 7.91± 13.03± Anak-anak Nened 12.92± 18.55± 19.57± 23.86±
0.83b 0.87b 1.15b 1.03c 0.77b 1.57d 1.58de 1.02d
Perlodent Junior 5,75± 6.85± 6.62± 24.26± Perlodent Junior 11.43± 20.57± 18.09± 25.87±
6th 1.45b 0.93b 1.61b 1.13e 6th 1.61b 1.36d 0,95 cd 1.8d
CDMEM 6.17± 6.17± 6.17± 6.17± CDMEM 6.26± 6.26± 6.26±1.11a 6.26±
0.97b 0.97b 0.97b 0.97a 1.11a 1.11a 1.11a
p 0,003* 0,000* 0,000* 0,000* p 0,000* 0,000* 0,000* 0,000*

abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji ANOVA abc-D-ef: Tidak ada perbedaan antara kelompok yang sama. Uji ANOVA
Satu Arah; Tes post-hoc Tukey. Satu Arah; Tes post-hoc Tukey.
* *
Nilai p signifikan pada taraf 0,05. Nilai p signifikan pada taraf 0,05.

kelompok pada konsentrasi 0,4%, 20% dan 50% (p<0,05).
Persentase laju sel mati pada hGMSC diwakili dalam: Tabel 5. Sementara
tingkat terendah dari sel-sel apoptosis awal terdeteksi pada kelompok
Kontrol dan kelompok Splat di semua konsentrasi, tingkat terendah dari
apoptosis awal umumnya ditemukan pada kelompok Sensodyne setelah
kelompok-kelompok ini (hal.<0,05). Tingkat tertinggi dari apoptosis akhir
pada semua konsentrasi ditemukan pada kelompok Colgate (p<0,05). Tidak
ada perbedaan signifikan yang ditemukan antara kelompok Colgate,
Nenedent dan perlodent pada konsentrasi 0,4%. Dalam evaluasi rasio sel
nekrotik, rasio sel nekrotik terendah pada semua konsentrasi ditemukan
pada kelompok Splat setelah kelompok Kontrol (hal.<0,05).
3.3. Evaluasi potensi diferensiasi osteogenik dalam MSC
Potensi diferensiasi osteogenik dari hGMSC dan hPDLMSC yang terpapar
larutan pasta gigi yang berbeda dinilai secara kualitatif dengan pewarnaan
intens untuk pewarnaan Alizarin Red dan adanya endapan kalsium
ekstraseluler yang diwarnai merah oranye terang. Gambar hGMSC dan
hPDLMSC yang distimulasi dengan media diferensiasi osteogenik
setelah inkubasi dalam larutan pasta gigi yang berbeda untuk konsentrasi pasta
gigi 0,4% ditunjukkan pada:Gambar 7, Gambar. 9Gambar. 7 dan 9. masing-
masing. Dalam GMSC dan PDLMSC, jumlah tertinggi sel mirip osteoblas dan
akumulasi kalsium termineralisasi diamati pada kelompok Kontrol. Pada kelompok
Splat, konsentrasi kalsium sedikit lebih rendah daripada kelompok Kontrol tetapi
jika dibandingkan dengan kelompok eksperimen lainnya, nodul kalsium paling
kuat ditemukan pada kelompok ini. Pada kelompok Sensodyne, potensi
diferensiasi osteogenik sedikit lebih rendah daripada kelompok CDMEM dan Splat,
tetapi ditemukan cukup tinggi pada kelompok Nenedent, Perlodent dan Colgate.
Sementara kelompok Perlodent mengandung nodul kalsium jauh lebih sedikit
daripada kelompok CDMEM, Splat dan Sensodyne dalam hal adanya endapan
kalsium, itu diperiksa pada gambar mikroskop yang mengandung nodul sedikit
lebih termineralisasi daripada kelompok Nenedent dan Colgate. Keberadaan
nodul kalsium pada kelompok Perlodent dan Nenedent berdekatan satu sama lain
tetapi deposit kalsium yang terdeteksi pada kelompok Nenedent lebih sedikit.
Jumlah terendah dari deposisi kalsium intraseluler dan adanya sel apoptosis yang
intens diamati pada kelompok Colgate. (Gambar. 7 dan 9).