NIM : 1734011
teknik pengambilan sampel dan penanganan sampel merupakan tahap pra analitik yang
menentukan validitas hasil pemeriksaan laboratorium toksikologi. Dalam bab ini Anda akan
mempelajari jenis-jenis sampel, cara penanganan, dan teknik preparasi sampel baik sampel dari
bahan biologis maupun non biologis. Jenis-jenis sampel terutama sampel biologis yang diambil dari
tubuh berkaitan dengan mekanisme absorbsi, distribusi dan eliminasi suatu xenobiotic. Sedangkan
analit yang kemungkinan dapat terdeteksi pada sampel yang diperiksa didasari dengan pemahaman
tentang biotransformasi xenobiotika.
jenis-jenis sampel yang dapat diambil baik sampel biologis pada korban yang masih hidup
atau mati. Selain itu juga sampel non biologis yang berupa barang-barang yang berada disekitar
korban yang diduga mengandung zat yang dicurigai yang dalam bab ini disebut “residu kejadian”.
Pengambilan sampel terutama darah memerlukan pemahaman tentang flebotomi dan hal-hal yang
berkaitan, yang sudah Anda dapatkan pada mata kuliah Flebotomi.
- Jenis-jenis Sampel Toksikologis
a. Darah arteri
Darah arteri biasanya dikumpulkan oleh seorang praktisi medis yang berpengalaman karena ini
adalah prosedur yang relatif berbahaya, dilakukan untuk pengukuran gas darah dan biasanya tidak
diajukan untuk analisis toksikologi. Darah kapiler, yang mendekati darah arterial, dapat diperoleh
dengan menusuk tumit, lobang jari atau telinga, prosedur ini paling sering dilakukan pada anak kecil.
b. Darah vena
Darah vena diperoleh dengan venepuncture (biasanya) vena median cubital lengan yang jauh
dari lokasi infus. Dapat menggunakan spuit dan jarum suntik (1-50 mL) atau sistem sampling vakum
komersial seperti Vacutainer dapat digunakan. Sebuah turniket dapat digunakan untuk membendung
vena sebelum venepuncture, namun harus segera dilepaskan sebelum pengambilan sampel. Untuk
sampling berulang, kanula kecil dapat dimasukkan ke dalam pembuluh darah di lengan atau tangan,
yang memungkinkan akses vena melalui septum karet. Namun, patensi mungkin menjadi masalah
karena ada risiko menginduksi hemolisis dan kontaminasi spesimen karena penggunaan larutan
antikoagulan dengan alat tersebut.
Setelah venepuncture, darah harus dipindahkan ke wadah yang tepat sesegera mungkin.
Beberapa analit dasar dan senyawa amonium kuaterner, misalnya antidepresan trisiklik dan paraquat,
dan aluminium terikat pada kaca. Tabung plastik lebih disukai dan juga cenderung pecah daripada
kaca, terutama jika dibekukan. Di sisi lain, jika pelarut volatil atau gas anestesi, misalnya, harus
dianalisis maka gelas lebih disukai jika tersedia.
Jika darah telah dikumpulkan ke dalam spuit, jarum harus dikeluarkan dan darahnya
dibiarkan mengalir dengan lancar ke dalam tabung sampel untuk mencegah hemolisis. Kemudian
diikuti dengan pencampuran lembut untuk memastikan kontak dengan antikoagulan, jika digunakan.
Bahkan hemolisis ringan pun akan membuat besi serum atau tes kalium berlebih, dan mungkin
mengakibatkan analit lain dalam plasma atau serum terkonsentrasi pada sel darah merah seperti
chlortalidone meninggalkan plasma atau serum yang kontak dengan sel darah merah, dapat
menyebabkan perubahan karena aktivitas enzimatik atau redistribusi analit antara sel dan plasma.
Secara umum, plasma atau serum harus dipisahkan dari sel darah sesegera mungkin. Jika perlu,
seluruh darah dapat disimpan pada suhu -20ºC atau di bawahnya, namun pembekuan akan
melisiskan sebagian besar jenis sel.
Tabung yang mengandung 0,5 atau 1 mL antikoagulan natrium sitrat dalam larutan berair dan
karenanya tidak sesuai untuk pekerjaan kuantitatif. Selanjutnya, pengenceran sampel dapat
mengurangi tingkat pengikatan protein plasma dan akibatnya distribusi analit plasma - sel darah
merah. Harus dipastikan bahwa antikoagulan heparin lithium tidak digunakan jika lithium plasma
diukur. Heparin juga telah diketahui mengganggu dalam analisis obat.
c. Darah dan cairan terkait
- Darah utuh (whole blood) adalah cairan yang bersirkulasi melalui arteri, kapiler dan vena.
Tubuh manusia dewasa mengandung sekitar 5-6 liter darah. Ini terdiri dari plasma dan sel
darah. Jika seluruh darah dianalisis, sampel harus dikumpulkan ke dalam antikoagulan yang
tepat, dicampur, dan kemudian dibekukan untuk melisiskan sel sebelum analisis (Catatan:
darah tersembunyi adalah darah yang ditemukan hanya dalam jumlah jejak terutama pada
faeces. Ini tidak digunakan sebagai sampel analitis).
- Sel darah termasuk sel darah merah (eritrosit) dan sel darah putih (limfosit, leukosit),
trombosit) dll. Semua dapat diperoleh dari darah yang baru dikumpulkan dengan prosedur
yang sesuai.
- Darah tali pusat diperoleh dari tali pusat saat parturisi. Biasanya darah tali pusat diperoleh
untuk mencerminkan neonatal, berlawanan dengan darah plasenta. Untuk mendapatkan
plasma atau serum tergantung pada volume yang tersedia
- Plasma adalah bagian cairan darah yang diperoleh dengan penambahan anticoagulant
Serum adalah cairan kuning pucat yang tersisa saat seluruh darah membeku. Komposisinya
umumnya sama dengan plasma kecuali fibrinogen dan faktor yang terkait dengan proses
penggumpalan tidak ada.
- Aqueous humor adalah cairan berair yang menempati ruang antara kornea dan iris mata
- ASI adalah cairan kaya protein dan lemak yang diproduksi oleh ibu menyusui. Ekskresi
pertama ASI (kolostrum) sangat kaya akan protein
- Aspirasi empedu adalah cairan asam yang mengandung enzim pencernaan, makanan, dan
sebagainya, diperoleh dengan aspirasi dari lambung.
- Getah bening adalah cairan kekuningan yang berasal dari kelenjar getah bening
- Air liur adalah sekresi kelenjar mukosa yang kental dan jernih di mulut. Cairan ini terkait
dalam komposisi plasma, tetapi juga mengandung beberapa enzim pencernaan.
- Semen diproduksi oleh testis dan kelenjar prostat, dan terdiri dari cairan mani (yang bisa
didapat dari semen dengan sentrifugasi), dan spermatozoa.
- Cairan sinovial adalah cairan pelumas yang jernih dan kental yang mengisi synovium
(membran yang mengelilingi sendi dan menciptakan kantung pelindung)
- Air mata adalah sekresi air mata yang jernih pada mata
- Cairan vagina adalah sekresi kental vagina
- Vitreous humor adalah cairan transparan dan kental yang terkandung di balik lensa di mata.
- Empedu adalah cairan kuning-hijau tebal yang disekresikan oleh hati melalui kandung
empedu ke dalam usus
- Udara yang dihembuskan (ekspirasi) umumnya mengandung sedikit oksigen dan lebih
banyak karbon dioksida dan uap air daripada udara sekitar, namun mungkin mengandung
produk metabolik volatil lainnya.
- Faeces adalah residu proses pencernaan yang berwarna coklat dan semi solid
- Urin adalah cairan kuning / kuning-hijau yang dihasilkan oleh ginjal, terutama terdiri dari air,
garam, urea, kreatinin, dan produk metabolik lainnya.
f. Sampel lainnya
- Bronchoalveolar lavage (BAL) diperoleh dengan mencuci bronkus / alveoli dengan larutan
yang tepat dan aspirasi cairan yang dihasilkan.
- Calculi ('batu') adalah endapan kristal keras yang terbentuk di berbagai rongga tubuh seperti
ginjal
- Cairan dialisis (extracorporeal atau peritoneal) adalah cairan yang tersisa setelah dialisis telah
dilakukan
- Gastric lavage adalah spesimen yang diperoleh dengan cara mencuci lambung dengan
larutan yang tepat dan aspirasi cairan yang dihasilkan
- Rambut (kepala, aksila, atau kemaluan) kadang digunakan untuk menilai keterpaparan baru-
baru ini terhadap racun seperti obat-obatan terlarang atau logam berat
- Potongan kuku atau kuku (jari atau kaki) kadang digunakan untuk menilai terpapar obat-
obatan terlarang atau logam berat
- Swab (olesan) hidung adalah cairan yang dikumpulkan ke kapas dari dalam hidung
- Cairan oral adalah campuran air liur, cairan gingivial crevicular (cairan antara gigi / gusi),
sisa-sisa seluler, darah, lendir, partikel makanan, dan bahan lain yang dikumpulkan dari
mulut.
- Isi perut dari (i) aspirasi gastrik, (ii) cuci lambung, (iii) muntahan, atau (iv) residu di perut
saat otopsi
- Spesimen jaringan diperoleh dengan pembedahan atau postmortem. Jaringan yang diperoleh
dari janin dan / atau plasenta kadang dapat digunakan untuk analisis.
- Sampel biopsi adalah sampel kecil jaringan yang diperoleh dengan teknik sampling spesialis
g. Serum
Bila darah utuh dibiarkan (15 menit, suhu kamar) dalam tabung kosong (tidak ada
antikoagulan), bentuk gumpalan yang akan ditarik cukup untuk memungkinkan serum dikumpulkan.
Untuk banyak analisis, serum lebih disukai daripada plasma karena menghasilkan lebih sedikit
presipitat (fibrin) pada pembekuan dan pencairan.
h. Plasma
Pemisahan plasma dari darah utuh dengan antikoagulan biasanya memerlukan sentrifugasi.
Hubungan antara diameter rotor dari pusat, kecepatan sentrifugasi dan gaya sentrifugal relatif (G-
force) ditetapkan.
Pada sentrifugasi darah utuh dengan antikoagulan (2000 g, 10 menit, 2-8oC jika perlu), maka
akan terpisah menjadi tiga lapisan: lapisan bawah (biasanya sekitar 45% volume) terdiri dari sel
darah merah; lapisan tipis antara sel darah putih dan platelet yang disebut 'buffy coat adalah lapisan
berikutnya; dan lapisan atas, berair, berwarna jerami adalah plasma (sekitar 50% v/v). Asalkan analit
stabil, darah utuh dan antikoagulan dapat disimpan pada suhu kamar atau didinginkan (2-8oC)
selama dua hari atau lebih sebelum plasma dipisahkan.
Lebih banyak plasma dapat dipisahkan dari darah utuh daripada serum. Beberapa tabung
komersial mengandung zat seperti manik-manik plastik atau gel yang berada pada antarmuka antara
sel dan plasma untuk membantu pengumpulan plasma. Gel pemisah (gel separator) dapat
menyebabkan masalah pada analisis beberapa obat walaupun gel yang diformulasikan telah diklaim
memiliki sedikit efek pada pengukuran obat terapeutik, tabung yang mengandung gel pemisah
sebaiknya dihindari. Penggunaan tabung semacam itu akan membuat banyak analit trace elemen
tidak ada dan dapat mengganggu analisis untuk pelarut dan volatil lainnya.
i. Sel darah
Untuk mengumpulkan eritrosit, darah heparinisasi disentrifugasi (2000 g, 10 menit), plasma,
buffy coat dan 10% eritrosit teratas (terutama retikulosit) dikeluarkan, dan sisa eritrosit dicuci
dengan larutan garam isotonik, untuk menghilangkan plasma yang terperangkap. Sel dapat
digunakan secara langsung atau beku, baik untuk menyebabkan hemolisis, atau untuk penyimpanan.
Trombosit biasanya diisolasi dengan sentrifugasi yang lambat (misalnya 300 g, 15 menit)
dari darah utuh untuk menghasilkan plasma kaya trombosit, kemudian disentrifugasi (2000 g, 10
menit) untuk memisahkan trombosit. Sel darah putih lainnya paling sering diperoleh dengan
sentrifugasi melalui media kepadatan yang sesuai (sesuai petunjuk pabriknya) atau diisolasi dengan
teknik antibodi fase padat.
j. Urin
Spesimen urin yang berbeda, misalnya acak, pagi hari, 24 jam, dapat dikumpulkan dalam
perjalanan studi metabolik atau lainnya. Dalam studi metabolisme, penting untuk mencatat waktu
awal dan akhir periode pengumpulan sehingga tingkat produksi urin dapat dihitung. Sampel urin
acak adalah spesimen midstream – diberi pengawet, seperti 2 mol asam klorida per liter ditambahkan
setelahnya. Urin segar berwarna kuning / kuning-hijau, namun pada penyimpanan dalam larutan
asam berubah warna menjadi kuning / coklat dan bahkan sampai coklat tua karena oksidasi
urobilinogen menjadi urobilin. Kristal, terutama asam urat dan kalsium oksalat, dapat menyebabkan
kekeruhan.
Spesimen urin acak, pagi hari, atau end-of-shift dikumpulkan, adalah cara umum untuk
menghubungkan hasil analisis tertentu dengan konstituen urin 'tetap' seperti kreatinin, yang dianggap
diekskresikan pada tingkat yang relatif konstan pada subjek normal.
Konsentrasi banyak obat dan metabolit, dan beberapa konstituen endogen, akan tetap sama dalam
urin yang diasamkan selama lebih dari seminggu pada suhu kamar, dan sampai satu bulan pada 2-
8oC. Urin yang tidak diasamkan mengalami serangan mikrobiologis dan banyak perubahan terjadi,
termasuk hilangnya asam amino.
k. Isi lambung
Spesimen ini meliputi muntahan, aspirasi lambung dan cairan lambung serta isi perut pada
postmortem. Sifat sampel ini bisa sangat bervariasi dan prosedur tambahan seperti homogenisasi
diikuti dengan penyaringan dan / atau sentrifugasi mungkin diperlukan untuk menghasilkan cairan
yang dapat diperiksa
l. Faces
Analisis feces jarang dilakukan, namun kadang-kadang analisis obat dan kemungkinan
metabolit mungkin diperlukan dalam studi farmakokinetik dan metabolisme. Analisis mungkin juga
diminta jika, misalnya, muncul pertanyaan tentang kebocoran obat dari paket obat antemortem yang
ditelan. Tidak seperti plasma, urin, dan sampel cairan lainnya, faeces tidak homogen, dan oleh
karena itu seringkali diperlukan untuk menganalisis keseluruhan sampel atau menghomogenkan
seluruh sampel dan membuktikan bahwa fraksi yang diambil untuk analisis mewakili keseluruhan.
Diperlukan lebih dari sehari sebelum obat oral atau metabolit obat muncul dalam faeces.
m. Jaringan
Spesimen histologi biasanya dikumpulkan ke dalam bahan pengawet seperti formalin (larutan
formaldehyde dalam air). Perlakuan awal semacam itu harus diingat jika analisis toksikologi
dilanjutkan. Sampel jaringan yang diperoleh postmortem biasanya disimpan pada suhu 4oC sebelum
analisis.
1) Faktor Fisiologi
Hormone seks
b) Jenis kelamin
Wadah spesimen
Wadah spesimen urin, serum, darah, cairan lambung, harus dari bahan yang tidak mudah
pecah, seperti dari polietilen yang kuat, tidak bocor, bersih dan kering.
Tertutup rapat (tutupnya berulir), bermulut lebar.
Bahan Pengawet
Bahan pengawet diperlukan jika spesimen harus dirujuk ke laboratorium pemeriksaan yang
lebih mampu dan berjarak cukup jauh, atau ke laboratorium lainnya untuk pemeriksaan konfirmasi.
Cantumkan nama bahan pengawet
Pemberian Label
Secara umum label harus tertulis antara lain:
1. Nama pasien :
2. Umur :
3. Jenis Kelamin :
4. Alamat :
5. Tanggal pengambilan :
6. Lokasi pengambilan :
7. Jenis spesimen :
8. Jumlah spesimen :
Untuk pemeriksaan yang bersifat rahasia (Rhs) maka label cukup diberi kode
3. Pastikan tabung tertutup rapat dan terisi dengan baik, tapi jangan terlalu banyak mengisi tabung,
terutama tabung kaca
Referensi : Badan Pengembangan dan Pemberdayaan Sumber Daya Manusia Kesehatan tahun 2018.