TEKNIK PENGAMBILAN

 TEKNIK PENGAMBILAN

Teknik pengambilan sampel dan penanganan sampel merupakan tahap

pra analitik yang menentukan validitas hasil pemeriksaan laboratorium
toksikologi. Dalam bab ini anda akan mempelajari jenis-jenis sampel, cara
penanganan, dan teknik preparasi sampel baik sampel dari bahan biologis
maupun non biologis. Jenis-jenis sampel terutama sampel biologis yang
diambil dari tubuh berkaitan dengan mekanisme absorbsi, distribusi dan
eliminasi suatu xenobiotic. Sedangkan analit yang kemungkinan dapat
terdeteksi pada sampel yang diperiksa didasari dengan pemahaman tentang
biotransformasi xenobiotika.

Jenis-jenis sampel yang dapat diambil baik sampel biologis pada

korban yang masih hidup atau mati. Selain itu juga sampel non biologis yang
berupa barang-barang yang berada disekitar korban yang diduga mengandung
zat yang dicurigai yang dalam bab ini disebut “residu kejadian”. Pengambilan
sampel terutama darah memerlukan pemahaman tentang flebotomi dan hal-hal
yang berkaitan, yang sudah anda dapatkan pada mata kuliah flebotomi.
- Jenis-jenis sampel toksikologis

Sampel klinis untuk uji toksikologis dapat dibagi menjadi:

(i) cairan darah dan cairan terkait,
(ii) cairan tubuh selain darah,
(iii) cairan atau residu eksretori
(iv) spesimen klinis lainnya.
Sejumlah spesimen tambahan dapat dikumpulkan untuk tujuan
toksikologi. Tindakan pencegahan khusus akan dibutuhkan untuk analit yang
tidak stabil. Sebagian besar senyawa yang diukur dalam urin dapat dianggap
stabil setidaknya beberapa jam pada suhu kamar karena urin mungkin telah
ditahan pada suhu tubuh untuk beberapa saat sebelum dikeluarkan (flanagan,
2007).
1. Darah

a. Darah arteri
 Darah arteri biasanya dikumpulkan oleh seorang praktisi medis yang
berpengalaman karena ini adalah prosedur yang relatif berbahaya, dilakukan
untuk pengukuran gas darah dan biasanya tidak diajukan untuk analisis
toksikologi. Darah kapiler, yang mendekati darah arterial, dapat diperoleh dengan
menusuk tumit, lobang jari atau telinga, prosedur ini paling sering dilakukan pada
anak kecil.

b. Darah vena
Darah vena diperoleh dengan venepuncture (biasanya) vena median
cubital lengan yang jauh dari lokasi infus. Dapat menggunakan spuit dan jarum
suntik (1-50 ml) atau sistem sampling vakum komersial seperti vacutainer dapat
digunakan. Sebuah turniket dapat digunakan untuk membendung vena sebelum
venepuncture, namun harus segera dilepaskan sebelum pengambilan sampel.
Untuk sampling berulang, kanula kecil dapat dimasukkan ke dalam pembuluh
darah di lengan atau tangan, yang memungkinkan akses vena melalui septum
karet. Namun, patensi mungkin menjadi masalah karena ada risiko menginduksi
hemolisis dan kontaminasi spesimen karena penggunaan larutan antikoagulan
dengan alat tersebut.
Setelah venepuncture, darah harus dipindahkan ke wadah yang tepat
sesegera mungkin. Beberapa analit dasar dan senyawa amonium kuaterner,
misalnya antidepresan trisiklik dan paraquat, dan aluminium terikat pada kaca.
Tabung plastik lebih disukai dan juga cenderung pecah daripada kaca, terutama
jika dibekukan. Di sisi lain, jika pelarut volatil atau gas anestesi, misalnya, harus
dianalisis maka gelas lebih disukai jika tersedia.
Jika darah telah dikumpulkan ke dalam spuit, jarum harus dikeluarkan dan
darahnya dibiarkan mengalir dengan lancar ke dalam tabung sampel untuk
mencegah hemolisis. Kemudian diikuti dengan pencampuran lembut untuk
memastikan kontak dengan antikoagulan, jika digunakan.
Bahkan hemolisis ringan pun akan membuat besi serum atau tes kalium berlebih,
dan mungkin mengakibatkan analit lain dalam plasma atau serum terkonsentrasi
pada sel darah merah seperti chlortalidone meninggalkan plasma atau serum yang
kontak dengan sel darah merah, dapat menyebabkan perubahan karena aktivitas
enzimatik atau redistribusi analit antara sel dan plasma. Secara umum, plasma
atau serum harus dipisahkan dari sel darah sesegera mungkin. Jika perlu, seluruh
darah dapat disimpan pada suhu -20ºc atau di bawahnya, namun pembekuan akan
melisiskan sebagian besar jenis sel.
Tabung yang mengandung 0,5 atau 1 ml antikoagulan natrium sitrat dalam
larutan berair dan karenanya tidak sesuai untuk pekerjaan kuantitatif. Selanjutnya,
pengenceran sampel dapat mengurangi tingkat pengikatan protein plasma dan
akibatnya distribusi analit plasma - sel darah merah. Harus dipastikan bahwa
antikoagulan heparin lithium tidak digunakan jika lithium plasma diukur. Heparin
juga telah diketahui mengganggu dalam analisis obat.
c. Darah dan cairan terkait

- Darah utuh (whole blood) adalah cairan yang bersirkulasi melalui arteri,
kapiler dan vena. Tubuh manusia dewasa mengandung sekitar 5-6 liter
darah. Ini terdiri dari plasma dan sel darah. Jika seluruh darah dianalisis,
sampel harus dikumpulkan ke dalam antikoagulan yang tepat, dicampur,
dan kemudian dibekukan untuk melisiskan sel sebelum analisis (catatan:
darah tersembunyi adalah darah yang ditemukan hanya dalam jumlah jejak
terutama pada faeces. Ini tidak digunakan sebagai sampel analitis).

- Sel darah termasuk sel darah merah (eritrosit) dan sel darah putih (limfosit,
leukosit), trombosit) dll. Semua dapat diperoleh dari darah yang baru
dikumpulkan dengan prosedur yang sesuai.

- Cairan serebrospinal (cerebrospinal fluid = csf) adalah ultrafiltrasi plasma

(komposisinya adalah plasma kecuali protein mr tinggi yang tidak ada)
yang mengelilingi elemen sistem saraf pusat (ssp). Cairan ini diperoleh
dengan tusukan lumbal (aspirasi jarum dari sumsum tulang belakang) dan
biasanya dikumpulkan ke dalam tabung steril.

- Darah tali pusat diperoleh dari tali pusat saat parturisi. Biasanya darah tali
pusat diperoleh untuk mencerminkan neonatal, berlawanan dengan darah
plasenta. Untuk mendapatkan plasma atau serum tergantung pada volume
yang tersedia

- Plasma adalah bagian cairan darah yang diperoleh dengan penambahan

anticoagulant
 Serum adalah cairan kuning pucat yang tersisa saat seluruh darah
membeku. Komposisinya umumnya sama dengan plasma kecuali
fibrinogen dan faktor yang terkait dengan proses penggumpalan tidak ada.

d. Cairan tubuh selain darah

- Cairan amnion adalah cairan yang mengelilingi janin di kantung amnio

- Aqueous humor adalah cairan berair yang menempati ruang antara kornea
dan iris mata

- Asi adalah cairan kaya protein dan lemak yang diproduksi oleh ibu
menyusui. Ekskresi pertama asi (kolostrum) sangat kaya akan protein

- Aspirasi empedu adalah cairan asam yang mengandung enzim pencernaan,

makanan, dan sebagainya, diperoleh dengan aspirasi dari lambung.

- Getah bening adalah cairan kekuningan yang berasal dari kelenjar getah
bening

- Cairan peritoneal adalah cairan yang menumpuk di peritoneum

- Air liur adalah sekresi kelenjar mukosa yang kental dan jernih di mulut.
Cairan ini terkait dalam komposisi plasma, tetapi juga mengandung
beberapa enzim pencernaan.

- Semen diproduksi oleh testis dan kelenjar prostat, dan terdiri dari cairan
mani (yang bisa didapat dari semen dengan sentrifugasi), dan
spermatozoa.

- Cairan sinovial adalah cairan pelumas yang jernih dan kental yang mengisi
synovium (membran yang mengelilingi sendi dan menciptakan kantung
pelindung)

- Air mata adalah sekresi air mata yang jernih pada mata

- Cairan vagina adalah sekresi kental vagina

- Vitreous humor adalah cairan transparan dan kental yang terkandung di

balik lensa di mata.

e. Cairan / residu ekskresi

- Empedu adalah cairan kuning-hijau tebal yang disekresikan oleh hati

melalui kandung empedu ke dalam usus
- Udara yang dihembuskan (ekspirasi) umumnya mengandung sedikit
oksigen dan lebih banyak karbon dioksida dan uap air daripada udara
sekitar, namun mungkin mengandung produk metabolik volatil lainnya.

- Faeces adalah residu proses pencernaan yang berwarna coklat dan semi
solid

- Keringat adalah cairan berair yang diekskresikan oleh pori-pori kulit

- Urin adalah cairan kuning / kuning-hijau yang dihasilkan oleh ginjal,

terutama terdiri dari air, garam, urea, kreatinin, dan produk metabolik
lainnya.

f. Sampel lainnya

- Bronchoalveolar lavage (bal) diperoleh dengan mencuci bronkus / alveoli

dengan larutan yang tepat dan aspirasi cairan yang dihasilkan.

- Calculi ('batu') adalah endapan kristal keras yang terbentuk di berbagai

rongga tubuh seperti ginjal

- Cairan dialisis (extracorporeal atau peritoneal) adalah cairan yang tersisa

setelah dialisis telah dilakukan

- Gastric lavage adalah spesimen yang diperoleh dengan cara mencuci

lambung dengan larutan yang tepat dan aspirasi cairan yang dihasilkan

- Rambut (kepala, aksila, atau kemaluan) kadang digunakan untuk menilai

keterpaparan baru-baru ini terhadap racun seperti obat-obatan terlarang
atau logam berat

- Potongan kuku atau kuku (jari atau kaki) kadang digunakan untuk menilai
terpapar obat-obatan terlarang atau logam berat

- Swab (olesan) hidung adalah cairan yang dikumpulkan ke kapas dari

dalam hidung

- Cairan oral adalah campuran air liur, cairan gingivial crevicular (cairan
antara gigi / gusi), sisa-sisa seluler, darah, lendir, partikel makanan, dan
bahan lain yang dikumpulkan dari mulut.

- Isi perut dari (i) aspirasi gastrik, (ii) cuci lambung, (iii) muntahan, atau (iv)
residu di perut saat otopsi
 - Spesimen jaringan diperoleh dengan pembedahan atau postmortem.
Jaringan yang diperoleh dari janin dan / atau plasenta kadang dapat
digunakan untuk analisis.

- Sampel biopsi adalah sampel kecil jaringan yang diperoleh dengan teknik
sampling spesialis

- Muntahan mencerminkan komposisi aspirasi gastrik

g. Serum

Bila darah utuh dibiarkan (15 menit, suhu kamar) dalam tabung kosong
(tidak ada antikoagulan), bentuk gumpalan yang akan ditarik cukup untuk
memungkinkan serum dikumpulkan. Untuk banyak analisis, serum lebih disukai
daripada plasma karena menghasilkan lebih sedikit presipitat (fibrin) pada
pembekuan dan pencairan.

h. Plasma
Pemisahan plasma dari darah utuh dengan antikoagulan biasanya
memerlukan sentrifugasi. Hubungan antara diameter rotor dari pusat, kecepatan
sentrifugasi dan gaya sentrifugal relatif (g-force) ditetapkan.
Pada sentrifugasi darah utuh dengan antikoagulan (2000 g, 10 menit, 2-8oc
jika perlu), maka akan terpisah menjadi tiga lapisan: lapisan bawah (biasanya
sekitar 45% volume) terdiri dari sel darah merah; lapisan tipis antara sel darah
putih dan platelet yang disebut 'buffy coat adalah lapisan berikutnya; dan lapisan
atas, berair, berwarna jerami adalah plasma (sekitar 50% v/v). Asalkan analit
stabil, darah utuh dan antikoagulan dapat disimpan pada suhu kamar atau
didinginkan (2-8oc) selama dua hari atau lebih sebelum plasma dipisahkan.
Lebih banyak plasma dapat dipisahkan dari darah utuh daripada serum.
Beberapa tabung komersial mengandung zat seperti manik-manik plastik atau gel
yang berada pada antarmuka antara sel dan plasma untuk membantu pengumpulan
plasma. Gel pemisah (gel separator) dapat menyebabkan masalah pada analisis
beberapa obat walaupun gel yang diformulasikan telah diklaim memiliki sedikit
efek pada pengukuran obat terapeutik, tabung yang mengandung gel pemisah
sebaiknya dihindari. Penggunaan tabung semacam itu akan membuat banyak
analit trace elemen tidak ada dan dapat mengganggu analisis untuk pelarut dan
volatil lainnya.
 i. Sel darah
Untuk mengumpulkan eritrosit, darah heparinisasi disentrifugasi (2000 g,
10 menit), plasma, buffy coat dan 10% eritrosit teratas (terutama retikulosit)
dikeluarkan, dan sisa eritrosit dicuci dengan larutan garam isotonik, untuk
menghilangkan plasma yang terperangkap. Sel dapat digunakan secara langsung
atau beku, baik untuk menyebabkan hemolisis, atau untuk penyimpanan.
Trombosit biasanya diisolasi dengan sentrifugasi yang lambat (misalnya
300 g, 15 menit) dari darah utuh untuk menghasilkan plasma kaya trombosit,
kemudian disentrifugasi (2000 g, 10 menit) untuk memisahkan trombosit. Sel
darah putih lainnya paling sering diperoleh dengan sentrifugasi melalui media
kepadatan yang sesuai (sesuai petunjuk pabriknya) atau diisolasi dengan teknik
antibodi fase padat.

j. Urin
Spesimen urin yang berbeda, misalnya acak, pagi hari, 24 jam, dapat
dikumpulkan dalam perjalanan studi metabolik atau lainnya. Dalam studi
metabolisme, penting untuk mencatat waktu awal dan akhir periode pengumpulan
sehingga tingkat produksi urin dapat dihitung. Sampel urin acak adalah spesimen
midstream – diberi pengawet, seperti 2 mol asam klorida per liter ditambahkan
setelahnya. Urin segar berwarna kuning / kuning-hijau, namun pada penyimpanan
dalam larutan asam berubah warna menjadi kuning / coklat dan bahkan sampai
coklat tua karena oksidasi urobilinogen menjadi urobilin. Kristal, terutama asam
urat dan kalsium oksalat, dapat menyebabkan kekeruhan.
Spesimen urin acak, pagi hari, atau end-of-shift dikumpulkan, adalah cara
umum untuk menghubungkan hasil analisis tertentu dengan konstituen urin 'tetap'
seperti kreatinin, yang dianggap diekskresikan pada tingkat yang relatif konstan
pada subjek normal.
Konsentrasi banyak obat dan metabolit, dan beberapa konstituen endogen, akan
tetap sama dalam urin yang diasamkan selama lebih dari seminggu pada suhu
kamar, dan sampai satu bulan pada 2-8oc. Urin yang tidak diasamkan mengalami
serangan mikrobiologis dan banyak perubahan terjadi, termasuk hilangnya asam
amino.
 k. Isi lambung
Spesimen ini meliputi muntahan, aspirasi lambung dan cairan lambung
serta isi perut pada postmortem. Sifat sampel ini bisa sangat bervariasi dan
prosedur tambahan seperti homogenisasi diikuti dengan penyaringan dan / atau
sentrifugasi mungkin diperlukan untuk menghasilkan cairan yang dapat diperiksa

l. Faces
Analisis feces jarang dilakukan, namun kadang-kadang analisis obat dan
kemungkinan metabolit mungkin diperlukan dalam studi farmakokinetik dan
metabolisme. Analisis mungkin juga diminta jika, misalnya, muncul pertanyaan
tentang kebocoran obat dari paket obat antemortem yang ditelan. Tidak seperti
plasma, urin, dan sampel cairan lainnya, faeces tidak homogen, dan oleh karena
itu seringkali diperlukan untuk menganalisis keseluruhan sampel atau
menghomogenkan seluruh sampel dan membuktikan bahwa fraksi yang diambil
untuk analisis mewakili keseluruhan. Diperlukan lebih dari sehari sebelum obat
oral atau metabolit obat muncul dalam faeces.

m. Jaringan
Spesimen histologi biasanya dikumpulkan ke dalam bahan pengawet
seperti formalin (larutan formaldehyde dalam air). Perlakuan awal semacam itu
harus diingat jika analisis toksikologi dilanjutkan. Sampel jaringan yang diperoleh
postmortem biasanya disimpan pada suhu 4oc sebelum analisis.

 Pedoman Pengumpulan Sampel Toksikologi

Banyak prosedur toksikologi analitis memerlukan pengumpulan
darah, urin, isi lambung, dan 'residu kasus', yaitu bahan, botol, tablet atau
semacamnya yang ditemukan di tempat kejadian sampel cairan dan jaringan
lain yang sesuai juga harus dikumpulkan secara rinci, terutama saat
 menyelidiki kematian, namun mungkin tidak diperlukan untuk analisis
kecuali jika diperlukan penyelidikan khusus.
Hanya ada sedikit informasi tentang distribusi obat dalam jaringan
padat pada manusia; koleksi sekitar 5 g spesimen dari beberapa lokasi pada
organ seperti otak dianjurkan, jika keseluruhan organ tersedia. Organ hati
diambil lobus kanan. Kelebihan dan kekurangan berbagai spesimen dijelaskan
pada.
Jika keracunan dicurigai, sampel darah 10 ml (tabung heparin lithium
atau edta) dapat diambil dari orang dewasa (secara proporsional kurang dari
anak kecil) sesegera mungkin, misalnya setelah masuk rumah sakit. Selain itu,
2 ml darah harus dikumpulkan dalam tabung fluoride / oksalat jika dicurigai
etanol. Perhatikan bahwa tabung jenis ini untuk penggunaan klinis hanya
mengandung sekitar 0,1% (w/v) fluorida, sedangkan sekitar 2% (w/v) fluorida
(40 mg sodium fluorida per 2 ml darah) diperlukan untuk menghambat
sepenuhnya aktivitas mikroba pada spesimen. Penambahan fluoride juga
membantu melindungi obat labil lainnya seperti clonazepam, kokain, dan
nitrazepam dari degradasi. Penggunaan penyeka desinfektan yang
mengandung alkohol harus dihindari, gunakan antikoagulan larutan heparin
yang mengandung pengawet fenol.

 Pengambilan Dan Penanganan Sampel

Secara umum, spesimen biologis harus disimpan pada suhu 4oc
sebelum diangkut ke laboratorium. Pengecualian untuk ini termasuk rambut
dan kuku, yang stabil pada suhu kamar, dan kertas saring yang diadsorpsi
darah kering, yang merupakan cara mudah untuk menyimpan dan
mengangkut sampel darah untuk analisis tertentu jika transportasi dan
penyimpanan berpendingin tidak ada.
Setiap botol spesimen harus disegel dengan aman untuk mencegah
kebocoran, dan dikemas secara terpisah dalam kantong plastik terpisah.
Perhatian khusus harus diberikan pada kemasan sampel yang akan dikirim
melalui pos atau kurir agar sesuai dengan peraturan kesehatan dan
keselamatan saat ini. Volume sampel atau jumlah yang lebih kecil dari yang
ditunjukkan cukup memadai untuk melengkapi analisis yang dibutuhkan.
Pengiriman sampel yang sangat kecil dapat mengurangi sensitivitas dan
 cakupan analisis yang dilakukan, namun sampel semacam itu harus selalu
diteruskan ke laboratorium. Spesimen sisa harus disimpan pada suhu -20°c
atau di bawah sampai penyelidikan atas kejadian telah selesai.
Dalam pemeriksaan postmortem, penggunaan tabung plastik keras
sekali pakai (polystyrene) steril direkomendasikan. Jika tidak tersedia, wadah
dengan penutup yang aman sesuai dengan volume spesimen harus digunakan.
Beberapa laboratorium menyediakan wadah spesimen untuk mengumpulkan
spesimen darah dan urine postmortem. Penting untuk dicatat jika urin
diperoleh dengan menggunakan kateter. Kemasan yang sesuai untuk
pengiriman spesimen melalui pos juga dapat diberikan. Saat kematian terjadi
di rumah sakit dan keracunan dicurigai, spesimen antemortem residual harus
diperoleh sebagai dari laboratorium patologi rumah sakit (tidak hanya
patologi dan hematologi kimiawi, tetapi juga imunologi, obat transfusi, dan
virologi mungkin sumber spesimen semacam itu) dan diajukan untuk analisis
toksikologi selain spesimen postmortem. Perhatikan bahwa ketersediaan
spesimen ante atau peri-mortem tidak meniadakan kebutuhan untuk
mengumpulkan spesimen postmortem.
Semua sampel organ dan jaringan, dan setiap botol tablet atau residu
kejadian, harus ditempatkan di wadah terpisah untuk menghindari
kemungkinan kontaminasi silang. Sampling melalui jaringan yang
mengandung konsentrasi analit tinggi dapat menyebabkan kontaminasi
sampel.
Semua sampel organ dan jaringan, dan setiap botol tablet atau
residu pemandangan, harus ditempatkan di wadah terpisah untuk
menghindari kemungkinan kontaminasi silang. Sampling melalui jaringan
yang mengandung konsentrasi analit tinggi dapat menyebabkan
kontaminasi sampel.

Wadah spesimen
 Wadah spesimen urin, serum, darah, cairan lambung, harus dari bahan
yang tidak mudah pecah, seperti dari polietilen yang kuat, tidak bocor,
bersih dan kering.
  Tertutup rapat (tutupnya berulir), bermulut lebar.

Bahan pengawet
Bahan pengawet diperlukan jika spesimen harus dirujuk ke laboratorium
pemeriksaan yang lebih mampu dan berjarak cukup jauh, atau ke laboratorium
lainnya untuk pemeriksaan konfirmasi. Cantumkan nama bahan pengawet

Pemberian label
Secara umum label harus tertulis antara lain:
1. Nama pasien :

2. Umur :

3. Jenis kelamin :

4. Alamat :

5. Tanggal pengambilan :

6. Lokasi pengambilan :

7. Jenis spesimen :

8. Jumlah spesimen :

9. Nama dan paraf petugas pengambil spesimen :

Untuk pemeriksaan yang bersifat rahasia (rhs) maka label cukup diberi
kode

Pedoman pembekuan specimen:

1. Jangan membekukan darah utuh jika plasma atau serum harus dianalisis

2. Pastikan pelabelan itu tahan air

3. Pastikan tabung tertutup rapat dan terisi dengan baik, tapi jangan terlalu banyak
mengisi tabung, terutama tabung kaca

4. Jangan terlalu lama untuk meminimalkan efek pengeringan beku

5. Simpanlah catatan isi freezer

6. Simpanlah catatan suhu freezer yang terus-menerus

7. Setting alarm jika terjadi kegagalan freezer

 Penanganan khusus sampel toksikologi

Tujuan pemeriksaan toksikologi secara umum dibagi dua yaitu untuk
projustisia/penyidikan dan diagnostic atau terapi, dimana untuk projustisia,
pemeriksaan harus dilakukan mengikuti prosedur yang ketat karena implikasinya
dalam pengadilan.

Pedoman penerimaan dan penanganan sampel/ barang bukti untuk

penyidikan
1. Persyaratan penerimaan barang bukti
a. Persyaratan administrasi
 Surat permintaan pemeriksaan dari penyidik polri atau dari dokter
forensik (tanggal dari lp sampai permintaan tidak lebih dari tujuh
hari dan tanda tangan penyidik minimal kanit/kepala unit) jika
berita acara penyitaan lebih dari satu maka surat permintaan harus
ada dan sesuai untuk masing-masing barang bukti, sesuai nama.
 Laporan polisi dari satuan kepolisian yang menangani kasus secara
terinci, tidak ada coretan, stempel asli.
 Berita acara penyitaan barang bukti, stempel asli
 Berita acara penyisihan (penyisihan sebagian barang bukti yang
dikirim ke laboratorium) dan pengambilan barang bukti
 Berita acara pembungkusan harus sesuai dengan barang bukti yang
dikirim dan penyegelan barang bukti dari penyidik
 Berita acara penahanan (asli, ditandatangani oleh tersangka)
 Laporan kemajuan dilengkapi bila barang bukti berupa cairan
tubuh
 Berita acara pengambilan sampel urine atau darah
b. Persyaratan teknis
Pengambilan barang bukti (bb) bukan cairan tubuh :
- Barang bukti sesuai rincian tercantum berita acara pembungkusan /
penyegelan.
- Berupa tanaman lengkap/bagian dari tanaman (daun, bunga, biji), semua
dikirim ke laboratorium
- Bila berupa sediaan farmasi (tablet, kapsul, ampul), maka bb
dikelompokkan sesuai dengan bentuk sediaan dan sesuai dengan nama
obat
- Bila berupa wadah sediaan farmasi (botol, vial, usahakan yang masih ada
sisa obat jangan dibuang)
- Bila berupa peralatan medis atau bahan-bahan sisa penggunaan (spuit, sisa
puntung rokok, abu rokok), bb dikumpulkan secara terpisah.
- Bila berupa larutan dari satu wadah, jika memungkinkan pipet
- 10 ml sampel untuk pemeriksaan; bila dari beberapa wadah, kelompokkan
menurut nomor lot atau karakteristik yang sama, ambil dengan rumus:
𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙=√𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑤𝑎𝑑𝑎ℎ𝑑𝑎𝑙𝑎𝑚𝑠𝑎𝑡𝑢𝑘𝑎𝑟𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖𝑠𝑡𝑖𝑘 dari
setiap wadah ambil 10 ml.

 PREPARASI SAMPEL TOKSIKOLOGI

Meskipun dalam tes warna tes warna toksikologi analitik sederhana

dan beberapa pengujian immunoassays dan metode berbasis reaksi
enzimatik, sering dilakukan secara langsung pada spesimen, beberapa
bentuk perlakuan terhadap sampelnya biasanya diperlukan sebelum
analisis, bahkan jika ini hanya terdiri dari menambahkan standar internal.

gambar 3.5 tahap tahap analisis sampel toksikologi

1. Tujuan
Tambahan dari preparasi sampel dapat menghilangkan residu
yang tidak larut dan senyawa yang mengganggu, dan kadang-kadang
konsentrasi atau bahkan pengenceran analit untuk menyesuaikan
sensitivitas. Pilihan ekstraksi pelarut yang bijaksana, termasuk
ekstraksi balik terkontrol ph dari elektrolit lemah menjadi larutan
berair, kadang-kadang diikuti dengan ekstraksi ulang ke dalam pelarut,
dapat memperbaiki selektivitas dan sensitivitas.
2. Metode
Metode yang dipilih untuk persiapan sampel tergantung pada
keseluruhan strategi analisis. Jika analit itu labil secara termal maka gc
biasanya tidak tepat, karena menggunakan penguapan pelarut ekstraksi
pada suhu tinggi. Jika konsentrasi analit tinggi, atau pengujian tertentu
sangat sensitif, maka persiapan sampel mungkin minimal. Di sisi lain,
analisis jejak mungkin memerlukan suatu prosedur pengujian
kompleks dengan beberapa konsentrasi dan langkah pembersihan. Urin
dan empedu mungkin mengandung konsentrasi senyawa yang lebih
tinggi dan lebih sedikit residu yang tidak larut daripada darah utuh,
plasma atau serum, dan sebagai hasilnya persiapan sampel terkadang
 disederhanakan. Dengan kata lain, preparasi sampel disesuaikan
dengan tujuan. Metode apapun diplih semudah mungkin secara teknis,
tidak hanya untuk meminimalkan biaya, tetapi juga untuk
memaksimalkan validitas dan reproduksibilitas (flanagan, 2007).

 Metode persiapan sampel

1. Presipitasi protein

Presipitasi protein plasma dengan analisis supernatan yang

dihasilkan setelah sentrifugasi mungkin merupakan pendekatan
yang paling sederhana, prosedur yang digunakan diturunkan dari
metode preparasi sampel yang digunakan sebelum spektrofotometri
uv. Pada beberapa kasus supernatan dianalisis secara langsung
dengan hplc atau oleh lc-ms. Kemungkinan hilangnya analit
dengan presipitat harus dipertimbangkan.
2. Mikrodifusi
Mikrodifusi adalah suatu bentuk pemurnian sampel yang
bergantung pada pembebasan senyawa yang mudah menguap,
misalnya hidrogen sianida. Larutan uji yang dimasukkan dalam
satu kompartemen sistem tertutup, senyawa yang menguap
(volatile) selanjutnya 'ditangkap' menggunakan pereaksi yang
sesuai (larutan natrium hidroksida dalam kasus higrogen sianida)
yang disimpan di kompartemen terpisah dari peralatan conway
yang dibuat khusus.
3. Hidrolisis metabolit terkonjugasi

Pelepasan konjugasi merupakan langkah penting dalam

analisis toksikologi, terutama urin. Banyak obat dan metabolit
(misalnya benzodiazepin, obat pencahar, opiat dan steroid)
diekskresikan dalam urin dan dalam empedu terutama sebagai
konjugat dengan asam d- glukuronat atau dengan sulfat, atau
kadang-kadang keduanya. Sementara konjugat sulfat adalah
senyawa ester, glukuronida dapat berupa eter (aseton), ester (asil),
atau n - atau s- glukuronida. (silahkan dibaca lagi bab 2 tentang
biotransformasi atau metabolism xenobiotic). Untuk
 memaksimalkan sensitivitas dalam skrining obat / racun, dan jika
perlu, untuk mengukur konjugat tersebut secara tidak langsung,
yaitu bersamaan dengan pengukuran analit yang tidak terkonjugasi,
hidrolisis selektif atau tidak selektif sampel dapat dilakukan
sebelum pengolahan sampel lebih lanjut.
 Teknik preparasi
Tekik preparasi sampel toksikologi yang dipilih bergantung pada
jenis sampel dan tujuan pengujian.
a. Sampel berbentuk serbuk atau tablet

Satu tablet sampel (50 mg serbuk) larutkan dalam 10 ml metanol, bila perlu
saring.

b. Sampel ganja

1) Tanaman ganja (cannabis plant, cannabis herba)

Lebih kurang 400 mg cuplikan yang telah diserbuk haluskan,

masukkan ke dalam erlenmeyer bertutup, tambahkan 10 ml petroleum
eter atau toluen, dan kocok selama 1 jam, kemudian saring. Bila perlu
tambahkan lagi pelarut hingga diperoleh volume 10 ml

2) Damar ganja (cannabis resin)

Lebih kurang 100 mg damar ganja dalam mortir, gerus dengan ± 2 ml

toluen sampai terbentuk pasta. Dengan bantuan 8 ml toluen masukkan
ke dalam erlenmeyer bertutup, kocok selama 1 jam dan saring.
3) Hasis (hasis oil, cannabis oil)

Lebih kurang 50 mg hasis larutkan dalam 10 ml toluen.

c. Sampel cuplikan berbentuk cairan

Ambil minimal 10 ml cairan, tanpa penambahan zat lain.

d. Spesimen darah/serum/plasma

Persiapan spesimen darah/serum/plasma dengan cara ekstraksi adalah

sebagai berikut:

1) Ekstraksi darah/serum/plasma

2) Ekstraksi urin/cairan lambung

 3) Pemeriksaan fraksi-fraksi dengan metode pemeriksaan klt

1) Ekstraksi darah/serum/plasma

a) Prinsip

Pemisahan/isolasi specimen dengan pelarut organic pada ph tertentu

dari zat-zat yang mengganggu berdasarkan dengan kelarutannya. Hasil
ekstraksi disaring dan dikeringkan sehingga didapat residu yang dapat
dianalisa.
b) Peralatan :

(1) Vortex mixer

(2) Shaker

(3) Sentrifus

(4) Tapered tube

(5) Corong pisah

(6) Corong

(7) Batang pengaduk

(8) Penangas air

(9) Sonikator

c) Reagen

(1) Pelarut organic (chcl3)

(2) Natrium sulfat anhidrat

(3) Natrium hidroksida

(4) Asam sulfat pekat

d) Cara kerja

(1) Ke dalam 4 ml specimen tambahkan 2 ml buffer fosfat (ph 7,4)

dan 40 ml kloroform (chcl3) kocok, kemudian tambahkan 2
gram na2so3 anhidrat kocok kembali untuk menghasilkan
masa yang padat.
(2) Tuangkan chcl3 melalui saringan
 (3) Ektraksi kembali masa padat tersebut dalam 20 ml chcl 3,
campur kedua hasil ekstraksi fraksi chcl3. Simpan masa padat
yang ada
(4) Apabila terdapat salisilat i fraksi chcl3 diekstraksi dengan
nahco3 untuk menghilangkan salisilat yang dapat menghambat
penentuan selanjutnya
(5) Pada fraksi chcl3, tambahkan 8 ml naoh 0,45 m (setara dengan
2 kali volume specimen yang diambil)
(6) Kocok selama 2 menit kemudia sentrifus. Larutan naoh
kemungkinan mengandung barbiturat dan senyawa asam lemah
lainnya. (fraksi b) isi fraksi dapat dilihat pada table 3.6
(7) Cuci fraksi chcl3 dengan sedikit air, buang air cucian,
keringkan fraksi chcl3 dengan na2so4 anhidrat, uapkan sampai
kering. Residu kemungkinan mengandung obat-obat netral dan
beberapa obat yang bereaksi basa (fraksi c) seperti
klordiaepoksid, diazepam dan nitrazepam.
(8) Apabila specimen masih ada, basakan dengan larutan
ammonia, lalu ekstraksi 2 kali, masing-masing dengan 10ml
chcl3, kemudian keringkan dengan na2so4 anhidrat. Uapkan
larutan sampai kering.
(9) Residu kemungkinan mengandung obat golongan basa (fraksi
d)

2) Ekstraksi urin/cairan lambung

a) Prinsip

Pemisahan/isolasi spesimen dengan pelarut organik pada ph

tertentu dari zat-zat yang mengganggu, hasil ekstraksi disaring dan
di keringkan sehingga didapat residu yang dapat dianalisa.
b) Peralatan : vortex mixer, shaker, sentrifus, tapered tube,
corong pisah, corong, batang, pengaduk, penangas air
c) Reagen

(1) Pelarut organik (eter)

(2) Natrium sulfat anhidrat

(3) Natrium hidroksida

(4) Asam sulfat pekat

d) Cara kerja

(1) Tambah 10 ml urin dengan asam phosphate dan asam tartrat untuk
membuat ph 3

(2) Ekstraksi 2 kali masing-masing dengan 30 ml eter, campur hasil

ekstraksi

(3) Cuci dengan 5 ml air dan tambahkan air cucian ke dalam specimen

Simpan fraksi air untuk ektraksi selanjutnya

(4) Fraksi eter diatas diekstraksikan dengan 5 ml larutan natrium

bikarbonat

(5) Fraksi eter diesktraksi kembali dengan 5 ml naoh 0,45 n dan

simpan sebagian hasil ekstraksi untuk pemeriksaan barbiturate
dan beberapa substansi asam lemah lainnya, misalnya
klordiazepoksid (fraksi b) (tabel 3.
(6) Sebagian lain dari fraksi eter diatas dicuci kembali dengan air,
saring hasil cucian dan tambahkan dengan na2so4 anhidrat,
uapkan sampai kering.
(7) Residu kemungkinan mengandung obat-obatan netral (fraksi c)

(a) Fraksi air pada butir 3 ditambah dengan ammonia untuk

membuat ph 8

(b) Ekstraksi sebanyak 2 kali masing-masing dengan 10ml chcl3.

(c) Cuci campuran ekstrak fraksi dengan air, kemudian saring

dan tambahkan dengan sedikit asam tartrat untuk
menghindari hilangnya zat-zat yang mudah menguap.
(d) Uapkan sampai kering, residu kemungkinan mengandung
antara lain golongan benzodiazepin: klordiazepoksid,
diazepam, nitrozepam (fraksi d).
 (e) Ekstraksi cairan lambung dilakukan seperti ekstraksi pada
urin dengan tambahan cara kerja specimen yang akan
diekstraksi sebagai berikut: tambahkan ke dalam specimen
ammonium sulfat (padat berlebihan) bersama-sama dengan
beberapa tetes asam phosphate 10%, panaskan, kocok dan
saring. Filtrat dilakukan seperti cara kerja di bawah ini
(depkes, 2004).
e. Sampel rambut

1) Dekontaminasi dengan pelarut organic:

a) Ambil untai rambut (~ 100 mg).

b) Cuci dengan 5 ml diklorometana selama 2 menit.

c) Keringkan dengan kertas adsorben.

d) Cuci kembali dalam 5 ml diklorometana selama 2 menit.

e) Keringkan lagi

2) Prosedur dengan pelarut berair

a) Ambil untai rambut (~ 100 mg).

b) Cuci dengan 10 ml sds 0,1% dalam air (b / v) selama 3 menit.

c) Bilas dua kali dengan 10 ml air selama 3 menit.

d) Bilas dengan 10 ml aseton selama 3 menit.

e) Keringkan dalam oven pada suhu 60 ° c selama 30 menit.

3) Preparasi

langkah pertama adalah homogenisasi dengan memotong rambut

menjadi potongan 1-3 mm atau dengan grinder. Untuk memastikan
homogenitas sampel, disarankan agar menggunakan setidaknya 20-30
mg rambut. Hindari kontaminasi gunting) dan harus digunakan botol
sekali pakai. Senyawa yang terdapat dalam matriks rambut dapat
dilarutkan dengan menggunakan berbagai metode ekstraksi, yang
efisiensi dan selektivitasnya harus sesuai dengan karakteristik obat
target dan teknik analisis.
a. Ekstraksi dengan metanol
 Metanol melarutkan senyawa lipofilik netral, dan hidrofilik
sedang; karena sifatnya yang hidrofilik, ia menembus rambut,
menghasilkan pembengkakan matriks dan pembebasan obat-
obatan. Sonikasi sampel dalam bak mandi ultrasonik
meningkatkan proses ekstraksi.
1) Keuntungan cara ini adalah:

a. Hampir semua obat dapat diekstraksi dengan methanol,

b. Efektif terhadap senyawa hidrofilik dan lipofilik, prosedur

ini "ringan" terhadap senyawa yang tidak stabil yang
mudah mengalami hidrolisis (misalnya heroin dan
kokain).
c. Injeksi langsung ekstrak pada gc-ms atau lc-ms
dimungkinkan bila konsentrasi obat cukup tinggi.
d. Campuran asam organik metanol / berair telah terbukti
memperbesar panel obat yang dapat diekstraksi secara
efisien.
2) Kekurangan

a) Ekstrak metanol sering menggabungkan zat yang

mengganggu, dan prosedur pembersihan (seperti ekstraksi
fase cair / cair atau padat) dianjurkan dalam penggunaan
rutin.
b) Pemulihan obat yang dapat diionkan tidak lengkap dan
lebih rendah daripada prosedur ekstraksi lainnya.

b. Ekstraksi dengan larutan asam atau larutan buffer

Inkubasi pada hcl berair 0,01-0,50 m atau buffer fosfat m

pada ph 6,4-7,6 biasanya dilakukan pada suhu 56°c atau 60°c
dalam semalam. Bila diperlukan (misalnya untuk menyingkirkan
kontaminasi eksternal), morfin glukuronida, yang merupakan
fraksi minor dari morfin total, dapat ditentukan dengan
membandingkan konsentrasi morfin sebelum dan sesudah
perlakuan dengan glukuronidase / arilulfatase.
 1) Keuntungan:

a) Ekstraknya umumnya lebih bersih dari pada ekstrak metanol.

b) Obat-obatan dasar diekstraksi dengan efisien.

2) Kekurangan:

a) Hidrolisis molekul berikut telah dilaporkan:

b) Konversi parsial kokain menjadi benzoylecgonine;

c) Konversi heroin (diacetylmorphine) menjadi 6-

monoacetylmorphine (6-mam);
d) Hidrolisis 6-mam menjadi morfin.

c. Digesti dalam naoh encer

Larutan 1 m naoh ditambahkan pada sampel rambut dan

inkubasi selama satu jam pada 80°c, atau semalam pada suhu
60°c. Hanya cocok untuk obat-obatan yang stabil dalam kondisi
basa.
1) Kelebihan:

a) Sesuai terutama nikotin, amfetamin dan beberapa neuroleptik.

b) Sangat efektif untuk pemulihan kuantitatif

c) Dapat digunakan dalam kombinasi dengan mikrokontroler

fase padat headspace (hs-spme) untuk mendeteksi senyawa
semi-volatile (misalnya turunan ampheta- mine, anestetik
lokal, barbiturat, diphenhydramine, ketamin, metadon,
phencyclidine, phenothiazines, tramadol, dan antidepresan
trisiklik).
d) Dapat berguna untuk mendeteksi obat yang
konsentrasinya sangat rendah seperti metabolit
cannabinoids.
2) Kekurangan

a) Tidak sesuai untuk obat-obatan yang tidak stabil dalam

kondisi basa (misalnya kokain, benzodiazepin).
b) Pelarutan matriks rambut secara parsial atau lengkap
menghasilkan larutan "kotor" yang membutuhkan
 pembersihan (clean up) sebelum analisis instrumental (un,
2014).

Referensi : badan pengembangan dan pemberdayaan sumber daya manusia

kesehatantahun 2018.