Indikasi
Membantu diagnosis gangguan fungsi trombosit baik kongenital (Von Willebrand’s disease)
maupun didapat, pada pasien dengan riwayat perdarahan
Dugaan peningkatan agregasi trombosit (DM, hiperlipidemia)
Monitoring terapi anti-trombosit (aspirin, ticlopidine, clpopidogrel, abciximab) paska stroke/
heart attack
Deteksi faktor resiko trombosis arteri (PJK, stroke)
Deteksi resistensi aspirin
Monitoring fungsi trombosit selama operasi CABG (sirkulasi mekanik dengan mesin jantung-
paru mengaktifkan sejumlah besar trombosit dan menyebabkan dysfungsional trombosit),
kateterisasi jantung, transplantasi hepar.
Skrining pasien preoperasi beresiko perdarahan selama prosedur invasif, misalnya pasien
dengan riwayat perdarahan atau mengkonsumsi obat yang mempengaruhi kemampuan darah
untuk membeku seperti aspirin dan NSAID
Prinsip Pemeriksaan
Perubahan transmisi cahaya (light transmittance changes) à penambahan agonist (aggregating
agents) ke PRP menginduksi terjadinya agregasi trombosit transmisi cahaya melalui PRP
Agonist : ADP (yang umumnya dipakai), epinferin, kolagen, thrombin, ristocetin
Alat
Agregometer trombosit chronolog model490 Centrifuge
Kuvet, Stir Bar Tabung plastik dan tutupnya
Pipet + disposable plastik 5µl, 20 µl, 45 µl, Tips
500 µl
Bahan
Darah citras yang telah dicentrifuge Platelet Rich Plasma (PRP), Platelet Poor Plasma (PPP)
Larutan ADP konsentrasi 10µM ,5 µM , 2 µM , 1 µM (sebagai agonist/ induktor)
Harga Normal
ADP 1 µM 3-15%
ADP 2 µM 11-36%
ADP 5 µM 25-68%
ADP 10 µM 49-84%
Keterangan :
Kinerja
1. Pengulangan intra uji coba menggunakan produk diagnostik Stago
2. Pengulangan antar sampel menggunakan produk diagnostik Stago*
Plasma Normal (%) Plasma Patologi (%)
PT (“) < 1,5 < 3* <2 < 3*
APTT (“) < 1,5 < 3* <2 < 3*
Fib <4 < 4* <5 < 5*
CHRONOMETRY
Prinsip: mengukur variasi amplitudo osilasi bola ↓ amplitudo sesuai dengan ↑ viskositas
medium (fenomena koagulasi)
Pada viskositas konstan, gerakan pendulum konstan seperti gerakan ayunan dari bola berkat 2 rel
yang melengkung ke dalam di bagian bawah cuvette & di bidang elektromagnetik (dibuat secara
alternatif di setiap sisi kepala pengukur mempertahankan gerakan ayunan)
Frekuensi lapangan ini mendekati frekuensi osilasi bola yang tepat menjamin tingkat
sensitivitas sistem baik
Setiap measurement head (emitting coil & receiving coil), medan magnet dibuat oleh 2 motor
coils & otomatis disesuaikan dengan perangkat lunak sebagai fungsi viskositas medium dan
jenis bekuan yang diuji (bekuan lemah untuk Fibrinogen, bekuan normal untuk yang lain)
Viskositas konstan, amplitudo dari osilasi bola konstan
Viskositas ↑ (fenomena koagulasi), amplitudo osilasi bola ↓
Algoritma menggunakan variasi amplitudo ini untuk menentukan waktu koagulasi
Fotometri
Prinsip deteksi dalam tes kolorimetrik/ imunologi
pada STA-R Evolution® berdasarkan pada absorbansi
(cahaya optik, O.D.) dari cahaya monokromatik (405
nm/ 540 nm) yang melewati sebuah cuvette pada saat
reaksi kromogenik terjadi
Incident light (I0) yang menembus cuvette sebagian
terserap oleh media reagen
Transmitted light (I1 = I0 + Ip) diukur & diubah
menjadi absorbansi A = Log (I1/I0)
Note: Decimal logarithm
Ambient light (Ip) dieliminasi dengan mengambil 2 pengukuran transmitted light dalam interval:
I1 = I0 + Ip (pengukuran pertama dengan incident and ambient light),
I2 = Ip (pengukuran kedua dengan menghalangi incident light, sesuai dengan ambient light)
I0 = I2 - I1 sesuai dengan incident light (ambient light (Ip) tetap identik antara 2 pengukuran)
Sumber monokromatik incident light (I0) diperoleh dari lampu halogen tungsten & dari filter
(405 nm / 540 nm) pada pemegang filter yang dapat dipindah.
Berbagai bagian ada di modul optik, lampu monokromatik diarahkan ke measurement heads
oleh serat optik, kemudian ke analog measurement card melalui serat optik lain
I0 (incident light) diketahui berkat serat referensi (serat yang masuk langsung dari modul optik
ke analog measurement card)
Dari pengukuran densitas optik hukum Beer-Lambert diterapkan, yaitu: A = I.C
A absorbance, coefficient of molecular extinction, I panjang optical trajectory, C concentration
Konsentrasi kromogen yang dicari berbanding lurus dengan absorbansi.
Catatan: Semua pengukuran densitas optik dilakukan berhubungan dengan serat referensi
Langkah – langkah dalam analisis
Plasma (sampel, kontrol/ kalibrator) dipipet dengan jarum n°1 ± zat pengencer
didistribusikan ke cuvette (antar jemput dengan cuvette berhenti di tempat sampel)
Jika reagen perantara diperlukan, umpan dihentikan pada titik reagen & reagen ditambahkan ke
cuvette dengan jarum n°2
Shuttle kemudian berhenti di measurement stop untuk lengan yang dilengkapi dengan suction
cups untuk mentransfer cuvette ke zona inkubasi
Reagen yang akan didistribusikan setelah inkubasi pertama (terutama reagen awal) dipipet
dengan jarum n ° 3
Saat pemanasan awal reagen diperlukan sd 37°C, pereaksi dipertahankan ± 2 detik di tabung
pemanas jarum n°3
Then, with or without preheating, the reagents are distributed in the corresponding cuvette in the
measuring area. As soon as measuring is finished, the suction cup arm takes the cuvette and
disposes it in the cuvette wastebin.
Kemudian, dengan atau tanpa pemanasan awal, reagen didistribusikan ke cuvette yang sesuai di
area pengukuran
Begitu pengukuran selesai, arm with the suction cups mengambil cuvette dan menyimpannya di
cuvette wastebin
Sampel Loading
Tabung utama dimuat ke rak 5 tabung setelah sentrifugasi
tray loading/unloading area of the STA-R Evolution
Software STA-R Evolution® mendeteksi adanya keranjang
rak dan mulai memuat isinya. Setiap rak bergerak di depan
pembaca bar code sampel.
Bar code label mengidentifikasi rak
Roda memutar tabung di depan pemindai kode batang sampai
label dipindai (hanya ada jika menggunakan Diagnostica
Stago racks & the Stago reading mode)
Lokasi tabung dalam analyzer dapat diketahui
pleh pemindai identifikasi rack & tube
Rak kemudian pindah ke area pipetting
There is an area where the samples can be
pipetted immediately (zone A with 28 racks) and
a storage area where the samples can not be
directly pipetted.
Ada area sampel dapat segera dipipet (zona A 28
rak) & area penyimpanan dimana sampel tidak
langsung dipipet
SYSMEX CS-2100
Sysmex CS-2100i adalah instrumen koagulasi darah otomatis untuk penggunaan diagnostik in
vitro di laboratorium klinis
Sampel plasma vena dalam 3,2% Na Sitrat menggunakan metode clotting kromogenik &
immunoassay
Hasil analisis ditampilkan di layar Unit Pengolahan Informasi (IPU)
Hasil dapat dicetak pada printer eksternal/ dikirim ke komputer host
Instrumen ini mampu mengukur tes dalam mode normal dan mode sampel mikro
Prinsip Operasi
Analisis Uji: mechanical, hydraulic, & electrical systems
Instrumen: reagen, kontrol, kalibrator, dan bahan konsumsi untuk melakukan tes waktu
Prothrombin (PT) & PT INR, Activated Partial Thromboplastin Time (APTT), Fibrinogen,
Antithrombin, & D-dimer
Sysmex CS-2100i Analysis Principles
Reagent Application Methodology
Dade® Innovin® PT, Prothrombin Time (“) Clotting (extrinsic pathway)
PT, Prothrombin Time (INR) Clotting (extrinsic pathway),
calculated
Dade® Actin® FSL APTT, Activated Partial Clotting (intrinsic pathway)
Thromboplastin Time
Dade® Thrombin Reagent Fibrinogen quantitation Clotting (common pathway)
INNOVANCE® Antithrombin Antithrombin quantitation Chromogenic
INNOVANCE® D-Dimer D-dimer quantitation Immunochemical
Clotting: Turbiditas berubah saat fibrinogen ditransformasikan menjadi fibrin. Perubahan
kekeruhan ini terdeteksi secara optik.
Kromogenik: Proses emisi warna oleh substrat sintetik kromogenik; light absorbance change
Immunoassay: proses reagen antibodi-sensitif bereaksi dg antibodi; light absorbance change
Kinerja ini belum terbentuk (has not been established) pada populasi neonatus & pediatrik
Prinsip Deteksi: detektor multi-panjang gelombang untuk cahaya yang ditransmisikan pada
340, 405, 575, 660 & 800 nm
Metode Deteksi: 10 saluran/ metode; 4 saluran agregasi trombosit*
Prinsip Pemeriksaan PT
Menilai terbentuknya bekuan pada:
Plasma yang telah diinkubasi + campuran tromboplastin jaringan & ion kalsium
Reagen: kalsium tromboplastin (tromboplastin jaringan dalam larutan CaCl2)
Tromboplastin jaringan dari emulsi ekstrak organ otak, paru atau otak dan paru kelinci dalam
larutan CaCl2 dengan pengawet sodium azida (misalnya Neoplastine CI plus)
Tromboplastin jaringan dari plasenta manusia dalam larutan CaCl2 &npengawet (misalnya
Thromborel S).
Anemia Chronic
Anemia Defisiensi Besi Hemoglobinopati
Disease
Anamnesa Lemas, lesu, pusing, Riwayat keluarga Terdapat penyakit lain
warna kulit kuning, yang kronik
mudah lelah
Px Fisik Atrofi lidah, Pembesaran Limpa Kelainan Organ
koikilonikia,
konjungtiva anemis,
cheilosis/ angular
stomatitis
Pemeriksaan CBC : Anemia Mikrositik Hipokrom (Hb, MCV, MCH ), Eritrosit ,
Laboratorium Retikulosit N/ ↓
Serum Iron N
Serum Feritin N N
TIBC N
Saturasi Transferin N/ N/
Fe SSTL (-) (+) (+)
Hiperplasi, metarubrisit Rubrisit Besi Eritroblast
Hb Elektro Normal Abnormal Normal
GDT Anisopoikilositosis Anisopoikilositosis Normositik
dengan sel pencil >>, sel dengan sel target >>, Normokrom sd
target, Basophilic sel pensil, benda Mikrositik Hipokrom
stippling, ring cell inklusi, bintik basofil,
eritrosit bizare, tear
drop
Tes Terapi Fe
5. TIBC & UIBC
Pre- Analitik
Serum/ Heparin Plasma, Sentrifuse, Turnd around time 1day, Stabilitas sampel 4ºC
Hemolisis & Lipemia merupakan faktor intereferensi (Obat & Makanan yang dikonsumsi)
Pengukuran Kapasitas Pengikatan Zat Besi (Iron Binding Capacity) dx/ & th/ anamia
Serum Besi dibawa dengan ikatan protein transport, Transferrin
Konsentrasi besi maksimum yang dapat diikat oleh Transferrin Total Iron Binding Capacity
Normalnya, hanya 1/3 dari iron binding sites of Transferrin diduduki oleh Fe (III) serum
memiliki kapasitas pengikatan besi cadangan yang cukup besar Unsaturated Iron Binding
Capacity (UIBC)
TIBC [µg/dL] = UIBC [µg/dL] + Iron [µg/dL] atau Fe Serum
Saturasi transferrin & UIBC memiliki reliabilitas sama dalam kemampuan memprediksi
hemochromatosis
UIBC adalah alternatif yang murah untuk mendeteksi hemochromatosis herediter
Nilai normal UIBC: 12-43 µmol/L (Pria), 13-56 µmol/L (Wanita) 21 – 84 µmol/L atau 120 –
470 µg/dL
Nilai normal TIBC : 45-72 µmol/L atau 300-360 µg/dL, pada orang tua < 300µg/dL
(Source : Abbott Diagnostics)
Ion besi, Fe2+, dibutuhkan untuk fungsi sel darah merah (RBC) yang tepat (mengangkut O2 dari
paru-paru ke seluruh tubuh)
Fe2+ terlarut secara bebas sangat beracun hampir tidak ada Fe2+ yang mengapung dalam darah
Zat besi terikat oleh protein, seperti feritin, transferin, dan hemoglobin
Ferritin ditemukan di dalam sel dan menyediakan penyimpanan zat besi di dalam sel
Transferrin bermigrasi melalui darah dan mengangkut besi, di dalam tubuh
Protein pembawa lainnya ada, tapi transferin membawa hingga 70% zat besi dalam darah
Total iron binding capacity (TIBC) mengacu pada jumlah besi total yang dibawa melalui darah
Meskipun protein selain transferin berkontribusi pada TIBC, TIBC sering digunakan secara
bergantian dengan transferin
Tidak seperti feritin & transferin, hemoglobin (Hb) lebih dari sekedar penyimpanan/ pembawa
zat besi Hb adalah protein pembawa oksigen (96% dry weight RBC)
Besi merupakan pusat fungsi hemoglobin, besi memberi dukungan struktural pada hemoglobin
& memfasilitasi perubahan struktur yang menyertai pengikatan oksigen oleh hemoglobin
memungkinkan pengikatan oksigen lanjut terjadi lebih mudah/ cooperativit
Kooperatifitas oleh besi di Hb penting bagi kemampuan RBC untuk mengoksigenasikan
jaringan, karena perubahan kecil tingkat pengikatan oksigen memiliki efek besar terhadap
efektivitas RBCs
TIBC, UIBC, Tes Transferrin menilai tingkat zat besi individu & kemampuan untuk
mengangkut besi ke seluruh tubuh
Fe Serum - mengukur kadar Fe2+ terlarut dalam plasma darah
TIBC - mengukur tingkat transferin yang terikat dengan besi
UIBC - mengukur tingkat transferrin yang tidak mengikat besi
Saturasi Besi - mengukur persentase besi yang terikat pada transferin Fe serum : TIBC x 100
kejenuhan transferrin
Hanya sekitar 10% zat besi yang benar-benar diserap tubuh
Karena kemampuan tubuh menyimpan zat besi, suplementasi zat besi dapat menyebabkan
kelebihan zat besi & toksisitas
Makanan kaya zat besi - daging merah, kuning telur, hati, dan sayuran hijau tua
Fe Serum Saturasi Transferin TIBC UIBC
Meningkat Keracunan Besi Defisiensi Besi oleh karena diet
Anemia Hemolitik Ketidakmampuan untuk menyerap besi
Anemia Sideroblastik
Hemokromatosis
Menurun Defisiensi Besi oleh karena Hemokroatosis
diet Infeksi Kronis
Ketidakmampuan untuk Keracunan Besi
menyerap besi Anemia Hemolitik
Anemia Sideroblastik
Infeksi Kronis
Eritrosit Roeleaux Eritrosit bertumpuk seperti uang logam (↑Kadar Hb/ Artefak)
Normalnya nilai LED relatif lebih kecil karena pengendapan eritrosit akibat tarikan gravitasi
diimbangi oleh tekanan ke atas akibat perpindahan plasma
Viskositas plasma tinggi/ kadar kolesterol ↑ tekanan ke atas mungkin dapat menetralisi
tarikan ke bawah terhadap setiap sel/ gumpalan sel
Keadaan ↑ penggumpalan/ perlekatan sel ↑LED
Makromolekul dengan konsentrasi tinggi dalam plasma < sifat saling menolak di antara sel
eritrosit eritrosit lebih mudah melekat memudahkan terbentuknya rouleaux
Rouleaux: gumpalan eritrosit yang terjadi bukan karena antibodi/ ikatan konvalen, tetapi karena
saling tarik-menarik di antara permukaan sel
Bila perbandingan globulin/ albumin ↑ /kadar fibrinogen >> rouleaux ↑ LED ↑
Penyakit : Multiple Mieloma, Makroglobulinemia