ANEMIA

Anemia dapat diklasifikasikan berdasarkan:

1. Morfologi eritrosit
 Normositik Normokrom,
 Mikrositik Hipokrom,
 Makrositik
2. Fungsional
 Penurunan Produksi
 Defek Maturasi
 Peningkatan Destruksi

ANEMIA MIKROSITIK HIPOKROM

Fe Serum ↓ Menurun Fe Serum Normal
TIBC ↑↑ TIBC ↓↓
Feritin Normal
Feritin ↓↓ Feritin Normal/ ↑
Elektroforesis Hb : Ring Sideroblast di
Besi SSTL (-) Besi SSTL +
HbA2↑, HbF↑ SSTL
Anemia Defisiensi Anemia Penyakit
Thalasemia Beta Anemia Sideroblastik
Besi Kronik

Anemia Chronic
Anemia Defisiensi Besi Hemoglobinopati
Disease
Anamnesa Lemas, lesu, pusing, Riwayat keluarga Terdapat penyakit lain
warna kulit kuning, yang kronik
mudah lelah
Px Fisik Atrofi lidah, Pembesaran Limpa Kelainan Organ
koikilonikia,
konjungtiva anemis,
cheilosis/ angular
stomatitis
Pemeriksaan CBC : Anemia Mikrositik Hipokrom (Hb, MCV, MCH ), Eritrosit ,
Laboratorium Retikulosit N/ ↓
Serum Iron  N 
Serum Feritin  N N
TIBC  N 
Saturasi Transferin  N/  N/ 
Fe SSTL (-) (+) (+)
Hiperplasi, metarubrisit Rubrisit  Besi Eritroblast 

Hb Elektro Normal Abnormal Normal
GDT Anisopoikilositosis Anisopoikilositosis Normositik
dengan sel pencil >>, sel dengan sel target >>, Normokrom sd
target, Basophilic sel pensil, benda Mikrositik Hipokrom
stippling, ring cell inklusi, bintik basofil,
eritrosit bizare, tear
drop
Tes Terapi Fe   
Ferritin Serum Cadangan Besi & Protein Fase Akut
Fe Serum Jumlah kadar besi dalam sirkulasi yang terikat pada transferin
Transferin Mengangkut besi ke jaringan yang mengandung reseptor transferin
(eritroblas dan sstl), dari jaringan dan darah ke SSTL yang diperlukan
untuk pembentukan Hb
TIBC Jumlah besi total yang dibutuhkan untuk
Platelet Large Cell Ratio ( P-LCR )
P-LCR merupakan pebandingan antara trombosit berukuran besar dengan jumlah trombosit total.

Rumus : P-LCR = P-LCC/PLT

Dengan : PLT = Platelet Count = jumlah trombosit total

: PLCC = Platelet Large Cell Count = trombosit berukuran > 12 fl dan < 30 fl

Nilai normal P-LCR : 15-35 fl

P-LCR meningkat pada keadaan peningkatan aktivitas trombosit atau sel-sel trombosit muda
berukuan besar (Giant Platelet) serta pasien-pasien dengan faktor risiko yang tinggi untuk terjadinya
trombosis.

Plateletcrit (PCT)
PCT merupakan parameter volume total massa trombosit dari jumlah trombosit total. Pemeriksaan
ini juga dapat digunakan untuk membedakan antara keadaan trombositopenia dengan
pseudotrombositopenia.

Rumus : PCT = MPV x Platelet Count x 10-3

Nilai normal P-LCR : 0,2 % - 0,36 %

Pemeriksaan Activated Clotting Time ( ACT )

ACT merupakan pemeriksaan waktu pembekuan untuk monitoring terapi antikoagulasi heparin.
ACT mengukur efek inhibisi heparin terhadap koagulasi bukan konsentrasi heparin dalam darah. 
Indikasi pemeriksaan :
Setelah pemberian dosis awal bolus Heparin pada bedah jantung terbuka (sebelum, selama dan
beberapa saat setelahnya), tindakan kateterisasi jantung serta tindakan lain yang memerlukan
antikoagulan dosis tinggi. Pemeriksaan biasanya dilakukan secara serial.
Prinsip pemeriksaan :
Mengukur waktu terbentuknya fibrin dengan cara interaksi sampel darah dengan activating agent
kaolin pada alat, kemudian secara elektronik diukur waktu terbentuknya serabut fibrin.
Sampel : Whole blood atau darah sitrat.
ACT diukur dalam satuan detik. Semakin tinggi hasil ACT maka semakin tinggi derajat inhibisi
pembekuan darah. Clotting time memanjang bila terdapat defisiensi berat faktor pembekuan pada
jalur intrinsik dan jalur bersama, misalnya pada hemofilia (defisiensi F VIIc dan F Ixc), terapi
antikoagulan sistemik (heparin).
Beberapa keadaan yang dapat mempengaruhi hasil ACT adalah : 
- Tidak dilakukannya pemanasan alat hingga 37º C 
- Hipotermia 
- Bahan kateter jantung
- Hemodilusi 
- Jumlah dan fungsi trombosit 
- Pemberian Protamine sulfate 
- Keadaan tertentu misalnya antibodi lupus dan defisiensi faktor pembekuan darah 

Pemeriksaan Jumlah dan Fungsi Trombosit

Pemeriksaan Jumlah Trombosit
1. Metode Langsung : Brecher & Herwerden
2. Metode Tak Langsung: Fonio

Metode Brecher (Langsung)

Prinsip pemeriksaan: Darah dicampur larutan pengencer yang dapat merusak sel-sel lain kecuali sel trombosit dan
jumlah trombosit dihitung dengan bilik hitung.
Bahan pemeriksaan : Darah EDTA atau darah kapiler
Cara Pemeriksaan:
1. Bilaslah pipet eritrosit dengan pengencer sampai angka 1
2. Hisap darah EDTA dengan pipet eritrosit sampai angka 0,5 dan lakukan pengenceran 200 x dengan larutan
ammonium oxalat 1%
3. Campur rata selama 5-10 menit, buang beberapa tetes dan sisanya masukkan dalam bilik hitung
4. Letakkan bilik hitung di atas kapas basah dalam piring petri yang tertutup selama 15-30 menit supaya trombosit
mengendap
5. Hitung jumlah sel pada seluruh bidang baca eritrosit dengan pembesaran 400 x
6. Baca hasilnya, kalikan hasil tersebut dengan faktor 2000, hasilnya merupakan jumlah trombosit dalam ul darah.

Cara pemeriksaan metode Herwerden sama dengan metode Brecher.

Normal : Jumlah trombosit 150.000 – 450.000/ ul darah

Metode Fonio (Tidak Langsung)

Pada metode ini jumlah trombosit dilakukan pada preparat hapus dan hasilnya diperhitungkan terhadap jumlah eritrosit.
Cara pemeriksaan:
1. Bersihkan ujung jari dengan alkohol dan biarkan kering
2. Teteskan magnesium sulfat 14 % pada langkah No.1
3. Tusuk dengan lancet steril melalui Mg Sulfat sampai darah keluar, campur rata.
4. Buat preparat hapus, biarkan kering dan di cat dengan larutan Giemsa 1 : 9
5. Hitung jumlah trombosit dalam 1.000 eritrosit
6. Hitung jumlah eritrosit dengan metode Hayem
7. Lakukan perhitungan jumlah trombosit berdasar perhitungan No. 5 dan No.6

Contoh: Σ trombosit dalam 1.000 eritrosit = 50 sel; Σ eritrosit metode Hayem/1 ul = 4.000.000 sel
Maka jumlah trombosit = (4.000.000 : 1000) x 50 sel = 200.000 sel/ul
Normal: 40 – 60 trombosit per 1.000 eritrosit.
Catatan:
 Kondensor mikroskop harus letak rendah (diturunkan)
 Trombosit mempunyai dinding yang teratur, bagian tengah sel terang dan latar belakang remang-remang tampak
seperti bintang menunjukkan gerak Brown, ukuran 2-4 mikron kadang sampai 7 mikron.

Pemeriksaan Fungsi Trombosit

Pemeriksaan ini digunakan untuk menguji fungsi trombosit. Bila bekuan didiamkan akan mengkerut dan serum terperas
keluar dan bekuan jadi kenyal. Selain trombosit permukaan yang bersinggungan dengan bekuan dan faktor lain
membantu terjadinya retraksi bekuan.

Retraksi Bekuan
1. Masukkan tabung I/II sisa pemeriksaan waktu bekuan darah dalam water bath (bila ada) dengan suhu 37oC
2. Amati hasilnya dalam waktu 30 menit – 1 jam

Penilaian hasil:
Normal : Serum mulai keluar waktu ½ jam, Retraksi sempurna lewat 24 jam
Abnormal : Lebih dari 2 jam tak tampak adanya serum

Konsistensi Bekuan:
1. Keluarkan salah satu isi tabung sisa pemeriksaan waktu pembekuan darah, letakkan pada piring petri
2. Periksa konsistensi bekuan dengan dasar tabung reaksi
Penilaian hasil Normal :
 Bentuk bekuan: licin, kompak, tidak berlubang
 Konsistensi bekuan : tidak rapuh, kenyal
Metode Pengecatan Hemosiderin (Prussian-blue)
 Hemosiderin yang bertindak sebagai cadangan besi terutama di dalam makrofag sumsum tulang
akan bereaksi dengan potassium ferrocyanide membentuk ferriferrocyanide yang berwarna biru.
Reaksi ini merupakan dasar dari reaksi Prussian-blue yang positif (Perl’s reaction)

Langkah pengecatan
1. Biarkan preparat sumsum tulang kering terlebih dahulu
2. Fiksasi dengan methanol selama 10-20 menit
3. Campurkan 10 g/l larutan potassium ferrocyanide dalam 0,1 mol/l hcl dalam volume yang sama
(masing-masing sekitar 1,5 cc), sampai membentuk warna biru muda/tosca.
4. Masukkan preparat ke dalam campuran larutan tersebut dan diamkan selama 10 menit
5. Cuci dengan air selama 20 menit
6. Lakukan pengecatan dengan eosin (sebagai counterstain) selama 10-15 detik.

Bahan Pengecatan ferriferrocyanide Preparat besi

 Pengecatan besi pada apusan BMA merupakan standar emas dalam diagnosis anemia defisiensi
besi, tapi tidak mutlak dilakukan karena prosedur BMA yang invasif. Anemia defisiensi besi
bisa ditegakkan dengan pemeriksaan darah lengkap, apusan darah, SI, dan TIBC. Pengecatan
besi biasa dikerjakan sebagai pemeriksaan tambahan pada pasien yang memiliki indikasi untuk
dilakukan BMA.
 Cadangan besi yang kosong bisa ditemukan mulai dari tahapan eritropoiesis defisiensi besi
sampai anemia defisiensi besi, sedangkan pada tahap deplesi besi cadangan besi masih ada.
Gambaran cadangan besi yang positif pada aspirasi sumsum tulang ditunjukkan dengan warna
biru kehijauan pada matriks sumsum tulang, bisa dilihat pada gambar berikut:

Cadangan Besi Positif

 Gambar cadangan besi yang negatif bisa dilihat pada gambar di bawah. Dapat kita lihat
perbedaannya dengan yang positif. Apusan yang negatif tidak ada warna biru kehijauan,
sebagian besar hanya berwarna merah kecoklatan

Cadangan Besi Negatif

Biopsi Sumsum Tulang
 Biopsi sumsum tulang adalah salah satu dari dua prosedur yang dilakukan dalam pemeriksaan sumsum tulang,
selain aspirasi sumsum tulang
 Biopsi sumsum tulang dilakukan dengan mengambil sampel kecil dari tubuh pasien untuk pemeriksaan lebih lanjut,
yang dapat membantu mendiagnosis penyakit yang telah diderita (atau penyakit yang sangat berisiko diderita
pasien) & menentukan rencana pengobatan yang efektif mengobati penyakit tersebut atau mengendalikan gejalanya
Tujuan : Menilai selulerits sumsum tulang, Menentukan adanya keganasan hematologi dan non hematologi
(metatastik), Menentukan adanya fibrosis sumsum tulang.

Preparat Sumsum Tulang

1. Metode Rentang (Spread)
 Bahan yang dibuat jaringan yang tipis, misal : pleura, mesenterium, peritoneum, pericardium
 Dapat diamati tanpa pewarnaan / dengan pewarnaan Mallory-Acid Fuchsin : Hematoksilin ; Azure II-Eosin.
 Preparat yang dibuat dengan cara meletakkan hasil aspirasi berupa fragmen sumsum tulang diatas kaca obyek
dan kemudian digeser menggunakan kaca penebar (spreader). Pembuatannya mirip dengan pembuatan sediaan
apus darah tepi (SADT) atau blood film, tetapi disini menggunakan bahan utama fragmen sumsum tulang.
2. Metode Pencet (Squash)
 Metode untuk mendapatkan suatu sediaan dengan cara memencet suatu potongan jaringan atau suatu organisme
secara keseluruhan sehingga didapatkan suatu sediaan yang tipis yang dapat diamati dengan mikroskop.
 Digunakan untuk jaringan yang sel mudah lepas, misal : lien, sumsum tulang, tumor seluler dll.
 Diambil ± 1 mm. Pewarnaan yang digunakan : Larutan Carmine.
 Preparat yang dibuat dengan cara meletakkan fragmen sumsum tulang hasil aspirasi diatas kaca obyek,
kemudian dengan kaca obyek yang lain ditekan sambil menggeser sehingga tampak gambaran inti ditengah
(core) dan daerah pinggir dari fragmen sumsum tulang.

Pengecatan Sitokimia
Dengan menggunakan prinsip reaksi biokimia,maka reagensia / pereaksi tertentu yang dipergunakan dalam teknik
pengecatan sel darah ini dapat mendeteksi edanya enzim spesifik dan atau bahan produk intraseluler yang terdapat dalam
eritrosit, lekosit, trombosit. Hasil reaksi bikomia yang berupa endapan berwarna: difus, granuler atau merupakan benda
inklusi berbeda secara kualitatif (gradual) sesuai tingkat maturasinya dala satu sistim / seri darah tertentu

Pengecatan Giemsa
Alat & Bahan : Giemsa, Buffer, Methanol
Larutan Kerja Giemsa :
 Siapkan campuran Buffer A + B,( 1 : 1) campuran ini tahan 3 hari.
 Tambahkan ke dalam Buffer, Giemsa pekat dengan perbandingan, Giemsa pekat 1 bagian : 7 bagian Buffer.
Campuran hanya tahan 1 hari.
Cara pengecatan :
 Preparat yang sudah kering difiksasi dengan methanol 5 – 10 menit.
 Genangi dengan larutan kerja selama 20 – 30 menit.
 Sisa cat dibuang, cuci dengan air mengalir hingga betul-betul bersih.
 Keringkan di udara, lalu mounting dengan EZ mount dan ditutup deck glass.

Pengecatan Sudan Black B

Alat & Bahan :
 Larutan A : Phenol 12 gr, Ethanol 70% 25 ml
 Larutan B : Na2HPO4-2H2O 0,225 gr, Aquadest 75 ml
 Larutan C : Sudan Black B 0,45 gr, Ethanol 70 % 150 ml
Larutan Kerja :
Campurkan larutan A + B (1 : 1)  Tambahkan larutan C, 3 bagian  Campuran ini harus netral atau sedikit alkalis
Cara Kerja :
 Preparat yang sudah kering difiksasi dengan uap formalin dalam staning jar selama 5 – 10 menit.
 Cuci dengan aquadest, keringkan.
 Rendam preparat dengan larutan kerja dalam petri tertutup selama 30 menit.
 Buang sisa cat, rendam dengan alcohol 70% selama 2 menit sambil digoyang goyang.
 Cuci dengan air mengalir, lakukan counter stain dengan safranin 1% selama 10-30 detik
 Cuci dengan air mengalir, keringkan (jangan di mounting
Pengecatan Lepehne
Alat & Bahan :
 Reagent Lepehne : larutan benzidine 0,6% dalam ethanol 96% 2 ml; 0,5 ml perhidrol 30% dlm 4,5 ml ethanol 70%
 Methanol, Giemsa (larutan kerja)
Cara Kerja:
 Preparat yang sudah kering difiksasi dengan methanol 5 – 10 menit
 Tuangkan ½ bagian HCl 1 N ke dalam staining jar dan masukan ke dalam water bath 560 C selama 10 menit
 Tambahkan ½ bagian K Ferrocyanida 4 % ke dalam staining jar
 Masukan preparat yang sudah difiksasi hingga terendam semua
 Biarkan selama 10 - 20 menit dalam water bath 560 C
 Bilas dengan air mengalir ½ - 1 me nit
 Lakukan counter stain dengan safranin 1 % 10 – 30 detik
 Cuci dengan air mengalir dan keringkan

Pengecatan Fe
Alat & Bahan : HCl 1 N, K Ferrocyanida 4 %, Methanol, HCL 20 %
Cara Kerja:
 Preparat yang sudah kering difiksasi dengan methanol selama 5 – 10 menit.
 Rendam dengan reagen lepehne selama 10 menit.
 Cuci dan keringkan
 Rendam dengan cat Giemza (lar. kerja) 15 – 20 menit
 Cuci dan keringkan

Pengecatan Kristal Formalin

Alat & Bahan : Larutan Periodic Acid, Larutan Schiff, Larutan Hematoxylin
Cara Kerja:
 Preparat di fiksasi dengan uap formalin 5-10 menit.
 Rendam dengan Periodic Acid selama 20-30 menit
 Buang cat, cuci dengan air mengalir selama 5-10 menit, bilas dengan aquadest.
 Rendam dengan larutan Schiff selama 20-30 menit
 Buang cat, cuci dengan air mengalir sampai betul betul bersih selama 5-10 menit.
 Rendam dengan Hematoxylin selama 10-15 menit
 Buang cat, cuci dengan air mengalir selama 5-10 menit.
 Preparat dikeringkan kemudian di mounting dengan EZ-mount dan ditutup dengan cover glass

Pengecatan Giemsa Pengecatan Sudan Black B Pengecatan Lepehne

Selularitas hiperkrom, Terdapat Positif karena banyak sel yang Warna hijau terang pada eritrosit
megakariosit terdapat granula yang ditandai
dengan adanya bercak hitam

Pengecatan Fe Pengecatan PAS

0 = Tidak ada simpanan besi Tidak terdapat granulasi yang berwarna merah