 Uji Ninhydrin

- Tujuan : untuk mengidentifikasi asam α-amino dan protein yang mengandung gugus amina
bebas
- Pereaksi ninhidrin (triketohidrinden hidrat) sendiri adalah hidrat dari trikrton siklik yang
merupakan pengoksidaasi kuat sehingga saat direaksikan dengan asam amino menyebabkan
dekarboksilasi oksidatif yang menghasilkan CO2, NH3, dan aldehid
- Warna ungu berasal dari nitrogen yang berasal dari amino alpha dengan asam amino primer dan
intensitas warnanya berbanding lurus dengan konsentrasi asam amino yang ada.

 Uji Xantoprotein
- Tujuan : untuk mengidentifikasi adanya inti benzene
- (+) HNO3 70% : saat sampel mengandung inti benzen, . Inti benzen yang menjadi gugus samping
dalam residu asam amino tertentu temitrasi oleh asam nitrat pekat dengan reaksi subtitusi atom
H pada benzenayang terdapat pada molekul protein oleh gugus nitro (NO2) membentuk
turunan nitrobenzene (berwarna kuning pucat).
- (+)keping marmer : menghindari bumping Dipanaskan
- (+) NaOH 40% : Menjadikan suasana basa untuk perubahan senyawa nitro menjadi senyawa
nitro lain yang ion H+ pada gugus OH nya tergantikan oleh ion Na+ dari NaOH sehingga
terbentuk larutan berwarna jingga
 Uji Pauly-Diazo
- Tujuan : dilakukan untuk secara spesi- k mendeteksi triptofan dan histidin. Triptofan dan histidin
akan memberikan warna merah diazon
- Prinsip reaksi diazotisasi
- Disimpang di penangas es :
- (+) asam sulfanilat , (+) natrium nitrat, (+)Natrium karbonat : asam sulfinilat akan terdiazotisasi
dengan penambahan sodium nitrit dan sodium karbonat.  Asam sulfanilat yang telah
terdiazotisasi akan mmembentuk komponen diazonium. Komponen diazonium akan
bereaksi dengan cincin imidazole dari histidin dan gugus fenol dari tirosin membentuk
senyawa berwarna merah gelap.
- Diazotisasi adalah reaksi antara amina aromatik (dalam hal ini asam sulfanilat) dengan
sodium nitrit dengan sodium karbonat membentuk komponen diazonium. Komponen
diazonium hanya terbentuk dalam kondi dingin.

1. Uji millon
2. Uji millon merupakan salah satu uji protein yang bertujuan untuk mengidentifikasi
adanya asam amino tirosin pada suatu sampel. Uji ini akan memberikan hasil positif pada
fenol-fenol. Tirosin merupakan asam amino yang mempuyai gugus hidroksi yang terikat
pada benzena (fenol) dan bersifat asam lemah sehingga tirosin akan memberikan hasil
positif pada uji ini (Anna P, 2009). Tirosin memiliki struktur seperti gambar berikut
3. Sruktur tirosin
4. Uji ini menggunakan reagen millon yang mana reagen millon terdiri dari larutan merkuro
dan merkuri nitrat dalam asam nitrat. Penambahan reagen millon ke dalam sampel
menyebabkan terbentuknya endapanberwarna putih dan akan berubah menjadi larutan
berwarna merah setelah melalui pemanasan. Sampel yang mengandung tirosin ketika
ditambahkan dengan reagen millon akan mengalami proses nitrasi akibat asam nitrat
 yang terdapat pada reagen millon. Reaksi nitrasi merupakan proses reaksi substitusi ion
H+ dengan NO2. Endapan putih yang terbentuk ketika pencampuran dengan reagen millon
merupakan endapan merkuri yang terlarut oleh asam nitrat dan mengalami oksidasi
menjadi ion Hg+. Kemudian ion Hg yang teroksidasi akan bereaksi dengan gugus
karboksil pada tirosin membentuk garam sehingga membentuk endapan berwarna putih.
Hal ini sesuai dengan prinsip ketika suatu protein direaksikan dengan garam merkuri
akan terjadi koagulasi. Kemudian, reaksi dilanjutkan dengan tahap pemanasan yang
bertujuan untuk mempercepat reaksi dan terbentuknya kompleks berwarna merah.
Terbentuknya warna merah setelah proses pemanasan mengindikasikan adanya asam
amino tirosin. Adapun persamaan reaksi yang terjadi adalah :
5. Persaamm reaksi
6. Uji histidin
Uji histidin merupakan salah satu tes asam amino yang bertujuan untuk mengidentifikasi
adanya asam amino histidin pada suatu sampel. Histidin merupakan asam amino yang
memiliki rantai samping imidazol dengan nilai pKa yang relatif netral sehingga ketika
adanya perubahan sedikit pada pH akan merubah muatannya. Uji ini melibatkan adanya
penambahan larutan bromin 5% dalam asam asetat 33% yang menyebabkan terjadinya
proses brominasi histidin dalam suasana asam asetat. Penyimpanan sampel pada suhu
ruang berujuan unuk menegaskan keberlangsungan reaksi brominasi, adanya
penambahan 2 mL larutan amonium karbonat untuk menetralisasi. Kemudian, dilanjutkan
dengan proses pemanasan dalam suasana larutan basa menyebabkan terbentuknya larutan
warna biru pekat yang menandakan adanya asam amino hstidin.
Persamaan reaksi
7. Uji hopkins cole
Uji hopkins cole merupakan salah satu uji asam amino dan protein yang bertujuan untuk
menunjukkan adanya asam amino triptofan pada suatu sampel. Triptofan adalah asam
amino essensial yang memiliki gugus fungsi indol yang berbentuk planar. Uji ini
menggunakan asam glioksilat yang dibuat dari proses reduksi asam oksalat dengan
serbuk magnesiukm atau natrium amalgam. Asam glioksilat akan bereaksi dengan gugus
fungsi indol yang ada pada asam amino triptofan dan dengan adanya penambahan asam
sulfat pekat sebagai agen pengoksidasi dan akan memunculkan cincin warna ungu yang
terbentuk antara lapisan tak berwarna. Cincn warna ungu tersebut merupakan senyawa
kompleks yang terbentuk dari hasil reaksi.
I.1 Uji Sackaguchi

Uji sackaguchi bertujuan untuk mendeteksi adanya kandungan asam amino arginin.
Arginin mengandung gugus guanidine diujungnya dan satu-satunya asam amino yang
mengandung gugus guanidine adalah arginin. Oleh karena itu pengujian ini khusus untuk
identifikasi arginin, uji tes untuk arginin ini dikhususkan karena banyak fungsi arginin dalam
tubuh manusia termasuk menyembuhkan luka, menghilangkan produk limbah dari hati dan
menjaga fungsi hormon dan kekebalan tubuh. Gugus guanidine merupakan atom C yang
mengikat N2 dengan ikatan tunggal dan mengikat N dengan ikatan ganda, dapat dilihat pada
Gambar 7.8.1. Gugus guanidine akan bereaksi dalam uji sackaguchi karena pereaksi
sackaguchi merupakan gabungan antara alfa naftol dengan hipobromin untuk membentuk
kompleks berwarna merah. (Stoscheck, 1990)

Penambahan larutan NaOH 40% bertujuan untuk mengubah suasana berpH basa,
karena NaOH merupakan basa kuat. Dalam kondisi basa alfa naftol akan bereaksi dengan
gugus guanidine dalan arginin yang telah teroksidasi hipobromida, menghasilkan senyawa
berwarna merah. Sehingga larutan hipobromida berfungsi sebagai zat pengoksidasi

Pada sampel dari hasil pengamatan menunjukkan uji yang positif dengan
terbentuknya produk berwarna merah yang merupakan senyawa kompleks, dimana senyawa
kompleks khas dengan warnanya. Sehingga sampel yang digunakan mengandung senyawa
arginin.

2.2 Uji Timbal Sulfida

Uji ini dilakukan untuk mengidentifikasi asam amino yang mengandung gugus sulfur
yaitu sistein dan methionin. Sistein merupakan asam amino non esensial bagi manusia yang
memiliki atom belerang, bersama-sama dengan metionin, karena memiliki atom belerang,
sistein menjadi sumber utama dalam sintesis senyawa-senyawa biologis lain yang
mengandung belerang.
Ikatan disulfida merupakan jenis ikatan kovalen lain yang dimiliki oleh peptida dan
asam amino dalam protein. (Hart, 2003). Reaksi yang terjadi dilakukan oleh Pb-asetat dengan
asam amino membentuk warna hitam yaitu garam PbS yang terbentuk. Penambahan NaOH
bertujuan untuk mendenaturasi protein sehingga ikatan yang menghubungkan atom sulfur
dapat terputus oleh Pb-asetat membentuk PbS. Selain itu, penambahan NaOH juga bertujuan
untuk mengoksidasi sintesis larutan dan merupakan larutan alkali, karena bersifat basa.
Kemudian ditambahkan beberapa kepingan marmer yang berfungsi agar saat dipanaskna
dengan bunsen, larutan yang mendidih tidak terjadi bumping. Sehingga tidak mengganggu
keselamatan praktikan dan menjaga analisis dengan baik.
 Pemanasan dengan bunsen bertujuan untuk mempercepat reaksi. Pada saat tabung
reaksi mendidih, campuran yang mengandung sulfur pada sistein yang telah ditambahkan
NaOH sebelumnya akan diubah menjadi natrium sulfida (Na2S). Na2S dapat dideteksi dengan
pengendapan PbS dalam larutan alkali. Saat pemanasan, campuran larutan menjadi berwarna
oren. Hal ini disebabkan karena terbentuknya natrium sulfida.
Kemudian dilakukan langkah penyimpanan tabung reaksi di bawah air keran
bertujuan untuk pendinginan, agar mempercepat reaksi yaitu timbulnya endapan hitam.
Timbal asetat ditambahkan ialah sebagai pengikat sulfida yang telah diputuskan oleh NaOH
membentuk garam PbS yang berwarna hitam. Sehingga Pb berfungsi sebagai donor Pb +
(Girindra, 1986) Pada percobaan ini endapan hitam terbentuk yang mengindikasikan bahwa
sampel mengandung protein dengan asam amino yang memiliki gugus belerang, yaitu sistein
yang merupakan PbS.
Reaksi Pb asetat dengan protein atau sampel adalah:
SH – CH2 – CH(NH3) – COO + NaOH ⇌ Na2S
Na2S + Pb(CH3COO) 2 ⇌ PbS

dimana, S2+(aq) + Pb2+(aq) ⇌PbS(s)

Tes Folin's McCarthy Sullivan

Asam imino seperti Prolin dan hidroksiprolin mengembun dengan pereaksi isatin dalam kondisi
basa untuk menghasilkan berwarna biru. Penambahan natrium nitroprusida [Na2Fe (CN) 5NO]
ke larutan alkali metionin diikuti dengan pengasaman menghasilkan reaksi warna merah. Reaksi
ini juga membentuk dasar untuk penentuan kuantitatif metionin.
Tes isatin
Asam imino seperti Prolin dan hidroksiprolin mengembun dengan pereaksi isatin dalam kondisi
basa untuk menghasilkan aduk berwarna biru.