Tugas:

1. Tabulasikan (buat tabel) yang menunjukkan wadah yang digunakan untuk kultur tiap
jenis sel, jenis sel, media yang digunakan untuk memelihara/menumbuhkan sel, dan
kondisi (suhu, CO2, dll).

Wadah JenisSel Media Kondisi

Kultur disk Adipocyte cell Medium 199 (M199) 1. Adiposit hasil isolasi disuspensi
atautabung (Gibco) dalam media kultur
denganglutamin pada ditambahkan antibiotik
suhukamar (RT) 2. Lalu adiposity diresuspensi 10
% FBS atau BSA
3. Mendistribusikan suspense
adiposity ke kultur disk atau
tabung 50 – cc
4. Media diganti setelah 24 jam
pertama
Water-jacket Hela cervical Medium RPMI1640 1. Sel dikultur dalam Water-jacket
incubator cancer cell line, dengan 5% fetal incubator dengan suhu 37°C dilihat
A549dan H1650 bovine serum dan stabilitas suhu dengan thermometer.
non-small cell lung streptomycin, PBS 2. Medium diganti setiap 3-4 hari atau
cancer cell lines, bila warnanya berubah agak kuning
HCT116 colorectal (Selama penggantian media kultur
cancer cell line disk dikeluarkan dari incubator
secara cepat agar waktu medium
pada suhu ruang lebih sedikit)
Inkubator Adipocyte cell Saline 0,9 % , Fosfat 1. Adiposit hasil isolasi disuspensi
Buffered Saline dalam media kultur ditambahkan
(PBS) solusi atau antibiotik
Medium 199 (M199) 2. Lalu adiposit diresuspensi ~ 10 %
(Gibco) dengan (yaitu 1 ml sel dikemas dalam
glutamin pada suhu media kultur 10 - ml ) FBS atau
kamar (RT) . Jika BSA dapat digunakan untuk kultur
 digunakan untuk sel lemak yang terisolasi untuk
kultur sel atau organ , menangkap asam lemak bebas
menambahkan yang dilepaskan selama kultur
penisilin (100 U / l) , 3. Mendistribusikan suspensi adiposit
streptomisin (100 ug / ke kultur disk atau tabung 50 – cc
ml) , dan gentamisin (harus longgar dibatasi selama
(50 ug / ml) ke media budaya). Adiposit matang
transportasi . mengapung dengan mudah dan
lembut berputar-putar diperlukan
selama proses pemisah untuk
mendapatkan jumlah yang sama
dari sel per disk atau tabung .
4. Tempatkan tabung atau disk di
inkubator kultur sel .
5. Media diganti setelah 24 jam
pertama.
6- well plate Lung Cancer Cell RPMI-1640 1. Setelah removal pembekuan darah
PrePlaced sampel dibilas dengan PBS
( Phosfat Buffer Saline) sebanyak
dua kali
2. Potong menjadi fragmen ukuran 1
mm3 kemudian inkubasi dengan
kolagen sedalam gently shaking
water bath selama 1 jam suhu 37°
C.
3. Sentrifugasi pada kecepatan 3000 x
10 menit
Cawan petri Renal Cell Medium DMEM 1. Sel ginjal dikumpulkan pada
medium kultur medium DMEM LG medium dingin
yang mengandung 1%
penisilin/streptomisin , 1 %
amfoterisin ,1% glutamin , dan 10
 % fetal calf serum disimpan pada
suhu 4° selama24 jam
2. Potong menjadi fragmen dalam
cawan petri. Fragmen kecil
kemudian diinkubasi selama 2 jam
pada suhu 37°C dengan DMEM -
F12 dan 1,25 mg/ml
3. Divortex setiap 15 menit untuk
mendapatkan enzimatik disagregasi
4. Sampel kemudian dicuci tiga kali di
PBS pada suhu 4°C
5. Diplate di 10 - cm cawan petri
medium kultur inkubasi pada 37°C
dan 5% CO2
6. Setelah 24 jam sel dicuci dengan
PBS pada 37°C
(Rosdiana, A. and Hadisaputri, Y.E., 2016)
2. Mengapa kultur sel harus dilakukan secara aseptis? Bagaimana caranya? Mengapa ada
penambahan antibiotika, dan mengapa ada yang tidak ditambah antibiotika?
Penelitian membutuhkan standar yang tinggi untuk melakukan kultur sel untuk
meminimalkan variabilitas eksperimental. Kontaminasi kultur sel merupakan ancaman
konstan yang muncul dari paparan kontaminan mikroba seperti bakteri, jamur, dan virus.
Kontaminasi juga dapat disebabkan oleh tipe sel invasif dan tidak diinginkan, dan telah
mengakibatkan kesalahan identifikasi garis sel. Penyebaran kontaminasi berpotensi
merusak laboratorium karena memberantasnya bisa sangat memakan waktu dan mahal,
dan setiap publikasi yang menghasilkan dari pekerjaan pada sel-sel yang terkontaminasi
dipertanyakan. Untuk menghindari kontaminasi, kombinasi dari praktik kultur sel yang
tepat dan teknik aseptik yang ketat diperlukan. Teknik aseptik adalah seperangkat prinsip
dan praktik yang digunakan oleh pekerja kultur sel untuk mengurangi keberadaan
mikroorganisme yang tidak diinginkan atau garis sel lain dalam kultur mereka. Teknik
aseptik yang baik sangat penting untuk keberhasilan kultur sel dan jaringan jangka
panjang (Ileana Slavin, John P. Schell. 2012  )
 Area kerja steril
- Tudung kultur sel harus dipasang dengan benar dan ditempatkan di area yang
terbatas pada kultur sel yang bebas dari angin dari pintu, jendela, dan peralatan
lainnya, dan tanpa lalu lintas.
- Permukaan kerja harus rapi dan hanya berisi item yang diperlukan untuk prosedur.
- Sebelum dan sesudah digunakan, permukaan kerja harus didesinfeksi secara
menyeluruh, dan area dan peralatan di sekitarnya harus dibersihkan secar arutin.
- Bersihkan permukaan kerja dengan etanol 70% sebelum dan selama bekerja,
- Dapat digunakan sinar ultraviolet untuk mensterilkan udara dan permukaan kerja
yang terbuka di tudung kultur sel di antara penggunaan.
- Menggunakan pembakar Bunsen untuk menyala tidak perlu atau
direkomendasikan dalam tudung kultur sel.
- Biarkan kap kultur sel bekerja setiap saat, dapat dimatikan hanya jika tidak
digunakan dalam waktu yang lama.
 Personal”s Hygiene
- Cuci tangan sebelum dan sesudah bekerja dengan kultur sel. Selain melindungi
dari bahan-bahan berbahaya, memakai alat pelindung diri juga mengurangi
kemungkinan kontaminasi dari kulit gudang serta kotoran dan debu dari pakaian.
 Reagen dan Media Steril
- Selalu bersihkan tangan dan area kerja Anda dengan etanol 70%.
- Bersihkan bagian luar wadah, labu, piring, dan piring dengan etanol 70%
sebelumnya menempatkan mereka di kap kultur sel.
- Hindari menuangkan media dan pereaksi langsung dari botol atau botol.
- Gunakan gelas steril atau pipet plastik sekali pakai dan pipettor untuk bekerja
dengan cairan, dan gunakan setiap pipet hanya sekali untuk menghindari
kontaminasi silang. Jangan membuka pipet steril sampai digunakan. Simpan pipet
Anda di area kerja Anda.
 - Selalu tutup botol dan termos setelah digunakan dan tutupi pelat multi sumur
dengan selotip atau tempat Dalam kantong yang dapat ditutup kembali untuk
mencegah mikroorganisme dan kontaminan yang ada di udara mendapatkan entri.
- Jangan pernah membuka labu steril, botol, cawan petri, dll. Sampai Anda siap
gunakan dan jangan biarkan terbuka untuk lingkungan. Kembalikan penutup
segera setelah selesai.
- Jika Anda melepas tutup atau penutup, dan harus meletakkannya di atas
permukaan kerja, letakkan tutup dengan bukaan menghadap ke bawah.
- Gunakan hanya gelas steril dan peralatan lainnya.
- Berhati-hatilah untuk tidak berbicara, bernyanyi, atau bersiul ketika Anda
melakukan prosedur steril.
- Lakukan eksperimen Anda secepat mungkin untuk meminimalkan kontaminasi.
(Invitrogen, G., 2014)

Antibiotik tidak boleh digunakan secara rutin dalam kultur sel, karena penggunaannya
mendorong pengembangan strain resisten antibiotik dan memungkinkan tingkat
kontaminasi rendah untuk bertahan, yang dapat berkembang menjadi kontaminasi skala
penuh begitu antibiotik dikeluarkan dari media, dan dapat menyembunyikan infeksi
mikoplasma dan kriptik lainnya kontaminan. Lebih lanjut, beberapa antibiotik mungkin
bereaksi silang dengan sel dan mengganggu proses seluler yang sedang diselidiki.
Antibiotik hanya boleh digunakan sebagai upaya terakhir dan hanya untuk aplikasi
jangka pendek, dan mereka harus dikeluarkan dari kultur sesegera mungkin. Jika mereka
digunakan dalam jangka panjang, kultur bebas antibiotik harus dipertahankan secara
paralel sebagai kontrol untuk cryptic infeksi (Invitrogen, G., 2014)

3. Mengapa media berbeda-beda? Apa beda isi media DMEM dan RPMI? Untuk apa
Neurobasal A, EGF, bFGF pada kultur mFNS?
Media adalah komponen paling penting dari lingkungan kultur, karena menyediakan
nutrisi yang diperlukan, faktor pertumbuhan, dan hormon untuk pertumbuhan sel, serta
mengatur pH dan tekanan osmotik kultur. Banyak continuous mammalian cell lines dapat
dipertahankan pada media yang relatif sederhana seperti DMEM atau Medium 199.
Secara umum, tempat yang baik untuk memulai adalah DMEM untuk sel adheren dan
 RPMI-1640 untuk suspensi sel. Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) yang
mengandung vitamin dan asam amino 4 kali lebih besar dan mengandung 2-4 kali lebih
banyak glukosa dari medium Eagle’s (Ma’at, 2011). Media Dulbecco’s modified Eagle’s
medium (DMEM) memiliki konsentrasi asam amino 2 kali lebih tinggi dari media
Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI 1640) (Mather dan Roberts, 1998).
4. Apa beda primary cells dan cell line?
Banyak peneliti telah memilih untuk bekerja dengan cell line karena mereka
umumnya sangat proliferatif, dan lebih mudah untuk dikultur dan ditransfeksi. Sebagian
besar cell line telah dalam kultur selama beberapa dekade dan beradaptasi dengan baik
terhadap lingkungan kultur dua dimensi, dan sebagai hasilnya, seringkali berbeda secara
genetik dan fenotipik dari asal jaringan mereka dan menunjukkan perubahan morfologi.
Berbeda dengan cell line, primary cell yang diisolasi langsung dari jaringan, memiliki
umur yang terbatas dan kapasitas ekspansi terbatas. Di sisi positifnya, primary cell
memiliki morfologi sel normal dan mempertahankan banyak penanda dan fungsi penting
yang terlihat secara in vivo. (Pan C, 2009). Primary cell, berbeda dengan cell line, adalah
sel yang sangat sensitif yang membutuhkan nutrisi tambahan yang tidak termasuk dalam
media klasik. Untuk mengoptimalkan kelangsungan hidup dan pertumbuhan, sel primer
berkinerja terbaik dalam media khusus yang disesuaikan untuk setiap jenis sel. Sel
endotel, misalnya, memiliki kebutuhan nutrisi yang sangat berbeda dari sel epitel atau
neuron, dan karenanya membutuhkan media yang unik.
5. Kapan dipilih kultur 2 dimensi dan kapan dipilih kultur 3 dimensi?
Kultur sel dua dimensi (2D) telah digunakan sebagai model in vitro untuk
mempelajari respons seluler terhadap stimulasi dari isyarat biofisika dan biokimiawi.
Keuntungan kultur 2D terkait dengan pemeliharaan kultur sel yang sederhana dan murah
serta dengan kinerja tes fungsional. Pertumbuhan sel dalam lapisan tunggal 2D
memungkinkan akses ke jumlah nutrisi yang sama dan faktor pertumbuhan yang ada
dalam medium, yang menghasilkan pertumbuhan dan proliferasi yang homogeny.
Meskipun pendekatan ini diterima dengan baik dan telah secara signifikan meningkatkan
pemahaman kita tentang perilaku sel, semakin banyak bukti menunjukkan bahwa, dalam
beberapa keadaan, sistem 2D dapat menghasilkan bioaktifitas sel yang menyimpang
secara signifikan pada respon in vivo. Sebagai contoh, beberapa karakteristik penting sel
 kanker tidak dapat dimodelkan secara tepat dalam kultur 2D. Untuk mengatasi
keterbatasan ini, platform kultur sel 3D baru sedang dibuat untuk meniru kondisi in vivo
yang lebih yang sering disebut kultur spheroid atau organoid. Dalam banyak kasus,
platform baru ini terbukti lebih mampu menginduksi sel in vivo untuk proses spesifik
yang sedang diteliti. Hasil dari studi 3D menunjukkan bahwa meningkatkan dimensi
matriks ekstraseluler (ECM) di sekitar sel dari 2D ke 3D dapat secara signifikan
mempengaruhi proliferasi sel, diferensiasi, respons mechano, dan kelangsungan hidup
sel. Perilaku sel 3D lebih mencerminkan respons seluler in vivo. Penelitian telah
menemukan bahwa sel-sel dalam lingkungan kultur 3D berbeda secara morfologis dan
fisiologis dari sel-sel dalam lingkungan kultur 2D.Penambahan dimensi dari kultur 3D
yang merupakan fitur penting yang menyebabkan perbedaan dalam respon seluler karena
tidak itu hanya memengaruhi organisasi spasial reseptor permukaan sel yang terlibat
dalam interaksi dengan sel-sel di sekitarnya, tetapi juga menginduksi kendala fisik pada
sel. Meskipun penemuan-penemuan ini mungkin menyarankan bahwa sistem 3D harus
diterapkan, platform 3D universal saat ini tidak ada; selain itu, pendekatan kultur sel 2D
masih dapat merekapitulasi perilaku in vivo untuk banyak bioaktivitas, sementara
kemajuan baru dalam desain substrat terus menawarkan kemampuan baru untuk platform
ini. Secara keseluruhan, platform 3D cenderung memberikan alternatif untuk kultur sel
2D saat teknologi berkembang untuk memungkinkan berbagai proses yang lebih luas
(Baker, BM. 2012)
6. Bagaimana anda dapat menemukan/mengembangkan kondisi optimum untuk meng-
kultur suatu jenis sel?
Kondisi kultur sangat bervariasi untuk setiap jenis sel, tetapi lingkungan buatan di
mana
sel dikultur selalu terdiri dari wadah yang cocok yang mengandung substrat atau media
yang memasok nutrisi penting (asam amino, karbohidrat, vitamin, mineral), faktor
pertumbuhan, hormon, dan gas (O2, CO2), dan mengatur lingkungan fisikokimia (pH,
tekanan osmotik, suhu). Sebagian besar sel terikat secara jangkar dan harus dikultur saat
melekat pada substrat padat atau semi-padat, sementara yang lain dapat tumbuh
mengambang di dalam budaya medium (budaya suspensi). Karena sel beragam, medium
kultur sel universal yang optimal tidak ada, dan tipe sel berbeda mungkin memerlukan
 kondisi kultur yang berbeda. Optimalisasi kultur sel membutuhkan pengembangan media
sintetis yang terdefinisi dengan baik dengan faktor pertumbuhan rekombinan atau sitokin.
Kondisi kultur sel harus disesuaikan dengan jenis sel. Selanjutnya, kultur sel mungkin
memiliki tujuan yang berbeda. Oleh karena itu, parameter kultur sel perlu disempurnakan
sesuai dengan tujuan akhir kultur sel (van der Sanden, 2010).

Karakteristik 2D 3D
Bentuksel Bentuk alami Datar dan membentang (ellipsoid atau
terpolarisasi)
Antar muka sel Semua sels ama-sama terpapar Lapisan atas sel sangat terpapar pada
ke medium komponen media. lapisan bawah (paparanheterogen)
Cell junction Kurang lazim dan tidak Lazim dan memungkinkan komunikasi
menyerupai kondisi fisiologis sel k esel
Diferensiasi sel Diferensiasi sedang dan buruk Diferensiasi baik
Metabolisme Metabolisme obat tidak Peningkatan metabolisme obat dengan
obat diamati dengan baik peningkatan ekspresi enzim CYP
Sensitivitas obat Sel sensitif dan obat Sel sering menunjukkan resistensi dan
menunjukkan kemanjuran obat menunjukkan potensi rendah
tinggi
Proliferasi sel Tingkat proliferasi lebih tinggi Tingkat proliferasi mungkin tinggi
daripada di lingkungan alami atau rendah, ini didasarkan pada tipe
sel dan teknik kultur sel 3D
Respon pada Buruk Baik
stimuli
Viability Peka terhadap sitotoksin Kelangsungan hidup yang lebih besar
dan kurang rentan terhadap faktor
eksternal
Apoptosis Sangat rentan terhadap Peningkatan resistensi terhadap
apoptosis yang diinduksi obat rangsangan apoptosis yang diinduksi
obat
(Merck, 2020)
7. Bagaimana kultur sel dapat membantu penemuan obat baru?
Tes berbasis sel adalah elemen penting dari proses penemuan obat. Dibandingkan
dengan penggunaan model hewan yang mahal, pengujian menggunakan sel yang dikultur
lebih sederhana, cepat dan hemat biaya serta fleksibel dan mudah direproduksi. Sampai
 saat ini, sebagian besar kultur sel yang digunakan dalam penemuan obat adalah
monolayers 2D sel yang tumbuh pada permukaan plastik kaku planar yang dioptimalkan
untuk perlekatan dan pertumbuhan sel. Selama beberapa dekade terakhir, kultur 2D telah
memberikan banyak informasi tentang proses biologis dan penyakit dasar. (Langhans S.
A. 2018). Langkah pertama dalam penemuan obat, dalam banyak kasus, senyawa dalam
kultur sel diuji untuk mengetahui seberapa aktif mereka dalam hal farmakologis.
Tantangan yang dihadapi dalam langkah ini beragam. Dalam memilih cell line adalah
masalah penting karena aktivitas senyawa mungkin spesifik. Menentukan kondisi optimal
untuk media kultur sel dan pelarut obat, di samping reagen lain yang akhirnya digunakan,
tetap penting karena variasi dari masing-masing faktor ini dapat mempengaruhi
ketahanan uji berbasis sel dengan mempengaruhi hidup. Sel. Unsur penting lainnya
adalah pemilihan kontrol positif, yang dalam banyak kasus adalah obat biasa yang
dipelajari dengan baik dan terkenal dengan aktivitas yang akan diuji. Penggunaan kontrol
negatif memastikan interpretasi yang lebih baik dari hasil karena memungkinkan kita
untuk membedakan efek dari obat yang diuji dari yang disebabkan oleh unsur-unsur lain
seperti reagen atau bahan medium kultur sel. (Ghanemi, 2014)
8. Bagaimana cara membuat rekombinan sel-T pasien dengan mesin otomatis seperti
dijelaskan sekilas di video Miltenyi (https://www.youtube.com/watch?
v=PFWoVN5wafo)?
1) Ikuti perintah pada layar untuk menggabungkan tubing set dari buffer dan Tech’s
Max GMP Medium.
2) Setelah sistem bekerja, sambungkan starting material dan reagen clean Emacs.
3) T Cells secara otomatis terlabeli dengan cd4 dan cd8 klinis atau reagen cd 62
dalam century cult unit dengan menggunakan pemisahan sel secara magnetis, t
cells diperkaya (enriched)
4) T cell yang sudah diperkaya dieluasi menuju reapplication back.
5) Untuk mengambil sampel dari T cell yang sudah diperkaya gunakan salah satu
sampling pouches.
6) T max GMP T cells transact telah terkoneksi dengan sistem.
7) Dengan menggunakan layar dapat dilakukan penyusaian pada proses penanaman
sesuai dengan kebutuhan.
 8) Jumlah sel yang dibutuhkan di tanam pada century cult unit dan dicuci.
9) T cell diaktivasi menggunakan max GMP T Cell transact dalam century cult unit
(sel menetap pada kultur static)
10) Pada hari selanjutnya, lentiviral vector ditambahkan pada t cell yang teraktivasi (T
cell tertransduksi).
11) T cell yang sudah tertranduksi mengekpresikan reseptor antigen chimeric pada
permukaannya. Sel di ekspansi lebih lanjut.
12) Setelah fase transduksi, sel dicuci dan diinkubasi pada century cult unit.
13) Sampling secara regular membuat pemantauan densitas sel dan kondisi kultur
dapat dilakukan pada fase ekspansi.
14) Kultur secara regular ditambahan dan di tukar media kultur sel.
15) Saat volume kultur melebihi 150 ml, proses penanaman di ubah dari statis
menjadi kultur agitasi.
16) Setelah 10-14 hari, sel dapat dipanen dari formulasi final menuju tempat target
cell.
Sumber:
Baker BM, Chen CS.2012.  Deconstructing the third dimension: how 3D culture
microenvironments alter cellular cues. J Cell Sci 125: 3015–3024
Bykowski, T. and Stevenson, B., 2008. Aseptic technique. Current protocols in
microbiology, 11(1), pp.A-4D.
Ghanemi A. 2014. Biological properties and perspective applications of “bio-neuter”
chemicals Saudi Pharm. J. 
Ileana Slavin, John P. Schell. 2012  Human Stem Cell Manual (Second Edition).
Academic Press
Invitrogen, G., 2014. Cell culture basics. Life technologies.
Langhans S. A. 2018. Three-Dimensional in Vitro Cell Culture Models in Drug
Discovery and Drug Repositioning. Frontiers in pharmacology, 9, 6.
Ma’at, Suprapto. 2011. Teknik Dasar Kultur Sel. Surabaya: Airlangga University Press
Mather JP, Roberts PE, 1998. Introduction to Cell and Tissue Culture Theory and
Technique. New York: Plenum Press
Merck, 2020.2D vs 3D Cell Culture. (Online)https://www.sigmaaldrich.com/technical-
documents/articles/biology/3d-cell-culture-technology.html Diakses 04 Mei 2020
Pan C, Kumar C, Bohl S, Klingmueller U, Mann M. 2009. Comparative Proteomic
Phenotyping of Cell Lines and Primary Cells to Assess Preservation of Cell Type-
specific Functions. Mol Cell Proteomics. 8(3): 443-450.
Rosdiana, A. and Hadisaputri, Y.E., 2016. Studi Pustaka tentang Prosedur Kultur
Sel. Farmaka, 14(1), pp.236-249.
van der Sanden, B., Dhobb, M., Berger, F., & Wion, D. 2010. Optimizing stem cell
culture. Journal of cellular biochemistry, 111(4), 801–807.
https://doi.org/10.1002/jcb.22847