Pewarnaan

TROUBLE Hematoxilin
Eosin

SHOOTING Yadi Apriyadi S.Si

 PEWARNAAN
MANUAL
 Waldeyer memperkenalkan sistem pewarnaan
hematoxilin dan eosin pada tahun 1863

 Itu adalah teknik pewarnaan yang paling

umum dan utama dalam histopatologi saat ini

 Saat ini berbagai jenis hematoxylin tersedia,

tapi yang biasa kita gunakan adalah Harris
Hematoxilin
 CONTOH PROSEDUR PEWARNAAN
HEMATOXILIN EOSIN ( H& E)
1. Dimasukan ke dalam xilen I 5 menit 12. Celupkan ke lithium carbonat 5% 10 celup
2 .Dimasukan ke dalam xilen II 5 menit 13. Celupkan ke dalam air mengalir 10 celup

3 .Dimasukan ke dalam alkohol 96% 10 celup 14.Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 celup
4.Celupkan ke dalam alkohol 80 % 10 celup 15.Celupkan ke dalam eosin alkoholic 1 celup
5. Dimasukan ke dalam alkohol 50 % 10 celup 16. Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
6. Dimasukan ke dalam air mengalir 10 celup 17 Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
7. Dimasukan ke dalam larutan Harris Hematoxilin 5-10” 18 Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
8. Dimasukan ke dalam air mengalir 10 celup 19 Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
9. Celupkan ke dalam HCl 0,25 % 1 celup 20. Celupkan ke dalam Xilen 5 menit
10 .Celupkan ke dalam air mengalir 10 celup 21. Celupkan ke dalam Xilen 5 menit
11 Celupkan ke dalam larutan lithium carbonat 5% 10
celup
 Bintik-bintik putih terlihat pada preparat setelah langkah deparafinisasi. Preparat
seperti berkabut pewarnaan tidak rata atau tidak
teratur akan terlihat secara mikroskopis menghalangi sample yang sudah
terwarnai.

Preparat kurang tercelup lama dalam

Preparat tidak dikeringkan
xylen untuk menghilangkan parafin
sebelum tahap xylin dengan
sepenuhnya
benar

Preparat harun s dikeringkan dan

preparat harus dikembalikan ke
kemudian mundur ke xylene
xylene untuk waktu yang agak
untuk menghilangkaparafin
lama
 Kesulitan mendiagnosa,karena hematoxilin kurang
( nucleus terlalu pucat)

konsentrasi inti pucat

preparat kurang langkah pada jaringan
lama tercelup larutan diferensia
hematoxyli tulang hasil
di hematoxylin si terlalu dari
n hilang / panjang
berkurang dekalsifikasi
berlebihan

tahan agak Buang

lama di larutan Kembali lagi
haematoxylin Tidak ada
haematoxili ke
dan ganti solusi
n belakang
dengan yang dan warnai
segar
 Hematoxilin berlebihan
(nucleus terlalu gelap)

Preparat diwarnai Langkah

terlalu lama dalam Preparat terlalu
diferensiasin
hematoxylin tebal
ya terlalu
pendek

mendekolorisasi Potong ulang mendekolorisasi

preparat dan yang tipis preparat , menahan
menahan, membuat sampel membuat
penyesuaian tersebut penyesuaian waktu
waktu yang tepat
yang tepat pada
dalam pewarnaan
langkah
hematoxylin
diferensiasi
Inti merah atau coklat merah

Hematoxylin Nukleus kurang

sudah biru
teroksidasi

Cek konsentrasi dan Tahan agak lama pada

fungsi dari larutan tahap bluing
hematoxylin
 Pewarnaan Eosin terlalu pucat

pH larutan eosin mungkin di atas 5,0

kemungkinan disebabkan oleh Preparat terlalu
akumulasi reagen kebiruan tipis

Periksa ketebalan sediaan

Chek pH,pastikan reagen kebiruan
dan jika perlu Potong
benar-benar dihilangkan sebelum
mentransfer slide ke larutan eosin, ulang tipis
danJika perlu sesuaikan ke pH 4 - 5
dengan asam asetat
 Sitoplasma terlalu berlebihan dan perbedaannya
buruk

Konsentrasi larutan Sediaan

Sediaan terlalu
eosin mungkin terlalu terlalui cepat
lama terwarnai
tinggi dalam
dalam larutan
proses
eosin
dehidrasi

Encerkan Kurangi Tambah waktu pada

larutan waktu proses dehidrasi
eosin pewarnaa untuk diferensiasi
n eosin yang
memadai
 Latar Belakang Pewarnaan Eosin

mungkin karena penggunaan albumin untuk sediaan

sebelum menempel sampel pada slide

gunakan apusan albumin yang tipis, atau lebih baik

tidak menggunakan lapisan albumin
 Endapan biru-hitam / kristal di atas sediaan

Kemilau logam yang berkembang pada sebagian

besar larutan hematoksilin telah terbawa pada
slide

Saring larutan hematoxilin setiap hari

sebelum
pewarnaan slide
Gelembung air terlihat secara mikroskopis di bagian slide yang
telah diwarnai

Sediaan tidak sepenuhnya mengalami

dehidrasi, dan air ada di sediaan yang sudah
terpasang coverglass

Lepaskan kaca penutup dengan merendam

sediaan dalam xylene.kemudian
mengembalikan slide ke alkohol absolut segar
(lihat perubahan nya) setelah itu dehidrasi,
dengan xylen segar dan tutup dengan coverglass
+ Enthelan.
 Kesulitan membaca beberapa area jaringan dalam fokus
dengan mikroskop cahaya,
karena salah pemasangan cover glass, mungkin jaringan
berada di atas slida tapi tidak tertutup kaca coverglass

lepaskan kaca
penutup

ganti slide atau coverglas dan pasang

kembali
Sediaan yang telah diwarnai tidak menunjukkan
transparansi yang biasa bila dilihat dengan
mikroskopi cahaya

pasang coverglass bersih tinjau metode yang

digunakan untuk memasang bagian dan
memodifikasi jika perlu

media pemasangan mungkin terlalu

tebal, kaca penutup juga dipegang pas
di atas jaringan
 Coverglass tidak pas menutup sediaan,
tertarik ketepi sediaan

Pada saat menutup dengan

kaca penutup
cover glass enthelannya
terlalu banyak xilol
dibengkokka
n

lepaskan oleskan kaca penutup baru

coverglass dan dengan media mounting segar
ganti dengan agar tertutup sempurna,dan tutup
coverglass rapat kembali botol mounting
baru saat tidak digunakan dan buang
ketika menjadi keras