Pewarnaan

TROUBLE SHOOTING Hematoxilin Eosin

Elis Herwati, S.Si

 PEWARNAAN MANUAL
 Waldeyer memperkenalkan sistem pewarnaan
hematoxilin dan eosin pada tahun 1863

 Itu adalah teknik pewarnaan yang paling umum

dan utama dalam histopatologi saat ini

 Saat ini berbagai jenis hematoxylin tersedia, tapi

yang biasa kita gunakan adalah Harris
Hematoxilin
 CONTOH PROSEDUR PEWARNAAN HEMATOXILIN EOSIN ( H& E)

1. Dimasukan ke dalam xilen I 5 menit 12. Celupkan ke lithium carbonat 5% 10 celup

2 .Dimasukan ke dalam xilen II 5 menit 13. Celupkan ke dalam air mengalir 10 celup

3 .Dimasukan ke dalam alkohol 96% 10 celup 14.Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 celup
4.Celupkan ke dalam alkohol 80 % 10 celup 15.Celupkan ke dalam eosin alkoholic 1 celup
5. Dimasukan ke dalam alkohol 50 % 10 celup 16. Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
6. Dimasukan ke dalam air mengalir 10 celup 17 Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
7. Dimasukan ke dalam larutan Harris Hematoxilin 5-10” 18 Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
8. Dimasukan ke dalam air mengalir 10 celup 19 Celupkan ke dalam alkohol 96% 10 .celup
9. Celupkan ke dalam HCl 0,25 % 1 celup 20. Celupkan ke dalam Xilen 5 menit
10 .Celupkan ke dalam air mengalir 10 celup 21. Celupkan ke dalam Xilen 5 menit
11 Celupkan ke dalam larutan lithium carbonat 5% 10
celup
 Bintik-bintik putih terlihat pada preparat setelah langkah
deparafinisasi. Preparat seperti berkabut pewarnaan tidak rata atau
tidak teratur akan terlihat secara mikroskopis menghalangi sample
yang sudah terwarnai.

Preparat kurang tercelup lama dalam

Preparat tidak dikeringkan
xylen untuk menghilangkan parafin
sebelum tahap xylin dengan benar
sepenuhnya

Preparat harun s dikeringkan dan

preparat harus dikembalikan ke
kemudian mundur ke xylene untuk
xylene untuk waktu yang agak lama
menghilangkaparafin
 Kesulitan mendiagnosa,karena hematoxilin kurang
( nucleus terlalu pucat)

konsentrasi inti pucat

preparat kurang langkah pada jaringan
lama tercelup di larutan diferensiasi
hematoxylin tulang hasil
hematoxylin terlalu dari
hilang / panjang
berkurang dekalsifikasi
berlebihan

tahan agak Buang larutan

lama di haematoxylin Kembali lagi
dan ganti Tidak ada
haematoxilin ke belakang
dengan yang solusi
dan warnai
segar
 Hematoxilin berlebihan (nucleus terlalu gelap)

Preparat diwarnai Langkah

terlalu lama dalam Preparat terlalu tebal
diferensiasinya
hematoxylin terlalu pendek

mendekolorisasi Potong ulang mendekolorisasi

preparat dan yang tipis preparat , menahan
menahan, membuat sampel tersebut membuat
penyesuaian waktu
penyesuaian waktu
yang tepat dalam
yang tepat pada
pewarnaan
langkah diferensiasi
hematoxylin
 Inti merah atau coklat merah

Hematoxylin sudah Nukleus kurang biru

teroksidasi

Cek konsentrasi dan Tahan agak lama pada

fungsi dari larutan tahap bluing
hematoxylin
 Pewarnaan Eosin terlalu pucat

pH larutan eosin mungkin di atas 5,0

kemungkinan disebabkan oleh Preparat terlalu tipis
akumulasi reagen kebiruan

Periksa ketebalan sediaan

Chek pH,pastikan reagen kebiruan
dan jika perlu Potong
benar-benar dihilangkan sebelum
mentransfer slide ke larutan eosin, ulang tipis
danJika perlu sesuaikan ke pH 4 - 5
dengan asam asetat
 Sitoplasma terlalu berlebihan dan perbedaannya buruk

Konsentrasi larutan Sediaan

Sediaan terlalu
eosin mungkin terlalu terlalui cepat
lama terwarnai
tinggi dalam proses
dalam larutan eosin
dehidrasi

Encerkan Kurangi Tambah waktu pada

larutan eosin waktu proses dehidrasi
pewarnaan untuk diferensiasi
eosin yang memadai
 Latar Belakang Pewarnaan Eosin

mungkin karena penggunaan albumin untuk sediaan

sebelum menempel sampel pada slide

gunakan apusan albumin yang tipis, atau lebih baik

tidak menggunakan lapisan albumin
 Endapan biru-hitam / kristal di atas sediaan

Kemilau logam yang berkembang pada sebagian

besar larutan hematoksilin telah terbawa pada slide

Saring larutan hematoxilin setiap hari sebelum

pewarnaan slide
Gelembung air terlihat secara mikroskopis di bagian
slide yang telah diwarnai

Sediaan tidak sepenuhnya mengalami dehidrasi,

dan air ada di sediaan yang sudah terpasang
coverglass

Lepaskan kaca penutup dengan merendam

sediaan dalam xylene.kemudian mengembalikan
slide ke alkohol absolut segar (lihat perubahan
nya) setelah itu dehidrasi, dengan xylen segar dan
tutup dengan coverglass + Enthelan.
Kesulitanmembaca beberapa area jaringan dalam fokus
dengan mikroskop cahaya,
karena salah pemasangan cover glass, mungkin jaringan
berada di atas slida tapi tidak tertutup kaca coverglass

lepaskan kaca penutup

ganti slide atau coverglas dan pasang kembali

Sediaan yang telah diwarnai tidak menunjukkan
transparansi dan kerenyahan yang biasa bila
dilihat dengan mikroskopi cahaya

pasang coverglass bersih tinjau metode yang

digunakan untuk memasang bagian dan
memodifikasi jika perlu

media pemasangan mungkin terlalu

tebal, kaca penutup juga dipegang pas
di atas jaringan
 Coverglass tidak pas menutup sediaan,
tertarik ketepi sediaan

Pada saat menutup dengan

kaca penutup
cover glass enthelannya
dibengkokkan
terlalu banyak xilol

lepaskan oleskan kaca penutup baru

coverglass dan dengan media mounting segar
ganti dengan agar tertutup sempurna,dan tutup
coverglass baru rapat kembali botol mounting
saat tidak digunakan dan buang
ketika menjadi keras
#RINGKASAN

Pemrosesan suatu biopsi atau spesimen tunduk pada

protokol prosedural hasil dalam suatu jaringan yang cocok
untuk diagnosa suatu interpretasi
prosedur pewarnaan itu sendiri tunduk pada kesalahan
manusia dan material dan hasilnya adalah artefak yang
setidaknya dapat mengganggu dengan diagnosa yang
memadai atau paling banyak residu jaringan sehingga
terdistorsi sehingga tidak dapat dibatalkan

Kebutuhan untuk mengenali artefak ini dan upaya untuk

mengatasinya adalah satu-satunya tantangan besar dalam
laboratorium patologis