JURNAL PRAKTIKUM BIOFARMASETIKA

KELOMPOK : C2-5
NAMA ANGGOTA : Rima Novita Puspasari (182210101157)
Vira Yuliana (182210101159)
Zaenab Hasyimia (182210101160)
Moch. Chusnul Rifqi Zauhair (182210101162)
Carolin Enjelin Rumaikewi (182210101164)
HARI/TANGGAL : Senin, 8 Maret 2021
MATERI PRAKTIKUM : Absorpsi Obat Per Oral Secara In Situ
DOSEN : Lusia Oktora Ruma Kumala Sari S.F., M.Sc., Apt.

I. TUJUAN PRAKTIKUM

Mempelajari pengaruh pH terhadap absorpsi obat, yang diabsorpsi melalui difusi pasif
dan percobaan dilakukan secara in situ.

II. DASAR TEORI

Biofarmasetika adalah ilmu yang mempelajari hubungan sifat fisika-kimia formulasi

obat terhadap bioavailabilitas obat. Bioavailabilitas menyatakan kecepatan dan jumlah obat
aktif yang mencapai sirkulasi sistemik (Shargel dkk., 2007). Fase biofarmasetika melibatkan
seluruh unsur-unsur yang terkait mulai saat pemberian obat hingga terjadinya penyerapan zat
aktif. Peristiwa tersebut tergantung pada cara pemberian dan bentuk sediaan. Fase
biofarmasetika dapat diuraikan dalam tiga tahap utama yaitu liberasi (pelepasan), disolusi
(pelarutan), dan absorpsi (penyerapan) (Aiache. 1993).
Absorpsi atau penyerapan suatu zat aktif adalah masuknya molekul- molekul obat
kedalam tubuh atau menuju ke peredaran darah setelah melewati membran biologis.
Penyerapan terjadi bila zat aktif dalam bentuk terlarut, penyerapan zat aktif tergantung pada
berbagai parameter terutama sifat fisika
kimia molekul obat. Proses penyerapan zat aktif terjadi setelah bebas dari sediaandan
melarut dalam cairan biologis (Aiache. 1993).

Obat Pelepasan Partikel Obat Obat

dalam dengan cara obat pelarut dalam absorpsi dalam
produk penghancuran padat larutan tubuh
obat
Obat dengan rute per oral absorpsi terjadi pada saluran cerna. Beberapa jenis obat
diabsorpsi di lambung, namun duodenum sering menjadi jalan masuk utama ke sirkulasi
sistemik, sebab permukaan absorpsinya yang lebih besar. Sesuai dengan Hukum Fick 1 yang
menyatakan bahwa kecepatan difusi pasif suatu obat berbanding lurus dengan luas
permukaan absorpsi (adanya lipatan / filli), maka luas permukaan usus halus akan
mengakibatkan absorpsi zat-zat makanan dan obat berjalan lebih baik.
Menurut Siswandono dan Suekardjo, 2000, adapun faktor-faktor yang mempengaruhi
proses absorpsi obat di saluran cerna antara lain:
1. Bentuk sediaan obat, meliputi ukuran partikel bentuk sediaan, adanya bahan- bahan
tambahan dalam sediaan.
2. Sifat fisika kimia obat, misalnya: bentuk garam, basa, amorf, Kristal.
3. Faktor biologis, seperti: gerakan saluran cerna, luas permukaan saluran cerna, waktu
pengosongan lambung, banyaknya pembuluh darah dalam usus, aliran (perfusi) darah
dari saluran cerna.
4. Faktor-faktor lain, seperti: usia, interaksi obat dengan makanan, interaksi obat dengan
obat lain, penyakit tertentu.
Parasetamol merupakan deri p-aminofenol sebagai analgesik dan antipiretik, dimana
secara teoritis memiliki pH stabilitas antara 5,5-6,5. Hal ini menyatakan bahwa parasetamol
penyerapannya bergantung pada pH lambung danusus. Secara teoritis absorpsi paracetamol
lebih cepat dalam pH basa pada usus dibandingkan dengan pH asam pada lambung. Hanya
obat dalam bentuk molekul yang akan mengalami absorpsi karena bentuk molekul yang
dapat larut dalam lipid akan mudah menembus membran tubuh tempat absorpsi obat
(membran tubuh bersifat lipid bilayer).
Absorpsi obat secara difusi pasif dilakukan dengan menggunakan membrane alami
maupun sintetis. Penelitian dengan membrane alami dilakukan
secara in situ dan in vitro, keduanya memiliki prinsip yang sama yakni untuk mengetahui
banyaknya obat yang melewati membrane usus (terabsorpsi) pada keadaan tertentu, kedua
cara ini mengasumsikan bahwa obat yang digunakan tidak mengalami metabolisme dalam
lumen usus. Model in situ lebih unggul dari in vitro karena hasil tingkat penyerapannya lebih
realistis disbanding in vitro. Penggunaan model in situ karena terbukti berkolerasi dengan
data manusia invitro untuk memproduksi penyerapan pada media pasif dan media pembawa.
Model ini juga mengasumsikan semua obat masuk kedalam porta vena.
Model umum penggambaran penyerapan gasfrointiesfinal

Kompartemen darah (cb)

Cb (t) Eliminasi

Tabs

Input Cut Flow

X=0 Usus X=1

Halus

Perubahan kadar obat dalam setiap waktu merupakan hasil dan keadaan non steady
(tidak stabil) obat berbanding terbalik dengan panjang usus dengan lajueliminasi dari
darah.ketika obat yang telah hancur di lambung saluran ke usus kecil akan terjadi gradien
konsentrasi non skady state di sepanjang saluran usus.Gradien konsentrasi ini dipengaruhi
oleh laju pengosongan lambung aliran cairan usus.laju penyerapan dan tingkat penyebaran
zat terlarut di saluran koefisien permebealitas yang efektif.
Konstanta laju abs orde 1 yang mungkin secara langsung berkaitan dengan koefesien
permeabilitas efektif (peff).peff merupakan salah 1 parameter yangmempertahankan laju dan
tingkat abs obat pada usus.Rumus kosentrasi absorbsi
𝐴 Keterangan:
𝐾𝑎 = . 𝑃𝑒𝑓𝑓
𝑉 A = Luas Permukaan (Peff)L
=Panjang Usus
 V =Volume (𝜋𝑟2𝐿)
Peff berasal dari hukum ficks : 𝐽𝑤𝑎𝑙𝑙 → 𝑃𝑒𝑓𝑓. ∆𝑐

Keterangan : Jwall → hubungan antara massa persatuan luas persatuan waktu

𝑑𝑚 1
( 𝑑𝑡 . 𝐴 )

∆𝑐 = Penurunan Konsentrasi Obat

𝑄 𝐶𝑜𝑢𝑛𝑡
𝑃𝑒𝑓𝑓 = − ( ) 𝑙𝑛 ( )
𝐴 𝐶𝑖𝑛

𝑄 𝐶𝑜𝑢𝑛𝑡
𝑃𝑒𝑓𝑓 = − ( ) 𝑙𝑛 ( )
2π𝑟𝑡 𝐶𝑖𝑛
Model yang alternative adalah model pencampuran radial yang lengkap atau tube
parallel.
Keterangan:

Peff = Koef.permeabilitas intestinal efektif melalui segmen silinder intestinal

dengan r dan L tertentu
Q = koef.alir larutan obat (Cm/Menit)A = luas permukaan usus (Cm2)
r = jari-jari Usus

L = panjang Usus (Cm)

C(o) = kadar larutan obat mula-mula (Cin)

C(i) = kadar Larutan setelah melalui intestine sepanjang 10 m (Cout)

III. Metode In situ

Terdapat banyak variasi metode perfsui yang digunakan sebagai model absorbsi salah
satunya adalah metode in situ. Metode ini didasarkan atas penentuan hilangnya obat dari
lumen usus halus secara perfusi dengan kecepatan tertentu. Pada metode in situ, meskipun
hewan coba telah dibedah, pasokan darah,saraf, endoktrin dan limfatik masih dapat berfungsi
sebagai transporter sehingga tingkat penyerapan pada metode ini akan lebih besar daripada
in vitro. Metode ini dikenal pula dengan nama Teknik perfusi, karena usus dilubangi untuk
masuknya ujung kanul. Kanul bagian atas usus untuk masuknya sampel dan bagian
bawahnya untuk keluarganya cairan tersebut.
Metode in situ diasumsikan bahwa obat yang diujikan di dalam keadaan stabil
 tidak mengalami metabolisme dalam lumen usus sehingga hilangnya obat dari lumen
usus akan masuk ke dalam plasma darah. Hilangnya obat dari lumen usus tersebut
adalah karena proses absorbsi untuk obat yang bersidat asam lemah atau basa lemah.
Pengaruh ph terhadap kecapatan absorbsi sangat besar, karena pH akan menentukan
besarnya fraksi obat dalam bentuk tak terion. Obat dalam bentuk ini dapat terabsorbsi
secara baik melalui mekanisme difusi pasif.

Metode in situ dapat digunakan untuk mempelajari factor yang dapatberpengaruh terhadap
perbeabilitas dinding usus dan berbagai macam obat. Metode perfusi obat dalam usus dibagi
menjadi 2, yaitu closed loop experiment dan opened expirement “through and through”
klasifikasi tersebut dibedakan berdasarkan keadaan segmen usus
1. Closed Loop Intestinal Perfussion
Larutan obata akan berada pada bagian usus yang terisolir dan cairan usus
yang dihasilkan dianalisis pada waktu tertentu. Cairan perfusi dilewatkan melalui
segmen untuk mengeluarkan cairan dari usus, konsentrasi obat dalam closed intestinal
perfusion diasumsikan menurun pada orde pertama seiring waktu (t), hal tersebut
didefinisikan berdasarkan rumus:
𝐶 = 𝐶𝑜. 𝑒−𝐾𝑎.𝑡 Keterangan: Co = Konsentrasi awal obat
Ka = Konstanta laju absorsi orde pertama
t = waktu
2. Single Pass Intestinal Perfussion

Disebut juga metode through and through, metode ini dirancang untuk
memperkirakan sifat penyerapan obat dengan cairan yang terus menerus mengalir
melalui usus. Metode ini dilakukan dengan menentukan fraksi obat yang terabsorbsi,
setelah larutan obat dialirkan melalui lumen usus dengan Panjang tertentu dan laju
tertentu. Metode ini memiliki kelemahan potensial bahwa obat tersebut terpapar pada
seluruh luas permukaan segmen usus yang tidak menunjukkan situasi in vivo dalam
keadaan tunak, proses absorbsi dapaat dinyatakan dengan persamaan:

−𝑄 𝐶𝑜𝑢𝑛𝑡
𝑃𝑒𝑓𝑓 = . 𝑙𝑛 ( )
𝐴 𝐶𝑖𝑛

−𝑄 𝐶𝑜𝑢𝑛𝑡
𝑃𝑒𝑓𝑓 = . 𝑙𝑛 ( )
2π𝑟𝑡 𝐶𝑖𝑛

Keterangan :

Peff : koefisien permeabilitas intestinal efektif

Q : kecepatan aliran larutan obat (ml/mm)

A : luas permukaan usus (cm2)

Cin : Kadar larutan obat mula-mula

Cout : Kadar larutan obat setelah dialirkan melalui intestine

r : Jari – jari usus (cm)

l : Panjang usus (cm)

• Keuntungan metode in situ:

1. Suplai darah, neural, endokrin, dan limpatik masih utuh sehinggamekanisme

transpor seperti yang terdapat pada mahluk hidup masih fungsional.
2. Hasil dari metode ini lebih realistik dibandingkan dengan hasil yang diperoleh
dengan metode in-vitro
3. Dapat digunakan untuk membandingkan permeabilitas dari satu tempat ke
tempat lain sepanjang saluran usus yang merupakan syarat dalam klasifikasi
produk lepas terkendali
• Kelemahan:
Obat menyebar luas ke seluruh permukaan usus sehingga tidak mencerminkan in
vivo yang sebenarnya
.
IV. ALAT DAN BAHAN

A. Alat
1. Satu set kanula
2. Cutter listrik
3. Jam/timer
4. Gelas piala besar (untuk tempat anastesi)
5. Spektrofotometer
6. Alat/perlengkapan operasi (meja operasi, gunting, benang, danpenggaris)
7. Pompa peristaltik
8. Alat-alat gelas (beaker glass)
9. Timbangan hewan percobaan

B. Bahan
1. Cairan lambung buatasn (CLB) tanpa enzim
2. Cairan usus buatan (CUB) tanpa enzim
3. Larutan PCT pada CLB dan CUB tanpa enzim
4. Tikus putih jantan dengan berat 150-170 gram
5. Larutan eter
6. Larutan natrium klorida 0,9% b/v

V. CARA KERJA

Percobaan absorpsi dilakukan secara in situ, parasetamol per oral. Percobaan dilakukan
dalam dua kondisi uji yaitu pada kondisi asam menggunakan CLB tanpa enzim dengan pH
1,2 dan kondisi normal-basa menggunakan CUB tanpa enzim pH 6,8. Kadar parasetamol
di ukur menggunakan metode spektrofotometeri UV.

4.1. Pembuatan Larutan CLB dan CUB tanpa enzim (1 liter)

a. Pembuatan larutan CLB tanpa enzim (Farmakope Indonesia Edisi V, hal 1698)

Natrium ditimbang 2,0 gram

Kemudian dilarutkan dalam 7 ml asam klorida pekat dan air ad 980 ml

 Larutan di-Adjust sampai pH ± 1,2

b. Pembuatan larutan CUB tanpa enzim (Farmakope Indonesia Edisi V, hal 1698)

Kalium fosfat monobasa Ditimbang 6,8 gram kemudian dilarutkan dengan air

Setelah itu dicampurkan dan ditambahkan dengan 77 ml NaOH 0,2 N dan 500 ml air

Larutan di-Adjust sampai pH 6,8 ± 0,1 dengan penambahan NaOH 0,2 N

Larutan ditambahkan akuades ad 1000 ml

4.2. Pembuatan Kurva Baku Parasetamol dalam CLB dan CUB tanpa enzim

Kurva kalibrasi dibuat untuk masing-masing larutan yaitu larutan CLB dan CUB tanpa
enzim

Parasetamol ditimbang seksama 50 mg, kemudian dilarutkan dengan cairan simulasi

hingga 1000 ml untuk konsentrasi 200 ppm (Larutan Induk)

Pengenceran dilakukan untuk memperoleh enam larutan dengan konsentrasi berbeda yaitu
2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm

Keenam larutan diukur serapannya dengan spektrofotometer UV-VIS pada panjang

gelombang maksimumnya (Absorbansi Paracetamol pada panjang gelombang UV 200-
400 nm dengan panjang gelombang maksimum 243 (Patel, M.D et al,. 2012)
 Persamaan kurva bakunya dihitung sehingga diperoleh persamaan garis y = bx +a

4.3. Preparasi Larutan Sampel Parasetamol

Ditimbang parasetamol sebanyak 125 mg dan dilarutkan dalam masing-masing larutan

CUB dan CLB tanpa enzim 50 ml

4.4. Penetapan Kadar Parasetamol CLB dan CUB sebagai Konsentrasi Awal (Co)

Absorbansi diukur masing-masing menggunakan panjang gelombang maksimun yang

sudah dicari (point 4.2)

Kadar parasetamol dihitung menggunakan persamaan kurva kalibrasi yang didapat dari
pekerjaan point 4.2

4.5. Percobaan Absorbsi pada Tikus Teranestesi

Dua ekor tikus putih jantan digunakan, tikus pertama digunakan untuk uji menggunakan
CLB dan tikus kedua digunakan untuk uji menggunakan CUB

Tikus dipuasakan selama 24 jam, hanya boleh diberi minum

Anestesi dilakukan tikus menggunakan eter.

Sepanjang linea medina perut tikus dibedah sampai jelas terlihat bagian ususnya

Bagian lambung dicari, diukur 15 cm dari lambung ke arah anal menggunakan benang
dengan hati-hati dibuat lubang dan kanul dimasukkan dan ditali dengan benang
Pemasangan kanul sedemikian rupa sehingga ujungnya mengarah ke bagian anal. Kanul
dihubungkan dengan selang infus menuju labu infus berisi CLB dan CUB

Dari ujung kanul ini usus diukur lagi dengan pertolongan benang ke arah anal sepanjang
20 cm, dan dibuat lubang kedua, selanjutnya dipasang kanul kedua dengan ujung kanul
mengarah ke bagian oral dari usus dengan benang.

Kanul dihubungkan dengan selang infus menuju gelas kimia.

Kran infus dibuka dan dibiarkan CUB atau CLB mengalir melalui usus dan keluar sampai
ke gelas kimia, sampai cairan yang keluar jernih

Labu infus diganti dengan CUB atau CLB yang sudah mengandung parasetamol

Usus dialiri selama 30 menit

Volume CUB atau CLB dicatat yang tertampung dalam gelas kimia dan ditentukan
kecepatan alirnya dengan rumus : (Q) = volume terukur / 30 menit

Usus tikus dipotong antara kedua ujung dan diukur panjangnya menggunakan penggaris.
Data yang terukur sebagai l
 Ujung usus diikat dan dimasukkan akuades melalui ujung yang lain sampai usus
menggelembung

Diameter usus diukur dengan jangka sorong dan ditentukan jari-jarinya (r)

4.6. Penetapan Kadar Parasetamol dalam CUB atau CLB yang Tertampung sebagai
Konsentrasi Akhir (C1)

Masing-masing absorpsi diukur dengan panjang gelombang maksimum yang sudah dicari

Kadar parasetamol dihitung menggunakan persamaan kurva kalibrasi yang didapatkan

Diameter usus diukur dengan jangka sorong dan ditentukan jari-jarinya (r)

4.7. Perhitungan Peff

Dihitung Peff (CUB) dan Peff (CLB) menggunakan data yang telah didapat dengan
memasukkan pada persamaan : Peff = - (Q/A) ln (C(1)/C(0)), Peff = - (Q/2ᴨrl) ln
(C(1)/C(0))

Perhitungan dibandingkan Peff (CUB) dan Peff (CLB)

Data dianalisis

Tugas Sebelum Praktikum

1. Carilah komposisi CUB dan CLB tanpa enzim pada Farmakope Indonesia V!
Komposisi

Cairan lambung buatan LP

▪ 2 g natrium klorida
▪ 3,2 g pepsin P
▪ 7 ml asam hidroklorida P
▪ 1000 ml air
▪ Larutan dapar dengan pH lebih kurang 1,2

Cara pembuatan:

Larutkan 2 g natrium klorida P dan 3,2 g pepsin P dalam 7 ml asam hidroklorida P dan air
hingga 1000 ml. Kemudian ditambahkan pH larutan lebih kurang sampai 1,2. Jika pembuatan
CLB tanpa enzim tidak perlu ditambahkan pepsin P.

Cairan usus buatan LP

▪ 6,8 g kalium fosfat monobasa P

▪ 1750 ml air
▪ 77 ml natrium hidroksida 0,2 N
▪ 10 pankreatin P
▪ Natrium hidroksida 0,2 N atau asam hidroklorida 0,2 N

Cara pembuatan:

Larutkan 6,8 g kalium fosfat monobasa P dalam 250 ml air, campur dan tambahkan 77 ml
natrium hidroksida 0,2 N dan 500 ml air. Tambahkan 10,0 g pankreatin P, campur dan atur pH
hingga 6,8±0,1 dengan penambahan natrium hidroksida 0,2 N atau asam hidroklorida 0,2 N.
Encerkan dengan air hingga 1000 ml. Jika pembuatan CUB tanpa enzim tidak perlu
ditambahkan pankreatin P

2. Hitunglah penimbangan dan pengenceran untuk pembuatan kurva baku parasetamol

dengan rentang konsentrasi 2-12 ppm!
A. Penimbangan dan pengenceran kurva baku paracetamol

50 𝑚𝑔
𝑥 1000 = 100 𝑝𝑝𝑚
500 𝑚𝐿

Ditimbang 50 mg paracetamol dalam 500 mL CLB untuk replikasi 1 dan 500 mL untuk
replikasi 2

B. Pengenceran larutan baku induk

𝑥
• 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 = 2 𝑝𝑝𝑚
25 𝑚𝐿

x = 0,5 mL
 𝑥
• 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 = 4 𝑝𝑝𝑚
25 𝑚𝐿

x= 1 mL
𝑥
• 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 = 6 𝑝𝑝𝑚
50 𝑚𝐿

x = 3 mL
𝑥
• 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 = 8 𝑝𝑝𝑚
25 𝑚𝐿

x = 2 mL
𝑥
• 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 = 10 𝑝𝑝𝑚
10 𝑚𝐿

x = 1 mL
𝑥
• 𝑥 100 𝑝𝑝𝑚 = 12 𝑝𝑝𝑚
50 𝑚𝐿

x = 6 mL

C. Pembuatan larutan paracetamol (sampel)

125 𝑚𝑔
𝑥 1000 = 2500 𝑝𝑝𝑚
50 𝑚𝐿
Ditimbang 125 mg paracetamol masing – masing dalam CLB dan CUB tanpa enzim hingga
50 mL CLB
 DAFTAR PUSTAKA

Aiache, J.M, et al. 1993. Farmasetika, diterjemahkan oleh Dr. widji Soeratri,
terjemahan kedua

Doluisio, J.T., Billups, N.P., Dittert, L.W., Suigita, E.T., dan Swintosky, J.V. (1969).
Drug Absorption. I. An In Situ Rat Gut Technique Yieldding Realistic
Absorption Rates. J. Pharm. Sci. 58(5): 1196-1200

Fagerholm U, Johansson M, Lennernäs H. Comparison between permeabilitycoefficients

in rat and human jejunum. Pharm Res. 1996;13:1336–42.

Shargel, L., Yu, A., and Wu, S., 2005, Biofarmasetika dan Farmakokinetika Terapan,
Edisi kedua, Airlangga University Press, Surabaya. 167 – 187

Siswandono. 2016. Kimia Medisinal 1. Edisi 2. Surabaya: Airlangga University Press.