LAPORAN PRATIKUM 2 PEMBUATAN PREPARAT DAN

PENGAMATAN SEL

NAMA : ALI AKBAR HISBULLAH

KELAS : ILMU KELAUTAN B
NIM : 2004114167

UNIVERSITAS RIAU
FAKULTAS PERIKANAN DAN KELAUTAN
TAHUN AJARAN 2020/2021
 BAB I

SEDIAAN ATAU PREPARAT SEGAR DAN PEWARNAAN

A PENGERTIAN

Fungsi dari mikroskop cahaya adalah untuk melihat benda-benda kecil atau untuk
melihat jaringan hewan dan tumbuhan secara detail.
Preparat merupakan sediaan awetan yang dibuat dari objek tumbuhan, hewan atau
organisme lain. Sediaan atau preparat adalah sesuatu yang akan diperiksa dibawah
mikroskop. Pembuatan preparat awetan dapat dilakukan dengan suatu teknik pembuatan yang
dilakukan secara mikroskopis atau disebut mikroteknik (Harijati et al., 2017). Pembuatan
preparat harus dilakukan sesuai dengan langkah-langkah atau prosedur yang sesuai dengan
metode pembuatan preparat yang digunakan. Menurut Djukri (2003), metode dalam
pembuatan mikroteknik ada beberapa macam yaitu metode maserasi, metode squash, metode
section, metode wholemount, metode pollen, dan metode apus.
Untuk mengamati benda-benda kecil tersebut, harus disiapkan sediaan atau preparat segar.
Adapun cara menyiapkan preparat segar adalah dengan cara menyayat tipis bagian tubuh
tersebut. Contoh: preparat usap darah, sel epithel pipi, jaringan daun, akar dan lain-lain.
Sediaan ini langsung dibuat
dari spesimen segar dan langsung diamati serta tidak menggunakan pengawet apapun
juga sehingga tidak dapat disimpan lama.
B PEMBAGIAN SEDIAAN ATAU PREPARAT

Sediaan atau preparat dibagi menjadi 3 jenis, yaitu:

1. Sediaan/preparat segar : sediaan yang langsung dibuat dari specimen segar, langsung
diamati dan tidak menggunakan pengawetan apapun juga. Preparat ini tidak dapat
disimpan lama. Jaringan tubuh hewan atau tumbuhan dapat dibuat preparat segar
dengan cara menyayat tipis bagian tubuh tersebut. Contoh: preparat usap darah, sel
epithel pipi, jaringan daun, akar dan lain – lain .( Sediaan yang langsung dari sediaan
segar tanpa bahan pengawet apapun ).
 2. Sediaan/preparat semi awet : sama dengan sediaan segar tetapi lebih kuat/lebih lama
disimpan dari pada sediaan segar, digunakan medium yang dapat menahan penguapan
serta menjaga bentuk jaringan selama beberapa hari. Contoh bahan pengawet untuk
preparet semi awet : gliserol dan ethylene glycol.

3. Sediaan/preparatawet : dibuat dengan teknik “ mikroteknik”, melalui beberapa tahap

pengawetan , pemotongan, pewarnaan dan lain – lain. Preparat awet dapat disimpan
selama bertahun – tahun. Contoh : preparet untuk pengamatan jaringan tubuh
hewan/tumbuhan secara histologi.

C CARA MEMBUAT PREPARAT SEGAR

Dikenal beberapa cara membuat preparat segar:

1. Preparat usap darah : darah diteteskan pada objek glass dan diratakan dengan
menggunakan objek glass lain.

2. Preparat tempel : jaringan tubuh ( misalnya epithel pipi ) langsung diambil atau
dikerok dan ditempelkan pada objek glass.

3. Preparat iris / sayatan : jaringan tubuh diiris sangat tipis (dan kecil, hanya sekitar
1-2 mm) dan ditempel pada objek glass.

a. Macam-macam   sayatan yang biasa digunakan pada pengamatan anatomi

tumbuhan  adalah sebagai berikut  :

i. Transverse section/cross section (sayatan melintang) yaitu bagian

tanaman disayat tegak lurus dengan sumbu horizontal dari bagian
tanaman. bagian yang digunaakan seperti daun, kulit kayu (Bark),
rhizoma, akar, buah dan biasanya tujuan dari pengamatan ini adalah
untuk melihat susunan jaringan.

ii. Longitudinal Tangensial section yaitu bagian tanaman dipotong tegak

lurus terhadap bagian radial longitudinal dan tidak sampai bagian
tengah organ. bagian yang digunakaan dapat berupa batang, rhizoma
dan lain-lain. pada bagian batang sayatan ini digunakan untuk
mengamati struktur vessel, trakeid, parenkim aksial.
 iii. Longitudinal Radial section (sayatan radial/membujur) yaitu bagian
tanaman dipotong langsung pada bagian tengah dan sejajar dengan
sumbu utama (vertical). sayatan digunakan untuk mengamati struktur
paraenkim  radial (sel baring dan sel tegak).

iv. Paradermal section (sayatan paradermal) yaitu bagian tanaman

disayat pada permukaan organ tanaman sejajar dengan permukaan.
bagian yang digunakan dapat berupa batang, daun, buah atau
endocarp. sayatan ini biasa digunakan untuk pengamatan stomata atau
bentuk epidermis, cork pada batang atau bentuk sklereid pada
endocarp kelapa.

Selain diatas preparat dibedakan menjadi dua jenis.

a. Preparat basah. Preparat basah biasanya digunakan pada waktu praktikum struktur
tumbuhan atau hewan. Preparat yang dihasilkan tidak dapat disimpan lama.

b. Preparat awetan. Preparat awetan biasanya digunakan pada waktu melakukan

praktikum mikroteknik tumbuhan. Preparat yang dihasilkan dapat disimpan cukup
lama.

Ada dua cara pembuatan preparat yaitu pembuatan preparat tanpa penyayatan dan
pembuatan preparat dengan penyayatan.

a. Pembuatan preparat tanpa penyayatan

Preparat yang dibuat tanpa penyayatan adalah preparat yang berasal dari mikroorganisme di
dalam air.
Cara membuatnya:Ambil air yang akan diamati menggunakan pipet tetes. Kemudian
tempatkan air tersebut pada object glass.Selanjutnya tutup object glass dengan menggunakan
kaca penutup.Preparat siap diamati dengan menggunakan mikroskop.

b. Pembuatan preparat dengan penyayatan

Preparat yang dibuat dengan penyayatan adalah preparat yang berasal dari organ tubuh
mikroorganisme, misalnya penampang daun, akar, atau otot.Untuk membuat pembuatannya
kita perlu menyiapkan peralatan seperti silet, object glass, kaca penutup, dan bahan
pewarna.Bahan pewarna seperti lugol, biru metilen (methylene blue), dan eosin untuk
memudahkan dalam mengamati objek.

Cara membuatnya:

1) Gunakan gabus/batang umbi kayu sebagai alat bantu mempermudah menyayat bagian
tumbuhan seperti akar, daun, atau batang. Kemudian sayat/ belahlah tengahnya.
2) Selipkan daun pada belahan gabus. Kemudian, sayatlah dengan silet setipis mungkin agar
mendapatkan penampang melintang daun (jika objek yang akan diamati adalah daun).
3) Selipkan akar atau batang pada belahan gabus. Kemudian, sayatlah dengan silet setipis
mungkin untuk mendapatkan penampang melintang akar/ batang (jika objek yang akan
diamati adalah akar/ batang).

Setelah mendapatkan sayatan, selanjutnya lakukan langkah-langkah berikut ini.

1) Letakkan jaringan atau objek yang akan diamati pada objekt glass yang telah ditetesi air.
Kemudian tutup dengan kaca penutup.
2) Tambahkan setetes pewarna. Pewarna yang digunakan dapat berupa yodium, metilen biru,
ataupun merkurokrom.
3) Jika cairan terlalu banyak, kurangi sedikit menggunakan kertas lensa/tisu, tetapi jangan
terlalu banyak cairan yang dibuang.
4) Amati di mikroskop dengan perbesaran paling kecil.
4. Teknik Membuat dan Memasang Preparat Segar/Basah

Hal-hal yang harus diperhatikan dalam membuat preparat basah mikroskopis (untuk
pengamatan dengan mikroskop) adalah sebagai berikut :

1. Buat sayatan setipis mungkin dengan menggunakan silet atau cutter yang tajam.
2. Sayatan dilakukan dengan arah dari luar ke dalam (ke arah tubuh) dengan posisi agak
jauh dari tubuh, sejajar mata.
3. Letakkan hasil sayatan di tengah kaca objek .
4. Upayakan sayatan objek dalam keadaan rata.
5. Tetesi sayatan preparat yang telah diletakkan di atas kaca objek dengan air
menggunakan pipet sebanyak satu tetes. Pegang pipet dengan benar
6. Setelah ditetesi air, tutup sayatan objek dengan kaca penutup. Caranya, siapkan kaca
penutup dalam posisi berdiri dengan menahannya menggunakan pipet. Sementara satu
tangan yang lain memegang kertas hisap/kapas untuk menyerap kelebihan tetesan air
yang menutup sayatan. Kegiatan ini bertujuan agar tidak terjadi gelembung air pada
preparat.
7. Sambil tangan yang memegang kapas mengurangi tetesan air, perlahan-lahan
rebahkan kaca penutup dengan menggerakkan pipet yang menahannya, sampai kaca
penutup menutupi sayatan objek tadi. Setelah tertutup, preparat sudah jadi dan siap
diamati.

D CARA MENYIAPKAN SAMPEL PADA OBJEK GLASS

1. Siapkan objek glass, bersihkan dengan tissue lembut. Beri setetes air. Letakkan
sampel yang sudah diiris/ dikerok pada tetesan air tersebut. Atur posisi sampel dengan
menggunakan jarum/ sonde.
2. Tutup sampel dengan cover glass. Caranya: tempelkan salah satu sisi cover glass di
dekat tetesan air yang sudah ada sampelnya, pelan-pelan turunkan sisi cover glass
yang lain sampai akhirnya cover glass menutupi sampel dan tetesan air.

E CARA MEWARNAI SEDIAAN SEGAR

 Ambil preparat segar yang sudah diletakkan pada objek glass dan ditutup
dengan cover glass.
  Teteskan pewarna pada objek glass, tepat menyentuh salah satu sisi cover
glass.
 Pada sisi cover glass yang berseberangan, tempelkan ujung kertas tissue atau
kertas saring yang sudah dilipat meruncing. Biarkan sampai zat warna
mengalir menuju tissue dan mengenai sampel. Setelah zat warna mencapat
sampel, segera ambil tissuenya dan biarkan sampel terendam zat warna sampai
sekitar 5 menit, kemudian amati di bawah mikroskop.

F CARA MEMBUAT PREPARAT SEGAR UNTUK PENGAMATAN

( SEL HEWAN, SEL TUMBUHAN,SEL DARAH, DAN PLANKTON DI
AIR )

1. SEL HEWAN
Berikut dibawah ini adalah beberapa cara pembuatan preparat awetan, simak dan perhatikan
sebagai berikut :
 Pembuatan awetan basah hewan
 Langkah-langkah membuat awetan basah hewan sebagai berikut :
1. Terlebih dahulu hewan tersebut dimatikan.
2. Diberi Fiksatif, yaitu zat kimia atau campuran zat kimia yang bertujuan untuk mematikan
sel-sel dengan cepat sehingga isi sel tidak rusak dan sel-sel masih sesuai dengan sel-sel yang
hidup serta membuat sel-sel jaringan mengeras.
3. Dimasukkan ke dalam zat pengawet, yaitu seperti :
 Alkohol 70% untuk mengawetkan invertebrata.
  Formalin 8% untuk mengawetkan lintah, udang, keong air, kerang, Reptil serta
Mamalia.
  Formalin 5% untuk mengawetkan cacing perut, cacing tanah, serta katak.
 Pembuatan awetan basah tumbuhan

Langkah-langkah dalam penyiapan preparat basah sebagai berikut :

1. Pastikan keadaan aseptis terjaga meliputi tempat kerja, tangan, dan peralatan.
Teteskan gliserol 10% pada preparat/glass slide (gelas objek). Gliserol berguna untuk
memberi nutrisi pada biakan murni dan mencegah terjadinya lisis sel karena gliserol
 bersifat isotonik, sehingga tidak mempengaruhi permeabilitas sel. Gliserol dapat
digantikan dengan cairan lain.
2. Ose dipijarkan pada api bunsen dan ambil satu ose pada biakan murni dan goreskan
pada tetesan gliserol di gelas objek.
3. Tutup gelas objek dengan gelap penutup. Usahakan tidak ada gelembung yang
muncul.
4. Amati di bawah mikroskop dengan perbesaran lemah (100x) untuk pengamatan awal
yang bertujuan untuk melokalisir objek yang diinginkan.
5. Pengamatan dilanjutkan dengan perbesaran 400x untuk memperjelas objek
pengamatan. Perbesaran 1000x diperlukan untuk lebih memperjelas lagi.

A Membuat preparat sel hewan berupa epithelium ro ngga mulut.

 Dengan menggunakan tusuk gigi yang tumpul dan bersih, koreklah secara
hati – hati permukaan dalam pipi bagian epitel( kulit luar rongga mulut
bagian pipi sebelah dalam ). Hati – hati jangan sampai terluka.
 Oleskan sel epithel pipi yang terdapat pada tusuk gigi pada objek glass.
 Tambahkan 1 tetes larutan fisiologis.
 Aduk – aduk dengan tusuk gigi sampai rata.
 Tutup dengan cover glass dan amati di bawah mikroskop, dengan
perbesaran 10x10 dan 10x40.

2. SEL TUMBUHAN

a. metode-metode pembuatan sedian pada tumbuhan

 Whole Mount; Metode ini digunakan untuk membuat preparat organisme utuh atau
sebagian kecil yang nantinya akan diamati di bawah mikroskop tanpa atau dengan
penyayatan. Contoh dari tumbuhan yang dapat dibuat preparat menggunakan metode
ini adalah lumut, sori paku, trikoma dan stomata
 Squash (pencet); merupakan metode yang digunakan untuk mendapatkan suatu
sediaan dengan cara memejet sebuah objek diatas gelas objek atau kaca preparat
  

 Smear (apus); metode terbatas pada beberapa penerapan pada sel-sel yang tidak
disatukan dengan kuat satu sama lain, seperti pada lamela tengah. Pada tumbuhan
tingkat tinggi seperti pada mikrosporosit yang  mulai membulat.

 Paraffin ; metode ini mengharuskan membuat sayatan setipis mungkin untuk

pengamatan objek dengan bidang penyayatan yang berbeda ditanam di dalam lilin
paraffin  dan disayat dengan mikrotom.
 Maserasi; metoda ini yaitu memisahkan  ikatan antar dinding sel dengan cara 
direndam dalam larutan asam dan dipanaskan. Misalnya maserasi batang untuk
pengamatan serat dan komponen-komponen pembuluh angkut.

 Mikrokimia (Microchemist);  yaitu suatu metoda menggunakan suatu zat warna untuk
mengetahui suatu kandungan kimia pada jaringan tumbuhan misalnya untuk
mengetahui keberadaan pati pada suatu jaringan tumbuhan, dapat ketahui dengan 
ditetesi Lugol. Keberadaan  pati ditandai dengan perubahan warna objek menjadi
ungu.

Freehand Sections

b. CARA KERJA

1. satu sisi dari silet  ditutupi oleh selotip(panah) untuk menghindari tersayatnya jari
secara tidak sengaja.
2. Untuk memotong spesimen harus dipegang oleh ibu jari, pada sudut kanan ke jari
telunjuk.
3. Silet dan spesimen harus basah untuk mengurangi gesekan selama pemotongan. Posisi
spesimen di salah satu ujung pisau seperti yang ditunjukkan oleh panah
4. Bagian yang terpotong (panah) di pindahkan ke kaca objek kemudian ditetesi air dan
ditutup dengan cover glass kemudian diamati.
freehand section dapat pula dilakukan dengan meletakan potongan sampel kedalam gabus
atau wortel seperti gambar dibaawah ini

setelah proses pembuatan spesimen maka akan dilakukan proses pengamatan dan
menggambar. menggambar hasil pengamatan mikroskop dapat dilakukan secara langsung
atau menggunakan alat bantu yang disebut dengan kamera lusida

Langkah-langkah dalam membuat preparat basah adalah sebagai berikut :

1. Irislah bahan preparat setipis-tipisnya. Untuk mendapatkan hasil yang tipis lihat cara-
cara berikut :Kaca objek yang telah bersih dari lemak ditetesi (1 tetes) reagen
ditengah - tengah kaca objek, Peganglah bahan preparat tegak lurus dengan badan,
apabila bahan sangat tipis dapat dibantu dengan menyelipkan bahan pada empulur
batang manihot atau gabus, Letakkan silet/cutter pada bahan tersebut dengan
membentuk sudut ∆ 30 derajat supaya mendapat irisan yang tipis. Arahkan pisau ke
arah badan.
 2. Buatlah irisan-irisan 3-4 irisan.
3. Letakkan irisan-irisan tersebut pada kaca yang telah ditetesi Reagen.
4. Tutuplah dengan kaca penutup yang telah dibersihkan dengan hati-hati dan pelan-
pelan.
5. Hindari terbentuknya gelembung-gelembung air ,karena dapat mengganggu
pengamatan, menghindari dengan dibantu dengan meletakkan kaca penutup di atas
kertas saring dan ditutupkan pelan-pelan.
6. Siapkan mikroskop yang telah diketahui kelengkapanya dan keadaan bersih.
7. Letakkan mikroskop pada meja tanpa alas.
8. Aturlah pencahayaannya dengan menggunakan lensa objektif perbesaran 10x.
9. Letakkan preparat dibawah lensa objektif pembesaran 10 x dengan posisi yang benar.
10. Carilah bayangan benda pada preparat, dengan memutar makrometer sampai lensa
objektif mendekati preparat kurang lebih 2mm siatasnya(lihatlah dari pinggir),
kemudian putar kembali makrometer keatas secara pelan-pelan, sampai terlihat
bayangan.
11. Apabila telah terlihat bayangan benda tersebut, tunjukanlah pada bagian yang akan
diamati, perjelas dengan cara memutar mikrometer secara perlahan-lahan dan putar
lensa objektif ke perbesaran 40x. dan perjelas lain dengan cara memutar mikrometer
perlahan-lahan.

3. SEL DARAH

Biasanya pada sel darah ini yang digunakan adalah preparat usap darah, sel

darah ini bisa diambil pada darah manusi dan darah pada hewan.

A SEL DARAH MANUSIA

a. Pada preparat usap darah ini biasanya digunakan untuk pengamatan sel darah,
misalnya: Sediaan apus darah (sediaan apus darah tepi / preparat darah) adalah
salah satu teknis pemeriksaan sel-sel darah menggunakan mikroskop. Pemeriksaan
sediaan darah umumnya digunakan untuk membantu pemeriksaan kelainan darah dan
juga infeksi parasit, seperti malaria.

i. Teknik pembuatan
 Sebagai bagian dari persiapan pembuatan sediaan apus, kaca objek (preparat
kaca) yang digunakan harus bersih dari kotoran dan diberi label berisi informasi
tentang nama pasien, tanggal pembuatan, dan kode identifikasi pasien. Selanjutnya,
satu tetes darah pasien diletakkan di ujung preparat kaca.Kaca preparat lainnya
digunakan untuk meratakan darah menjadi satu lapisan tipis (monolayer) agar bisa
diamati di bawah mikroskop. Kaca perata ini diletakkan di depan tetesan darah,
kemudian tarik ke belakang hingga darah merata pada setiap sudut. Pada tahap akhir,
kaca perata didorong ke depan dengan sudut 45-60 °C hingga terbentuk apusan
sepanjang 3-4 cm. Darah dibiarkan mengering di udara sebelum dilanjutkan ke
proses pewarnaan.

ii. Pewarnaan dan Pengamatan

Sel-sel darah harus diwarnai terlebih dahulu agar dapat diamati di bawah
mikroskop.Jenis pewarnaan yang paling sering digunakan untuk pemeriksaan darah
adalah pewarnaan Romanowski, seperti Wright, Mary-Grunwald, dan Giemsa.
Berbagai komponen darah akan memiliki warna yang berbeda di bawah mikroskop.
Selanjutnya, preparat darah ditutup dengan kaca pelapis agar dapat disimpan dalam
waktu yang lama. Pengamatan di bawah mikroskop umumnya dilakukan pada
perbesaran 40x dan terkadang 100x. Selain menghitung jumlah sel darah putih
(terdiri dari: neutrofil, limfosil, basofil, eosinofil, dan monosit). Bentuk (morfologi)
dan ukuran sel darah merah (eritrosit) dan putih juga harus diamati dan dilaporkan
kepada pasien atau dokter terkait. Pemeriksaan apusan darah ini merupakan salah
satu pemeriksaan awal untuk mendeteksi kanker darah ( leukemia), animea, dan
kelainan genetik seperti talasemia.
 Sediaan apus darah sebelum (kiri) dan sesudah
(kanan) pewarnaan dengan Giemsa.

B SEL DARAH IKAN

 CARA KERJA

a. Ambillah darah ikan dari vena caudalis dengan menggunakan jarum

suntik yang dibasahi EDTA 10 % ( mencegah pembekuan darah ).

b. Teteskan darah pada objek glass, tambahkan 1 gelas larutan fisiologis.

c. Aduk –aduk dengan tusuk gigi dan ratakan dipermukaan objek glass,
tutup dengan cover glass.

d. Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10x10 dan 10x40. Amati

sel darah merah dan sel darah putih.

4. PLANKTON DI AIR

Plantkton adalah seluruh kumpulan organisme,baik hewan maupun tumbuhan

yang hidup terapungatau melayang di dalam air, tidak dapat bergerak ataudapat
bergerak sedikit dan tidak dapat melawan arus. Individup lankton (plankter)
umumnya berukuran mikroskopis, meskipun demikian ada plankter yang berukuran
beberapa meter misalnya ubur- ubur dapat mencapai ukuran 1 meter dengan tentakel
sepanjang 25 meter. Plankton dapat dikelompokkan menjadi beberapa kelompok
berdasarkan cara makan, habitat, asal,ukuran dll. Pengelompokkan plankton yang
paling umum didasarkan pada cara makannya. Berdasarkan cara makan plankton
dapat dibedakan menjadi saproplankton, fitoplankton, dan zooplankton. Diperairan,
peran plankton tersebut sangat penting.Terutama dalam usaha budidaya ikan/udang,
plankton dapat berfungsi sebagai pakan alami yang ramah lingkungan.Plankton juga
dapat digunakan sebagai indikator kesuburan perairan.
a. Pembuatan Preparat Plankton
 Alat:
  Objek glass
 Cover glass
 Pipet tetes
 Botol semprot
 Bahan:
 Sampel plankton
 Tissue
 Aquades
 Prosedur:

1. Objekglassdan coverglassdikalibrasimenggunakan aquades kemudian dilap

secarasearah menggunakan tissue.

2. Sampel plankton dikocok secara perlahan,kemudian diambil menggunakan

pipet tetes laluditeteskan ke permukaan objek glass sebanyak1 tetes (v).

3. Tutup objek glass dengan cover glass dengansudutkemiringan40 derajat

agarmemperkecilkemungkinan terjadi gelembung.

4. Jika terdapat gelembung dalam pembuatanpreparat sebaiknya diulangi agar

pengamatandibawah mikroskop menjadi lebih mudah.