BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
memerlukan makanan untuk dapat tumbuh seperti makhluk hidup pada umumnya.
Medium adalah suatu bahan yang terdiri dari beberapa campuran zat
makanan yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroba. Komposisi dari medium sendiri
Medium untuk petumbuhan mikroba dapat berbentuk cair (broth), padat (agar) dan
semisolid.
lainnya. Agar nantinya mikroba yang yang ingin ditumbuhkan tidak tekontaminasi
Sterilisasi adalah suatu proses yang dilakukan pada alat dan bahan yang
autoclave yang menggunakan tekanan uap dan oven dengan suhu pemanasan
Pada praktikum ini akan dilakukan pembuatan medium untuk mikroba dan
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
B. Rumusan Masalah
C. Maksud Pratikum
D. Tujuan Pratikum
E. Manfaat Praktikum
Manfaat dari praktikum yaitu agar dapat mengetahui jenis medium yang
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
BAB II
KAJIAN PUSTAKA
A. Teori Umum
jenis nutrisi yang diperlukan oleh mikroba tersebut. (Lestari & Hartati, 2017)
Media petumbuhan mikroba adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-
Mikroorganisme yang dimaksud dapat berupa kuman, virus, ricketsia maupun jamur.
(Ma’at, 2009)
1. Atas dasar konsistensinya dibagi menjadi liquid (cair), semi-solid (misal : Stuart’s
dan Amies media, Hugh & Leifson’s oxdation fermentation test medium) dan solid
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
2. Atas dasar kandungan nutrisinya : sederhana (peptone wate, mutrient agar),
komplek (blood agar) dan sintetik atau buatan (Davis & Mingioli medium)
3. Atas dasar kegunaannya atau fungsinya : basal media (Peptone wate, nutrient
broth dan nutrient agar), unriched media adanya penambahan bahan ke basal
medium seperti ekstra nutrient dalam bentuk darah, serum, egg yolk dan
sebagainya menjadi medium Blood agar, chocolate agar, Loeffer’s serum slope
agar, sedangkan enrichment medium adalah cairan; misal TCBS Agar dan
Monsur’s Tellurite Taurocholate Gelatin Agar untuk isolasi V. Cholerae dan yang
CLED agar, TCBS agar, XLD agar dan sebagainya), transport media dan holding
medium untuk penyakit kolera, Sach’s buffered gylceol saline untuk pasien
sebenarnya medium tersebut dapat dikelompokkan pada tiga grup saja, yakni :
1. Medium alami. Ialah medium yang dipakai untuk menumbuhkan mikroba secara
2. Medium semi sintetis atau semi buatan. Yaitu medium yang merupakan
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
3. Medium sintetis atau buatan. Yaitu menggunakan pencampuran berbagai bahan
1. Penimbangan bahan
Bahan dicampur dan ditambahkan akuadest. Bila media padat maka dipanaskan
4. Sterilisasi
Media disterilisasi dengan alat autoclave (suhu 121°C selama 15 menit atau
tindalisasi pada suhu 100°C selama 30 menit dan diulang 3 kali dengan interval
waktu 24 jam).
menggunakan api bebas maupun panas yang ditimbulkan oleh uap air sehingga dapat
dikatakan bahwa media sterilisasi klasik adalah panas dan air (basah) yang meliputi air
mendidih dan uap air panas. Air mendidih (boiling water) dianggap kurang baik karena
tidak memiliki tekanan sehingga penetrasi ke dalam material lambat dan suhunya
relatif rendah, oleh karena itu uap air bertekanan tinggi paling banyak digunakan
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
B. Uraian Bahan
Pemerian : Berbau dan berasa pada lidah. Kaldu daging sapi konsentrat
Produksi : Difco TM
Divisio : Spermatophyta
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
Familia : Euphorbiaceae
Pemerian : Tidak berbau atau bau lemah, berasa musilago pada lidah.
Kelarutan : Tidak larut dalam air dingin, dan larut dalam air mendidih.
Produksi : Difco TM
busuk.
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
Produksi : Difco TM
Pemerian : Hablur tidak berwarna, serbuk halus atau butiran putih, tidak
Kelarutan : Mudah larut dalam air, sangat mudah larut dalam air mendidih,
Produksi : Difco TM
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
Berat Molekul : 18,02 g/mol
C. Uraian Sampel/Bakteri
1. NA (Nutrien Agar)
2. NB (Nutrient Broth)
Warna : Coklat
Warna : Cream
Bentuk : Padat
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
D. Prosedur Kerja
Pepton 5 gram
2. Masing – masing bahan tersebut dilarutkan dalam 100 mL air suling sampai
homogen
phenol red pada waktu menetralkan). Untuk netralisasi NaOH 1 N sedikit demi
5. Air yang hilang selama pemanasan supaya diganti dengan menambahkan air suling
wate bath)
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
4. Air yang hilang selama pemanasan supaya diganti dengan air suling. Bila pelu
5. Disaring dalam keadaan panas-panas dengan kapas atau kain flanel yang bersih
banyaknya medium agar tegak diisikan 10 mL, sedangkan untuk medium agar
7. Disterilkan dengan otoklaf selama 15 menit dengan 2 atm. Untuk medium agar
miring setelah disterilisasi letakkan miring 30 derajat terhadap garis mendatar dan
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
BAB III
METODE KERJA
Alat Bahan
2. Autoclave 2. Singkong
5. Erlenmeyer 50 mL 5. Pepton
7. Pisau 7. Aquadest
8. Kapas
9. Karet
10. Corong
B. Cara Kerja
agar 0,75 gram dan pepton 0,2 gram. Setelah itu, daging dimasukkan ke dalam gelas
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
kimia 500 mL dan ditimbahkan aquadest sampai 300 mL. Kemudian dipanaskan pada
wajan yang berisi air mendidih. Setelah beberapa menit diambil dan langsung disaring
dengan corong yang dilapisi kain putih dan kapas. Hasil saringannya di tampung di
dalam erlenmeyer yang berisi agar dan pepton yang telah ditimbang hingga 50 mL.
menggunakan kapas lalu dibungkus dengan kertas dan diikat dengan karet. Setelah itu
sebanyak 10 gram. Kemudian ditimbang agar sebanyak 0,75 gram dan dextrosa 0,5
gram. Setelah singkong dipanaskan di dalam wajan yang berisi air mendidih selama
beberapa menit. Kemudian diangkat dan disaring menggunakan corong yang dilapisi
dengan kain putih dan kapas. Ekstraknya ditampung dengan erlenmeyer yang telah
berisi agar dan dextrosa yang telah ditimbang hingga 50 mL. Setelah dihomogenkan
dibungkus dengan kertas dan diikat dengan karet. Setelah itu dimasukkan kedalam
dibungkus dengan kertas dan diikat dengan karet. Setelah itu dimasukkan kedalam
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
BAB IV
Hasil
Menumbuhkan dan
Putih
PDA (Potatoes mempelajari Non-
3. kekuninga Padat
Dextrose Agar) taksonomi sintetik
n
mikroorganisme
Pembahasan
yang berasal dari sumbe karbohidrat, nutrisi dan protein. Medium terbagi menjadi
beberapa jenis sesuai dengan cara pemberlakuan mikroba. Dimana tujuan pembuatan
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
Medium yang dibuat pada praktikum ini yaitu medium NA (Nutrient agar),
medium NB (Nutrient Broth) dan medium PDA (Potatoes Dextrose Agar). Nutrient Agar
adalah medium yang terbuat dari campuran ekstrak daging dan agar dimana Nutrient
agar yang dibuat yaitu non sintetik. PDA tebuat dari campuran ekstrak singkong
dengan dextrosa dan agar. Sedangkan Nutrient broth tanpa campuran apapun.
Dimana didapatkan hasil pada nutrient agar berwarna kuning keruh, pada nutrient
broth bewarna kuning dan pada PDA berwarna putih kekuningan. Setelah didapatkan
hasilnya medium yang telah jadi disterilkan pada autoklaf selama 15 menit dengan
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
nutrient agar (NA), nutrient broth (NB) dan PDA (Potatoes Dextrosa agar) dimana
singkong.
B. Saran
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
DAFTAR PUSTAKA
Ditjen POM, 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Jakarta : Kementrian Kesehatan
Republik Indonesia
Ditjen POM, 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta : Kementrian Kesehatan
Republik Indonesia
Ma’at, Suprapto. 2009. Sterilisasi dan Disinfeksi. Surabaya : Airlangga University Press
Press
Indonesia
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
LAMPIRAN
A. Foto Sampel
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
NUTRIENT BROTH
B. Foto Hasil
SEBELUM DI STERILKAN
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
SESUDAH DI STERILKAN
C. Komposisi Medium
NA PDA NB
Daging Segar Ubi Kayu NB
Pepton Dextrosa Aquadest
Agar Agar -
Aquadest Aquadest -
D. Perhitungan
1. NA (Nutrient Agar)
200 gram
x 50 mL=10 gram
1000 mL
- Pepton 5 gram/L
5 gram
x 50mL=0,25 gram
1000 mL
- Agar 15 gram/L
15 gram
x 50mL=0,75 gram
1000 mL
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
2. PDA (Potato Dextrose Agar)
200 gram
x 50 mL=10 gram
1000 mL
- Dextrosa 10 gram/L
10 gram
x 50 mL=0,5 gram
1000 mL
- Agar 15 gram/L
15 gram
x 50 mL=0,75 gram
1000 mL
3. Nutrient Broth
8 gram
x 50mL=0,4 gram
1000 mL
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
LAMPIRAN
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188
PEMBUATAN MEDIUM DAN STERILISASI
RIDHATUL AZIZAH
ASMARANI PUJAWANTI
15020180188