KARYA TULIS ILMIAH

PERBEDAAN HASIL PEWARNAAN BAKTERI TAHAN

ASAM DENGAN TES CEPAT MOLEKULER
PADA SUSPEC TUBERCULOSIS
DI PUSKESMAS SRENGAT
KABUPATEN BLITAR

CHRISNAWATI
NIM: 27827019007

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES SURABAYA
JURUSAN ANALIS KESEHATAN
2020

i
 KARYA TULIS ILMIAH

PERBEDAAN HASIL PEWARNAAN BAKTERI TAHAN

ASAM DENGAN TES CEPAT MOLEKULER
PADA SUSPEC TUBERCULOSIS
DI PUSKESMAS SRENGAT
KABUPATEN BLITAR

Karya Tulis Ilmiah Ini Diajukan Sabagai Salah Satu Syarat Akadenik Untuk
Memperoleh Gelar
Ahli Madya Analis Kesehatan

CHRISNAWATI
NIM: 27827019007

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES SURABAYA
JURUSAN ANALIS KESEHATAN
2020

ii
 LEMBAR PERSETUJUAN

PERBEDAAN HASIL PEWARNAAN BAKTERI TAHAN

ASAM DENGAN TES CEPAT MOLEKULER
PADA SUSPEC TUBERCULOSIS
DI PUSKESMAS SRENGAT
KABUPATEN BLITAR

Oleh :

CHRISNAWATI
NIM: 27827019007

Karya Tulis Ilmiah ini telah diperiksa dan disetujui isi dan susunannya
sehingga dapat diajukan pada Ujian Sidang Karya Tulis Ilmiah
Yang Diselengarakan oleh Prodi D3 Analis Kesehatan Jurusan Analis Kesehatan
Politeknik Kesehatan Kemenkes Surabaya

Surabaya, Juni 2020

Menyetujui

Pembimbing I Pembimbing II

Drh.Diah Titik M,M.Kes Indah Lestari,SE.S.Si,M.Kes

NIP. 195808061991032001 NIP.195803171986032002

Mengetahui
Ketua Jurusan
Analis Kesehatan Politeknik Kesehatan Kemenkes Surabaya

Drs.Edy Haryanto, M.Kes

NIP.19640316 198302 1 001

iii
 LEMBAR PENGESAHAN

PERBEDAAN HASIL PEWARNAAN BAKTERI TAHAN

ASAM DENGAN TES CEPAT MOLEKULER
PADA SUSPEC TUBERCULOSIS
DI PUSKESMAS SRENGAT
KABUPATEN BLITAR

Oleh :

CHRISNAWATI
NIM: 27827019007

Karya Tulis Ilmiah ini telah dipertahankan di hadapan

Tim Penguji Karya Tulis Ilmiah Jenjang Pendidikan Tinggi Diploma III
Jurusan Analis Kesehatan Kemenkes Surabaya

Surabaya, 2020
Tim Penguji

Tanda Tangan

Penguji 1 : Drh. Diah TitikMutiarawati,M.Kes ................................

NIP: 19580806 199103 2 003

Penguji II : Indah Lestari,SE.S.Si,M.Kes ................................

NIP.19580317 198603 2 002

Penguji III : Suliati,SPd,SSi,M.Kes ................................

NIP: 19640905 198603 2 003

Mengetahui
Ketua Jurusan
Analis Kesehatan Politeknik Kesehatan Kemenkes Surabaya

Drs.Edy Haryanto, M.Kes

NIP.19640316 198302 1 001

iv
 ABSTRAK

Tuberkulosis (TB) paru adalah penyakit menular melalui udar (airborne

disease) disebabkan oleh bakteri Mycobacterium tuberculosis yang menyerang
paru-paru, kulit, kelenjar limfe, tulang, selaput otak dan anggota tubuh lainnya.
Penegak diagnose TB Paru adalah dengan metode pewaranaan Bakteri Tahan
Asam, Kultur/biakan, serologi dengan rapid dan metode terbaru dengan Tes Cepat
Molekuler. Tujuan Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui perbedaan hasil
pemeriksaan pewarnaan bakteri tahan asam dengan tes cepat molekuler pada
pasien suspek TB paru.

Metode Penelitian ini adalah analitik dengan rancangan Cross Sectional,

yaitu untuk membandingkan hasil pemeriksaan pewarnaan bakteri tahan asam dan
TCM pada pasien suspek TB paru Puskesmas Srengat. Teknik pengumpulan data
yang diambil dalam penelitian ini adalah observasi terhadap data primer yaitu data
diambil secara langsung pada tempat penelitian kemudian dilakukan pemeriksaan
terhadap bahan uji di Laboratorium Puskesmas Srengat mulai dari bulan Januari
sampai dengan April 2020. Populasi pada penelitian ini adalah semua pasien
suspek TB paru yang datang dengan pasien berjumlah 30 pasien.

Berdasarkan hasil penelitian pewarnaan BTA dengan metode ZN didapatkan

hasil sampel negative sebanyak 24 orang (80%), scanty sebanyak 1 orang
(3,33%), positif 1 sebanyak 4 orang (13,33%) dan positif 3 sebanyak 1 orang
(3,33%). Pemeriksaan menggunakan TCM didapatkan hasil sampel negative
sebanyak 23 orang (76,67%), scanty sebanyak 2 orang (6,67%), positif 1 sebanyak
2 orang (6,67%), positif 2 sebanyak 2 orang (6,67%)dan positif 3 sebanyak 1
orang (3,33%). Sehingga dapat disimpulkan tidak ada perbedaan hasil antara
pewarnaan BTA dengan TCM di Puskesmas Srengat.
Kata Kunci :Tuberkulosis, PewarnaanTahanAsam,Tes Cepat Molekuler

v
 KATA PENGANTAR

Dengan memanjatkan puji syukur Kehadiran Tuhan Yang Maha Esa atas
segala limpahan rahmat dan karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan
Karya Tulis Ilmiah dengan judul “Perbedaan Pewarnaan Bakteri Tahan Asam
dengan Tes Cepat Molekuler Pada Suspec Tuberculosis Di Puskesmas Srengat
Kabupaten Blitar”. Karya Tulis Ilmiah ini disusun untuk memenuhi salah satu
syarat dalam menyelesaikan Program D-3 Jurusan Analis Kesehatan Politeknik
Kesehatan Kemenkes Surabaya.
Mengingat masih banyaknya kekurangan dalam penyusunan ini, maka
penulis mengharapkan saran dan kritik dari pembaca demi sempurnanya ini.
Akhirnya penulis berharap semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi
pembaca umumnya dan bagi penulis pada khususnya terutama bila penulis nanti
terjun ke masyarakat.

Surabaya, Juni 2020

Penulis

vi
 DAFTAR ISI

COVER DALAM .................................................................................................... i

COVER LUAR ....................................................................................................... ii
LEMBAR PERSETUJUAN................................................................................... iii
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................... iv
ABSTRAK ...............................................................................................................v
KATA PENGANTAR ........................................................................................... vi
DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. ix
DAFTAR GAMBAR ...............................................................................................x
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xi

BAB 1 PENDAHULUAN .......................................................................................1

1.1 Latar Belakang ................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah ...........................................................................................3
1.3 Batasan Masalah .............................................................................................3
1.4 Tujuan Penelitian ............................................................................................3
1.4.1 Tujuan Umum .......................................................................................3
1.4.2 Tujuan Khusus.......................................................................................3
1.5 Manfaat Penelitian ..........................................................................................4

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ..............................................................................5

2.1 Tuberkulosis(TB paru)....................................................................................5
2.1.1 Definisi................................................................................................5
2.1.2 Epidemiologi .......................................................................................5
2.1.3 Patogenesis..........................................................................................7
2.1.4 Klasifikasi Penyakit dan Tipe Pasien TB ...........................................9
2.2 Sputum ..........................................................................................................12
2.3 Pemeriksaan Laboratorium ...........................................................................12
2.3.1 Pemeriksaan Mikrokopis ..................................................................12
2.3.2 Pemeriksaan biakan dan uji kepekaaan ............................................14
2.3.3 Pemeriksaan biomolekuler M. Tuberculosis:TCM ...........................15
2.3.4 Pemeriksaan Serologi .......................................................................18

BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN.................................................................19

3.1 Jenis dan Rancangan Penelitian ....................................................................19
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian.......................................................................19
3.2.1 Tempat Penelitian .............................................................................19
3.2.2 Waktu Penelitian ...............................................................................19
3.3 Populasi dan Sampel ....................................................................................19
3.3.1 Populasi Penelitian ...........................................................................19
3.3.2 Sampel ..............................................................................................19
3.4 Variabel Penelitian........................................................................................20

vii
 3.4.1 Variabel Bebas / Independent ...........................................................20
3.4.2 Variabel Terikat/ Dependent .............................................................20
3.5 Definisi Operasional ....................................................................................20
3.6 Metode Pengumpulan data ...........................................................................21
3.7 Tahapan Penelitian........................................................................................21
3.7.1 Pra analitik (Pengambilan sputum pagi) .............................................21
3.7.2 Analitik ................................................................................................22
3.7.3 Post Analitik .......................................................................................25
3.8 Kerangka Operasional ..................................................................................27
3.9 Analisa data ..................................................................................................28

BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN..................................................................29

4.1 Penyajian Data ..............................................................................................29
4.2 Analisa Data..................................................................................................31
4.2.1 Uji Wilcoxon .......................................................................................31
4.3 Pembahasan ..................................................................................................32

BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................35

5.1 Kesimpulan ...................................................................................................35
5.2 Saran .............................................................................................................35
5.2.1 Bagi Institusi Penelitian ....................................................................35
5.2.2 Bagi ATLM.......................................................................................36
5.2.3 Bagi Penelitian Selanjutnya ..............................................................36

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................37

viii
 DAFTAR TABEL

Tabel 4.1 Hasil Pemeriksaan M.tb menggunakan pewarnaan BTA dan TCM ......29

ix
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Bakteri M. tuberculosis dengan Pewarnaan Zeihl Nellsen ...............14

Gambar 2.2 Mesin GenExpert ..............................................................................17
Gambar 2.3 Hasil M tuberculosis dan Rifampisin Resisten terdeteksi ................17
Gambar 3.1 Kerangka Operasional.......................................................................27
Gambar 4.1 Hasil Pemeriksaan BTA menggunakan pewarnaan ZN dan TCM ...31

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Surat Ijin Penelitian ..........................................................................40

Lampiran 2 Hasil Penelitian .................................................................................41
Lampiran 3 Analisa Data .....................................................................................42
Lampiran 4 Nota Persetujuan Sidang ...................................................................43

xi
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tuberkulosis (TB) paru adalah penyakit menular melalui udara

(airborne disease) disebabkan oleh bakteri Mycobacterium tuberculosis

(M. tuberculosis) yang menyerang paru-paru. Bakteri M. tuberculosis menular

dari orang ke orang melalui percikan dahak (droplet) ketika penderita TB paru

aktif batuk, bersin, bicara atau tertawa. Tuberkulosis dapat juga menyerang kulit,

kelenjar limfe, tulang, dan selaput otak dan merupakan penyebab mortalitas

nomor satu diantara penyakit menular (Kemenkes RI, 2012).

Penderita TB Paru di Indonesia berdasarkan survei oleh Badan Litbangkes

Kemenkes RItahun 2013-2014, angka insiden TB paru sebesar 399 per 100.000

penduduk, angka pravelensi TB paru sebesar 647 per 100.000 penduduk

(WHO 2015). Propinsi Jawa Timur merupakan salah satu daerah dengan penderita

TB paru terbanyak yaitu 22.244 orang di tahun 2014. Daerah dengan kasus BTA

positif yang cukup signifikan kenaikannya adalah Kabupaten Blitar. Penemuan

penderita penyakit Tuberkulosis paru BTA positif di wilayah Kabupaten Blitar

pada tahun 2016 sejumlah 688 penderita, tahun 2017 sejumlah 668 penderita,

tahun 2018 sejumlah 698 penderita dan pada tahun 2019 sejumlah 847 penderita

(Data P2P Dinas Kesehatan Kab Blitar).

Metode yang banyak digunakan untuk pemeriksaan TB paru adalah

pemeriksaan dengan metode pewarnaan tahan asam (Ziehl Nellsen). Metode

tersebut mudah dikerjakan dan tidak memerlukan biaya yang mahal, akan tetapi

1
 2

metode tersebut memiliki keterbatasan seperti keahlian pemeriksaan

mengakibatkan ketidakteraturan pemeriksaan serta kualitas pewarnaan. Gold

standar lain dari pemeriksaan TB paru yaitu kultur bakteri. Kelemahan metode ini

adalah masa inkubasi membutuhkan waktu yang lama. Semakin berkembangnya

zaman, teknologi terbaru untuk pemeriksaan TB paru adalah menggunakan Tes

Cepat Molekuler (TCM) yang mampu mendeteksi Deoxyribo Nucleic Acid (DNA)

M. tuberculosis komplek secara kualitatif dari spesimen langsung dan juga

mendeteksi mutasi pada gen rpoB yang menyebabkan resistensi terhadap

rifampisin (Kemenkes,2017)

Penegak diagnosa TB paru di wilayah kerja Kabupaten Blitar yang

menggunakan Tes Cepat Molekuler (TCM) hanya ada di Rumah Sakit Umum

Daerah (RSUD) Ngudi Waluyo, UPTD Puskesmas Sutojayan dan UPTD

Puskesmas Srengat, sedangkan Puskesmas yang lain masih menggunakan

Pewarnaan Bakteri Tahan Asam. UPTD Puskesmas Srengat menjadi rujukan

pemeriksaan TB paru, karena sering terjadi perbedaan hasil antara pemeriksaan

pewarnaan Bakteri Tahan Asam sehingga untuk meyakinkan hasil maka dilakukan

juga pemeriksaan menggunakan TCM (Data P2P Dinas Kesehatan Kab Blitar).

Berdasarkan Naim dan Dewi (2018), tidak terdapat perbedaan yang

signifikan antara TCM dengan uji kepekaan metode proporsi. Hasil penelitiannya

menunjukkan bahwa TCM memiliki nilai spesifitas yang tinggi untuk mendeteksi

M.tubercolusis sehingga dapat digunakan dalam diagnosis tuberkulosis. TCM

memiliki nilai sensifitas yang tinggi untuk digunakan juga sebagai alat screening

uji resistensi terhadap Rifampisin. Berdasarkan uraian diatas, maka penulis

tertarik untuk melakukan penelitian yang berjudul “Perbedaan Hasil Pemeriksaan

 3

Pewarnaan Bakteri Tahan Asam dan TCM Pada Pasien Suspek Tuberkulosis Paru

Di UPTD Puskesmas Srengat”

1.2 Rumusan Masalah

“Apakah ada perbedaan hasil pewarnaan bakteri tahan asam dengan

TCM pada pasien suspect TBC di UPTD Puskesmas Srengat ?”

1.3 Batasan Masalah

1. Pewarnaan BTA menggunakan Ziehl Nellsen

2. Pemeriksaan Tes Cepat Molekuler menggunakan metode Real Time

Polymerase Chain Reaction Assay (RT-PCR) menggunakan alat Genexpert

3. Sampel bahan yang digunakan merupakan sputum pagi

1.4 Tujuan Penelitian

1.4.1 Tujuan Umum

Mengetahui perbedaan hasil pemeriksaan pewarnaan bakteri tahan asam

dengan TCM pada pasien suspek TB paru di UPTD Puskesmas Srengat.

1.4.2 Tujuan Khusus

1. Menganalisa adanya bakteri tahan asam menggunakan pewarnaan bakteri

tahan asam pada pasien suspek TB paru di UPTD Puskesmas Srengat.

2. Menganalisa adanya bakteri tahan asam menggunakan Tes Cepat Molekuler

(TCM) pada pasien suspek TB paru di UPTD Puskesmas Srengat.

3. Untuk menganalisis perbedaan hasil pemeriksaan pewarnaan bakteri tahan

asam dan TCM pada pasien suspek TB paru di UPTD Puskesmas Srengat.
 4

1.5 Manfaat Penelitian

1. Bagi Peneliti

Dapat menambah pengetahuan dan pengalaman dalam penelitian. Sebagai

ATLM bisa menambah ilmu tentang Tes Cepat Molekuler beserta kelebihannya

dibanding BTA.

2. Bagi Masyarakat

Memberi informasi kepada masyarakat mengenai pemeriksaan TB paru

menggunakan metode terbaru yaitu TCM dengan mendeteksi gen

M.tuberculosis.
 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tuberkulosis(TB paru)

2.1.1 Definisi

TB paru adalah salah satu penyakit kronik yang dapat menginfeksi seluruh

bagian tubuh manusia tetapi organ yang paling diserang adalah organ paru. Robert

Koch pada tahun 1882 mengidentifikasikan Bakteri Tahan Asam yaitu

M.tuberculosis untuk pertama kali sebagai bakteri penyebabnya (Sudoyo, 2014).

2.1.2 Epidemiologi

Tuberkulosis dapat menyebar melalui udara ketika seseorang dengan

infeksi TB aktif batuk, bersin, atau menyebarkan droplet yang dapat terhirup pada

saat bernafas. Penyakit ini dapat dihubungkan dengan tempat tinggal di daerah

urban dan lingkungan yang padat (Sudoyo,2014).

Kemungkinan penyakit ini menular dari satu orang ke orang lain

tergantung pada beberapa faktor. Faktor-faktor tersebut antara lain jumlah droplet

yang disemprotkan oleh pembawa, efektifitas ventilasi lingkungan tempat tinggal,

jangka waktu paparan, tingkat virulensi strain M. tuberculosis, dan tingkat

kekebalan tubuh orang yang tidak terinfeksi (Kemenkes, 2011).

TB paru di Indonesia merupakan masalah besar dan merupakan penyebab

kematian nomor tiga didunia setelah Cina dan India. Berdasarkan dari data WHO

tahun 1997, di dunia setiap tahunnya terdapat sembilan juta orang yang terkena

TB paru, dan lebih dari dua juta orang meninggal dunia. Diperkirakan setiap

100.000 penduduk Indonesia terdapat 130 penderita baru TB paru BTA positif.

5
 6

Setiap satu penderita TB paru yang positif akan menularkan 10-15 orang

penduduk setiap tahunnya (Susanti, 2013).

a. Cara Penularan

1) Sumber penularan adalah pasien Tuberkulosis BTA positif.

2) Pada waktu batuk atau bersin, pasien menyebarkan bakteri ke udara dalam

bentuk percikan dahak (droplet nuclei). Sekali batuk dapat menghasilkan

sekitar 3.000 percikan dahak.

3) Umumnya penularan terjadi dalam ruangan dimana percikan dahak berada

dalam waktu yang lama. Ventilasi dapat mengurangi jumlah percikan.

Sementara sinar matahari langsung dapat membunuh kuman. Percikan dapat

bertahan selama beberapa jam dalam keadaan yang gelap dan lembab.

4) Daya penularan seorang pasien ditentukan oleh banyaknya kuman yang

dikeluarkan dari parunya. Makin tinggi derajat kepositifan hasil

pemeriksaan dahak, semakin menular pasien tersebut.

5) Faktor yang memungkinkan seseorang terpajan bakteri Tuberkulosis

ditentukan oleh konsentrasi percikan dalam udara dan lamanya menghirup

udara tersebut (DepKes RI, 2008).

b. Resiko Penularan

Resiko tertular tergantung dari tingkat pajanan dengan percikan dahak.

Pasien TB Paru dengan Bakteri Tahan Asam positif memberikan kemungkinan

resiko penularan lebih besar dari pasien TB Paru dengan Bakteri Tahan Asam

negatif (Kemenkes, 2011).

 7

c. Pengendalian Tuberkulosis di Indonesia

Pada tahun 1995, Program Nasional Pengendalian Tuberkulosis mulai

menerapkan strategi DOTS dan dilaksanakan di Puskesmas secara bertahap.

Sejak tahun 2000 strategi DOTS dilaksanakan secara nasional di seluruh

Faskes terutama Puskesmas yang diintegrasikan dalam pelayanan kesehatan

dasar (Kemenkes, 2011).

2.1.3 Patogenesis

Paru merupakan port d’entree lebih dari 98% kasus infeksi Tuberkulosis.

Kuman Tuberkulosis dalam percik renik (droplet nuclei) yang ukurannya sangat

kecil (<5µm) akan terhirup dan dapat mencapai alveolus. Pada sebagian kasus,

kuman Tuberkulosis dapat dihancurkan seluruhnya oleh mekanisme imunologis

non-spesifik, sehingga tidak terjadi respon imunologis spesifik. Akan tetapi, pada

sebagian kasus lainnya, tidak seluruhnya dapat dihancurkan

(Mikrobiologi Kedokteran, 1993).

Saat M.Tuberculosis berhasil menginfeksi paru-paru, maka dengan segera

akan tumbuh koloni bakteri yang berbentuk globular. Biasanya melalui

serangkaian reaksi imunologis bakteri TB paru ini akan berusaha dihambat

melalui pembentukan dinding disekeliling bakteri itu oleh sel-sel paru.

Mekanisme pembentukan dinding itu membuat jaringan disekitarnya menjadi

jaringan parut dan bakteri TB paru akan menjadi dorman (Darliana, 2016).

Pada saat terbentuknya kompleks primer, Tuberkulosis primer dinyatakan

telah terjadi. Setelah terjadi kompleks primer, imunitas selular tubuh terhadap

Tuberkulosis terbentuk, yang dapat diketahui dengan adanya hipersensivitas

terhadap tuberkuloprotein, yaitu uji tuberkulin positif. Selama masa inkubasi, uji
 8

tuberkulin masih negatif. Pada sebagian besar individu dengan sistem imun yang

berfungsi baik, pada saat sistem imun selular berkembang, poliferasi bakteri

M.tuberkulosis terhenti. Akan tetapi, sejumlah kecil bakteri M. tuberkulosis dapat

tetap hidup dalam granula. Bila imunitas selular telah terbentuk, bakteri

M.tuberkulosis yang masuk ke dalam alveoli segera dimusnahkan oleh imunitas

selular spesifik (Cellular Mediated Immunit (CMI))(Kemenkes, 2016).

Penyebaran hematogen yang paling sering terjadi adalah dalam bentuk

penyebaran (occult hematogenic spread). Melalui cara ini, bakteri

M. Tuberkulosis menyebar secara sporadik dan sedikit demi sedikit sehingga tidak

menimbulkan gejala klinis. Bakteri M.tuberkulosis kemudian akan mencapai

berbagai organ di seluruh tubuh, bersarang di yang mempunyai vaskularisasi

baik, paling sering diapeks paru, limpa dan kelenjar limfe superfisialis. Selain itu,

dapat juga bersarang di organ lain seperti otak, hati, tulang, ginjal dan lain-lain.

Pada umumnya bakteri di sarang tersebut tetap hidup, tetapi tidak aktif (tenang),

demikian pula dengan proses patologiknya. Sarang di apeks paru disebut dengan

fokus Simon, yang dikemudian hari dapat mengalami reaktivasi dan terjadi

Tuberkulosis apeks paru saat dewasa (Kemenkes, 2016).

Setelah pemajanan dan infeksi awal, individu dapat mengalami penyakit

aktif karena gangguan atau respon yang inadekuat dari respon sistem imun.

Penyakit dapat juga aktif dengan infeksi ulang dan aktivasi bakteri dorman.

Bakteri kemudian menjadi tersebar di udara, mengakibatkan penyebaran penyakit

lebih jauh. Paru yang terinfeksi menjadi lebih membengkak, menyebabkan

terjadinya bronkopneumonia lebih lanjut ( Darliana, 2016).

 9

2.1.4 Klasifikasi Penyakit dan Tipe Pasien TB

Penentuan klasifikasi penyakit dan tipe pasien tuberkulosis memerlukan

suatu “definisi kasus” yang meliputi 4 (empat) hal, yaitu :

1. Lokasi atau organ tubuh yang sakit (paru atau ekstra paru).

2. Bakteriologi (hasil pemeriksaan dahak baik secara mikroskopis) BTA Positif

atau BTA Negatif.

3. Tingkat keparahan penyakit (ringan atau berat).

4. Riwayat pengobatan Tuberkulosis sebelumnya (baru atau sudah pernah

diobati) (DepKes RI, 2008).

a. Klasifikasi berdasarkan organ tubuh yang terkena

1) Tuberkulosis Paru

Tuberkulosis Paru adalah tuberkulosis yang menyerang jaringan

(parenkim) paru, tidak termasuk pleura (selaput paru) dan kelenjar hilus.

2) Tuberkulosis Ekstra Paru

Tuberkulosis yang menyerang organ tubuh lain selain paru,

mislanya pleura, selaput otak, selaput jantung (pericardium), kelenjar

limfe, tulang persendian, kulit, usus, ginjal, saluran kencing, alat kelamin

dan lain-lain (Kemenkes, 2011).

b. Klasifikasi berdasarkan hasil pemeriksaan dahak mikroskopis, yaitu pada TB

paru

a. TB paru BTA Positif

1) Sekurang-kurangnya 2 dari 3 spesimen dahak SP (Sewaktu-Pagi)

hasilnya BTA Positif.

 10

2) 1 spesimen dahak SP hasilnya BTA Positif dan foto toraks dada

menunjukkan gambaran tuberkulosis.

3) 1 spesimen dahak SP hasil BTA Positif dan biakan kuman

Tuberkulosis Positif.

4) 1 atau lebih spesimen dahak hasilnya BTA positif setelah 2 spesimen

dahak SP pada pemeriksaan sebelumnya hasilnya BTA negatif dan

tidak ada perbaikan setelah pemberian antibiotik OAT.

b. Tuberkulosis Paru BTA Negatif

Kasus yang tidak memiliki definisi pada Tuberkulosis Paru BTA

Positif. Kriteria diagnostik Tuberkulosis Paru BTA negatif harus meliputi:

1) Paling tidak 2 spesimen dahak SP hasilnya BTA negatif.

2) Foto toraks abnormal menunjukkan gambaran tuberkulosis.

3) Tidak ada perbaikan setelah pemberian antibiota non OAT.

4) Ditentukan (dipertimbangkan) oleh dokter untuk diberi

pengobatan(Depkes RI, 2008).

c. Klasifikasi berdasarkan tingkat keparahan penyakit

1. Tuberkulosis Paru BTA negatif foto toraks positif dibagi berdasarkan

tingkat keparahan penyakitnya, yaitu bentuk berat dan ringan.

2. Bentuk berat bila gambaran foto meperlihatkan gambaran kerusakan paru

yang luas (misalnya proses far advanced), dan/atau keadaan umum pasien

buruk.

3. Tuberkulosis ekstra-paru dibagi berdasarkan pada tingkat keparahan

penyakitnya, yaitu :
 11

a) Tuberkulosis Ekstra Paru ringan, misalnya : Tuberkulosis kelenjar

limfe, pleuritis eksudativa unilateral, tulang (kecuali tulang belakang),

sendi dan kelenjar adrenal.

b) Tuberkulosis Ekstra Paru Berat, misalnya : meningitis, milier,

perikarditis, peritonitis, pleuritis eksudativa bilateral, Tuberkulosis

tulang belakang, Tuberkulosis usus, Tuberkulosis saluran kemih dan

alat kelamin (DepKes RI, 2008).

d. Klasifikasi berdasarkan riwayat pengobatan sebelumnya

Klasifikasi berdasarkan riwayat pengobatan sebelumnya dibagi menjadi

tipe pasien, yaitu

1. Baru : Adalah pasien yang belum pernah diobati dengan OAT atau sudah

pernah menelan OAT kurang dari satu bulan (4 minggu).

2. Kambuh (Relaps) : Adalah pasien Tuberkulosis yang sebelumnya pernah

mendapat pengobatan Tuberkulosis dan telah dinyatakan sembuh atau

pengobatan lengkap, di diagnosis kembali dengan BTA positif.

3. Pengobatan setelah putus berobat (Default) : Adalah pasien yang telah

berobat dan putus berobat 2 bulan atau lebih dengan BTA positif.

4. Gagal (Failure) : Adalah pasien yang hasil pemeriksaan dahaknya tetap

positif atau kembali menjadi positif pada bulan kelima atau lebih selama

pengobatan (Kemenkes, 2014).

 12

2.2 Sputum

Dahak atau sputum adalah mukus yang keluar saat batuk dari saluran

pernafasan atas.Spesimen sputum paling baik diambil pada pagi hari.

Pengumpulan sputum dilakukan di ruang terbuka dan mendapat sinar matahari

langsung atau di ruangan dengan ventilasi yang baik, untuk mengurangi

kemungkinan penularan akibat percikan sputum yang infeksius

(Kemenkes, 2011).

Hasil pemeriksaan biakan dan uji kepekaan M. tuberculosis sangat

bergantung pada kualitas spesimen yang diterima oleh laboratorium. Mutu

spesimen harus diperhatikan mulai dari pengambilan, pengemasan, pengiriman

harus mampu mempertahankan mutu spesimen. Sebaiknya tidak memakai

pengawet CPC lagi karena beberapa alasan sebagai berikut: bahan sulit didapat,

proses pengawetannya tidak mudah dan pengelolaan spesimen yang diawetkan

dengan CPC memerlukan keahlian khusus (Kemenkes, 2015).

2.3 Pemeriksaan Laboratorium

2.3.1 Pemeriksaan Mikrokopis

M. tuberculosis berbentuk batang atau basil dan bersifat tahan asam bila

diwarnai dengan pewarnaan bakteri tahan asam, misalnya pewarnaan Ziehl

Nellsen. M tuberculosis juga bersifat dorman dan aerob, mati pada pemanasan

1000 C selama 5-10 menit atau dengan alkohol 70-95% selama 15-30 detik.

Bakteri ini dapat bertahan hidup lama, terutama di tempat lembab dan gelap,

namun tidak tahan terhadap sinar atau aliran udara ( Kalma, 2018).
 13

a) Prinsip Kerja

Bakteri M. tuberculosis yang diwarnai dengan carbol fuchsin

dipanaskan akan mengikat warna merah dari carbol fuchsin dan tidak akan

luntur oleh larutan asam alkohol sehingga tetap berwarna merah (Albertus,

2014).

b) Pembacaan Sediaan Apus

Sediaan dahak yang telah diwarnai dapat dinilai baik atau jelek dengan

memperhatikan beberapa hal secara makroskopis, diantaranya :

a. Kualitas dahak : ditemukan adanya makrofag atau leukosit >25 LP dengan

pembesaran 100 x.

b. Ukuran sediaan : 2 x 3 cm.

c. Kerataan : sediaan tampak rata atau tidak terkelupas.

d. Ketebalan sediaan : seluruh bagian sediaan dapat dibedakan dengan jelas.

e. Kebersihan sediaan : adanya sisa zat warna, kotoran harus dihindarkan

agar tidak mengganggu pembacaan (Albertus, 2014).

Interpretasi BTA

Hasil dilihat dibawah lensa obyektif 100 x (+ minyak imersi).

Minimum diperiksa sebanyak 100 LP, sebelum dinyatakan negatif (-).

Interpretasi BTA menurut Kemenkes /Union InternasionalAgaints

Tuberculosis dan Lung Diseaces (IUATLD) ( Depkes, 2008)

1) Negatif : 0 / 100 Lapang Pandang (LP)

2) Scanty = 1 – 9 / 100 LP

3) 1 + = 10 – 99 / 100 LP

4) 2 + = 1 – 10 / LP
 14

5) 3 + = > 10 / LP, (periksa mininal 20 LP)

Gambar 2.1 Bakteri M. tuberculosis dengan Pewarnaan Zeihl Nellsen

2.3.2 Pemeriksaan biakan dan uji kepekaaan

Identifikasi M. tuberculosis pada pemeriksaan biakan dengan media padat

LJ (Lowenstain Jensen), minimal dilakukan dengan pemeriksaan makroskopis,

mikroskopis (pewarnaan ZN), tes niacin dan tes PNB, namun bagi laboratorium

yang mampu menyediakan tes MPT64, dapat menggunakan tes MPT64 untuk

menggantikan tes PNB yang memerlukan waktuterlalu lama untuk mengeluarkan

hasil. Identifikasi M.Tuberculosis pada biakan cair (MGIT) diawali dengan

konfirmasi menggunakan pewarnaan ZN kemudian dilakukan uji identifikasi

minimal dengan dua tes di antaranya tes niacin (diambil dari biakan dengan media

padat LJ, tes PNB (MGIT), tes MPT64 (Kemenkes, 2015)

Pemeriksaan uji kepekaan dilakukan dengan metode proporsional pada

media Lowenstain Jensen, atau dengan metode proporsional menggunakan media

cair (MGIT)(Kemenkes, 2015).Dahak dan spesimen lainnya harus sampai

dilaboratorium secepatnya. Jika diperkirakan akan terjadi penundaan pemeriksaan,

dahak disimpan pada suhu 4°C. Specimen dahak untuk pemeriksaan biakan dan

uji kepekaan harus sesegera mungkin sampai di laboratorium dengan suhu dingin

(2°C - 10°C).
 15

Pemberian pengawet pada dahak hanya boleh untuk pemeriksaan biakan

pada media padat LJ , tidak diperbolehkan untuk pemeriksaan media cair (MGIT)

(Kemenkes, 2015).

Interpretasi Hasil Uji :

Pembacaan hasil uji dilakukan dengan cara mengamati pertumbuhan pada

masing-masing tabung dan menghitung koloni yang terbentuk setelah itu

menentukan MIC setiap strain isolat yaitu konsentrasi terendah yang ditumbuhi

kurang dari 20 koloni (MIC dari INH untuk M. tuberculosis strain H37RV adalah

0,06 μg/ml), setelah itu membandingkan antara MIC strain isolat dengan MIC dari

INH untuk M. tuberculosis strain H37RV. Bila rasio resistensinya 2, maka strain

tersebut sensitif, rasio resistensinya 4 berarti bakteri tadi intemediate resistant,

rasio resistensinya 8 strain tersebut resisten (Hidayati, 2013).

2.3.3 Pemeriksaan biomolekuler M. Tuberculosis:TCM

Pemeriksaan Tes Cepat Molekuler (TCM) merupakan metode penemuan

terbaru untuk diagnosis Tuberkulosis berdasarkan pemeriksaan molekuler yang

menggunakan metode Real Time Polymerase Chain Reaction Assay (RT-PCR)

semi kuantitatif yang menargetkan wilayah hotspot gen rpoB pada M.

tuberculosis, yang terintegrasi dan secara otomatis mengolah sediaan dengan

ekstraksi Deoxyribo Nucleic Acid (DNA) dalam catridge sekali pakai.

Pemeriksaan tersebut dilakukan dengan alat GeneXpert, yang menggunakan

sistem otomatis yang mengintegrasi proses purifikasi spesimen, amplifikasi asam

nukleat, dan deteksi sekuen target. Sistem tersebut terdiri atas alat GeneXpert,

komputer dan perangkat lunak (Naim, 2018).

 16

Setiap pemeriksaan menggunakan katrid sekali pakai dan dirancang untuk

meminimalkan kontaminasi silang. Katrid Xpert MTB/RIF juga memiliki Sample

Processing Control (SPC) dan Probe Check Control (PCC). Sample processing

control berfungsi sebagai control proses yang adekuat terhadap bakteri target serta

untuk memonitor keberadaan penghambat reaksi PCR, sedangkan PCC berfungsi

untuk memastikan proses rehidrasi reagen, pengisian tabung PCR pada katrid,

integritas probe, dan stabilitas dye (Kemenkes RI ,2017).

Pemeriksaan Xpert M. tuberkulosis/RIF dapat mendeteksi tuberkulosis

komplek dan resistansi terhadap rifampisin secara simultan dengan

mengamplifikasi sekuen spesifik gen rpoB dari M.tuberkulosiskompleks

menggunakan lima probe molecular beacons (probe A –E) untuk mendeteksi

mutasi pada daerah gen rpoB. Setiap molecular beacon dilabel dengan dye

florofor yang berbeda. Cycle threshold(Ct) maksimal yang valid untuk analisis

hasil pada probe A, B dan C adalah 39 siklus, sedangkan pada probe D dan E 36

siklus. Hasil dapat di interpretasikan sebagai berikut :

1) “M.tuberkulosisterdeteksi” apabila terdapat dua probe memberikan nilai Ct

dalam batas valid dan delta Ct min ( selisih/perbedaan Ct terkecil antara

pasangan probe) < 2.0

2) “Rifampisin Resisten tidak terdeteksi” apabila delta Ct maks (selisih perbedaan

antara probe yang paling awal muncul dengan paling akhir muncul) ˂ 4.0

3) “Rifampisin Resisten terdeteksi” apabila delta Ct maks > 4.0

4) “Rifampisin Resistan indeterminate” apabila ditemukan dua kondisi sebagai

berikut :

a. Nilai Ct pada probe melebihi nilai valid maksimal (atau nilai 0)

 17

b. Nilai Ct pada probe yang paling awal muncul > (nilai Ct valid maksimal

delta Ct maksimal cut-off 4.0)

5) “Tidak terdeteksi Tuberkulosis” apabila hanya terdapat satu atau tidak terdapat

probe yang positif (Kemenkes,2017).

Gambar 2.2 Mesin GenExpert

Gambar 2.3 Hasil M tuberculosis dan Rifampisin Resistenterdeteksi

 18

2.3.4 Pemeriksaan Serologi

M. tuberculosis Antigen rapid (M. tuberkulosis Ag Rapid Tes) merupakan

uji serologi untuk mendeteksi antigen M. tuberculosis. Tuberkulosis antibodi

monoclonal terhadap antigen yang dikode genRD1, RD2 dan RD3 digunakan

untuk mendeteksi antigen ESAT-6, CFP-10 dan MPb64. Tiga genomic RD

(Regions Of Different) yaitu RD1, RD2 dan RD3 dan dapat dilakukan cepat

praktis dan mudah.

Gen yang menjadi ESAT6, CFP10 dan MPb64 terdapat pada region RD

yang terdeteksi ini menjadi RD1-RD3 diduga kuat sebagai gen virulensi yang

dimiliki oleh M. tuberculosis.

Metode yang digunakan adalah Cromatografi. Intepretasi hasil positif akan

terlihat dua garis di area kontrol dan tes. Hasil menunjukan negatif apabila hanya

terlihat satu garis pada area kontrol saja (Ariyani, 2016)

 BAB 3

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian ini adalah analitik dengan rancangan Cross Sectional,

yaitu untuk membandingkan hasil pemeriksaan pewarnaan bakteri tahan asam dan

TCM pada pasien suspek TB paru UPTD Puskesmas Srengat.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

3.2.1 Tempat Penelitian

Pengambilan sampel dan penelitian dilakukan di Laboratorium UPTD

Puskesmas Srengat Kabupaten Blitar.

3.2.2 Waktu Penelitian

Waktu penelitian dilakukan pada periode bulan Januari – April 2020.

3.3 Populasi dan Sampel

3.3.1 Populasi Penelitian

Populasi pada penelitian ini adalah semua pasien suspek TB paru di UPTD

Puskesmas Srengat Kabupaten Blitar.

3.3.2 Sampel

Sampel dalam penelitian ini adalah sebagian penderita suspek TB paru

UPTD Puskesmas Srengat Kabupaten Blitar yang diambil secara purposive

sampling yaitu sampel diambil berdasarkan pada suatu pertimbangan/kriteria

inklusi yang dibuat oleh peneliti.

19
 20

Kriteria inklusi dalam penelitian ini yaitu pasien suspek TB paru dengan

batuk lebih dari 2 minggu, pasien tidak sedang dalam masa pengobatan dan pasien

diambil sputum Pagi sebanyak 30 sampel.

3.4 Variabel Penelitian

3.4.1 Variabel Bebas / Independent

Variabel bebas pada penelitian ini adalah pewarnaan bakteri tahan asam

(Ziehl Nellsen) dan metode TCM (Genexpert).

3.4.2 Variabel Terikat/ Dependent

Variabel terikat dari penelitian ini adalah terdapatnya bakteri

M. tuberculosis

3.5 Definisi Operasional

1. Pasien suspek TB adalah pasien yang mengalami gejala TB (batuk > 2

minggu) tetapi belum didiagnosa berdasarkan pemeriksaan laboratorium

2. M. Tuberculosis adalah bakteri penyebab tuberkulosis yang diambil dari

sputum pasien suspek TB di UPTD Puskesmas Srengat Kabupaten Blitar.

3. Pawarnaan tahan asam adalah metode pemeriksaan secara manual

menggunakan Ziehl Nellsen untuk mengidentifikasi adanya bakteri

M. Tuberculosis pada sputum penderita suspek TB hasil dinyatakan dalam

positif atau negatif

4. Metode TCM adalah adalah metode pemeriksaan secara automatik

menggunakan alat Genexpert untuk mengidentifikasi adanya bakteri

 21

M. Tuberculosis pada sputum penderita suspek TB hasil dinyatakan dalam

positif atau negatif

3.6 Metode Pengumpulan data

Teknik pengumpulan data yang diambil dalam penelitian ini adalah

observasi terhadap data primer yaitu data diambil secara langsung pada tempat

penelitian kemudian dilakukan pemeriksaan laboratorium terhadap bahan uji di

Laboratorium.

3.7 Tahapan Penelitian

3.7.1 Pra analitik (Pengambilan sputum pagi)

1. Persiapan Alat

Sputum pot yang bertutup, botol bersih dengan penutup, hand scoon, formulir

dan etiket,bengkok, tissue,

2. Persiapan pasien

Jelaskan pada pasien apa yang dimaksud dengan sputum agar yang

dibatukkan benar-benar merupakan sputum, bukan air liur/saliva ataupun

campuran antara sputum dan saliva. Selanjutnya, jelaskan cara mengeluarkan

sputum.

3. Cara Pengambilan sputum

Pasien berkumur dengan air dahulu, kemudian di beri wadah yang bermulut

lebar, mempunyai tutup berulir, suci hama, tidak mudah pecah, tidak bocor,

sekali pakai dibuang (disposible). Pasien dalam posisi berdiri, jika tidak

memungkinkan dapat dengan duduk agak membungkuk. Pagi hari setelah

 22

bangun tidur biasanya rangsangan batuk sangat kuat, tetapi penderita di

anjurkan untuk menahanya dan menarik nafas dalam-dalam. Kemudian

segera di suruh batuk sekuat-kuatnya sehingga merasakan dahak yang

dibatukkan keluar dari tenggorokan. Sputum yang keluar di tampung dalam

wadah yang di sediakan, mulut wadah penampung dibersihkan dari tetesan

dahak lalu di tutup. Wadah diberi label yang yang berisi nama, alamat,

tanggal pengambilan serta nama pengirim

3.7.2 Analitik

A. Pemeriksaan mikroskopis TB dengan pewarnaan ZN

1. Alat dan reagen

Persiapan alat yang perlu disiapkan adalah potsputum,objek glass, lidi/tusuk

sate, lampu spirtus, mikroskop sarung tangan, jas laborat,masker.

2. Sampel

Sampel/bahan yang digunakan adalah sputum/dahak Pagi.

3. Prosedur pembuatan sediaan apus sputum

a) Dahak yang purulen diambil dengan menggunakan lidi yang telah

didekontaminasi.

b) Sputum yang terdapat pada lidi diletakan di kaca sediaan dibuat tersebar

merata, ukuran 2 x 3 cm, dan tidak terlalu tipis untuk menghindari apusan

menjadi kering sebelum diratakan.

c) Sediaan diratakan dengan membuat spiral-spiral kecil sewaktu apusan

setengah kering dengan menggunakan lidi lancip sehingga didapat sebaran

leukosit lebih rata dan area baca lebih homogen.

d) Apusan dikeringkan di udara bebas.

 23

e) fiksasi apusan dilakukan dengan pemanasan, yaitu : Apusan menghadap

ke atas, dilewatkan 3x melalui api dari lampu spiritus, dengan

menggunakan pinset untuk memegang kaca (pemanasan yang berlebihan

akan merusak hasil).

f) Apusan dikeringkan diatas rak sediaan, dengan menghindari sinar matahari

langsung, lidi langsung dibuang ke dalam botol berisi disinfektan.

4. Pewarnaan Ziehl Nellsen

a) Sediaan diletakan dengan bagian apusan menghadap keatas rak yang

ditempatkan di atas bak cuci atau baskom, antara satu sediaan dengan

sediaan lainnya masing-masing berjarak kurang lebih satu jari.

b) Seluruh permukaan sediaan digenangi dengan carbol fuchsin 0.3%.

c) Sediaan dipanasi dari bawah dengan menggunakan sulut api sampai

keluar uap (sekitar 5 menit),didiamkan kemudian dipanasi lagi sebanyak

3 kali. Diusahakan jangan sampai api langsung mengenai sediaan.

d) Sediaan didiamkan selama 5 menit.

e) Sediaan dibilas dengan hati-hati (diusahakan jangan sampai ada percikan

ke sediaan lain).

f) Sediaan dimiringkan menggunakan penjepit kayu atau pinset untuk

membuang air.

g) Sediaan digenangi dengan asam alkohol 3% sampai tidak tampak warna

merah carbol fuchsin.

h) Sediaan dibilas dengan hati-hati (diusahakan jangan sampai ada percikan

ke sediaan lain).
 24

i) Permukaan sediaan digenangi dengan methylene blue 0.1% selama 1

menit.

j) Sediaan dibilas dengan air mengalir (diusahakan jangan ada percikan ke

sediaan lain).

k) Sediaan dimiringkan untuk mengalirkan air.

l) Hasil dilihat dibawah lensa obyektif 100 x (+ minyak imersi). Lakukan

pembacaan sediaan apus sepanjang garis tengah dari ujung kiri ke kanan

atau sebaliknya. Minimum diperiksa sebanyak 100LP sebelum

dinyatakan negatif (-).

B. PemeriksaanTCM

1. Alat dan reagen

Persiapan alat yang perlu disiapkan adalah Genexpert Unit, masker,

handscoon, jas lab, pipet disposible, sampel reagen, cartridge sekali pakai.

2. Sampel

Sampel/bahan yang digunakan adalah dahak sputum/dahak Pagi (P).

3. Pemeriksaan RT-PCR

1. Segel sampel reagent (SR) dibuka dan penutup tabung yang berisi sampel

dahak.

2. SR dituang ke dalam tabung dahak dengan volume SR dua kali volume

dahak kemudian ditutup kembali tabung dahak.

3. Tabung dahak dikocok kencang sebanyak 10 – 20 kali, lalu diinkubasi

selama 10 menit. Setelah itu dikocok kuat kembali, lalu inkubasi kembali

selama 5 menit. Setelah inkubasi, diperhatikan kualitas dahak, apabila

 25

masih kental dan menggumpal makaditambahkan waktu inkubasi 5 -10

menit.

4. Cartridge Xpert MTB/RIF diberi identitas pada sisi kanan atau kiri

catridge dengan menggunakan spidol atau stiker barcode.

5. Penutup bagian atas cartridge dibuka.

6. Dahak yang sudah diproses dipindahkan menggunakan pipet yang

disediakan. Pipet diisi sampai melebihi tanda 2ml yang ada pada pipet.

7. Pipet dimasukan secara berlahan ke dalam ruang sampel yang terdapat

pada cartridge, lalu dahak dikeluarkan perlahan. Hindari pembentukan

gelembung udara.

8. Penutup cartridge ditutup rapat. Segera proses sampel menggunakan

mesin geneXpert.

3.7.3 Post Analitik

1. Interpretasi BTA

Intepretasi BTA menurut Kemenkes / International Union

AgainstTuberculosis and Lung Diseases (IUATLD) :

a. Negatif : 0 / 100 LP

b. Scanty : 1 – 9 / 100 LP

c. 1+ : 10 – 99 / 100 LP

d. 2+ : 1 – 10 / LP

e. 3+ : > 10 BTA dalam 1 LP, periksa minimal 20 LP

2. Interprestasi Hasil Tes Cepat Molekuler (TCM) :

a. Negatif : MTB Not Detected (Tidak terdeteksi Mycobacterium

tuberculosis)
 26

b. Scanty : MTB Detected Very Low (Terdeteksi Mycobacterium

tuberculosis dalam jumlah sangat sedikit)

c. 1+ : MTB Detected Low (Terdeteksi Mycobacterium

tuberculosis dalam jumlah sedikit)

d. 2+ : MTB Detected Medium (Terdeteksi Mycobacterium

tuberculosis dalam jumlah sedang)

e. 3+ : MTB Detected High (Terdeteksi Mycobacterium

tuberculosis dalam jumlah banyak)

 27

3.8 Kerangka Operasional

Pasien suspect TB di UPTD Puskesmas Srengat

Kabupaten Blitar (n = 30)

Diambil sputum pagi

Pemeriksaan sputum dengan Pemeriksaan sputum

pewarnaan tahan asam Dengan TCM

(Ziehl Nellsen) (genexpert)

Hasil pemeriksaan Hasil pemeriksaan

( ada tidaknya M. tuberculosis ( ada tidaknya M. tuberculosis

pada sputum pasien suspect Tb) pada sputum pasien suspect Tb)

Analisa data

Gambar 3.1. Kerangka Operasional

 28

3.9 Analisa data

Untuk mengetahui adanya perbedaan hasil pemeriksaan BTA dengan

pewarnaan tahan asam (Ziehl Nellsen) dengan pemeriksaan Tes Cepat Molekuler

(TCM) maka digunakan analisa data menggunakan SPSS dengan uji non

parametrik Wilcoxon karenan data yang digunakan merupakan data ordinal.

 BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Penyajian Data

Berdasarkan hasil pemeriksaan Mycobacterium tuberculosis pada suspek

TB di Laboratorium UPTD Puskesmas Srengat menggunakan pewarnaan BTA

dengan metode Ziehl Nellsen (ZN) dan Tes Cepat Molekuler (TCM) didapatkan

hasil sebagai berikut :

Tabel 4.1 Hasil Pemeriksaan M.tb menggunakan pewarnaan BTA dan TCM

Pemeriksaan
Jenis BTA metode
No. Kode Sampel Usia Dahak Metode
Kelamin Ziehl Nellsen
TCM
1 0015 32 P Neg Neg
2 0018 18 L Neg Neg
3 0019 44 L Neg Neg
4 0022 74 L 1+ 1+
5 0023 66 L Neg Neg
6 0024 69 L Neg Neg
7 0027 61 L Neg Neg
8 0028 44 P Neg Scanty
9 0029 66 P Neg Neg
10 0030 45 P Neg Neg
11 0031 29 P Neg Neg
12 0032 52 P Neg Neg
13 0033 68 L 1+ 2+
14 0034 51 L 3+ 3+
15 0035 50 P 1+ 2+
16 0037 35 P Scanty Scanty
17 0036 53 L Neg Neg
18 0038 40 P Neg Neg
19 0040 54 P 1+ 1+
20 0042 47 L Neg Neg
21 0046 45 L Neg Neg
22 0047 50 P Neg Neg

29
 30

Pemeriksaan
Jenis BTA metode
No. Kode Sampel Usia Dahak Metode
Kelamin Ziehl Nellsen
TCM
23 0048 8 L Neg Neg
24 0049 61 L Neg Neg
25 0050 27 P Neg Neg
26 0051 25 P Neg Neg
27 0052 25 L Neg Neg
28 0053 49 L Neg Neg
29 0054 58 L Neg Neg
30 0057 69 P Neg Neg

Gambar 4.1 Pemeriiksaan BTA dengan pewarnaan ZN dan TCM

Berdasarkan gambar 4.1 dapat diketahui hasil pemeriksaan M.tb

menggunakan pewarnaan BTA dengan metode ZN didapatkan hasil sampel

negatif sebanyak 24 orang (80%), hasil scanty sebanyak 1 orang (3,33%), hasil

positif 1 sebanyak 4 orang (13,33%) dan hasil positif 3 sebanyak 1 orang (3,33%).

Dari hasil pemeriksaan menggunakan TCM didapatkan hasil sampel

negatif sebanyak 23 orang (76,67%), sampel scanty sebanyak 2 orang (6,67%),

 31

positif 1 sebanyak 2 orang (6,67%), positif 2 sebanyak 2 orang (6,67%)dan positif

3 sebanyak 1 orang (3,33%).

4.2 Analisa Data

4.2.1 Uji Wilcoxon

Karena data yang digunakan merupakan data nominal maka analisa data

menggunakan uji nonparametrik yaitu uji wilcoxon untuk mengetahui perbedaan

pemeriksaan BTA menggunakan pewarnaan ZN dan TCM.

Terlebih dahulu ditentukan hipotesis penelitian sebagai berikut :

H0 : Tidak ada perbedaan hasil pemeriksaan BTA menggunakan pewarnaan ZN

dan TCM

H1 : Ada perbedaan hasil pemeriksaan BTA menggunakan pewarnaan ZN dan

TCM

Dengan syarat pengambilan keputusan :

Bila nilai signifikan > 0,05 maka H0 diterima H1

Bila nilai signifikan < 0,05 maka H1 diterima

Dari hasil analisa data menggunkan uji wilcoxon didapatkan hasil sebagai

berikut :

Test Statisticsb

TCM - ZN

Z -1.732a

Asymp. Sig. (2-tailed) .083

a. Based on negative ranks.

b. Wilcoxon Signed Ranks Test

 32

Didapatkan nilai signifikan sebesar 0,083 (p > 0,05) yang artinya tidak ada

perbedaan antara perbedaan hasil pemeriksaan BTA menggunakan pewarnaan ZN

dan TCM

4.3 Pembahasan

Berdasar hasil penelitian dan analisa data dari 30 suspec Tb mengenai

perbedaan hasil pemeriksaan BTA metode Ziehl Nellsen (ZN) dan Tes Cepat

Molekuler (TCM) di UPTD Puskesmas Srengat didapatkan nilai signifikan

sebesar 0,083 (p > 0,05) yang artinya tidak ada perbedaan hasil yang signifikan

antara pemeriksaan BTA dan TCM .

Tidak adanya perbedaan hasil pemeriksaan pada penelitian ini diantaranya

dipengaruhi oleh sampel sputum yang dijadikan bahan pemeriksaan cukup baik

dari segi jumlah maupun konsistensinya hal tersebut membuat BTA dapat dilihat

ada atau tidaknya pada mikroskop dengan pewarnaan BTA sedangkan pada

pemeriksaan TCM dapat mendeteksi BTA meskipun jumlah sampel sedikit.

Pada pemeriksaan BTA dengan pewarnaan ZN merupakan sarana

diagnostik yang termudah, tercepat dan termurah dan sampai saat ini masih

banyak digunakan diberbagai sarana kesehatan. Pemeriksaan sputum dengan

pewarnaan ZN mempunyai banyak kelemahan yaitu pengambilan sputum tidak

purulen akan memperkecil kemungkinan untuk dapat mengambil sampel yang

mengandung kuman Mycobacterium tuberculosis.

Disamping penggunaan sputum yang baik, tidak adanya perbedaan

pewarnaan ZN dengan TCM dikarenakan kesalahan dalam prosedur pemeriksaan

dapat diminimalisir. Dari kedua metode tersebut teknik pewarnaan ZN lebih

 33

banyak terjadi kesalahan prosedur dikarenakan pengerjaannya yang masih

manual. Kesalahan yang dapat terjadi pada pemeriksaan BTA dengan pewarnaan

Ziehl Neelsen antara lain waktu fiksasi diatas nyala api yang terlalu singkat atau

terlalu lama yang bias merusak sediaan, Penggunaan reagen yang tidak sesuai,

pewarnaan yang kurang baik / tidak rata serta intepretasi hasil yang salah

(Fihirudin, 2015)

Guna menghindari kesalahan maka dibutuhkan pemantapan mutu internal

pemeriksaan bakteri tahan asam sehingga kesesuaian hasil didapat dan

menghindari kesalahan. Pada tahap pra analitik adalah tahap mulai

mempersiapkan pasien, pengambilan dan penaganan spesimen dahak, menerima

spesimen dahak, memberi identitas spesimen sampai dengan menguji kualitas

reagen Ziehl Neelsen. Tahap analitik yaitu tahap mulai penyusunan Prosedur

Tetap (Protap), mengolah dan memeriksa spesimen dahak sesuai prosedur tetap,

pemeliharaan mikroskop. Penilaian pembuatan sediaan dengan penilaian terhadap

6 unsur menggunakan skala sarang laba-laba meliputi (kualitas spesimen sputum,

ukuran sediaan, pewarnaan, kebersihan, ketebalan, dan kerataan sediaan), dan

penyimpanan sedian untuk uji silang. Tahap pasca analitik yaitu tahap mulai dari

mencatat hasil pemeriksaan, interpretasi hasil sampai dengan pelaporan (Latifah,

2016).

Pada pemeriksaan tes cepat molekuler (TCM) spesimen sputum yang

sudah dikumpulkan dan dimasukkan kedalam wadah lalu dilakukan pemeriksaan

BTA dekontaminasi metode kubica, tes cepat molekuler dengan menambahkan

buffer kemudian diinkubasi selama 15 menit lalu diambil dengan pipet khusus dan

dimasukkan kedalam cartridge, setelah itu dimasukkan kedalam alat GeneXpert

 34

MTB/RIF. Sputum diproses dan diperiksa oleh GeneXpert MTB/RIF secara

otomatis, hasilnya diperoleh setelah ± 2 jam. Kelebihan metode TCM adalah

hanya membutuhkan sampel yang sedikit dan dapat mendeteksi resistensi

terhadap rimfampisin (Naim, 2018)

Pada prinsipnya kedua metode dapat digunakan dalam mendeteksi BTA

apabila digunakan sesuai SOP. Keterbatasan sumberdana atau bila keadaan

darurat seperti kerusakan alat atau listrik mati maka dapat digunakan pewarnaan

ZN, tetapi bila didapat hasil negatif dan setelah pengobatan tidak ada perbaikan

maka perlu diklarifikasi dengan metode TCM dikarenakan sensitifitas TCM lebih

tinggi serta tingkat kesalahan akibat human error lebih rendah dibanding

pewarnaan ZN.
 BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian mengenai perbedaan hasil pewarnaan BTA

dengan Tes Cepat Molekuler (TCM) di UPTD Puskesmas Srengat dapat

disimpulkan :

1. Hasil pewarnaan BTA dengan metode ZN didapatkan hasil sampel negatif

sebanyak 24 orang (80%), hasil scanty sebanyak 1 orang (3,33%), hasil positif

1 sebanyak 4 orang (13,33%) dan hasil positif 3 sebanyak 1 orang (3,33%).

2. Hasil pemeriksaan menggunakan TCM didapatkan hasil sampel negatif

sebanyak 23 orang (76,67%), sampel scanty sebanyak 2 orang (6,67%), positif

1 sebanyak 2 orang (6,67%), positif 2 sebanyak 2 orang (6,67%)dan positif

3 sebanyak 1 orang (3,33%).

3. Pada analisa data dengan uji statistika Wilcoxon didapatkan nilai signifikan

sebesar 0,083 (p > 0,05) yang artinya tidak ada perbedaan hasil antara

pemeriksaan BTA menggunakan pewarnaan ZN dan TCM

5.2 Saran

5.2.1 Bagi Institusi Penelitian

Disarankan bagi institusi penelitian apabila menginginkan hasil

pemeriksaan yang cepat dan akurat sebaiknya menggunakan TCM dan apabila

pada keadaan darurat seperti terjadi kerusakan alat TCM atau lampu mati maka

dapat menggunakan pewarnaan BTA. Pemantapan mutu internal pada

35
 36

pemeriksaan BTA menggunakan TCM maupun pewarnaan BTA sebaiknya rutin

dilakukan secara berkala.

5.2.2 Bagi ATLM

Agar aktif mengikuti pelatihan-pelatihan yang diadakan oleh organisasi

ATLM guna meningkatkan skill / keterampilan dalam pemeriksaan BTA baik itu

menggunakan pewarnaan BTA maupun TCM.

5.2.3 Bagi Penelitian Selanjutnya

Bagi peneliti selanjutnya dapat membandingkan kedua metode

pemeriksaan tersebut dengan metode kultur atau dapat meneliti pengaruh

penundaan waktu pemeriksaan terhadap hasil pemeriksaan BTA.

 37

DAFTAR PUSTAKA

Albertus A,dr. 2014. Pedoman Teknik Dasar Untuk Laboratorium Kesehatan

Jakarta : ECG.

Ariyani, F, Maulin & Noor. 2016. Perbedaan Hasil Deteksi Pewarnaan Bakteri
Tahan Asam dan Rapid Antigen pada Pasien Diagnosa Tuberkulosis
Paru. Jurnal Mitra Kesehatan, 1 (2), 112.

Dahlan. 2011. Statistik Untuk Kedokteran Dan Kesehatan edisi 5. Jakarta.

Salemba Medika.

Darliana, D. 2016. Manajemen Pasien Tuberkulosis Paru, Jurnal PSIK-FK

Unsyiah, 27-28.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2008. Pedoman

NasionalPenanggulangan Tuberkulosis edisi2, Jakarta : Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.

Fihiruddin, 2015. Konsentrasi Carbol Fuchsin Dan Waktu Penyimpanan Sediaan

Hapusan Sputum +2 Hasil Pewarnaan Ziehl Neelsen. Jurnal Kesehatan
Prima Volume : 9, No.2, Agustus 2015, Halaman : 1478-1485 ISSN Print
: 1978 – 1334, ISSN Online : 2460 – 8661

Handoyo & Ari. 2001. Prinsip Umum Dan Pelaksanaan Polymerase Chain
Reaction (PCR), Unitas, 9 (1), 17-20.

Hidayati & Roekistiningsih. 2013. Uji Kepekaan Mycobacterium Sp Terhadap

Isoniazid (INH) Menggunakan Metode Rasio Resistensi Secara In Vitro.
Mutiara Medika, 13 (3), 187-189.

Kalma & Adrika. 2018. Perbandingan Hasil Pemeriksaan Basil Tahan Asam
Antara Spesimen Dahak Langsung diperiksa Dengan Ditunda 24 Jam.
Jurnal Media Analis Kesehatan, 9 (2), 131.

Kalma. 2015. Efektifitas Waktu fiksasi Preparat Untuk Pewarnaan Basil Tahan
Asam Metode Ziehl Neelsen. Jurnal Media Analis Kesehatan Vol. VI
No.1 Mei 2015

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2011. Pedoman

NasionalPengendalian Tuberkulosis. Jakarta: Direktoral Jendral
Pengendalian Penyakit dan Penyehatan Lingkungan Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia.

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2012. Pedoman Nasional

Penanggulangan Tuberkulosis, Cetakan ke-8, Jakarta : Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia
 38

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2012. Petunjuk Teknis Tata

LaksanaKlinis Ko-Infeksi TB-HIV. Jakarta: Direktoral Jendral
Pengendalian Penyakit dan Penyehatan Lingkungan Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia.

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2015. Standar

PelayananLaboratorium Tuberkulosis. Jakarta: Kementerian Kesehatan
Republik Indonesia.

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2016. Petunjuk Teknis

Manajemendan Tata Laksana TB Anak. Jakarta: Direktoral Jendral
Pencegahan dan Pengendalian Penyakit Kementerian Kesehatan
Republik Indonesia.

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2016. Petunjuk Teknis Penemuan

Pasien TB-DM Di Fasilitas Kesehatan Rujukan Tingkat Lanjut. Jakarta:
Direktoral Jendral Pencegahan dan Pengendalian Penyakit Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia.

Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2017. Petunjuk Teknis

PemeriksaanTB Menggunakan Tes Cepat Molekuler. Jakarta:
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.

Latifah Imas. 2013. Pemantapan Mutu Internal (PMI) Dan Eksternal (PME) Pada
Pemeriksaan Mycobacterium Tuberculosis Di Puskesmas Kecamatan
Wilayah Jakarta Barat. Jurnal Ilmu Kesehatan, 8(1); Januari 2016.
Fakultas Kesehatan Universitas MH Thamrin

Naim Nurlia, 2018. Performa Tes Cepat Molekuler Dalam Diagnosa

Tuberkulosis Di Balai Besar Kesehatan Paru Masyarakat Makassar.
Jurnal Media Analis Kesehatan, Vol. 9, No.2, November 2018

Naim, Nurlia & Novi D. 2018. Performa Tes Cepat Molekuler dalam Diagnosa
Tuberkulosis di Balai Besar Kesehatan Paru Masyarakat Makasar. Jurnal
Media Media Analis Kesehatan, 9 (2), 113.

Notoatmojo, 2010. Metodologi Penelitian Kesehatan, Jakarta. Rineka Cipta.

Staf Pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, 1993.

MikrobiologiKedokteran, Jakarta: Binarupa Aksara.

Sudoyo, Aru W. 2014 Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Jilid II Edisi VI, Jakarta:
Interna Publising.

Susanti S, Kountul C & Buntuan V. 2013. Pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA)
Pada Sputum Penderita Batuk lebih dari 2 Minggu di Poliklinik Penyakit
Dalam BLU RSUP. Prof. Dr.R.D Kandou Manado. Jurnal e-Clinic (Eci),
1 (1).
 39

Lampiran 1

SURAT IJIN PENELITIAN

 40

Lampiran 2

HASIL PENELITIAN

Jenis BTA metode Pemeriksaan Dahak

No. Kode Sampel Usia
Kelamin Ziehl Nellsen Metode TCM
1 0015 32 P Neg Neg
2 0018 18 L Neg Neg
3 0019 44 L Neg Neg
4 0022 74 L 1+ 1+
5 0023 66 L Neg Neg
6 0024 69 L Neg Neg
7 0027 61 L Neg Neg
8 0028 44 P Neg Scanty
9 0029 66 P Neg Neg
10 0030 45 P Neg Neg
11 0031 29 P Neg Neg
12 0032 52 P Neg Neg
13 0033 68 L 1+ 2+
14 0034 51 L 3+ 3+
15 0035 50 P 1+ 2+
16 0037 35 P Scanty Scanty
17 0036 53 L Neg Neg
18 0038 40 P Neg Neg
19 0040 54 P 1+ 1+
20 0042 47 L Neg Neg
21 0046 45 L Neg Neg
22 0047 50 P Neg Neg
23 0048 8 L Neg Neg
24 0049 61 L Neg Neg
25 0050 27 P Neg Neg
26 0051 25 P Neg Neg
27 0052 25 L Neg Neg
28 0053 49 L Neg Neg
29 0054 58 L Neg Neg
30 0057 69 P Neg Neg
 41

Lampiran 3

ANALISA DATA

Wilcoxon Signed Ranks Test

Ranks

N Mean Rank Sum of Ranks

TCM - ZN Negative Ranks 0a .00 .00
Positive Ranks 3b 2.00 6.00
Ties 27c
Total 30
a. TCM < ZN
b. TCM > ZN
c. TCM = ZN

Test Statisticsb

TCM - ZN
Z -1.732a
Asymp. Sig. (2-tailed) .083
a. Based on negative ranks.
b. Wilcoxon Signed Ranks Test
 42

Lampiran 4

NOTA PERSETUJUAN SIDANG

PEMBIMBING 1

PEMBIMBING 2
 43

BERITAACARA REVISI PERBAIKAN

LEMBAR REVISI UJIAN KRYA TULIS AILMIAH

NAMA : CHRISNAWATI
NIM : P27827019007
JUDUL KTI : Perbedaan Hasil Pewarnaan Bakteri Tahan Asam dengan TCM
pada pasien suspek TB paru di Puskesmas Srengat Kabupaten
Blitar

No Dosen Penguji Kalimat Revisi / Tanda

Perbaikan Tangan

1 Drh.Diah Titik M,M.Kes Tidak Ada Revisi

2 Indah Lestari,SE,S.Si,M.Kes Revisi Daftar Pustaka

- Spasi diperbaiki

3 Suliati ,Spd,S.Si,M.Kes Revisi Bab I

- Manfaat Penelitan
ditambah Manfaat
bagi ATLM