MAKALAH

PERBANDINGAN SITOGENETIKA DAN KARIOTIPE MOLEKULER

UNTUK PENGUJIAN KROMOSOM SPESIMEN KEGUGURAN

DOSEN PENGAMPU : Dr. Ocktariyana, SST, M. Kes

Kelompok 3 :

1. Anisa Triani (PO.71.34.1.20.016)

2. Anisa Zanaty Yami Fama
3. Bella Adelia Adelia
4. Dea Fitri Annisa
5. Della yuliantizar
6. Dwi Fahmi Fadhil
7. Eicha Reabylly Aiesyah
8. Junialita
9. Muthia Nur Hafizah
10. Ruwina Wulandari
11. Rida Mutia
12. Tiara Sari
(PO.71.34.1.20.047)
(PO.71.34.1.20.044)
(PO.71.34.1.20.042)
(PO.71.34.1.20.008)
(PO.71.34.1.20.068)
(PO.71.34.1.20.069)
(PO.71.34.1.20.001)
(PO.71.34.1.20.049)
(PO.71.34.1.20.061)
(PO.71.34.1.20.027)
(PO.71.34.1.20.033)

POLTEKKES KEMENKES PALEMBANG

JURUSAN TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

TAHUN AKADEMIK 2021/2022

 KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh

Segala puji syukur kami panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa. Atas rahmat dan
karunia-Nya, kami dapat menyelesaikan tugas penulisan makalah mata kuliah
Biologi Sel dan Molekuler tepat waktu. Tidak lupa shalawat serta salam tercurah
kepada Rasulullah SAW yang syafa’atnya kita nantikan kelak.

Penulisan makalah berjudul “Perbandingan Sitogenetika dan Kariotipe Molekuler

Untuk Pengujian Kromosom Spesimen Keguguran” dapat diselesaikan karena
bantuan banyak pihak. Kami berharap makalah ini dapat bermanfaat bagi pembaca.

Kami menyadari makalah ini masih memerlukan penyempurnaan, terutama pada

bagian isi. Kami menerima segala bentuk kritik dan saran pembaca demi
penyempurnaan makalah. Apabila terdapat banyak kesalahan pada makalah ini,
kami memohon maaf.

Demikian yang dapat kami sampaikan. Akhir kata, semoga makalah bahasa
Indonesia ini dapat bermanfaat.

Wassalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh

Palembang, 12 Desember 2021

Kelompok 3

ii
 DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ............................................................................................ ii
DAFTAR ISI .......................................................................................................... iii
BAB 1 PENDAHULUAN
A. Latar Belakang................................................................................................1
B. Rumusan Masalah ..........................................................................................2
C. Tujuan .............................................................................................................2
BAB 1I PEMBAHASAN
A. Pengertian Sitogenetika ..................................................................................3
B. Pengertian Kariotipe .......................................................................................3
C. Pengertian Kromosom dan Fungsi Kromosom ..............................................4
D. Struktur Kromosom ........................................................................................5
E. Jenis Kromosom .............................................................................................6
F. Kromosom Analis ...........................................................................................8
G. Bahan dan Metode ........................................................................................14
BAB III PENUTUP
A. Kesimpulan ...................................................................................................17
B. Saran .............................................................................................................17
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................18

iii
 BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Sitogenetika adalah studi tentang jumlah dan struktur kromosom menggunakan
analisis mikroskopis. Ada berbagai teknik yang dilakukan dalam analisis
sitogenetik diantaranya Karyotyping, Hibridisasi fluoresensi in situ (IKAN), dan
Hibridisasi genomik komparatif berbasis array. Studi sitogenetik mengungkapkan
perbedaan dalam jumlah dan struktur kromosom. Analisis sitogenetik biasanya
dilakukan selama kehamilan untuk menentukan apakah janin aman dengan anomali
kromosom. Sel manusia normal mengandung 22 pasang kromosom autosom dan
satu pasang kromosom seks (total 46 kromosom).
Sedangkan Kariotipe adalah fenotip dari kromosom yang meliputi gambaran
struktural kromosom, antara lain jumlah, bentuk, posisi sentromer, penyebaran
eukromatin dan heterokromatin serta ukuran satelit, kromosom tersebut kemudian
disusun berdasarkan pasangan kromosom yang homolog dan diurut berdasarkan
ukuran kromosom dan posisi sentromernya dari yang paling panjang sampai yang
paling pendek. Kariotipe kromosom digunakan untuk meneliti struktur kromosom
pada seseorang untuk memastikan bila terdapat penyakit genetik yang terkait
dengan kromosom.
Aborsi spontan terjadi pada 10% hingga 15% dari semua kehamilan yang diakui
secara klinis. Abnormalitas kromosom menyebabkan 65% hingga 70% keguguran,
dari trisomi autosomal mana yang paling umum. Satu studi menemukan hanya 8%
dari keguguran trimester pertama yang menjalani analisis kromosom, tetapi
mayoritas pasangan menginginkan tes. Hasil ini sering memberikan penjelasan
untuk keguguran dan membantu pasangan mengatasi aspek emosional dari
keguguran. Selanjutnya, pengujian kromosom pada wanita dengan keguguran
berulang menawarkan penghematan biaya dengan mengurangi kebutuhan untuk
studi investigasi lain untuk mengidentifikasi penyebab lain. Standar emas pengujian
POC saat ini adalah dengan kariotipe metafase, yang biasanya dilakukan oleh
departemen sitogenetika di setiap lembaga. Namun, metode ini memiliki
keterbatasan praktis, termasuk keandalan kultur sel yang berhasil dengan tingkat

1
kegagalan berkisar antara 10% hingga 40%. Hasil sitogenetik 46,XX, yang terjadi
pada 55% hingga 80% kasus, tidak dapat mengecualikan adanya kontaminasi sel
ibu (MCC).
Selain itu, budaya yang berkepanjangan dapat menyebabkan artefak budaya,
yang dapat menghasilkan hasil yang tidak akurat. Akhirnya, karena resolusi pita
metode ini, penghapusan dan duplikasi submikroskopik, biasanya kurang dari 5
Mb, tidak dapat dideteksi. Metode molekuler yang lebih baru telah menawarkan
teknik baru untuk menganalisis spesimen keguguran. Ini termasuk mikroarray
polimorfisme nukleotida tunggal (SNP) dan hibridisasi genomik komparatif array
(aCGH). Teknologi ini menawarkan hasil yang lebih cepat dengan resolusi yang
lebih tinggi dan kebutuhan jaringan yang minimal. Pasien juga dapat mengirim
sampel mereka yang dikumpulkan di rumah dalam waktu 7 hingga 14 hari setelah
jaringan lewat. Selain itu, platform molekuler dapat mendeteksi MCC dan dapat
diterapkan pada jaringan yang disimpan dalam blok parafin dari keguguran
sebelumnya. Sampai saat ini, belum ada penelitian yang membandingkan ketiga
modalitas tersebut secara head to head.

B. Rumusan Masalah
1. Bagaimana bentuk perbandingan dari pengujian kromosom spesimen
keguguran antara sitogenetik tradisional dan kariotipe molekuler dengan
menggunakan SNP (mikroarray polimorfisme nukleotida tunggal) dan aCGH
(hibridisasi genomik komparatif array) ?

C. Tujuan
1. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi metode terbaik untuk
pengujian kromosom spesimen keguguran dengan membandingkan hasil dari
sitogenetika, susunan SNP, dan platform aCGH.
2. Untuk membandingkan pengujian kromosom spesimen keguguran antara
analisis sitogenetik tradisional dan kariotipe molekuler menggunakan
mikroarray polimorfisme nukleotida tunggal (SNP) dan hibridisasi genomik
komparatif array (aCGH).

2
 BAB II
PEMBAHASAN

A. Pengertian Sitogenetika
Cytogenetics adalah gabungan antara cytology (studi tentang sel) dan genetika,
menjelaskan hubungan dalam antara yang berusaha kejadian - kejadian di sel
(khususnya kromosom) dengan fenomena genetis. Lebih jelasnya, cytology adalah
cabang ilmu biologi yang membicarakan tentang besar (ukuran), struktur dan
riwayat hidup kromosom, sedangkan cytogenetics adalah studi tentang struktur
kromosom dan tingkah laku kromosom selama proses mitosis dan meiosis.
Sitogenetika merupakan cabang genetika yang berhubungan dengan struktur dan
fungsi sel. Ini termasuk studi tentang kromosom, pita kromosom, kariotipe, dan
pembelahan sel, terutama meiosis. Studi sitogenetik juga telah digunakan untuk
mempelajari evolusi pada populasi alami. Sitogenetika ialah studi tentang struktur,
lokasi, dan fungsi kromosom dalam sel. Ini termasuk studi tentang jumlah dan
penampilan kromosom (karyotyping), lokasi fisik gen pada kromosom, dan
perilaku kromosom dalam proses seperti pembelahan sel.

B. Pengertian Kariotipe
Kariotipe ialah metode atau cara untuk pengorganisasian kromosom suatu sel
dalam kaitanya dengan jumlah, ukuran dan jenis. Kariotipe bermanfaat untuk
mengidentifikasi abnormalitas tertentu dari kromosom. Teknisi medis biasanya
mempersiapkan kariotipe dengan menggunakan komponen darah berupa Leukosit
(sel darahputih).
Cara Pembuatan Kariotipe; Penemuan penting dan sangat populer saat ini ialah
dengan pembuatan kultur jaringan. Mula-mula diambil 5 cc darah vena. Sel-sel
darah dipisahkan, kemudian dibubuhkan pada medium kultur yang mengandung zat
phytohaemagglutinin (PHA). Zat ini didapat dari ekstrak biji kacang merah
Pheseolus vulgaris dan mempunyai fungsi sangat penting, yaitu,

(a) Menyebabkan sel-sel darah merah menggumpal sehingga mudah

memisahkannya dari sel-sel darah putih,

3
(b) Memacu sel-sel darah putih untuk membelah. Kemudian sel-sel lekosit
dipelihara dalam keadaan steril pada temperature 37°C untuk kira-kira 3 hari.
Dalam waktu ini sel-sel membelah dan dibubuhkan zat kolkhisin sedikit.
Kolkhisin adalah suatu alkaloida yang didapatkan dari umbi tanaman
Colchicumautonnale, yang mempunyai pengaruh unik, yaitu meniadakan
pembentukan gelendong inti dan menghentikan pembelahan mitosis pada
stadium metaphase, ialah pada saatnya kromosom mengalami kontraksi
maksimal dan nampak paling jelas. Kira-kira satu jam kemudian, ditambahkan
larutan hipotonik salin, sehingga sel-sel membesar dan kromosom-kromosom
menyebar letaknya. Akibatnya kromosom-kromosom dapat di hitung dan dapat
dibedakan satu dengan lainnya. Langkah berikutnya ialah memotret
kromosom-kromosomyang letaknya sudah tersebar itu dengan sebuah kamera
yang dipasang pada mikroskop. Kemudian tiap-tiap kromosom pada foto itu
digunting, diatur dalam pasangan-pasangan mulai dari yang paling besar ke
yang paling kecil, sehingga didapatkan 22 pasang autosom dan sepasang
kromosom kelamin. Pengaturan kromosom secara standar berdasarkan
panjang, jumlah serta bentuk kromosom dari sel somatis suatu individu
dinamkan kariotipe.

C. Pengertian Kromosom dan Fungsi Kromosom

1. Pengertian kromosom
Istilah kromosom diberikan untuk pertama kalinya oleh Weyder pada tahun
1882 untuk benda-benda halus berbentuk benang panjang atau pendek yang
dapat dilihat di dalam nukleus. Kromosom ikut membelah pada waktu
pembelahan inti berlangsung lebih dahulu diketahui oleh Schneider pada tahun
1873 dan Strasburger di tahun 1875, yang dikuatkan oleh Flemming pada tahun
1882 serta Van Beneden di tahun 1883 yang melihat bahwa setiap kromosom
ikut membelah secara longitudinal di waktu pembelahan inti. Selanjutnya Rabl
dan Boveri di tahun 1885 berpendapat bahwa tiap-tiap spesies memiliki jumlah
kromosom yang tetap dan bahwa ada hubungan antara kromosom dan gen-gen
yakni gen-gen terdapat dalam kromosom.
Kromosom ini ialah suatu unit genetik yang juga ada di dalam seluruh inti sel di
semua makhluk hidup. kromosom ini akan berbentuk sua deret panjar molekul yang

4
disusun oleh adanya DNA atau juga protein-protein.Tiap-tiap sel itu terdiri atas 3
bagian utama, diantaranya nukleus. Sitoplasma, atau juga Membran pelindung sel.
Di dalam nukleus, terdapat juga benang-benang halus yang sering disebut dengan
'kromatid', jika terjadi pembelahan sel, maka benang benang halus tersebut akan
dipintal membentuk suatu kromosom. Seperti yang saya jelaskan di atas,
Kromosom tersebut merupakan suatu struktur padat yang terdiri atas 2 (dua)
komponen molekul, diantaranya protein atau DNA. Struktur pada kromosom
tersebut hanya akan terlihat jelas pada metafase pembelahan sel 2. Fungsi
Kromoson. Berikut ini adalah fungsi kromosom yaitu :
1. Fungsi utamanya adalah untuk menyimpan materi genetik. Materi genetik inilah
yang akan menentukan sifat dan kekhasan setiap individu.
2. Menentukan jenis kelamin. Terdapat dua jenis kromosom yaitu X dan Y.
Apabila kromosom embrio XX, maka ia akan terlahir sebagai seorang
perempuan. Sedangkan jika kromosomnya XY maka ia terlahir sebagai laki-laki.
3. Berperan penting dalam proses transkripsi DNA untuk melakukan sintesis
protein. Ini dikarenakan kromosomlah yang membawa materi genetik seperti
DNA.
4. Berperan dalam proses pembelahan sel dan memastikan masing - masing sel
yang telah membelah mendapatkan gen yang sama.

D. Struktur kromosom
Berikut ini contoh gambar struktur kromosom:
• Kromatid
Kromatid adalah bagian dari kromosom yeng berupa lengan yang saling
berkaitan antara satu dengan yang lainnya. Yang mengikat kedua kromatid
disebut Sentromer.

• Sentromer
Sentromer adalah pengikat dua kromatid kembar Sentromer merupakan
daerah yang mengerut pada saat proses mitosis dan meiosis.

• Kromomer
Kromomer adalah penebalan yang terjadi pada kromonema

5
 • Kinektokor
Didalam sentromer terdapat mikrotubulus yang teedin dari struktur benang-
benang halus. Pada sentromer terdapat kinektokor, kinektokor adalah struktur
yang menjadi tempat meleka mikrotubulus.

• Satelit
Satelit adalah bagian dari kromosom yang berbentuk bulat yang terletak di
ujung kromati. Satelit yang terdapat dalam kromosom bukan termasuk satelit
luar angkasa akan tetapi satelit yang merupakan bagian dari kromosom.

• Telomer
Telomer adalah bagian paling ujung yeng terdapat dalam kromosom. fungsi
telomer adalah menjaga stabilitas bagian ujung kromosom dan menjaga DNA
supaya tidak terurai.

E. Jenis Kromosom
Ada beberapa jenis utama kromosom antara lain yaitu:
• Kromosom Metasentrik.
Kromosom metasentrik memiliki sentromer di tengah, yang sehingga kedua
bagian yang panjang yang sama Kromosom Submetasentrik.
• Kromosom Akrosentrik
• Kromosom Telosentrik

Berdasarkan fungsinya, kromosom dibedakan menjadi 2 tipe yaitu autosom dan

gonosom.
1) autosom, yaitu kromosom yang menentukan ciri-ciri tubuh.
2) gonosom, yaitu kromosom yang menentukan jenis kelamin pada individu jantan
atau betina. Beberapa kelainan kromosom disebabkan oleh perubahan jumlah
kromosom.

Perubahan ini tidak genetik, tetapi terjadi secara acak selama pembentukan sel
reproduksi (telur dan sperma). Kesalahan dalam pembelahan sel yang

6
disebut nondisjunction menghasilkan sel reproduksi dengan jumlah kromosom
yang tidak normal.

Misalnya, sel reproduksi mungkin secara tidak sengaja mendapatkan atau

kehilangan satu salinan kromosom. Jika salah satu dari sel reproduksi atipikal ini
berkontribusi pada susunan genetik seorang anak, anak tersebut akan memiliki
kromosom ekstra atau hilang di setiap sel tubuh. Meskipun ada kemungkinan
genetik untuk beberapa jenis kelainan kromosom, sebagian besar kelainan
kromosom (seperti Down Syndrome atau Turner Syndrome) tidak diturunkan dari
satu generasi ke generasi berikutnya.

Kelainan kromosom bisa disebabkan oleh kesalahan pada saat fase pembelahan
sel tahap awal ketika pembuahan yang bisa menyebabkan kromosom janin bisa
memiliki kromosom ekstra (trisomi) atau kehilangan kromosom (monosomi).

Salah satu kelainan kromosom yang paling terkenal adalah Down Syndrome.
Sebab, kelainan ini disebabkan oleh janin yang ketika terbentuk, memiliki 47
kromosom.

Namun, kelainan kromosom lebih banyak menyebabkan keguguran. Bahkan,

tercatat 50% keguguran di awal kehamilan disebabkan oleh kelainan kromosom.

Berikut beberapa penyebab kelainan kromosom:

• Keturunan dari ayah atau ibu yang membawa sifat kelainan kromosom.
• Kelainan dari sperma ataupun kualitas sel telur yang membawa sifat genetik
tidak sempurna.
• Faktor usia, misalnya hamil pada usia lebih dari 40 tahun.
• Gangguan proses pembelahan sel di tahap awal kehidupan.

Terdapat beberapa alternatif tes diagnosis untuk memastikan apakah bayi

berpotensi mengalami kelainan tertentu seperti kelaianan kromoson, antara lain:
• Amniosentesis
Amniosentesis adalah pemeriksaan kelainan kromosom bayi dengan
pengambilan sampel cairan ketuban. Pemeriksaan yang dilakukan saat usia
kehamilan sekitar 16-20 minggu ini memiliki tingkat keakuratan 99 persen

7
 dalam mendeteksi hampir semua jenis kelainan kromosom, seperti sindrom
Down dan sindrom Turner.

• Deteksi AFP
Dengan mendeteksi kadar alpha-fetoprotein (AFP) di dalam cairan ketuban,
dapat juga diketahui keberadaan cacat tabung saraf pada bayi. Amniosentesis
yang dilakukan pada trimester kedua, membawa sedikit risiko keguguran, yakni
sekitar 0,6%. Risiko ini akan lebih tinggi terjadi, jika amniosentesis dilakukan
sebelum 15 minggu kehamilan (trimester pertama).

• Chorionic villus sampling (CVS)

Chorionic villus merupakan bagian dari plasenta di mana terdapat perbatasan
antara jaringan pembuluh darah ibu dan janin. Komposisi genetika yang terdapat
di sel-sel chorionic villus sama dengan komposisi genetika sel-sel janin. CVS
adalah tes yang dapat menemukan masalah tertentu pada janin mama, hal ini
termasuk penyakit pada kelainan genetik dan kelainan kromosom. Biasanya, tes
ini dilakukan pada awal kehamilan, yakni minggu ke-10 dan ke-12. CVS
dilakukan dengan mengambil sampel sel chorionic villus y.

F. Kromosom Analis
Analisis kromosom disebut juga Kariotipe, Sitogenetik, Analisis
Sitogenetik,Kariotipe kromosom. Analisis Kromosom atau kariotipe tes adalah
sebuah tes yang mengevaluasi jumlah dan struktur kromosom seseorang untuk
mendeteksi keabnormalan genetik yang menyebabkan suatu penyakit. Kromosom
memiliki struktur seperti benang disetiap inti sel dan mengandung informasi
genetic. Setiap kromosom mengandung ribuan gendi lokasi tertentu. Gen ini
bertanggung jawab atas karakteristik seseorang yang diwariskan dan memiliki
dampak besar pada pertumbuhan, perkembangan, dan fungsi.Manusia memilki 46
kromosom, yang terdiri dari 22 pasang kromosom tubuh (kromosom 1 s.d
kromosom 22 ditemukan di kedua seks) dan 1 pasang kromosom seks berupa XY
(pada laki-laki) atau XX (pada perempuan). Pada umumnya, semua sel
didalamtubuh yang memiliki nukleus akan mengandung 1 set lengkap dari 46
kromosom yang sama,kecuali untuk sel-sel reproduksi (telur dansperma), yang

8
mengandung setengah set dari 23.Setengah set ini adalah kontribusi genetic yang
akan diturunkan kepada seorang anak.
Saat pembuahan, setengah set dari masing-masing orang tua bergabung untuk
membentuk pasangan dari 46 kromosom baru di janin yang sedang
berkembang.Kelainan kromosom mencakup perubahan numerik dan struktural.
Untuk perubahan numerik, bertambahnya atau menghilangnya kromosom dari
jumlah kromosom normal. Untuk perubahan structural, terjadinya pemutusan
kromosom yang menyebabkan bentuk kromosom berubah. Signifikansi masalah
dan tingkat keparahannya tergantung pada kromosom yang berubah. Kariotipe tes
memeriksa kromosom seseorang untuk menentukan apakah jumlah dan bentuk
yang ada pada setiap kromosom tampak normal. Secara teoritis, hamper semua
seldapat digunakan untuk melakukan pengujian. Pada umumnya digunakannya
cairan amniotic untuk mengevaluasi janin dan limfosit (sel darah putih) dari sampel
darah putih yangdiperoleh dari sumsum tulang untuk mencari perubahan pada
individu yang dicurigai memiliki penyakit hematologi atau limfoid (misalnya,
leukemia, limfoma, myeloma, anemiarefrakter).
Manfaat analisis kromosom :
• Dapat menunjukkan keabnormalan kromosom.
• Dapat membantu diagnosis atau rencana pengobatan penyakit.
• Mengetahui resiko penyakit yang mungkin diturunkan berkembang.
• Mengetahui apakah seseorang membawa gen penyakit yang mungkin diturunkan
• Mengetahui apakah bayi yang belum dilahirkan mungkin membawa kelainan
genetik.
• Dapat mendiagnosis kelainan genetik pada bayi yang baru lahir.
• Mengetahhui mengapa seseorang memiliki masalah untuk hamil.
• Mengetahui mengapa mengalami keguguran, atau kehilangan bayi sebelum
dilahirkan. dengan cara :
• Mengambil sampel sel seseorang, membiakkannya sel dalam media yang
diperkayadengan nutrisi dan dihentikan pada tahap metafase karena pada fase
ini kromosom paling mudah dibedakan
• Mengisolasi kromosom dari sel nucleus, menempatkannya paada slide
danmemberikan pewarnaan

9
 • Mengambil mikrofotografi dari kromosom.

Dalam teka-teki jigsaw, menyusun ulang gambar kromsom untuk menyesuaikan

dengan pasangan dan mengaturnya berdasarkan ukuran, dari yang terbesar hingga
yang terkecil, angka 1 hingga 22, diikuti oleh kromosom seks sebagai pasangan ke-
23.

Gambar-gambar juga memungkinkan kromosom menjadi berorientasi vertical.

Setiap kromsom tampak seperti jerami bergaris. Memiliki dua lengan yang
panjangnya berbeda (lengan pendek (p) dan lengan panjang (q)), daerah terjepit
diantara lengandisebut sentromer, dan serangkaian untai horizontal terang dan
gelap. Panjang lengandan lokasi pita membantu menentukan bagian atas dan
bawah. Setelah pengaturan foto kromosom selesai, spesialis laborarium
mengevaluasi pasangan kromosom dan mengidentifikasi setiap kelainan yang
mungkin ada.

Cara pengumpulan sampel

• Sampel darah diperoleh dengan cara memasukkan jarum ke pembuluh darah
lengan
• Cairan amniotik (amniotic fluid) dan villi korionik (chorionic vili) dikumpulkan
dariseorang wanita hamil menggunakan prosedur amniocentesis atau chorionic
villus.
• Koleksi sampel sumsum tulang atau jaringan memerlukan prosedur biopsi.

Amniotic fluid analysis

Cairan amniotik adalah cairan ketuban yang mengelilingi, melindungi, dan
memelihara janin yang sedang tumbuh selama kehamilan. Analisis cairan amniotic
melibatnkan berbagai tes yang dapat dilakukan untuk mengevaluasi kesehatan
janin. Cairan ketuban memungkinkan janin untuk bergerak relatif bebas di dalam
rahim, menjaga agar tali pusat tidak dikompresi, dan membantu mempertahankan
suhu yang stabil. Cairan amnion terkandung dalam kantung ketuban dan biasanya
cairan berwarna kuning pucat yang mengandung protein, nutrisi, hormon, dan
antibodi. Cairan ketuban mulai terbentuk satu sampai dua minggu setelah
pembuahan dan peningkatan volume sampai ada sekitar satu liter pada 36 minggu

10
kehamilan. Cairan diserapdan terus diperbarui. Janin menelan dan menghirup
cairan ketuban dan melepaskannya sebagai urin. Jumlah cairan amniotik meningkat
seiring waktu dan terus-menerus diserap dan diperbaharui. Selama proses sirkulasi
ini, sel-sel dari berbagai bagian tubuh janin terbawa kedalam cairan, dan bahan
kimia yang dihasilkan oleh janin juga hadir.
Inilah sebabnya mengapa sampel cairan dapat diuji untuk mengevaluasi
kesehatan janin. kemajuan dalam teknologi pengujian dan peningkatan pilihan
skrining prenatal,khususnya skrining pranatal non-invasif (NIPS), telah
menyebabkan penurunan dalam penggunaan tes diagnostik seperti amniosentesis.
NIPS menyaring sampel darah dari Wanita hamil untuk fragmen DNA bebas sel
(cfDNA) yang diproduksi oleh plasenta. Ini biasanya menyaring kelainan
kromosom tertentu, termasuk sindrom Down (trisomi 21), sindromEdwards
(trisomi 18), dan sindrom Patau (trisomi 13), dan dapat dilakukan sedini minggu
ke10 kehamilan. Namun, pada saat ini, tes diagnostik "invasif" seperti
amniosentesis dan chorionic villus sampling (CVS) masih diperlukan untuk
mengkonfirmasi hasil tes skrining prenatal positif atau untuk menguji kondisi yang
tidak dicakup oleh tes skrining.
Teknik High-Resolution metaphase banding Teknik banding resolusi tinggi
dapat mendeteksi penyusunan ulang kromosom bahkan di dalam pita-pita besar.
Kromosom-kromosom yang telah dipersiapkan untuk studi-studi mikroskopis
cahaya dari metafase utuh dari lempengan adalah struktur yang sangat dimodifikasi
dibandingkan dengan kromosom asli, dan daya tarik resolusi tinggi dari metode-
metode berikut ini distandarkan dan digabungkan. Penggunaan kolitis, yang
merupakan pembentukan spindel dan mengumpulkan sel di perbatasan anafase
metafase, secara rutin digunakan untuk persiapan kromosom. Untuk studi banding
resolusi tinggi, waktu paparan singkat dan konsentrasi dekat nilai ambang batas
telah direkomendasikan. Beberapa agen mengganggu proses kontraksi kromosom,
tetapi hanya sedikit yang memiliki pengaruh jangka panjang pada studi high-
resolution metaphase banding.
Agen yang paling banyak digunakan adalah ethidium bromide, actinomycin D,
dan Hoechst 33258, yang semuanya menghambat sebagian kontraksi kromosom.
Pengobatan dengan larutan hipotonik menginduksi pembengkakan sel-sel hewan,

11
dan metanol dalam denaturasi fiksatif dan mengendapkan protein melalui dehidrasi.
Asam asetat mengkoagulasi nukleoprotein dan menyebabkan pembengkakan sel.
Fiksatif menembus sel dengan cepat dan mempertahankan struktur kromosom.
Untuk mendapatkan kromosom tersegmentasi panjang yang cocok untuk
pengobatan hipotonik dengan resolusi tinggi dengan 0,75 M KCl, sering terjadi
perubahan fiksatif dan fiksasi semalam pada 4 derajat C. Penggabungan 5-
bromodeoxyuridine ke DNA,dan fluorochrome-fotolysis Giemsa (FPG) - noda
telah meningkatkan kualitas daya tarikresolusi tinggi. Teknik sinkronisasi, yang
memilih populasi limfosit di divisi awal, menyediakan bahan yang sangat baik
untuk persiapan kromosom dan menginduksi daya tarikresolusi tinggi.
Teknik banding tampaknya meningkatkan perbedaan yang sudah ada
dalamkromosom, dan pewarnaan Giemsa diferensial baru-baru ini dijelaskan oleh
interaksi antarakompleks pewarna hidrofobik, heliks DNA supercoiled, dan inti
histone yang terdenaturasidari nukleosom.
Macam-macam tipe banding kromosom:
1. G-Banding
Teknik yang digunakan dalam sitogenetik untuk menghasilkan kariotipe
yangterlihat dengan pewarnaan kromosom. Berguna untuk mengidentifikasi
penyakitgenetic melalui representasi fotografi dari seluruh kromosom
komplemen. G-banding diperoleh dengan pewarnaan Giemsa diikuti disgesti
kromosom dengan enzin tripsin. G-Banding menghasilkan serangkaian noda
pewarnaan gelap dan terang. Daerah gelap cenderung kental menjadi
Heterocromatic, yang kaya dengan adeninedan timin DNA. Daerah yang terang
cenderung kurang kental menjadi euchromatic, yang kaya akan guanine dan
sitosin. Pola pita diberi nomor pada setiap lengankromosom dari sentromer ke
telomere. Sistem penomoran ini memungkinkan setiap pita pada kromosom
diidentifikasi dan digambarkan dengan tepat. Semakin sedikit kental kromosom,
semakin banyak band muncul ketika G-banding. Ini berarti bahwa banyak
kromosom yang berbeda lebih jelas dalam profase daripada metafase.

2. Q-Banding
Pewarna fluoresens untuk kromosom yang menghasilkan pola pita
spesifikuntuk setiap pasangan kromosom homolog; acridine dye derivative

12
quinacrinehydrochloride atau turunan lain seperti quinacrine mustard
dihidroklorida menghasilkan fluoresensi hijau-kuning pada pH 4,5 di segmen
kromosom yang kayakonstitutive heterochromatin dengan deoxyadenylate
deoxythymidilate (A-T) basa DNA; daerah sentromerik kromosom manusia 3,
4, dan 13 secara khusus diwarnai,seperti juga satelit dari beberapa kromosom
akrosentrik dan ujung lengan Panjang kromosom Y.

3. R-Banding
R-Banding adalah kebalikan dari G-Banding. Bagian yang gelap
merupakaneuchromatic (kaya guanine – sitosin) dan bagian yang terang
merupakan heterochromatic (kaya timin – adenin). R - banding membutuhkan
perlakuan panas dan kesalahan yang diperoleh untuk IKAN-24 tidak tergantung
pada jumlah kromosom yang dianalisis dan setara dengan tingkat kesalahan yang
diamati untuk FISH-9,sebagai alat yang berguna untuk studi segregasi
kromosom dan penggunaan klinis. membalikkan pola putih dan hitam yang biasa
terlihat di G - banding.Metode Florescent in situ hybridization (FISH)
Fluorescence in situ Hibridisasi (FISH) melibatkan persiapan dua komponen
utama: probe DNA dan DNA target yang mana probe akan hibridisasi. Probe
DNA biasanya berasaldari sumber kloning seperti plasmid, cosmid, PAC, YAC,
atau BAC; di mana mungkin mengandung gen spesifik atau berasal dari lokus
kromosom spesifik.
Pewarnaan seluruh kromosom juga dapat digunakan tetapi biasanya berlaku
untuk persiapan metafase. DNA yang dimurnikan kemudian dapat diberi label
dan dideteksi secara tidak langsung menggunakan haptens, atau diberi label
langsung menggunakan fluorochrome atau pewarna nukleotida terkonjugasi.
Strategi pelabelan juga bervariasi, menggunakan standar terjemahan nick atau
metode pelabelanPCR. DNA target dapat mengambil bentuk kromosom
menyebar atauintinya interphase. Sumber-sumber target interfase bisa berasal
dari persiapan sitogenetika atau dari jaringan yang tertanam parafin. Baik probe
DNA berlabel dan target DNA didenaturasi ke keadaan single-stranded dan
diizinkan untuk hibridisasi satu sama lain. Pencucian pasca hibridisasi dan
inkubasi antibodi berlabel fluorescently mengikuti hibridisasi 24 jam, dan
spesimen siap untuk visualisasi dengan mikroskop fluorescent. Interpretasi yang

13
 berhasil dari percobaan FISHtergantung pada kualitas bahan awal, efisiensi
hibridisasi, dan kekakuan mencuci pasca-hibridisasi dan deteksi antibodi.

G. Bahan dan Metode

Kami melakukan studi prospektif buta pada kesehatan reproduksi akademik dan
praktik infertilitas. Studi ini telah disetujui oleh dewan peninjau kelembagaan
Universitas Stanford. Semua pasien yang menjalani dilatasi dan kuretase (D&C)
untuk kehilangan kehamilan intrauterin yang terdokumentasi pada trimester
pertama dari Maret 2014 hingga Desember 2015 memenuhi syarat. Persetujuan
lisan dan tertulis diperoleh dari semua pasien sebelum prosedur. Aborsi yang
terlewat didiagnosis dengan USG transvaginal dan dikonfirmasi dengan USG ulang
sebelum D&C. Prosedur dilakukan di bawah bimbingan ultrasound dengan cara
biasa menggunakan aspirasi vakum manual. POC dipisahkan untuk
mengidentifikasi vili korionik menggunakan teknik yang digunakan untuk
meminimalkan MCC(9). Jika vili korionik tidak dapat diidentifikasi dengan jelas,
pasien dikeluarkan dari penelitian. Setelah vili korionik dibersihkan, itu dipisahkan
menjadi tiga bagian yang sama dan dikirim untuk pengujian sitogenetik rutin,
pengujian susunan SNP, dan analisis aCGH. Sampel diberi label dengan nomor
deidentified yang unik. Sampel darah ibu juga diperoleh dan dikirim ke
laboratorium kariotipe molekuler untuk mendeteksi PKS dan sumber aneuploidi
orang tua; yang terakhir hanya diperoleh dengan metodologi array SNP. Setiap
laboratorium melaporkan hasil mereka ke lokasi penelitian dan tidak mengetahui
hasil dari modalitas pengujian lainnya.
Pengujian sitogenetik dilakukan oleh laboratorium referensi universitas
menggunakan kultur sel standar dan analisis dengan metode pita Giemsatrypsin-
wrights. Jaringan diperlakukan untuk menahan sel dalam metafase menggunakan
Giemsa untuk mewarnai pita di kromosom, menggunakan metode yang disebut
sebagai G-banding. Ketika dua kariotipe yang berbeda diidentifikasi oleh
sitogenetik,Netics, mosaikisme dikonfirmasi dengan mengidentifikasi kariotipe
yang sama dalam budaya independen yang terpisah.Pengujian molekuler dilakukan
oleh dua laboratorium terpisah untuk pengujian microarray SNP dan analisis aCGH.
Untuk pengujian susunan SNP, genotipe sampel ibu dan POC dilakukan di
laboratorium referensi komersial menggunakan mikroarray genotipe Illumina

14
CytoSNP-12, yang mengukur sekitar 300.000 SNP di seluruh genom (kira-kira satu
setiap 10 kb) sesuai dengan instruksi pabrik. Setelah sampel genomik dijalankan
pada susunan SNP, hasilnya harus lulus uji kontrol kualitas internal sebelum
analisis lebih lanjut dilakukan. Algoritma Parental Support kemudian digunakan
untuk menentukan jumlah dan asal masingmasing kromosom.

Singkatnya, rasio alel dihitung untuk setiap lokus di seluruh kromosom, dan
pengelompokan rasio alelmenunjukkan nomor salinan untuk kromosom itu; sampel
mosaik memiliki pola pengelompokan rasio alel yang berbeda. Hasil mosaik
kompleks tidak dapat dengan mudah ditentukan menggunakan rasio intensitas dan
biasanya dilaporkan sebagai mosaik monosomi/disomi atau mosaik trisomi/disomi.
Perbandingan identitas SNP antara data ibu dan POC digunakan untuk
mengidentifikasi PKS, asal orang tua dari aneuploidi dan segmen kromosom yang
tidak seimbang. Rincian tambahan mengenai platform pengujian ini dijelaskan oleh
Lathi et al.(10).aCGH dilakukan di laboratorium referensi komersial menggunakan
microarray (Illumina) kromosom buatan bakteri BlueGnome 24Sure. Jenis array ini
berisi sekitar 3.000 probe BAC yang mencakup sekitar 30% genom, dengan resolusi
5 Mb hingga 10 Mb. DNA pertama kali diekstraksi menggunakan kit Qiagen
standar. Amplifikasi dilakukan menggunakan AmpFlSTR Identifier Plus kits
(Promega) Penggunaan shorttandem repeat markers (STRs) ditambahkan ke
analisis untuk paruh kedua penelitian ini (sampel 31-60) untuk meningkatkan
deteksi kontaminasi sel ibu dan poliploidi . Pengulangan tandem pendek adalah
urutan berulang DNA yang dapat diukur untuk membandingkan lokus spesifik
DNA dari dua atau lebih sampel.

Kami menyertakan 15 penanda STR autosomal (D8S1179, D21S11, D7S820,

CSF1PO, D3S1358, TH01, D13S317, D16S539, D2S1338, Tingkat panggilan yang
benar ditentukan sebagai hasil yang sesuai dengan setidaknya satu platform
pengujian lainnya, kecuali jika hasilnya salah karena batasan bawaan yang
diketahui dari platform pengujian yang terdeteksi oleh platform ketiga. Misalnya,
dalam kasus kelainan struktural yang terdeteksi oleh sitogenetika (yaitu, tetraploidi
seimbang), hasil pengujian molekuler, meskipun sesuai, diberi label salah. Hasil
sumbang didefinisikan sebagai dua hasil yang tidak identik. Dalam hal hasil
sumbang antara hasil kariotipe molekuler atau hasil sumbang dari sitogenetika

15
yang tidak dijelaskan oleh keterbatasan teknis metode pengujian molekuler (yaitu,
tetraploidi seimbang, penataan ulang kromosom), alikuot DNA dari dua tes
molekuler ditukar untuk menganalisis ulang pada platform molekuler lainnya.
Jaringan dari analisis sitogenetika tidak tersedia untuk aspek penelitian ini.

Selama paruh kedua penelitian ini (sampel 31-60), sampel sumbang dan
pengambilan sampel acak dari sampel yang sesuai ditukar dan dibutakan sebelum
analisis ulang. Kami mendefinisikan mosaikisme plasenta dengan modalitas
tunggal dengan dua hasil yang berbeda atau hasil ketidaksesuaian, yang sesuai
ketika ditukar dan dianalisis ulang pada platform molekuler lainnya. Ketika satu
tes mendeteksi mosaikisme sementara platform lain hanya mendeteksi satu
kariotipe dan opsi untuk menukar sampel tidak tersedia, hasil mosaik dianggap
sebagai panggilan yang salah. Ketidaksesuaian karena keterbatasan teknis
didefinisikan sebagai hasil tukar sumbang yang tidak dapat dijelaskan oleh
keterbatasan yang melekat pada setiap modalitas pengujian. Kasus-kasus ini tidak
diklasifikasikan sebagai mosaik. Sebuah analisis kappa dilakukan untuk mengukur
kesepakatan antara tiga modalitas pengujian. Singkatnya, nilai kappa 0
menunjukkan kesepakatan hanya secara kebetulan, sedangkan nilai 1 menunjukkan
kesepakatan yang sempurna. Kami menggunakan skala yang sering dikutip untuk
menentukan tingkat kesepakatan di antara tiga modalitas pengujian. Analisis ini
dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak STATA (StataCorp).

16
 BAB III

PENUTUP

A. Kesimpulan
Kesimpulannya, tidak ada modalitas tunggal yang mendeteksi semua kelainan, dan
tingkat ketidaksesuaian yang tinggi muncul karena keterbatasan yang melekat pada setiap
tes. Mengingat tingkat deteksi yang sama antara sitogenetika dan metode molekuler, kami
menyarankan agar penyedia memilih metode berdasarkan ketersediaan individu dan
pertimbangan kekuatan dan keterbatasan setiap tes yang berlaku untuk setiap skenario
klinis. Ketiga metode memberikan informasi penting mengenai kemungkinan penyebab
genetik keguguran, dan kami mendorong penyedia layanan untuk melakukan pengujian
kromosom bila memungkinkan untuk membantu menasihati pasien dan membantu
perencanaan kehamilan di masa depan.

B. Saran
Adapun saran yang dapat penulis sampaikan yaitu :
Berdasarkan pembahasan dan kesimpulan makalah yang telah dibuat, kami
menyadari bahwa makalah masih memiliki banyak kesalahan dan kekurangan dalam
pembuatannya. Hal ini disebabkan oleh karena masih terbatasnya kemampuan kami
dalam menyusun makalah. Oleh sebab itu, kami selaku pembuat makalah ini sangat
mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari pembaca agar makalah ini dapat
bermanfaat terkhususnya untuk kami dan pembaca pada umumnya.

17
 DAFTAR PUSTAKA

https://id.sawakinome.com/articles/science--nature/difference-between-
cytogenetics-and-molecular-genetics-2.html

https://id.scribd.com/document/391699869/ANALISIS-KROMOSOM

Shah Sridhar, dkk., Pusat Kesehatan Reproduksi dan Kesuburan, Universitas

Stanford, Palo Alto, California.

Medical Embriology Langman. 12th Edition. T.W Sadler, Ph.D. Lippincot William
& Willkins/Wolters Kluwer Health In., USA. 2012, ISBN 978-979-044-461-4

Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. Burtis CA.

Ashwood ER.

Bruns DE, eds. 4th edition, St. Louis: Elsevier Saunders; 2006, Pp 1466-1474.
(April 24, 2014) Petrozza J. Recurrent Early Pregnancy Loss. Medscape Reference,
Available

online at http://emedicine.medscape.com/article/260495-overview. Accessed April

2016. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 22nd
ed. McPherson R.

Pincus M, eds. Philadelphia, PA: Saunders Elsevier: 2011, Pp 1293-1312. (2016)

Mayo Clinic. Chromosome Analysis, Congenital Disorders. Blood. Available
online at http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Clinical and
Interpretive/35248. Accessed April 2016.

(2016) Mayo Clinic. Chromosome Analysis, Hematologic Disorders, Blood.

Available online at http://www.mayomedicallaboratories.com/test-
catalog/Overview/35308. Accessed April 2016

Springer. S. (2016 May 11. Updated). Prenatal Diagnosis and Fetal Therapy.
Medscape Drugs: & Diseases. Available online
http://emedicine.medscape.com/article/936318-overview#showall.Accessed on
10/01/17.at

18
Marino, T. (2017 July 10. Updated). Prenatal Diagnosis for Congenital
Malformations and Genetic Disorders. Medscape Drugs & Diseases. Available
online at http://emedicine.medscape.com/article/1200683-overview showall.
Accessed on 10/01/17.

(2016 September, Updated). Prenatal Genetic Diagnostic Tests. ACOG FAQ.

Available online at https://www.acog.org/Patients/FAQs/Prenatal-Genetic-
Diagnostic-Tests. Accessed on 10/01/17

19