Badrya Draft Skripsi

ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI
PENGHASIL BIOPLASTIK P(3HB) DARI SAMPEL

TANAH PASIR PUTIH, GUNUNG SARIK KURANJI,
KOTA PADANG
SKRIPSI
Oleh :
BADRYA
NIM : 1804033
PROGRAM STUDI S1 FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS PERINTIS INDONESIA
PADANG
2022
ABSTRAK
Penguraian sampah plastik dengan pembakaran akan menghasilkan senyawa dioksin

yang berbahaya bagi kesehatan, salah satu upaya untuk menangulangi masalah ini
dengan menggunakan bioplastik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui bakteri
apa yang dapat diisolasi yang menghasilkan bioplastik P(3HB) dan mengetahui
karakterisasi isolat bakteri penghasil P(3HB) dengan uji biokimia. Pengambilan
sampel dilakukan dengan purposive sampling dimana pengambilan tanah secara acak
pada 10 lokasi berbeda. Dan proses isolasi dilakukan dengan metode pour plate dan
ditanam pada media crude palm oil (CPO) bakto agar, isolat yang tumbuh di
skrining dengan larutan Nile Blue A dan diamati dibawah sinar UV pada panjang
gelombang 365 nm. Isolat bakteri yang positif P(3HB) difermentasikan dan biomasa
yang didapat diuji dengan GC-MS. Hasil penelitian dari 60 isolat yang telah
dimurnikan didapatkan 5 isolat yang positif mengandung P(3HB) yang ditandai
dengan perubahan warna jingga keemasan dengan kode sampel TPP1.1, TPP 2.3,
TPP 5.1, TPP 8.5 dan TPP 10.3. Identifikasi lanjutan yaitu uji biokimia didapatkan
lima jenis bakteri yaitu kode sampel TPP 1.1 (Bacillus sp 1), TPP 2.3 (Bacillus sp 2),
TPP 5.1 (Bacillus sp 3), TPP 5.1 (Bacilus sp 3), TPP 8.5 (Bacilus sp 3), TPP 10.3
(Bacillus sp 2). Dari hasil pembacaan kromatogram kandungan P(3HB) tertinggi
ditemui pada kode sampel TPP 8.5 sebesar 40,45 mg/100 mL. Sementara itu pada
kode sampel TPP 1.1 sebesar 33,3 mg/100 mL, TPP 2.3 yaitu sebesar 15,12 mg/100
TPP 5.1 sebesar 30.47 mg/100 mL, TPP 8.5 sebesar 40,45 mg/100 mL, TPP 10.3
sebesar 28,14 mg/100 mL.
kata kunci : bioplastik, poli (3-hidroksibutirat), gcms, gunung sarik kuranji.
ii
ABSTRACT
Decomposition of plastic waste by burning will produce dioxin compounds that are
harmful to health, one of the efforts to overcome this problem is by using bioplastics.
This study aims to determine what bacteria can be isolated that produce P(3HB)
bioplastic and to characterize the isolates of P(3HB)-producing bacteria using
biochemical tests. Sampling was done by purposive sampling where the soil was
taken randomly at 10 different locations. And the isolation process was carried out
using the pour plate method and planted on crude palm oil (CPO) media. Bacterial
isolates positive for P(3HB) were fermented and the biomass obtained was tested by
GC-MS. The results of the 60 purified isolates showed that 5 isolates were positive
for P(3HB) which was marked by a golden orange color change with sample codes
TPP1.1, TPP 2.3, TPP 5.1, TPP 8.5 and TPP 10.3. Further identification, namely
biochemical tests, found five types of bacteria, namely sample code TPP 1.1 (Bacillus
sp 1), TPP 2.3 (Bacillus sp 2), TPP 5.1 (Bacillus sp 3), TPP 5.1 (Bacilus sp 3), TPP
8.5 (Bacilus sp 3). ), TPP 10.3 (Bacillus sp 2). From the results of the chromatogram
readings, the highest P(3HB) content was found in the sample code TPP 2.3, which
was 15.12 mg/100 mL of fermentation medium. Meanwhile, the sample code for TPP
1.1 is 33.3 mg/100 mL, TPP 5.1 is 30.47 mg/100 mL, TPP 8.5 is 40.45 mg/100 mL,
TPP 10.3 is 28.14 mg/100 mL.
keywords : bioplastic, poly(3-hydroxybutyrate), gcms, Gunung Sarik Kuranji.
iii
DAFTAR ISI
JUDUL........................................................................................................i
ABSTRAK...................................................................................................................ii
ABSTRACK...............................................................................................................iii
DAFTAR ISI..............................................................................................................iv
DAFTAR TABEL.....................................................................................................vii
DAFTAR GAMBAR...............................................................................................viii
DAFTAR LAMPIRAN..............................................................................................ix
BAB I. PENDAHULUAN...........................................................................................1
1.1Latar Belakang ........................................................................................................1
1.2Rumusan Masalah....................................................................................................4
1.3Tujuan Penelitian.....................................................................................................4
1.4Manfaat Penelitian...................................................................................................4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA...............................................................................5
2.1 Profil Tanah Pasir Putih.......................................................................................5
2.2 Bakteri.................................................................................................................6
2.2.1Definisi Bakteri...............................................................................................6
2.2.2Bentuk Bakteri................................................................................................6
2.2.3Cara Mengidentifikasi Bakteri........................................................................8
2.2.4Faktor Yang Mempengaruhi Pertumbuhan Bakteri......................................12
2.3 Bakteri Penghasil P(3HB).................................................................................15
2.4 Biopolimer.........................................................................................................16
2.5 Bioplastik...........................................................................................................16
2.6 Poli Hidroksi Alkanoat (PHA)..........................................................................17
2.7 Poli (3 Hidroksibutirat)......................................................................................18
2.8 Peranan P(3HB) di Dalam Sel Bakteri..............................................................19
2.9 Sifat Fisika Kimia P(3 Hidroksibutirat)............................................................19
2.10 Media Pertumbuhan Bakteri P(3HB) Minyak Kelapa Sawit............................20
2.11 Biosintesis Poli Hidroksialkanoat......................................................................20
iv
2.12 Jalur Biosintesis P(3HB) dari sumber karbon Minyak Kelapa Sawit...............21
2.13 Kromatografi Gas Spektometer Massa (GC-MS).............................................22
BAB III. METODE PENELITIAN.........................................................................23
3.1 Waktu dan Tempat............................................................................................23
3.2 Alat dan Bahan..................................................................................................23
3.2.1Alat................................................................................................................23
3.2.2Bahan............................................................................................................23
3.3 Prosedur Kerja...................................................................................................24
3.3.1Sterilisasi Alat...............................................................................................24
3.3.2Pengambilan Sampel di Lapangan................................................................24
3.3.3Pembuatan Medium CPO Bakto Agar..........................................................24
3.3.4Larutan Nile-Blue A 1%...............................................................................25
3.4Isolasi Bakteri dari Sampel Tanah.........................................................................25
3.4.1Skrining Bakteri Penghasil Biopolimer P(3HB)...........................................25
3.4.2Pemurnian dan Penyimpanan Isolat Bakteri.................................................25
3.5Produksi P(3HB) dengan Isolat Bakteri.................................................................26
3.5.1Penyiapan Medium Bakteri Penghasil Bioplastik P(3HB)...........................26
3.5.2Pembuatan Suspensi Bakteri Penghasil Bioplastik P(3HB).........................27
3.5.3Penyiapan Inokulum Isolat Bakteri...............................................................27
3.5.4Pembuatan Medium Pertumbuhan Bakteri Penghasil Bioplastik P(3HB)....27
3.5.5Pemisahan Biomassa dan Supernatan...........................................................27
3.5.6Pengukuran PH Supernatan..........................................................................28
3.5.7Pengukuran Berat Kering Biomassa Bakteri................................................28
3.6 Proses Metanolisis.............................................................................................29
3.6.1Proses Metanolisis Standar...........................................................................29
3.6.2Proses Metanolisis Sampel...........................................................................29
3.6.3Penentuan Bioplastik P(3HB) dengan Menggunakan Kromatografi Gas.....30
3.7 Karakeristik Bakteri Biopolimer.......................................................................30
3.7.1Makroskopis..................................................................................................30
3.7.2Mikroskopis..................................................................................................31
v
3.7.3Pewarnaan Gram...........................................................................................31
3.7.4Pewarnaan Endospora...................................................................................31
3.8 Uji Biokimia......................................................................................................32
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN.................................................................33
4.1 Hasil...................................................................................................................33
4.2 Pembahasan.......................................................................................................34
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN...................................................................42
5.1 Kesimpulan........................................................................................................42
5.2 Saran..................................................................................................................42
DAFTAR PUSTAKA................................................................................................43
LAMPIRAN...............................................................................................................45
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Perbandinagn Jumlah Koloni Bakteri yang Tumbuh dengan Isolat Bakteri
P(3HB) dengan Media CPO Bakto...............................................................49
Tabel 2. Data Hasil Uji Biokimia Isolat Bakteri.........................................................49
Tabel 3 Hasil Analisa Kuantitatif Kromatografi Gas pada P(3HB)...........................70
vii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Kerja...........................................................................................45
Lampiran 2. Lokasi Pengambilan Sampel..................................................................49
Lampiran 3. Sampel Tanah Gunung Sarik Kuranji....................................................51
Lampiran 4. Isolasi Bakteri P(3HB) Menggunakan Media CPO Bakto Agar............53
Lampiran 5. Skrining Bakteri.....................................................................................55
Lampiran 6. Isolat Bakteri pada Agar Miring.............................................................57
Lampiran 7. Fermentasi Media Inokulum Isolat Bakteri P(3HB)..............................57
Lampiran 8. Fermentasi Media Produksi Isolat Bakteri P(3HB)................................58
Lampiran 9. Biomassa Kering Bakteri P(3HB)..........................................................58
Lampiran 10. Lapisan Kloroform P(3HB)..................................................................59
Lampiran 11. Pengamatan Bentuk Sel Bakteri...........................................................59
Lampiran 12. Hasil Pengujian Uji Biokimia...............................................................59
Lampiran 13. Uji Gelatin............................................................................................64
Lampiran 14. Rumus dan Perhitungan........................................................................70
Lampiran 15. Alat yang Digunakan............................................................................76
viii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Bentuk Bakteri............................................................................................7
Gambar 2. Struktur Kimia P(3HB).............................................................................17
Gambar 3. Struktur Kimia P(3HB).............................................................................18
Gambar 4. Jalur Biosintesis P(3HB) dari Sumber Karbon.........................................21
Gambar 5. Lokasi Pengambilan Sampel.....................................................................50
Gambar 6. Skrining Bakteri TPP 1.1..........................................................................55
Gambar 10. Skrining Bakteri TPP 10.3......................................................................56
Gambar 11. Kromatografi Standar P(3HB) A............................................................64
Gambar 12.Kromatografi TPP 1.1 A..........................................................................65
Gambar 13.Kromatografi TPP 1.1 B..........................................................................65
Gambar 18.Kromatografi TPP 8.5 A.........................................................................68
Gambar 19.Kromatografi TPP 8.5 B.........................................................................68
Gambar 20.KromatografiTPP 10.3 A.........................................................................69
Gambar 21.Kromatografi TPP 10.3 B.......................................................................69
ix
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Plastik merupakan salah satu polimer sintesis yang banyak digunakan karena
memiliki sifat yang stabil, tahan air, ringan, transparan, fleksibel, dan kuat, namun
tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Penguraian sampah plastik dengan
pembakaran akan menghasilkan senyawa dioksin yang berbahaya bagi kesehatan.
Berdasarkan bahan bakunya, plastik dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu plastik
dari bahan yang tidak dapat diperbaharui dan dapat diperbaharui. Dari segi
kemudahan terdegradasi oleh alam, plastik dibedakan menjadi dua, yaitu mudah
terdegradasi (biodegradable) atau bioplastik dan sulit terdegradasi (non
biodegradable) atau plastik konvensional (Kamsiati dkk., 2017).
Salah satu upaya untuk menanggulangi masalah tersebut adalah dengan
menggunakan bioplastik. Bioplastik adalah plastik atau polimer yang secara alamiah
dapat dengan mudah terdegradasi baik melalui mikroorganisme maupun pengaruh
cuaca, kelembaban dan radiasi sinar matahari, sedangkan plastik sintesis terbuat dari
hidrokarbon minyak bumi yang sulit diuraikan di alam. Bioplastik atau disebut juga
sebagai plastik mudah terurai, secara global sudah dikenal dan telah dikembangkan
sejak puluhan tahun yang lalu (Djamaan, 2015).
Dampak yang terlihat nyata oleh penggunaan plastik tersebut memberikan satu
solusi yang tepat untuk menangani menumpuknya limbah plastik tersebut yaitu
dengan membuat material plastik dari bahan-bahan yang mudah diurai oleh
mikroorganisme. Belakangan ini perhatian tertuju pada biosintesis secara fermentasi
1
dengan menggunakan mikroorganisme penghasil biopolymer poli (3-hidroksibutirat)
atau disingkat dengan P(3HB) (Djamaan dkk, 2011).
Dalam bidang farmasi dan kedokteran, P(3HB) telah digunakan sebagai matriks
lepas lambat obat (sustained release) sehingga kadar obat dapat dibebaskan dalam
jumlah yang diinginkan untuk mencapai efek terapi. Dilaporkan pula, secara in-vivo
polimer ini sangat stabil, penguraiannya sangat lambat dan tidak toksik terhadap sel.
Selanjutnya P(3HB) juga telah digunakan sebagai benang untuk jahitan luka setelah
pembedahan dan untuk memperbaiki rekahan tulang yang retak. Kajian terakhir juga
melaporkan bahwa P(3HB) juga berpeluang digunakan sumber karbon dalam larutan
intraven (Djamaan dkk, 2011).
Biopolimer merupakan bahan yang dapat mengalami penguraian secara alamiah
oleh aktifitas mikroorganisme seperti bakteri, jamur dan biopolimer ini tidak hanya
membantu mengurangi volume sampah plastik, tetapi juga berfungsi sebagai bahan
kimia, bahan pertanian, penyalut bahan obat yang memungkinkan terkendalinya
pelepasan obat-obatan. Beberapa mikroorganisme telah diketahui dapat menghasilkan
P(3HB) di dalam selnya, yang berguna sebagai cadangan bahan makanan dan tenaga
untuk pertumbuhannya pada keadaan pertumbuhan yang kurang menguntungkan,
misalnya kekurangan nitrogen, fosfat, oksigen dan magnesium (Djamaan & Aulia,
2011). P(3HB) biasanya tumbuh pada lingkungan yang kurang menguntungkan
seperti tanah batu barah, tanah kapur, tanah pasir, tanah pengunungan.
Tanah pasir merupakan lapisan permukaan bumi yang berasal dari bebatuan dan
telah mengalami serangkaian pelapukan oleh proses alam sehingga membentuk
2
regolit (lapisan partikel halus).Tanah pasir dapat juga dikatakan tanah berukuran pasir
antara 2,0-0,20 mm dan sebagian besar tanah didominasi oleh fraksi pasir. Tanah
pasir banyak mengandung pori-pori makro, sedikit pori-pori sedang dan pori-pori
mikro. Tipe tanah seperti ini sulit untuk menahan air, tetapi mempunyai aerasi dan
drainase yang baik. Pada umumnya tanah pasir banyak didominasi mineral primer
jenis kwarsa (SiO2) yang tahan terhadap pelapukan dan sedikit mineral sekunder.
Mineral kwarsa mempunyai sifat ”inert” atau sulit bereaksi dengan senyawa lain dan
sukar mengalami pelapukan. Kondisi ini menjadikan tanah pasir merupakan tanah
yang tidak subur, kandungan unsur hara rendah dan tidak produktif untuk
pertumbuhan tanaman (Saptiningsih, 2007)
Sebelumnya telah dilakukan penelitian isolasi dan karakterisasi bakteri penghasil
biopolimer P(3HB) dari sampel tanah di daerah tambang batu bara bengkulu utara
pada penelitian tersebut didapatkan hasil isolasi sebanyak 30 isolat bakteri 4
diantaranya bakteri penghasil P(3HB) dengan kode sampel isolat tanah tambang ITB :
ITB 8, ITB 15, ITB 20, dan ITB 29 (Drajat, 2020).
Pada penelitian kali ini, peneliti tertarik mengambil sampel tanah pasir putih di
daerah Gunung Sarik Kuranji, Kota Padang, dikarenakan tanah pasir putih
mengandung sedikit zat hara yang mengakibatkan tumbuhnya bakteri penghasil
bioplastik P(3HB) sebagai cadangan makanannya serta didukung dengan belum
adanya penelitian yang melakukan pengujian tersebut. Maka dari itu peneliti
melakukan penelitian dengan judul ”Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Penghasil
Bioplastik P(3HB) dari Sampel Tanah Pasir Putih, Gunung Sarik Kuranji, Kota
Padang”.
3
1.2. Rumusan Masalah
1. Apakah terdapat bakteri penghasil bioplastik P(3HB) pada sampel tanah pasir
putih, Gunung Sarik Kuranji, Kota Padang ?
2. Bagaimana karakteristik dari isolat bakteri penghasil bioplastik P(3HB) pada
sampel tanah pasir putih, Gunung Sarik Kuranji, Kota Padang ?
1.3. Tujuan Penelitian

1. Gunung Sarik Kuranji, Untuk mengetahui bakteri apa yang dapat diisolasi
yang menghasilkan bioplastik P(3HB) pada sampel tanah pasir putih, Gunung
Sarik Kuranji, Kota Padang.
2. Untuk mengetahui karakteristik dari isolat bakteri penghasil bioplastik
P(3HB) pada sampel tanah pasir putih, Kota Padang.
1.4. Manfaat Penelitian

1. Memberikan informasi tentang bakteri apa yang dapat diisolasi yang
menghasilkan bioplastik P(3HB) pada sampel tanah pasir putih, Gunung Sarik
Kuranji, Kota Padang.
2. Memberikan informasi tentang karakteristik dari isolat penghasil bioplastik
P(3HB) pada sampel tanah pasir putih, Gunung Sarik Kuranji, Kota Padang.
4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Profil Tanah Pasir Putih

Tanah merupakan lapisan terluar dari bumi yang pada awalnya berasal dari
bebatuan yang menagalami pelapukan sehingga membentuk partikel-partikel halus
atau disebut dengan regolit. Tanah pasir adalah tanah dengan partikel berukuran
besar. Tanah ini terbentuk dari batuan-batuan beku serta batuan sedimen yang
memiliki butiran besar dan kasar atau yang sering disebut dengan kerikil
(Saptiningsih, 2007).
Tanah pasir tidak memiliki kandungan air, mineral, dan unsur hara karena tekstur
pada tanah pasir yang sangat lemah. Tanah pasir juga memiliki kesuburan yang
rendah sehingga sedikit sekali tanaman yang dapat tumbuh di tanah pasir. Tanah pasir
memiliki rongga yang besar sehingga pertukaran udara dapat berjalan dengan lancar.
Selain itu tanah pasir tdak lengket jika basah sehingga menjadikan tanah pasir mudah
untuk diolah (Saptiningsih, 2007).
Tanah pasir memiliki tekstur yang kasar. Terdapat ruang pori-pori yang besar
diantara butiran-butirannya sehingga kondisi tanah ini menjadi struktur yang lepas
dan gembur. Dengan kondisi yang seperti itu menjadikan tanah pasir ini memiliki
kemampuan yang rendah untuk dapat mengikat air. Pada dasarnya tanah pasir
merupakan tanah yang tidak cocok untuk digunakan sebagai media tanam karena
partikelnya yang besar dan kurang dapat menahan air. Apabila digunakan sebagai
media tanam, air akan mengalami infiltrasi, bergerak kebawah melalui rongga tanah
5
sehingga menyebabkan tanaman kekurangan air dan menjadi layu (Saptiningsih,
2007).
2.2 Bakteri
2.2.1. Defenisi bakteri
Ukuran sel bakteri pada umumnya adalah 0,5-1,0 µm, dan mempunyai
tiga bentuk dasar yaitu bulat atau coccus, batang atau Bacillus, dan bentuk spiral
(Holderman dkk, 2017). Bakteri merupakan salah satu golongan mikroorganisme
prokariotik (bersel tunggal) yang hidup berkoloni dan tidak mempunyai selubung
inti namun mampu hidup dimana saja. Menurut klasifikasinya bakteri dibagi
menjadi 2 yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif (Holderman dkk,
2017).
2.2.2. Bentuk Bakteri

Terdapat tiga bentuk sel bakteri yang paling umum yaitu cocci (spherical
dari kata yunani bentuk biji/ berry), bacilli (berbentuk batang dari kata yunani
untuk staff) dan spiral (bentuk melengkung dari spiral). Ada berbagai cara untuk
membagi ketiga bentuk menyeluruh ini sebagian besar didasarkan pada
bagaimana mereka disusun dalam bentuk multiseluler yang dapat dilihat pada
gambar 1 (Dwidjoseputro, 2010).
6
Gambar 1. Bentuk Bakteri (Dwidjoseputro, 2010).
1. Bentuk Kokus
Bentuk bakteri dibawah mikroskop seperti buah beri dan memiliki beberapa
pola atau pengelompokan. Pola atau pengelompokan bakteri kokus ini sangat
menentukan dalam hal identifikasi bakteri yang tidak dikenal sebagai contoh
bakteri dari genus steroptococci adalah bakteri dengan dengan bentuk kokus
yang membelah dalam satu bidang namun tidak memisahkan diri dan terlihat
seperti rantai dan seperti buah beri (Dwidjoseputro, 2010).
2. Bentuk Basil
Bakteri dengan bentuk basil dibawah mikroskop terlihat seperti batang yang
tersusun tunggal atau rantai. Terdapat beberapa susunan bakteri dengan bentuk
basil seperti coccobacil, mycobacteria, streptomycetes, spore-forming rods dan
lainnya (Dwidjoseputro, 2010).
7
3. Bentuk spiral
Bakteri berbentuk melilit, yang dinamakan spirillum atau spiral. Ada tiga
macam bentuk spiral, yaitu: Vibrios adalah batang yang melengkung menyerupai
koma, spirilla (dari kata spirillium) adalah spiral atau lilitan dan Spirochetes juga
bakteri berbentuk spiral, tetapi dapat melenturkan dan melekuk-lekuk tubuh saat
bergerak (Dwidjoseputro, 2010).
2.2.3 Cara Mengidentifikasi Bakteri

Identifikasi bakteri meliputi pemeriksaan morfologi, pewarnaan gram, dan
uji biokimia antara lain: uji O/F, uji oksidas, uji katalas, uji motilitas, produksi
indol, uji TSIA, uji gula. Identifikasi bakteri dilakukan dalam beberapa uji antara
lain:
1. Pengamatan Morfologi Bakteri

Pengamatan koloni bakteri dilakukan dengan cara menumbuhkan isolat
bakteri pada agar cawan yang meliputi: warna, elevasi, dan tepi koloni
(Budiyanto dkk, 2020).
2. Pewarnaan Gram
Pewarnaan Gram bertujuan untuk menentukan apakah bakteri tersebut
termasuk di dalam kelompok bakteri Gram positif atau kelompok bakteri
Gram negatif. Cara kerja dari pewarnaan Gram yaitu kaca objek dibersihkan
dengan alkohol dan dilewatkan beberapa kali pada nyala api bunsen,
kemudian diambil isolat bakteri dengan ose secara aseptik dan dioleskan
pada kaca objek. Isolat bakteri kemudian ditetesi larutan gram A yang
mengandung kristal violet dan dibiarkan selama 1 menit, selanjutnya dicuci
8
dengan air mengalir dan dianginkan hingga kering. Isolat bakteri kemudian
ditetesi lagi dengan larutan lugol iodine dan dibiarkan selama 1 menit,
kemudian dicuci dengan air mengalir dan dianginkan hingga kering.
Selanjutnya isolat bakteri dilunturkan alkohol 95%, kemudian dialiri air dan
dianginkan hingga kering. Isolat-isolat bakteri kemudian ditetesi safranin
selama 30 detik dan dicuci dengan air mengalir, dikeringkan dengan kertas
penghisap dan dikering anginkan, kemudian dilakukan pengamatan dengan
menggunakan mikroskop Bakteri Gram positif ditandai dengan warna ungu
yang menunjukkan bahwa bakteri tersebut mampu mengikat warna karbol
gentian violet, sedangkan bakteri Gram negatif ditandai dengan warna merah
muda yang menunjukkan bahwa bakteri tersebut tidak mampu mengikat
warna karbol gentian violet dan hanya terwarnai oleh safranin (Budiyanto
dkk, 2020).
3. Uji Katalase
Uji katalase bertujuan untuk mengetahui sifat bakteri dalam
menghasilkan enzim katalase. Cara kerja dari uji katalase yaitu larutan H2O2
3% diteteskan pada kaca objek, kemudian suspensikan koloni bakteri dengan
menggunakan ose steril. Perubahan yang terjadi jika terdapat gelembung-
gelembung oksigen, maka bakteri tersebut positif mengandung enzim
katalase, tetapi jika tidak terdapat gelembung maka bakteri dikatakan
negatif, tidak menghasilkan enzim katalase (Budiyanto dkk, 2020).
9
4. Uji Oksidase
Tujuan uji oksidase adalah mengetahui ada tidaknya enzim oksidase
pada bakteri. Cara kerjanya yaitu ambil biakan bakteri murni dengan
menggunakan ose kemudian goreskan pada paper oksidase. Hasil uji positif
ditandai dengan berubahnya koloni menjadi merah muda, lalu merah tua,
merah gelap, dan akhirnya warna hitam, sebaliknya apabila tidak berubah
warna maka negatif (Budiyanto dkk, 2020).
5. Uji O/F (oksidatif/ fermentasi )

Uji O/F bertujuan untuk membedakan sifat bakteri oksidatif dan bakteri
fermentatif yang mengandung oksidasi atau fermentasi terhadap glukosa
dengan menggunakan dua tabung media yang salah satunya ditutup dengan
paraffin, sehingga diharapkan di dalam media tidak terdapat udara yang
dapat mendukung terjadinya fermentasi. Isolat murni bakteri diinokulasi
pada media O/F dengan cara tusukan kemudian disimpan dalam inkubator,
setelah 24 jam penyimpanan dilakukan diamati perubahan warna yang
terjadi. Bakteri oksidatif apabila tabung terbuka (tidak berparaffin) berwarna
kuning dan tabung tertutup (dengan paraffin) berwarna biru. Bakteri
fermentatif apabila tabung terbuka dan tertutup berwarna kuning. Bakteri
non oksidatif /fermentatif pada tabung terbuka dan tertutup tidak ada
perubahan (Budiyanto dkk, 2020).
10
6. Uji motilitas dan mroduksi indiol
Uji MIO bertujuan untuk mengetahui apakah bakteri tersebut motil atau
tidak dan untuk mengetahui produksi indol dari tryptophane. Cara kerjanya
yaitu mengambil bakteri dengan menggunakan ose steril, dan ditusukkan ke
dalam media. Selanjutnya diinkubasi selama 24 jam. Pada pengamatan apabila
bakteri tumbuh menyebar pada tusukan dikatakan motility positif, jika media
berubah menjadi kuning maka ornithin positif dan untuk mengetahui indole,
diteteskan cairan konvaks beberapa tetes, lalu didiamkan sebentar kemudian
diamati. Apabila terjadi perubahan yaitu di bagian permukaan menjadi warna
merah, maka dikatakan indol positif (Budiyanto dkk, 2020).
7. Uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar)

Uji TSIA (Tripel Sugar Iron Agar) bertujuan untuk membedakan jenis
bakteri berdasarkan kemampuan memecahkan glukosa , laktosa, dan sukrosa,
selain itu uji TSIA berfungsi untuk mengetahui apakah bakteri tersebut
menghasilkan gas H2S atau tidak. Media yang digunakan mempunyai dua
bagian yaitu tegak dan miring. Cara kerjanya yaitu dengan mengambil koloni
bakteri dengan menggunakan ose steril dan diinokulasikan pada media TSIA
dengan menusuk tegak lurus pada bagian media tegak dan secara zig zag pada
bagiang media miring. Selanjutnya diingubasi selama 24 jam. Pengamatan
dilakukan dengan melihat warna media. Apabila bagian media miring
berwarna merah dan media tegak berwarna kuning maka bakteri mampu
memfermentasi glukosa, sedangkan apabila bagian media miring dan tegak
keduanya berwarna kuning maka bakteri mampu memfermentasi sukrosa dan
11
laktosa. Apabila terdapat warna kehitaman pada bekas goresan dan tusukan
menunjukkan adanya H2S (Budiyanto dkk, 2020).
8. Uji Gula
Uji gula bertujuan untuk kemampuan bakteri dalam mendegradasi gula
dan menghasilkan asam organik yang berasal dari tiap-tiap jenis gula, yaitu
glukosa, sukrosa, maltosa, arabinosa, manitol dan inositol. Isolat murni bakteri
diinokulasi pada masing-masing media dengan cara dicelupkan jarum Ose
sampai setengah bagian dari media, kemudian disimpan ke dalam inkubator
selama 24 jam. Setelah 24 jam amati perubahan warna, apabila bakteri pada
masing-masing media tersebut mengalami perubahan warna menjadi kuning,
maka bakteri dikatakan positif karena bakteri membentuk asam dari
fermentasi glukosa dan jika tidak terjadi perubahan warna dikatakan negatif
karena bakteri membentuk asam dari fermentasi glukosa (Budiyanto dkk,
2020).
2.2.4 Faktor Yang Mempengaruhi Pertumbuhan Bakteri

1. Nutrisi Bakteri
a) Air
Komponen utama di dalam sel bakteri, medium dan merupakan
subtrat yang dapat dioksidasi dalam bentuk donor H. Fungsi air
sebagai sumbar oksigen untuk bahan organik sel pada respirasi,
selain itu air berfungsi sebagai pelarut dan alat pengangkut dalam
metabolisme (Meganada & Sukini, 2017).
12
b) Nitrogen
Digunakan dalam sintesis protein asam nukleat dan senyawa-
senyawa lain yang mengandung nitrogen. Selama pertumbuhan
bakteri membebaskan enzim seperti proteolitik yang dapat
menguraikan protein menjadi asam amino. Sumber nitrogen dapat
diperoleh dari udara, garam ammonium dan sumber nitrogen
organik seperti glutamik dan aspargin (Meganada & Sukini,
2017).
c) Belerang
Diperlukan dalam pembentukan koenzim dan ditemukan dalam
rantai samping sisteinil dan merionil protein (Meganada & Sukini,
2017).
d) Fosfor
Dibutuhkan sebagai komponen ATP, asam nukleat dan sejumlah
koenzim seperti NAD, NADP dan flavin dan dapat diperoleh dari
fosfolipid, lipid A dan asam lemak lainnya (Meganada & Sukini,
2017).
2. Kadar Air
Air sangat diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Kadar oksigen yang
tepat sangat dibutuhkan untuk keseimbangan pertumbuhan. Pertumbuhan
bakteri aerob (Meganada & Sukini, 2017).
13
3. pH
Pada umumnya, bakteri tumbuh baik pada pH 6,0 - 8,0, untuk bakteri
asidofil memiliki pH optimal 3,0 dan bakteri alkalofil memiliki pH optimal
10,5 (Meganada & Sukini, 2017).
4. Tekanan Osmotik
Bakteri yang membutuhkan kosentrasi garam tinggi yaitu kelompok
halofilik dan bakteri yang membutuhkan tekanan osmotik yang tinggi yaitu
kelompok osmofilik. Pada umumnya bakteri dapat menahan tekanan
osmotik luar dan memiliki konsentrasi ion yang bervariasi yang berfungsi
untuk mengatur osmolitas (Meganada & Sukini, 2017).
5. Suhu
Berdasarkan kemampuan tumbuh pada suhu lingkungan, bakteri dapat
diklasifikasikan sebagai : bakteri mesofil, yaitu bakteri yang dapat tumbuh
baik pada suhu 25o – 40oC. Termasuk dalam golongan ini adalah bakteri-
bakteri yang penting secara medis (yang tumbuh baik pada temperatur
badan) bakteri thermofil, bakteri yang dapat tumbuh baik pada suhu 55o –
80oC (Thermus aquaticus misalnya, tumbuh pada daerah bersuhu tinggi,
dan enzimnya seperti Taq-polimerase, adalah enzim yang tahan panas).
bakteri psikrofil, yang tumbuh pada suhu dibawah 20oC (Meganada &
Sukini, 2017).
14
6. Oksigen
Bakteri terbagi menjadi bakteri aerob, anaerob, fakultatif dan anaerob
obligat. Bakteri aerob memerlukan oksigen sebagai penerima hidrogen
sedangkan bakteri anaerob dapat mati jika ada oksigen. Bakteri fakultatif
dapat hidup secara aerob dan anaerob dan bakteri obligat memerlukan
oksigen tidak hanya sebagai penerima hidrogen dan sangat peka dengan
oksigen (Meganada & Sukini, 2017).
7. Nutrisi bakteri
Media harus memenuhi persyaratan seperti dibawah ini sehingga
bakteri dapat tumbuh dengan baik yaitu:
a) Harus mengandung semua nutrient yang dibutuhkan oleh bakteri
untuk tumbuhnya.
b) Harus mempunyai tekanan osmosa, tegangan permukaan dan PH
yang sesuai dengan kebutuhan bakteri yang ditumbuhkan.
c) Tidak mengandung bahan-bahan yang dapat menghambat
pertumbuhan bakteri.
d) Dapat tumbuh dengan baik.
2.3 Bakteri Penghasil P(3HB)

Poliester alifatik, P(3HB) dan kopolimernya, P(3HB-co-4HB) merupakan
poliester termoplastik yang biodegradable dan biokompatibel, dihasilkan oleh bakteri
Ralstonia eutropha atau Alcaligenes latus. P(3HB-co-4HB) juga dapat dihasilkan
oleh R. eutropha dalam kultur nitrogen terbatas, dengan substrat karbon asam 4-
hidroksibutirat ,atau 1,4-butanadiol dimana komposisinya bervariasi dari 0 % mol
15
hingga 34 % mol 4HB, tergantung komposisi substrat karbonnya (Djamaan & Aulia,
2011).
2.4 Biopolimer
Biopolimer merupakan bahan yang dapat mengalami penguraian secara alamiah
oleh aktifitas mikroorganisme seperti bakteri, jamur dan alga. Biopolimer ini tidak
hanya membantu mengurangi volume sampah plastik, tetapi juga berfungsi sebagai
bahan kimia, bahan pertanian, penyalut bahan obat yang memungkinkan
terkendalinya pelepasan obat-obatan. Polimer merupakan makromolekul besar yang
terbentuk dari unit-unit atau monomer berulang sederhana (Djamaan & Aulia, 2011).
Biopolimer dibagidua kelompok yaitu, biopolimer biuorai dan fotourai.
Biopolimer biourai yaitu plastik yang dapat diuraikan oleh enzim yang dihasilkan
oleh mikroba secara hidrolisis, sedangkan biopolimer fotourai yaitu plastik yang
sensitif terhadap cahaya dan terurai menjadi fragmen kecil yang tidak dapat diuraikan
lagi (Djamaan & Aulia, 2011).
2.5 Bioplastik
Bioplastik adalah plastik atau polimer yang secara alamiah dapat dengan mudah
terdegradasi baik melalui serangan mikroorganisme maupun pengaruh cuaca,
kelembaban dan radiasi sinar matahari, sedangkan plastik sintesis terbuat dari
hidrokarbon minyak bumi yang sulit diuraikan di alam. Bioplastik atau disebut juga
sebagai plastik mudah terurai, secara global sudah dikenal dan telah dikembangkan
sejak puluhan tahun yang lalu (Susanti, 2010). Sedangkan polimer merupakan
makromolekul besar yang terbentuk dari unit-unit atau monomer berulang sederhana.
Salah satu kelompok polimer ini adalah plastik. Kebutuhan Biopolimer yang
16
dihasilkan oleh bakteri tersebut, dapat diekstrak keluar dari selnya dan diproses lebih
lanjut sesuai dengan keperluan yang diinginkan (Djamaan, 2011).
Sifat yang lain dari bioplastik yaitu dapat dihancurkan secara alami atau
mikrobiologis, bahan bioplastik sebaiknya mudah diperoleh dengan siklus waktu
penyediaan yang singkat (Yuniarti dkk, 2014).
2.6 Poli Hidroksialkanoat (PHA)

PHA adalah kelompok biopoliester yang disintesa dari berbagai variasi
mikroorganisme. Pertama kali ditemukan oleh Lemogine pada tahun1926, PHA
banyak menarik perhatian untuk diteliti karena sifat biodegradasi, biokompatibilitas,
keanekaragaman kimia, dan yang diproduksi dari sumber karbon yang dapat
dibarukan. Satu buah molekul PHA tersusun dari 600 sampai 35.000 unit monomer
(R)-hydroxy fatty acid.
Gambar 2. Struktur kimia P(3HB) (Sudesh, 2000)
Beberapa jenis bakteri yang mengakumulasikan PHA dalam jumlah besar yang
telah diketahui C. necator (sebelumnya dikenal sebagai Ralstonia eutropha atau
Alcaligeneutrophus), Azohydromonas lata dikenal sebagai (Alcaligenes latus)
Pseudomonas oleovorans, Pseudomonas putida, Aeromonas hydrophila,Paracoccus
denitrificans, Methylobacterium extorquens, Bacillus sp., Azotobacter vinelandii and
17
rekombinan E. coli dengan ekspresi gen biosintesis P(3HB) dari C. necator, A. lata
or A. vinelandii (Pena dkk, 2014).
2.7 Poli (3-Hidroksibutirat)

Poli (3-hidroksibutirat) adalah homopolimer unit (R)-3-hidroksibutirat. Masa
molekul memiliki rentang yang luas berfluktuasi dari 200 sampai dengan 20.000 KD.
Beberapa keunggulan P(3HB) adalah bersifat termoplastik, dapat terdegradasi secara
alami, dan tidak menghasilkan produk sampingan beracun, sehingga dapat dijadikan
alternatif untuk menggantikan plastik berbasis minyak bumi. Selain itu, P(3HB)
menunjukkan sifat menarik seperti biokompatibilitas tinggi dengan sel mamalia (Pena
dkk, 2014).
Gambar 3. Struktur Kimia P(3HB) (Djamaan, 2015).
Dalam waktu belakangan dan berdasarkan biokompatibilitas dan biodegradasi,
P(3HB) lebih diaplikasikan dalam bidang kedokteran dan farmasi. Dalam bidang
kedokteran seperti pembuatan organ palsu, benang bedah, kontruksi jaringan seperti
katup jantung, penyangga tulang, penyangga jaringan saraf. Dalam bidang farmasi
seperti dalam sistem penghantaran obat dalam bentuk makro atau nano partikel dan
untuk terapi target spesifik seperti untuk penyakit tuberkolosis dan kanker, serta
memungkinkan untuk aplikasi biomarker atau biosensor (Pena dkk, 2014).
18
2.8 Peranan P(3HB) Di Dalam Sel Bakteri
Pada kebanyakan bakteri, P(3HB) berperan sebagai sumber karbon dan tenaga
dalam keadaan kekurangan nutrien. Azospirillum brasilense dilaporkan mempunyai
jangka waktu hidup yang lebih lama karena mempunyai kandungan P(3HB) yang
lebih tinggi pada keadaan lingkungan yang buruk. Fungsi biologi P(3HB) dapat
dikatakan sama dengan glikogen dalam sel mamalia dan kanji pada tumbuhan. Dalam
keadaan ketiadaan sumber karbon serta kepekatan nitrogen yang sesuai, sintesis
protein dapat terjadi dengan P(3HB) bertindak sebagai sumber karbon untuk proses
metabolisme normal di dalam sel bakteri didukung oleh sifatnya dihasilkan dalam
berat molekul yang tinggi serta tingkat kelarutannya yang rendah sehingga tidak akan
meningkatkan tekanan osmotik sel (Djamaan, 2011).
2.9 Sifat Fisika Kimia P (3-Hidroksibutirat)

Tahap penghabluran dari P(3HB) relatif tinggi yaitu 55-80% yang menyebabkan
timbulnya masalah dalam pemanfaatan P(3HB) sebagai kemasan dalam bentuk
tunggal. Adanya sifat rapuh dan mudah pecah yang dimiliki oleh P(3HB) dapat
diatasi dengan menggunakan unit polimer lain yaitu poli (3- hidroksivalerat). Berat
molekul P(3HB) berkisar antara 166.000 - 737.000 bergantung pada strain bakteri
penghasil dan sumber karbon yang digunakan. Sifat kelarutan sudah banyak diteliti,
P(3HB) memiliki kelarutan pada pelarut organik yang bersifat non polar (Susanti,
2010).
19
2.10 Media Pertumbuhan Bakteri P(3HB) Minyak Kelapa Sawit
Minyak kelapa sawit merupakan alternatif sumber karbon yang banyak
digunakan dalam produksi senyawa bioplastik dewasa ini, hal ini disebabkan karena
ia mempunyai asam lemak jenuh dan tidak jenuh yang banyak, yang dapat diuraikan
oleh enzim lipase ektrasel bakteri sehingga dapat digunakan sebagai substrat dasar
untuk dapat menghasilkan P(3HB) secara fermentasi (Pena dkk, 2014).
2.11 Biosintesis Poli Hidroksialkanoat (PHA) dan Poli (3-Hidroksibutirat)

P(3HB)
Poli (3-hidroksibutirat) adalah polimer biodegradable yang paling umum dan
alternatif yang menjanjikan untuk plastik non degradable sintesis. Senyawa
biopolimer P(3HB) pertama kali ditemukan oleh Lemoigne pada tahun 1925 seorang
ahli mikrobiologi dari institut Pasteur di Paris. Lemoigne mengisolasi polimer
tersebut dari bakteri Bacillus megaterium dan mengekstrak dengan kloroform.
Beberapa bakteri mensintesis dan mengumpulkan PHA sebagai sumber karbon dan
sumber cadangan energi atau untuk mengurangi kelebihan energi dibawah kondisi
kekurangan nutrisi seperti pada tempat yang kelebihan unsur karbon. Simpanan PHA
dapat diregradasi oleh depolimer intraseluer dan metabolisme sebagai sumber karbon
dan energi yang dapat dihasilkan secara cepat untuk menyuplai kekurangan nutrisi.
Mayoritas PHA disusun oleh monomer asam R(-)-3-hydroxyalkanoic berkisar dari
C3 sampai C14 atom karbon dengan variasi jenuh dan tidak jenuh dan lurus atau
rantai bercabang mengandung grup alifatik dan aromatik. Berat molekul dari
polimerase ini berkisar dari 2x10⁵ sampai 3x10⁶ dalton berdasarkan tipe
mikroorganisme dan kondisi pertumbuhan (Djamaan, 2011).
20
2.12 Jalur Biosintesis P(3HB) dari Sumber Karbon Minyak Kelapa Sawit
Jalur biosintesis P(3HB) dari sumber karbon minyak kelapa sawit dimulai dari
perubahan minyak kelapa sawit yang terdiri dari asam-asam lemak menjadi asil-KoA
dan krotonil sebelum masuk kedalam β-oksidasi dengan tindakan enzim asil-KoA
dehidrogenase. Selanjutnya krotonil akan membentuk L(+)-β-hidroksi asil-KoA
dengan tindakan enzimenoil- KoA dehidrogenase. Kemudian dilanjutkan dengan
pembentukan β-ketoasil oleh tindakan enzim asetoasetil-KoA reduktase, dan
pembentukan asil-KoA untuk kemudian berubah menjadi asetil-KoA. Akhirnya dari
astil-KoA dengan tindakan β-ketothiolase asetoasetil-KoA redukatse dan P(3HB)
sintesa secara berurutan akan menghasilkan asam poli (3-hidroksibutirat) (Djamaan,
2011)
Gambar 4. Jalur biosintesis P(3HB) dari sumber karbon minyak kelapa sawit
(Djamaan & Aulia, 2011).
21
2.13 Kromatografi Gas- Spektometer Massa (GC-MS)
Kromatografi gas-spektrometer massa (GC-MS) adalah metode yang
mengkombinasikan kromatografi gas dan spektometri masa untuk mengidentifikasi
senyawa yang berbeda dalam analisis sampel. Kromatografi gas dan spektometer
masa memiliki keunikan masing-masing dimana keduanya memiliki kelebihan dan
kekurangan. Dengan menghubungkan kedua teknik tersebut diharapkan mampu
meningkatkan kemampuan dalam menganalisis sampel dengan mengambil kelebihan
masing-masing teknik dan meminimalisir kekurangannya (Bul, 2017).
Sampel disuntikan ke port injeksi dengan jarum suntik dan yang dapat mengukur
jumlah spesimen. Jarum tersebut dimasukan ke dalam septum karet neoprene atau
silicon yang dapat menutupi port injeksi. Port injeksi dipertahankan pada suhu di
mana sampel segera menguap. Dimana sampel diharapkan menyebar merata
disepanjang penampang kolom, bagian terakhir dari kolom melewati jalur transfer
yang dipanaskan dan berakhir di pintu masuk sumber ion dimana senyawa yang
mengelusi dari kolom diubah menjadi ion komponen berikutnya adalah penganalisis
masa (filter), yang memisahkan ion bermuatan positif sesuai dengan berbagai sifat
masa tergantung pada penganalisis yang digunakan (Bul, 2017).
22
BAB III. METODE PENELITIAN
3.1 Waktu Dan Tempat
Penelitian akan dilakukan pada bulan Februari hingga Juli di Laboratorium Biota
Sumatera, Balai Veteriner Baso Agam, dan Laboratorium Kesehatan Padang.
3.2 Alat Dan Bahan

3.2.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain, autoklaf
(GEA®), oven, inkubator (Memmert®), cawan petri (Pyrex®), tabung reaksi
(Pyrex®), erlenmeyer (Pyrex®), pipet tetes, beaker glass (Iwaky®), mikropipet,
gelas ukur (Iwaky®), lampu spritus, lampu ultraviolet, jarum ose, spatel, batang
pengaduk, lemari pendingin (LG), rotary shaker incubator, laminar air flow
(Elisa®), timbangan analitik, sentrifus, kromatografi gas-spektometer massa
(GC-MS).
3.2.2 Bahan
Pada penelitian ini bahan- bahan yang digunakan adalah sampel dari
tanah pasir putih Gunung Sarik Kuranji, Kota Padang, media minyak kelapa
sawit mentah (crude palm oil/ CPO), bakto agar, alkohol 70%, aquadest, nile
blue A, larutan98%, pendapar fosfat, Nutrient Broth, methanol, kloroform,
diammonium sulfat 8, metanol.
23
3.3 Prosedur Kerja
3.3.1 Sterilisasi Alat
Semua alat yang digunakan pada penelitian ini dicuci bersih terlebih
dahulu kemudian dikeringkan, kemudian alat-alat yang mempunyai mulut
ditutup dengan kapas yang dibalut dengan kapas yang dibalut dengan kain kasa,
lalu semua alat yang digunakan dibungkus dengan kertas perkamen, kemudian
disterilkan dengan autoklaf pada tekanan 15 Ibs selama 15 menit pada suhu
121°C.
Spatel dan jarum ose disterilkan dengan cara pemijaran di atas nyala api
lampu spiritus selama 20 detik, lemari aseptis dibersihkan dari debu dan
disterilkan dengan menyemprotkan alkohol 70% keseluruh bagian dalam
lemari.
3.3.2 Pengambilan Sampel di lapangan

Sampel yang diambil dalam penelitian ini adalah sampel dari tanah batu
kapur Air Dingin Kota Padang, pada penelitian ini tanah diambil pada 10 titik
disepanjang batu kapur Air Dingin Kota Padang, tanah diambil sebanyak 500
gram pada masing-masing titik dengan jarak tempat pengambilan ±20-35 meter.
3.3.3 Pembuatan Medium CPO Bakto Agar

Sebanyak 10 gram serbuk bakto agar dilarutkan dalam 500 ml air suling,
dimasukan ke dalam erlenmeyer, dipanaskan sampai mendidih sambil diaduk
hingga larut sempurna dan berwarna jernih. Kemudian disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 15 1bs selama 15 menit dan minyak
sawit sebanyak 2,5 gram disterilkan dalam erlemeyer bersumbat kapas yang
24
dibalut dengan kasa dengan cara yang sama. Dimasukan CPO steril ke dalam
larutan bakto agar yang telah disterilkan tadi. Kemudian dituangkan ke dalam
masing-masing cawan petri sebanyak 15 ml (Djamaan & Aulia 2011).
3.3.4 Larutan Nile Blue 1 %

Serbuk Nile Blue A (C4OH4ON6O6S) sebanyak 1 gram dilarutkan dalam
metanol absolut hingga volume 100 mL (Djamaan, 2011).
3.4 Isolasi Bakteri dari Sampel Tanah

Sampel tanah ditimbang sebanyak 1,0 gram dan dibuat suspensi ke dalam air
suling steril dan buat pengenceran bertingkat sampai 10-⁴. Kemudian pada
pengenceran 10-⁴ diinakulasikan ke dalam media CPO- bakto agar sebanyak 1 ml.
setelah itu diinkubasi pada inkubator pada suhu 37°C selama 24-48 jam. Dari masing-
masing bakteri yang tumbuh dipilih bakteri yang terpisah dan dipindahkan pada
media CPO yang baru (Djamaan, 2011).
3.4.1 Skrining Bakteri Penghasil Biopolimer P(3HB)

Pada medium yang telah tumbuh koloni bakteri, diteteskan Nile Blue A
1% dan didiamkan pada suhu kamar selama 30 menit. Selanjutnya dilihat di
bawah sinar ultraviolet pada panjang gelombang 365 nm. Apabila koloni
menghasilan flueresensi jingga menunjukan bahwa bakteri tersebut penghasil
granul P(3HB) dalam selnya (Djamaan, 2011).
3.4.2 Pemurnian Dan Penyimpanan Isolat Bakteri

Dilakukan pembuatan stok murni dengan cara menginokulasikan koloni
bakteri yang memberi hasil positif dengan Nile Blue A 1% pada CPO- bakto
agar pindahkan pada media agar miring medium nutrient agar, dan diinkubasi
25
pada suhu 37°C selama 24 jam, kemudian disimpan pada suhu 4°C (Djamaan
dkk, 2011).
3.5 Produksi P(3HB) dengan Isolat Bakteri

3.5.1 Penyiapan Medium Bakteri Penghasil Bioplastik P(3HB)
1. Sumber Karbon
Sumber karbon yang digunakan dalam penelitian ini adalah minyak
kelapa sawit mentah CPO dengan konsentrasi 5 g dicukupkan dengan
aquadest hingga 1 liter (Djamaan, 2011).
2. Sumber Nitrogen
Sumber nitrogen dibuat dengan melarutkan 1,1 (NH4)2HPO4 kedalam
1 liter air suling. Sumber nitrogen disterilkan dengan autoklaf pada
suhu 121°C dan tekanan 15 1bs elama 15 menit (Djamaan, 2011).
3. Pembuatan Larutan Mikroelemen

Pembuatan larutan mikroelemen dilakukan dengan cara melarutkan
sebanyak 2,78g FeSO4.7H2O; 1,98g MnCl2.4H2O; 2,81g CuSO4.7H2O;
1,67g CaCl.2H2O; 0,17g CuCl2 dan 0,29g ZnSO4. 7H20 kedalam 1 liter
HCL 0,1 N. Larutan mikroelemen ini disterilkan dengan autoklaf pada
suhu 121°C dan tekanan 15 lbs selama 15 menit (Djamaan, 2011).
4. Pembuatan Larutan MgSO4.7H2O 1 M

Larutan MgSO4.7H2O 1M dibuat dengan melarutkan 5g MgSO4.7H2O
1 M ke dalam 20 mL air suling. Kemudian disterilkan dengan autoklaf
pada suhu 121°C dan tekanan 15 lbs selama 15 menit (Djamaan,
2011).
26
5. Pembuatan Larutan Dapar Posfat pH-7
Larutan Dapar Posfat pH-7 dibuat dengan cara melarutkan 3,7g
KH2PO4 dan 5,8 K2HPO4 ke dalam 1 liter air suling, pH larutan diatur
hingga mendekati 7. Jika pH kurang dari 7 maka menaikinya dengan
cara penambahan NaOH 0,1 M. Kemudian larutan dapar ini disterilkan
dengan autoklaf pada suhu 121°C dan tekanan 15 lbs selama 15 menit
(Djamaan, 2011).
3.5.2 Pembuatan Suspensi Bakteri Pengasil Bioplastik P(3HB)

Pembuatan suspensi bakteri dibuat stok agar miring dan dinokulasikan 1-
2 ose. Koloni bakteri uji dari stok agar miring lalu dimasukan ke dalam 10 ml
CPO-bakto agar steril, lalu diputar dengan divortex sampai homogen (Djamaan,
2015).
3.5.3 Pembuatan Inokulum Isolat Bakteri Penghasil P(3HB)

Kemudian isolat bakteri dibuat stok agar miring dan diinokulasikan 1-2
ose kedalam 10 ml. Medium CPO-bakto agar steril untuk produksi P(3HB),
selanjutnya di shaker selama 24 jam dengan kecepatan 200 rpm. Setalah 24 jam,
sebanyak 3 ml kultur benih dipindahkan ke dalam 100 ml. Medium mineral yang
mengandung CPO 4,6 g/L dishaker kembali selama 24 jam pada suhu 30°C
dengan kecepatan 200 rpm di dalam labu erlenmeyer (Djamaan, 2011).
3.5.4 Pembuatan Medium Pertumbuhan Bakteri Penghasil Bioplastik

P(3HB)
Medium pengkulturan bakteri yaitu medium mineral spesifik dengan
komposisi untuk 1 liter medium adalah sebagai berikut : KH 2PO4 3,7 g/L (NH4)
27
2HPO4 1,1 g/L, MgSO4.7H2O 0,25 g/L dan larutan mikroelemen 10 mL
(Djamaan, 2011).
3.5.5 Pemisahan Biomassa dan Supernatan

Proses pemisahan biomassa dan supernatan dilakukan dengan proses
sentrifugasi, 100 ml sampel dengan menggunakan alat sentrifugasi pada
kecepatan 300 rpm selama 20 menit. Lapisan bening supernatan dipisahkan dari
endapan biomassa dengan cara pemipetan. Lapisan supernatan digunakan untuk
menentukan pH , sedangkan biomassa yang dikeringkan dengan menggunakan
oven untuk menentukan berat kering dari kandungan P(3HB) (Djamaan, 2011).
3.5.6 Pengukuran pH Supernatan

Kalibrasi pH meter dengan larutan buffer pH 4 dan pH 8, kemudian pH
meter dicelupkan ke dalam botol infus 100 ml yang berisi larutan supernatan.
Tunggu hingga nilai pH terukur stabil kemudian dicatat nilai pH supernatan
(Djamaan, 2011).
3.5.7 Pengukuran Berat Kering Biomassa Bakteri

Timbang berat botol vial kosong sebelum dimasukan biomasa. Biomasa
dimasukan ke dalam botol vial kemudian dikeringkan ke dalam oven pada suhu
60°C hingga kering. Timbang berat vial yang berisi biomasa kering bakteri.hasil
pengurangan berat botol vial yang berisi biomasa kering bakteri dengan berat
botol vial kosong adalah berat sel kering bakteri (Djamaan, 2011).
28
3.6 Proses Metanolisis
3.6.1 Proses Metanolisis Standar
Sebanyak 5 mg standar P(3HB) dimasukkan ke dalam labu ukur 50 ml
dan ditambahkan kloroform hingga 50 ml. Sebanyak 2 ml larutan dipindahkan ke
dalam tabung berpenutup skru dan ditambahkan 1,7 ml metanol dan 0,3 ml asam
sulfat 98%. Tabung uji tersebut diketatkan dengan pembalut teflon untuk
menghindari kebocoran selama pemanasan didalam oven pada suhu 100˚C
selama 4 jam. Setelah pemanasan tabung uji dibiarkan sejuk kemudian 1 ml air
suling ditambahkan ke dalam tabung uji dan divortek selama 3 menit untuk
memisahkan fasa kloroform dan air suling. Fasa kloroform pada bagian bawah
dikeluarkan dengan pipet Pasteur dan air yang masih terbawa dikeringkan
dengan penambahan natrium sulfat anhidrat. Kemudian, larutan kloroform
dipisahkan ke dalam labu ukur 5 ml ditambahkan dengan kloroform hingga 5 ml
dan larutan ini digunakan untuk analisis kromatografi gas (Djamaan & Aulia,
2011).
3.6.2 Proses Metanolisis Sampel

Sebanyak 20 mg biomasa kering bakteri dimasukkan dalam tabung
berpenutup skru ditambahkan 2 ml larutan standar, 1,7 ml metanol dan 0,3 ml
asam sulfat 98%. Tabung uji tersebut diketatkan dengan pembalut teflon untuk
menghindari kebocoran selama pemanasan didalam oven pada suhu 100 ˚C
selama 4 jam. Setelah pemanasan tabung uji dibiarkan sejuk kemudian 1 ml air
suling ditambahkan ke dalam tabung uji dan divortek selama 3 menit untuk
memisahkan fasa kloroform dan air suling. Fasa kloroform pada bagian bawah
29
dikeluarkan dengan pipet Pasteur dan air yang masih terbawa dikeringkan
dengan penambahan natrium sulfat anhidrat. Kemudian, larutan kloroform
dipisahkan ke dalam labu ukur 5 ml ditambahkan dengan kloroform hingga 5 ml
dan larutan ini digunakan untuk analisis kromatografi gas (Djamaan & Aulia,
2011).
3.6.3 Penetuan Bioplastik P(3HB) dengan Menggunakan Kromatografi

Gas
P(3HB) standar dan P(3HB)yang terkandung di dalam sel kering
ditentukan secara kromatografi gas. Setelah reaksi metanolisis selesai,
tambahkan 1 ml air suling ke dalam larutan, sehingga akan terbentuk 2 lapisan,
lapisan kloroform di pipet dan diinjeksikan 1 μL ke dalam kromatografi gas
dengan menggunakan kolom RPx- 5MS dan dideteksi dengan spektometri masa
(Bul, 2014).
Temperatur detektor 250˚C, injektor 200˚C dan kolom 60˚C selama 4
menit dan dinaikan suhunya 10˚C dan ditambah dengan waktu tunggu selama 3
menit. Kandungan biopolimer dapat dianalisa dari luas daerah dibawah kurva
yang terbentuk pada kromatogram (Bul, 2017).
3.7 Karakteristik Bakteri Penghasil Biopolimer

3.7.1 Makroskopis
Dilakukan identifikasi secara makroskopis dengan cara mengamati warna
koloni, bentuk koloni, pinggir koloni, permukaan koloni, dan elevasi koloni,
kemudian dicatat hasil pengamatan dalam bentuk tabel.
30
3.7.2 Mikroskopis
Dilakukan karakterisasi secara mikroskopis dengan cara mengamati
bentuk Sel, Pewarnaan Gram, dan Pewarnaan Endospora.
3.7.3 Pewarnaan Gram
Kaca objek dibersihkan dengan alkohol dan dilewatkan beberapa kali
pada nyala api bunsen, kemudian diambil isolat bakteri dengan ose secara aseptik
dan dioleskan pada kaca objek. Isolat bakteri kemudian ditetesi larutan gram A
yang mengandung kristal violet dan dibiarkan selama 1 menit, selanjutnya dicuci
dengan air mengalir dan dianginkan hingga kering. Isolat bakteri kemudian
ditetesi lagi dengan larutan lugol’s iodine dan dibiarkan selama 1 menit,
kemudian dicuci dengan air mengalir dan dianginkan hingga kering. Selanjutnya
isolat bakteri dilunturkan alkohol 95% / alkohol aseton, kemudian dialiri air dan
dianginkan hingga kering. Isolat Isolat bakteri kemudian ditetesi safranin selama
30 detik dan dicuci dengan air mengalir, dikeringkan dengan kertas penghisap
dan dikering anginkan, kemudian dilakukan pengamatan dengan menggunakan
mikroskop 1000 kali (Budiyanto dkk, 2020).
3.7.4 Pewarnaan Endospora

Pewarnaan ini dilakukan menggunakan metoda pewarnaan Klein. Kaca
objek yang kering dan bebas lemak dilewatkan di atas nyala api. Kemudian
ditetesi inokulum dan dikeringkan dengan lampu spiritus. Kemudian ditetesi
asam sulfat dan didiamkan selama 3 detik, dicuci dengan air mengalir. Diteteskan
methylen blue dan didiamkan selama 3 menit, lalu dicuci dengan air mengalir.
31
Kemudiaan dikeringkan dan diperiksa dibawah mikroskop (Budiyanto dkk,
2020).
3.8 Uji Biokimia

Identifikasi bakteri berupa uji biokimia dilakukan di Laboratorium Balai
Veteriner, Bukittinggi, Sumatera Barat. Uji yang dilakukan antara lain : pembentukan
hidrogen sulfida dan gas, pembentukan indol, motiliti, fermentasi karbohidrat
(laktosa, glukosa, sukrosa dan manitol), pengujian metil merah, uji Voges Prokauer,
uji katalase, uji oksidasi /fermentasi, uji oksidase, pembentukan urea dan penggunaan
sitrat (Djamaan & Aulia, 2011).
32
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
1. Terdapat 5 isolat bakteri yang positif penghasil bioplastik P(3HB) pada sampel
tanah pasir putih di Gunung Sarik Kuranji, Kota Padang. Dengan kode sampel
yaitu TPP 1.1, TPP 2.3, TPP 5.1, TPP 8.5, TPP 10.1.
2. Karakterisasi dari isolat bakteri penghasil bioplastik P(3HB) pada sampel tanah
pasir putih, Gunung Sarik Kuranji Kota Padang, sebagai berikut :
a. Hasil pengamatan uji makroskopis terhadap isolat bakteri adalah sebagai

berikut :
Kode isolat Bentuk Warna Permukaan Elevasi Pinggir
bakteri
TPP 1.1 Bulat Putih Licin Timbul Bergelombang
TPP 2.3 Oval Putih Licin Timbul Rata
TPP 5.1 Bulat Putih Licin Timbul Rata
TPP 8.5 Bulat Putih Licin Timbul Rata
TPP 10.3 Oval Putih Licin Timbul Bergelombang
Keterangan : TPP = tanah pasir putih
b. Hasil pengamatan uji mikroskopis terhadap isolat bakteri adalah sebagai
berikut :
Kode isolat Pewarnaan Gram Bentuk sel bakteri Pewarnaan
bakteri (+/-) endospora (+/-)
TPP 1.1 + Basil +
TPP 2.3 + Basil +
TPP 5.1 + Basil +
TPP 8.5 + Basil +
TPP 10.1 + Basil +
33
c. Hasil pengamatan uji biokimia terhadap isolat bakteri adalah sebagai berikut :
Kode isolat Nama spesies
TPP1.1 Bacillus sp. 1

d. Hasil pengamatan kandungan P3HB dalam 100mg media fermentasi sebagai
berikut :
Kode isolat Kandungan P3HB dalam 100 mg media
fermentasi
TPP1.1 33, 3 mg
TPP2.3 51,12 mg
TPP5.1 30,47 mg
TPP8.5 40,45 mg
TPP10.1 28,14 mg
4.2 Pembahasan
Pada penelitian ini dilakukan isolasi bakteri penghasil bioplastik P(3HB) dari
sampel tanah pasir putih Gunung Sarik Kuranji Kota Padang. Pengambilan sampel
dengan menggunakan metode purposive sampling, dimana sampel diambil sebanyak
10 titik dengan jarak ± 10 – 20 M. Hal ini bertujuan supaya mendapatkan bakteri
34
yang bervariasi, sehingga nanti dapat diketahui katakterisasi bakteri yang berbeda
yang menghasilkan P3HB. Sampel yang diambil diduga memiliki bakteri yang
mampu bertahan dikondisi ekstrem sehingga berpotensi menghasilkan bioplastik
khususnya P(3HB). Sebelum dilakukan perlakuan terhadap sampel yang sudah
diambil sampel disimpan didalam lemari es, fungsi utama sampel disimpan dalam
lemari es adalah untuk menghambat atau memperlambat pertumbuhan
mikroorganisme sehingga sampel memiliki daya simpan yang lebih lama (Unus,
1985).
Proses isolasi bakteri mengunakan media CPO, CPO mengandung unsur karbon
sehingga bakteri cendrung untuk mengonsumsi sumber karbon secara berlebih dan
menyimpan sebanyak-banyak nya dalam granul sebagai cadangan makanan didalam
selnya. Dari 60 isolat yang dimurnikan terdapat 5 isolat yang positif mengandung
P(3HB). Kelima isolat bakteri yang menunjukkan hasil positif dengan memberikan
fluoresensi jingga dengan kekuatan pendar isolat bakteri yang berbeda-beda, dapat
dilihat pada Lampiran 6, Gambar 6. Fluoresensi jingga yang berpendar paling kuat
ditunjukkan oleh isolat bakteri TPP 8.5 .Perbedaan kekuatan pendar ini disebabkan
oleh perbedaan aktivitas enzim yang menyebabkan kemampuan yang berbeda dalam
menghasilkan enzim PHBsynthase. P(3HB) disintesis dari asetil KoA melalui kerja
tiga jenis enzim, yaitu βketothiolase, asetoasetil-koA reduktase, dan P(3HB) syntha
(Djamaan, 2015). Setiap mikroorganisme dapat menghasilkan enzim yang sama
namun dengan aktivitas yang berbeda-beda, dipengaruhi oleh kemampuan bakteri itu
sendiri (Glazer & Nikaido 1995).
35
Kelima isolat positif yang diperoleh difermentasi, fermentasi dilakukan dengan
memberikan sumber karbon tunggal minyak kelapa sawit terhadap bakteri. Proses
fremantasi dilakukan pada pH 7suhu 30 ºC, agitasi 200 rpm selama 48 jam di dalam
alat rotary shaker incubator, pH medium berada netral sehingga pertumbuhan bakteri
optimum, suhu 30 ºC merupakan suhu optimum untuk pertumbuhan bakteri karena
bakteri ini merupakan bakteri mesofilik. Kecepatan putar (agitasi) Rotary shaker
inkubator merupakan salah satu parameter yang ikut menentukan pertumbuhan
bakteri.Kecepatan agitasi yang digunakan adalah 200 rpm karena pada kecepatan
putar tersebut terjadi pengguncangan yang sempurna agar bakteri tetap tersuspensi
dan larutan medium tetap homogen sehingga nutrisi yang tersedia didalam medium
tidak menumpuk dan dapat digunakan secara optimal dalam pertumbuhan bakteri
Djamaan (2011),
Sentrifugasi dilakukan pada larutan fermentasi dengan kecepatan 3000 rpm
selama 20 menit.Sentrifugasi bertujuan untuk memisahkan biomassa sel bakteri dari
supernatant.Supernatant dibutuhkan untuk penentuan pH fermentasi. Hasil
pengukuran pH bakteri berkisar antara 6-7. P(3HB) didalam sel bakteri tersebut.
Perubahan pH akan mempengaruhi produksi P(3HB) dalam sel bakteri tersebut,
dimana penurunan pH yang berarti akan mengakibatkan terjadinya penurunan
konsentrasi P(3HB). Oleh karena itu dilakukan penambahan dapar fosfat pH 7 untuk
menghalangi terjadinya penurunan pH yang cukup besar Djamaan (2015).
Biomassa dapat dilihat pada (Lampiran 10) yang diperoleh dari 100 ml
fermentasi sel bakteri menggunakan sumber karbon minyak kelapa sawit CPO selama
36
48 jam yaitu TPP 1.1 sebesar 282mg, TPP2.3 sebesar 284mg, TPP 5.1 sebesar
235mg, TPP 8.5 sebesar 135mg, TPP 10.3sebesar 181mg. Proses metanolisis dapat
dilihat pada (lampiran 11 ) dilakukan bertujuan untuk mengkonversikan monomer 3-
hidroksibutirat menjadi bentuk esternya 3-hidroksimetilester sehingga dapat menguap
dan dideteksi oleh detektor pada alat GC. Penambahan aquades pada hasil metanolisis
dilakukan untuk memisahkan P(3HB) dengan biomassa dan senyawa intrasel lainnya.
P(3HB) dalam sampel akan cenderung tertarik pada fasa kloroform, hal ini
dikarenakan sifat kelarutan P(3HB). Hal ini didukung dengan 45 data kelarutan
P(3HB) yang menyatakan bahwa P(3HB) bersifat mudah larut dalam kloroform dan
sukar larut dalam air, Djamaan (2015).
Berdasarkan hasil pengamatan makroskopis menunjukan 5 isolat bakteri dapat
menghasilkan P(3HB), dimana diamati dari bentuk, warna, elevasi dan pingir bakteri .
Pada penelitian ini didapatkan bentuk bakteri yang bulat dan oval, warna putih,
permukaan licin, elevasi timbul, pingir bergelombang dan rata Kebanyakan bakteri
memiliki warna keputih-putihan, kelabu, kekuning-kuningan, hingga bening tetapi,
pada beberapa spesies mempunyai pigmen warna yang lebih tegas. Perbedaan koloni
dari mikroba merupakan ciri khas bagi suatu spesies tertentu. Bentuk koloni, warna
koloni, mengkilat tidaknya, halus dan kasarnya permukaan merupakan sifat-sifat yang
diperlukan untuk identifikasi suatu spesies (Suriawiria, 2005).
Berdasarkan hasil pengamatan mikroskopis dari 5 isolat bakteri penghasil
P(3HB) yang diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000 kali. Pada
pewarnaan Gram, kelima isolat menunjukan hasil bakteri gram postif dikarenakan
37
dinding sel bakteri tersebut disusun oleh peptidoglikan yang tebal sehingga menyerap
warna utama yaitu warna kristal violet dan tidak tercuci oleh alkohol dan menunjukan
bentuk sel basil. Bentuk sel dapat berbentuk kokus, basil, dan spiral. Bakteri bentuk
diplobasil merupakan dua sel bakteri yang berdempetan. Diplobasil muncul dari
pasangan basil setelah pembelahan, dan streptobasil muncul dalam bentuk rantai
(Pratiwi, 2008).
Pada uji biokimia dilakukan beberapa uji diantaranya: TSIA triple sugar iron
agar ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan dari suatu bakteri dalam
memfermentasikan gula untuk menghasilkan asam atau gas. Pada uji ini kode isolat
TPP 1.1, TPP 2.3, TPP 5.1, TPP 8.5, TPP 10.3, terjadi perubahan warna menjadi
warna kuning karna isolat ini mampu memfermentasikan laktosa dan sukrosa.
Apabila dia menunjukan warna merah maka dia mampu memfermentasikan laktosa.
Kemudian pengujian H2S yaitu menggunakan media yang sama dengan pengujian
fermentasi Karbohidrat sebelumnya yaitu Triple Sugar Iron Agar (TSIA) dimana
media ini mengandung tiga macam gula yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa. Hasil
pengujian dari ketiga isolat bakteri tersebut dengan kode isolat TPP 1.1, TPP 2.3,
TPP 5.1, TPP 8.5, TPP 10.3.
Berdasarkan uji katalase pada kelima isolat ini menunjukan adanya hasil positif
uji katalase ini bertujuan untuk menentukan kemampuan bakteri dalam mendegradasi
hydrogen proksida ( H2O2) melalui produksi enzim. Kemudian dilakukan uji oksidasi,
dimana uji oksidasi bertujuan untuk mengetahui bakteri jenis enterik atau non
enterik, reagen terdiri dari p-aminodimetil oksalat dan alfa naftol dengan
38
perbandingan 6:4. Hasil positif ditunjukan dengan perubaahan warna biru violet, dari
kelima isolat yang diuji menunjukan hasil negatif yang ditandai dengan tidak terjadi
perubahan warna, sedangkan apabila terjadi perubahan warna menjadi biru violet
maka uji oksidasi dinyatakan positif.
Berdasarkan Uji motilitas tujuan dari uji ini yaitu untuk mengetahui pergerakan
bakteri uji pada media yang ditusuk, dari kelima isolat bakteri menunjukkan hasil
yang positif. hasil penelitian ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Sarah
(2014) dimana hasil positif menujukkan pertumbuhan penyebaran bakteri baik
disekitar daerah penusukan sampai pada permukaan media. Uji indol merupakan uji
untuk menentukan kemampuan mikroorganisme dari sampel untuk menghasilkan
indol dari triptofan. Asam amino triptofan merupakan komponen asam amino yang
lazim terdapat dalam protein, sehingga asam amino dengan mudah dapat digunakan
oleh mikroorganisme akibat penguraian protein dari kelima isolat bakteri yang diuji
menunjukkan hasil yang negatif karena tidak terbentuknya cincin berwarna merah
setelah penambahan reagen kovac’s, sedangkan hasil yang positif adalah sebaliknya
(Sarah et al., 2014).
Berdasarkan uji urea dilakukan untuk mengetahui bakteri yang memiliki enzim
urease dimana urea diubah menjadi amoniak, hasil positif ditunjukkan dengan
perubahan warna media dari kuning menjadi merah. Media urea berisi phenol red.
Dari kelima isolat bakteri hasilnya positif. Uji sitras dilakukan untuk mengetahui
bakteri yang memiliki enzim sitras permease yang menggunakan sitrat sebagai
sumber karbon. Hasil positif ditunjukan dengan perubahan warna media dari hijau
39
menjadi biru, dari kelima isolat yang di uji menunjukan hasil negatif, kemudian uji
laktosa, glukosa, sukrosa dan manitol bertujuan untuk mengetahui enzim pengurai
gula hasil positif ditunjukan dengan perubahan warna dari biru kehijauan menjadi
warna kuning, dari kelima isolat yang diuji menunjukan hasil yang negatif untuk
ketiga uji ini yaitu uji laktosa, glukosa, dan sukrosa.
Berdasarkan uji MRVP (metil red voges proskauer) dilakukan untuk mengtahui
bakteri mengubah glukosa menjadi pivurat. MR untuk mengtahi jalur asam campur
dimana hasil samping berupa asam seperti asam laktat, asetat. VP untuk mengetahui
jalur butilen glikol dimana hasil samping betral yaitu acetion. Pada uji MR hasil
positif jika medium bening yang ditumbuhi bakteri ditambah metil red menjadi
merah dan uji VP hasil positif jika medium bening yang ditumbuhi bakteri
ditambahkan KOH dan alfa naftol berubah warna menjadi merah muda. Dari kelima
isolat yang di uji dua positif MR dan tiga isolat positif VP.
Berdasarkan uji oksidasi-fermentasi dimana proses fermentasi tanpa oksigen.
Medium yang ditusuk bakteri ditutup dengan paraffin untuk mencegah oksigen
masuk. Hasil positif ditunjukan dari perubahan warna hijau menjadi kuning semua
bakteri uji menunjukan hasil negatif. Uji gelatih dilakukan untuk mengetahui bakteri
yang mampu menguraikan gelatin. Hasil positif ditunjukan dari zona bening skitar
koloni bakteri dari kelima isolat yang diuji kelima isolat ini positif dari kelima isolat
uji menunjukan zona bening di sekitar koloni bakteri.
40
Berdasarkan hasil identifikasi biokimia dari kelima isolat bakteri kelima isolat
merupakan Bacillus sp, Bacillus sp merupakan Divisio Monera, kelas Schizomycetes,
ordo Eubacteriales, family Bacilliacea, genus Bacillus sp. Bacillus sp bersifat aerob
tetapi mampu tumbuh pada kondisi anaerob fakultatif dan tidak mampu
memfermentasikan gula. Berdasarkan ketebalan dinding sel (peptidoglikon) Bacillus
sp merupakan bakteri Gram postif dan berbentuk basil, bakteri ini bersifat mesofilik
yang memiliki sifat menguntungkan karena dapat hidup lama pada kondisi
lingkungan yang kurang mendukung pertumbuhannya dan mampu bertahan dilokasi
yang tercemar logam berat (Oves et al, 2013).
Hasil analisa kromatografi gas pada P(3HB) dapat dilihat pada (Gambar 11) hasil
analisa kuantitatif dilakukan dengan cara menghitung konsentrasi sampel yang
ditambah dengan larutan standar. penentuan kadar P(3HB) dapat dilihat berdasarkan
AUC standar pada kromatogram dengan membandingkan AUC sampel dengan AUC
standar , diperoleh persentase P(3HB) dengan perhitungan pada (Lampiran 15) .
Berdasarkan perhitungan diperoleh kandungan P(3HB) dalam 100ml media
fermentasi untuk TPP 1.1 sebanyak 33,3mg, TPP 2.3 sebanyak 51.12mg, TPP 5.1
sebanyak 30.47mg, TPP 8.5 sebanyak 40.45mg, TPP 10.3 sebanyak 28.14mg.
41
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Dari penelitian yang telah dilakukan dapat diperoleh kesimpulan sebagai berikut:
1. Hasil isolasi tanah pasir putih di Gunung Sarik Kuranji Kota Padang
menggunakan media CPO bakto agar diperoleh 60 isolat bakteri penghasil
P(3HB) 5 isolat diantaranya dengan kode sampel TPP 1.1, TPP 2.3, TPP 5.1,
TPP 8.5, TPP 10.1.
2. Hasil identifikasi karakteristik dari ke 5 isolat bakteri penghasil P(3HB) yaitu
bentuk koloni bulat dan oval, warna koloni putih pingiran bergelembung dan
rata, permukaan licin, golongan bakteri Gram positif dengan jenis Bacillus sp.
1, Bacillus sp. 2, Bacillus sp. 3.
5.2 Saran
Disarankan untuk melakukan optimasi penghasil P(3HB) pada kelima isolat
bakteri yang menghasilkan P(3HB) dan dilakukan identifikasi molekuler pada kelima
isolat bakteri tersebut.
42
DAFTAR PUSTAKA
Agustien, A.& Hakam, A. D.. 2002. Produksi Bioplastik poli (3-hidroksibutirat)

dariBakteri Rekombinan Escherichia coli.Jurnal Kimia Andalas. 8, 38- 41.
Andini, P. 2016. Penentuan Konsentrasi Minyak Kelapa Sawit dan Waktu Fermentasi
Bioplastik Poli(3-Hidroksibutirat) Menggunakan Bakteri Bacillus sp. UUAC
21501, Skripsi. padang: Universitas Andalas.
Budiyanto, D., Madyowati, S. O., & Lailiyah, N,. 2020. Daya hambat air perasan
jeruk nipis (Citrus Aurantifolia s.) Pada pertumbuhan bakteri edwardsiella tarda
dari benih lele dumbo (Clarias Gariepinus) secara in vitro. Jurnal Hasil
Penelitian;05(01):11–16.
Badan Standarisasi Nasional. 2006. SNI 01-2901- 2006, bulir 5.4 Minyak Kelapa
Sawit . Jakarta
Bul ID. Gas Chromatography Mass Spectrometry. Diakses tanggal 1 Oktober 2017
dari http://www.bris.ac.uk/nerclsmsf/techniques/gcms.html.
Djamaan, A,. 2011. Biosynthesis of a biopolymer poly (3-hydroxybutyrate) from a
mixture of palm oil and 2-butanol as carbon sources. Indonesian Journal of
Pharmacy ;22:315–322.
Djamaan, A, Aulia W,. 2011. Optimasi proses produksi bioplastik poli (3-
hidroksibutirat) dengan bakteri Bacillus sp faac 20801 menggunakan bahan
dasar jerami padi setelah fermentasi. Jurnal Farmasi Higea ;3(2):63–73.
Djamaan, A,. 2015. Konsep produksi biopolimer p(3hb) dan (p3hb-ko-3hv) secara
fermentasi. Padang: Andalas University Pres.
Dwijoseputro. 1998. Dasar- Dasar Mikrobiologi. Penerbit Djambatan, Jakarta..
Glazer, A. N & Nikaido, H. 1995. Microbial enzym in: Microbial Technology,
fundamentals of Applied Microbiolgy. New York: W. H. Freeman and Company.
Holderman, M, Sequeljoe, E,. 2017. Identifikasi bakteri pada pegangan eskalator di
salah satu pusat perbelanjaan di Kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains ;17(1) :13-16.
Hadioetomo R. S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. PT. Gramedia, Jakarta.
Dwidjoseputro. 2010. Dasar-dasar mikrobiologi. Jakarta: Penerbit Djembatan.
Irwandi, I,. 2018. Produksi bioplastik (p3hb) dari bahan dasar minyak kelapa sawit
dengan isolat Bacillus sp. Chempublish Journal ;3(2):85–93.
43
Irwandi, Djamaan A, Agustien A,. 2018. Produksi bioplastik p(3hb) dari bahan dasar
minyak kelapa sawit dengan isolat Bacillus sp. Chempublish Journal,
Volume ;3:85-93.
Kamsiati, E., Herawati, H., and Purwani, E. Y., 2017. Potensi pengembangan plastik
biodegradable berbasis pati sagu dan ubi kayu di indonesia Jurnal Penelitian
Dan Pengembangan Pertanian ;36(2):67.
Lay, B. W. 1994. Analisis Mikroba di laboratorium.Edisi 1. Raja Grafindo Persada,
Jakarta.
Lee, S. Y. 1996. Bacterial polyhydroxyalkanoates.Biotechnol. Bio-eng. 49, 1-14
Meganada H., Sukini, Y. 2017. Mikrobiologi keperawatan gigi (32nd ed.). Jakarta:
Badan Pusat Pengembangan Pendidikan dan Pemberdayaan Sumber Daya
Manusia.
Moat AG, Faster JW 2002. , Spector m. Microbial physiology. USA: John Willey dan
Sons Ltd.
pelezer,M. J., dan Chan, E.C.S 2006. Dasar-Dasar Mikrobiologi I. Penerjemah: H.S
Ratna. Jakarta: Penerbit UI Press.
Pena, T., Castillo, A. Garcia, M. Millan and D. Segura., 2014 Biotechnological
Strategies To Improve Production Of Microbial Poly-(3-Hydroxybutyrate): A
Review Of Recent Research Work, Microbial Biotechnology, 7, 278-293
Paul EA. Soil 2015. Microbiology, biology, and biochemistry (4th Edition). USA:
Elsevier.
Nurhakim, Y.I. 2014. Perkebunan Kelapa Sawit Cepat Panen. Jakarta : Penerbit UI
Press.
Oves, M., Khan, M.S., dan Zaidi, A.2013. Chromium Reducing and Plant Growth
Promoting Novel Strain Psaudomonas aeruginosa OSG41 Enhance Chicpea
Growth in Chromium Amended Soils. European Jurnal of Soil Biology.
56(1):72-83
Pena C, Castillo T, Garcia A, Millan M, Segura D. 2014 Biotechnological strategies
to improve production of microbial poly-(3-hydroxybutyrate): a review of recent
research work. Journal Microbial Biotechnology; 7(4): 278–293.
Rohmah, F., Rahayu, Y.S., Yuliani. Pemanfaatan bakteri Pseudomonas fluorescens,
jamur Trichoderma harzianum dan seresah daun jati (Tectona grandis) untuk
pertumbuhan tanaman kedelai pada media tanam tana kapur. Journal Microbial
Biotechnology, 2(2): 149–153.
Sarah M.P., Fatimawali., Aaltje M. 2014. Identifikasi Bakateri Resisten Merkuri Pada
44
Urine Feses dan Kalkulus Gigi Pada Individu Di Kecamatan Malalayang,
Manado, Sulawesi Utara. Jurnal e-Biomedik. 2(2): 532- 540.
Saptiningsih, E.,2007 Peningkatan produktivitas tanah pasir untuk pertumbuhan
tanaman kedelai dengan inakulasi mikorhiza dan rhizobium. journal
biotecnology; 9(2): 58-61.
Subakti. 2014. Perancangan interior pusat mitigasi. Jogja: Universitas kristen Petra.
Sudarsono A. 2008. Isolasi dan karakterisasi Bakteri pada ikan laut dalam Spesies
ikan Gindara (Lepidocibium Flavobronneum). Skripsi. Institut Pertanian Bogor,
Bogor.
Susanti, M. 2010. Produksi bioplastik poli (3-hidroksibutirat) p(3hb) secara proses
fermentasi menggunakan bakteri Bacillus brevis faac- 20801 dari minyak kelapa
sawit sebagai sumber karbon. Chempublish Journal ; 2(1): 27–31.
Suseno, J. E., Firdausi, K. S. 2008. Rancang bangun spektroskopi ftir (fourier
transform infrared) untuk penentuan kualitas susu sapi. Jurnal Fisika ;11(1):23-
28.
Taslihan, A. 2001. Cara Isolasi dan Identifikasi Bakteri dari Air, Ikan dan Udang di
Air Payau. BBPBAP. Jepara.
Yuniarti, L. ., Hutomo, S., & Rahim, A. 2014. Sintesis dan karakterisasi bioplastik
berbasis pati sagu (Metroxylon sp). E-J. Agrotekbis ;2(1):38–46.
45
Lampiran 1. Skema Kerja
Isolasi bakteri penghasil bioplastik P(3HB)
 10 g sampel tanah di suspensikan dengan aquadest steril ad 100ml dan

dibuat pengenceran bertingkat 10ˉ ⁴.
 1 ml suspensi diinokulasikan dengan media CPO bakto agar kemudian
diinkubasi pada suhu 35-37 ˚C selama 24 - 48 jam, isolat yang tumbuh
dipindahkan ke media yang baru dan bikin duplonya.
 Teteskan nile blue A 1 % pada koloni dan diamkan selama 30 menit.
 Amati dibawah sinar UV pada panjang gelombang 365nm. Dikatakan
positif apabila berfluoresensi jingga.
Pemurnian Isolat Bakteri
 Isolat bakteri yang positif diinokulasikan dalam agar miring dengan

medium CPO bakto agar.
 Inkubasi selama 24 jam pada suhu 35- 37 ˚C kemudian disimpan dalam
kulkas dengan suhu 4˚C.
Produksi P(3HB) dengan fermentasi bakteri
 Produksi P(3HB) dengan fermentasi bakteri, isolat dari stok agar

miring diinakulasikan 1-2 ose masukan kedalam 25 ml medium
fermentasi di shaker selama 24 jam.
 5 ml kultur pindahkan dalam 100 ml medium mineral minyak kelapa
sawit, inkubasi lagi selama 24 jam pada suhu 30ºC menggunakan
shaker dengan kecepatan 200 rpm.
46
Lanjutan skema kerja
Pemisahan biomasa dan supernatan
 100ml sampel disentrifugasi selama 20 menit kecepatan 3000 rpm,

lapisan supernatant dipisahkan dengan biomasa
 Lapisan supernatant digunakan untuk menentukan PH, biomasa
dikeringkan dengan metode oven untuk menentukan berat kering dan
kandungan P(3HB).
Proses metanolisi

 5 mg standar P(3HB) dalam 2 ml kloroform dan 2 ml larutan yang
mengandung 1,7 ml methanol dan 0,3 ml asam sulfuric 98% di dalam
tabung berpenutup skru yang diketatkan dengan pembalut teflon
dipanaskan selama 4 jam suhu 100oC.
 20 mg sel kering bakteri ditambah 2 mg standar P(3HB) dalam 2 ml

kloroform dan 2 ml larutan yang mengandung 1,7 ml methanol dan 0,3
ml asam sulfirik 98% di dalam tabung berpenutup skru yang diketatkan
dengan pembalut teflon dipanaskan selama 4 jam suhu 100oC.
 Setelah tabung uji ditambahkan 1 ml aquadest dikocok dengan vortex

selama 3 menit, fase kloroform diambil dengan pipet Pasteur air yang
terbawa dikeringkan dengan penambahan natrium sulfat.
47
Lanjutan Skema Kerja
Identifikasi P(3HB) dengan Kromatografi Gas-Spektometri

Massa (GC-MS)
 1 µl lapisan kloroform standar P(3HB) atau sampel dipipet dan
diinjeksikan ke dalam kromatografi gas dengan menggunakan kolom
RT X-5MS dan dideteksi detector spektometer massa.
 Analisa kuantitatif dengan mengamati area di bawah kurva.
 Analisa kualitatif dengan mengamati waktu retensi sampel dengan
waktu retensi P(3HB).
Identifikasi isolat penghasil P(3HB)
 Pengamatan secara makroskopik: warna koloni . bentuk koloni pinggir

koloni dan elevasi koloni.
 Pewarnaan gram, inokulum bakteri difiksasi diatas kaca objek ditetesi
dengan larutan Kristal violet didiamkan dicuci dengan aquadest
kemudian ditambah larutan iodin, dicuci dengan alkohol, diwarnai
kembali dengan safranin kemudian amati dibawah mikroskop.
 Pewarnaan endospora, inokulum bakteri difiksasi ditambah asam sulfat
dicuci dengan aquadest ditetesi methylene blue dicuci dengan aquadest
kemudian amati dibawah mikroskop.
 Uji biokimia, dilakukan di balai veteran, bukitinggi, Sumatra barat,
ujinya berupa pembentukan hydrogen sulfide dan gas, pembentukan
indol, motiliti, fermantasi, karbohidrat(laktosa, glukosa, sukrosa, dan
monitol.
48
Tabel 1 perbandingan jumlah koloni bakteri yang tumbuh dengan isolat bakteri positif
P(3HB) dengan madia bakto agar CPO pada sepuluh titik pengambilan sampel
Titik pengambilan Jumlah koloni bakteri Isolat bakteri positif
sampel P(3HB)
Titik 1 6 koloni 1
Titik 2 6 koloni 1
Titik 3 6 koloni -
Titik 4 6 koloni -
Titik 5 6 koloni 1
Titik 6 6 koloni -
Titik 7 6 koloni -
Titik 8 6 koloni 1
Titik 9 6 koloni -
Titik 10 6 koloni 1
Jumlah Koloni 60 Isolat 5
Tabel 2. Data Hasil Uji Biokimia Isolat Bakteri
No. Perlakuan yang
dilakukan
TPP TPP TPP TPP TPP
1.1 2.3 5.1 8.5 10.3
1 Aerob/anaerob aerob aerob aerob Aerob Aerob
2 TSIA K/K K/K K/K K/K K/K
3 Gas - - - - -
4 H2S - - - - -
5 Katalase + + + + +
6 Oksidase - - - - -
7 Mortilitas + + + + +
8 Indol - - - - -
9 Urea + + + + +
10 Sitrat - - - - -
11 Laktosa - - - - -
12 Glukosa - - - - -
13 Sukrosa - - - - -
14 Manitol - - - - -
15 MR - - + + -
16 VP - + + - +
49
Lampiran 2. Lokasi Pengambilan Sampel Tanah Gunung Sarik Kuranji Kota Padang
Gambar 5. Lokasi pengambilan sampel tanah gunung sarik kuranji kota

padang dilihat pada ketinggian 30 mdpl.
50
51
Lampiran 3. Sampel Tanah Gunung Sarik Kuranji
Kode sampel Penampakan tanah Keterangan

Titik 1 Warna putih, pucat
Titik 2 Warna putih,

kekuningan

kekuningan
52
kekuningan

kekuningan
53
Lampiran 4. Isolasi bakteri P(3HB) menggunakan media CPO bakto agar
No. Nomor sampel Jumlah koloni Jumlah sel CFU Foto hasil isolasi
1. TPP 1 80 8.0 × 105
2. TPP 2 100 1.0 × 106
3. TPP 3 92 9.2 × 105
4. TPP 4 60 6.0 × 105
5. TPP 5 30 3.0 × 105
54
6. TPP 6 Tersebar Tersebar
7. TPP 7 Tersebar Tersebar
8. TPP 8 70 7.0 × 105
9. TPP 9 20 2.0 × 105
10. TPP 10 69 6.9 × 105
55
Lampiran 5. Skrining bakteri P(3HB) menggunakan sinar UV 365 nm
Gambar 6. Skrining bakteri penghasil P(3HB) dengan larutan Nile-Blue A pada

media CPO bakto agar dengan kode isolat TPP 1.1.

media CPO bakto agar dengan kode isolat TPP 2.3

56
Lanjutan Lampiran 6

57
Lampiran 6. Isolat Bakteri P(3HB) Pada Media Agar Miring
Keterangan:
1. Isolat bakteri TPP 1.1

Lampiran 7. Fermentasi Media Inokulum Isolat Bakteri P(3HB)
Keterangan:
1. Cairan fermentasi isolat bakteri TPP 1.1

58
Lampiran 8. Fermentasi Media Produksi Isolat Bakteri P(3HB)
Keterangan:

Lampiran 9. Biomassa Kering Bakteri Penghasil P(3HB)
Keterangan:
1. Biomassa bakteri P(3HB) TPP 1.1

59
Lampiran 10. Lapiran Kloroform P(3HB)
Lampiran 11. Pengamatan Bentuk Sel Bakteri Pada Pewarnaan Gram Bakteri
Penghasil P(3HB)
Kode Gambar Keterangan

sampel
TPP 1.1 Pewarnaan gram: gram positif (+)

Bentuk sel: Basil

Bentuk sel: Basil

Bentuk sel: Basil
60
Bentuk sel: Basil

Bentuk sel: Basil
61
Lampiran 12. Hasil Pengujian Uji Biokimia
Keterangan:
1 : Uji TSIA
2 : Mortilitas
3 : Urea
4 : Sitrat
5 : Laktosa
6 : Glukosa
7 : Sakarosa
8 : Manitol
9 : Metyl Red (MR)
10 : Vogesprokuer (VP)
11 : Oksidase
12 : Fermentasi
13 : KCN
62
Lanjutan Hasil Pengujian Uji Biokimia
63
Lanjutan Hasil Pengujian Uji Biokimia
64
Lampiran 13. Uji Gelatin yang Dilakukan Pada Bakteri Gram Positif (+)
Keterangan: Uji Gelatin Pada Isolat Bakteri Gram Positif (+)
Gambar 11. Kromatografi Metanolisis Sel Kering Isolat Bakteri Standar P(3HB)
Standar
P3HB
Nama Puncak Waktu Retensi Area Tinggi Puncak Kadar (mg)
P(3HB) 11.780 310863502 11.779 20
65
Gambar 12. Kromatografi Metanolisis Sel Kering Isolat Bakteri TPP 1.1 A
P3HB
P(3HB) 11.785 147243207 11.784 20
Gambar 13. Kromatografi Metanolisis Sel Kering Isolat Bakteri TPP 1.1 B
P3HB
P(3HB) 11.775 174944868 11.777 20
66
P3HB
P(3HB) 11.775 218990520 11.774 20
Gambar 15 . Kromatografi Metanolisis Sel Kering Isolat Bakteri TPP 2.3 B
P3HB
P(3HB) 11.775 228918673 11.777 20
67
P3HB
P(3HB) 11.785 172194094 11.784 20
P3HB
P(3HB) 11.775 150421444 11.777 20
68
P3HB
P(3HB) 11.775 346202085 11.775 20
P3HB
P(3HB) 11.770 399175567 11.770 20
69
P3HB
P(3HB) 11.770 198818774 11.770 20
P3HB
P(3HB) 11.770 188298922 11.770 20
70
Tabel 3. Hasil Analisa Kuantitatif Kromatografi Gas pada P(3HB)
Rata-rata
Rata-rata Kandungan
duplo %
Kode Luas area AUC duplo P(3HB)
P(3HB)
sampel bawah kurva sampel AUC 100mg media
20mg
sampel fermentasi
biomassa
TPP 1.1 A 147243207 2.368 2.590

12,95% 33.3 mg
TPP 1.1 B 174944868 2.813
TPP 2.3 A 218990520 3.522 3.601 18.08% 51.12 mg
TPP 2.3 B 228918673 3.681
TPP 5.1 A 172194094 2.769 2.594 12.96% 30.47 mg
TPP 5.1 B 150421444 2.419
TPP 8.5 A 346202085 5.568 5.994 29.97% 40.45 mg
TPP 8.5 B 399175567 6.420
TPP 10.3 A 198818774 3.197 3.11 15.56% 28.14 mg
TPP 10.3 B 188298922 3.028
Lampiran 14. Rumus dan Perhitungan

1. Kadar sampel P(3HB) dari minyak kelapa sawit (CPO)
a. Kadar sampel P(3HB) TPP 1.1 A
AUC sampel
¿ × Kadar P (3 HB) standar
AUC standar
147243207
¿ ×5 mg
310863502
¿ 2.368
71
 Kadar sampel P(3HB) TPP 1.1 B
AUC sampel
AUC standar
174944868
¿ ×5 mg
310863502
¿ 2.813
 Duplo sampel P(3HB)

2.368+2.813
¿ =2.590
2
b. Kadar sampel P(3HB) TPP 2.3 A

AUC sampel
AUC standar
218990520
¿ ×5 mg
310863502
¿ 3.522

AUC sampel
AUC standar
228918673
¿ ×5 mg
310863502
¿ 3.681

3.522+3.681
¿ =3.601
2
c. Kadar sampel P(3HB) TPP 5.1 A

AUC sampel
AUC standar
172194094
¿ ×5 mg
310863502
¿ 2.769
72
AUC sampel
AUC standar
150421444
¿ ×5 mg
310863502
¿ 2.419

2.769+ 2.419
¿ =2.594
2
d. Kadar sampel P(3HB) TPP 8.5 A

AUC sampel
AUC standar
346202085
¿ ×5 mg
310863502
¿ 5.568

AUC sampel
AUC standar
399175567
¿ ×5 mg
310863502
¿ 6.420

5.568+ 6.420
¿ =5.994
2
e. Kadar sampel P(3HB) TPP 10.3 A

AUC sampel
AUC standar
198818774
¿ ×5 mg
310863502
¿ 3.197
73
AUC sampel
AUC standar
188298922
¿ ×5 mg
310863502
¿ 3.028

3.197+3.028
¿ =3.11
2
2. Persentase Kandungan P(3HB) Sampel Dari Media Fermentasi Minyak Kelapa

Sawit (CPO) Selama Waktu Fermentasi 48 Jam.
a. % sampel P(3HB) TPP 1.1
kadar sampel(duplo)
¿ × 100 %
Massa sampel yang ditimbang
2.590
¿ ×100 %=12.95 %
20 mg
b. % sampel P(3HB) TPP 2.3

kadar sampel(duplo)
¿ × 100 %
3.60
¿ ×100 %=18.08 %
20 mg
c. % sampel P(3HB) TPP 5.1

kadar sampel(duplo)
¿ × 100 %
2.594
¿ ×100 %=12.96 %
20 mg
d. % sampel P(3HB) TPP 8.5

kadar sampel(duplo)
¿ × 100 %
5.994
¿ ×100 %=29.97 %
20 mg
74
e. % sampel P(3HB) TPP 10.3
kadar sampel(duplo)
¿ × 100 %
3.11
¿ ×100 %=15.55 %
20 mg
3. Kandungan P(3HB) Dalam 100 Ml Media Fermentasi Dengan Sumber

Karbon 5 Mg/L Dilakukan Fermentasi Selama 48 Jam.
a. Kadar total P(3HB) Bacillus sp.

Kandungan sampel P(3HB) TPP 1.1
Biomassa sampel
¿ × Kandungan P(3 HB) pada GC
Massa sampel yang diuji diGC
282mg
¿ × 2.368=33.3 mg
20 mg
b. Kadar total P(3HB) Bacillus sp.

Biomassa sampel
284 mg
¿ ×3.60=51.12 mg
20 mg
c. Kadar total P(3HB) Bacillus sp.

Biomassa sampel
235 mg
¿ ×2.592=30.47 mg
20 mg
d. Kadar total P(3HB) Bacillus sp.

Biomassa sampel
75
135mg
¿ × 5.994=40.45 mg
20 mg
e. Kadar total P(3HB) Bacillus sp.

Biomassa sampel
181mg
¿ × 3.11=28.14 mg
20 mg
Lampiran 15 Alat Yang Digunakan
76
No Alat Keterangan
1 Laminar air flow berfungsi untuk

preparasi bahan-bahan mikrobiologi agar
tidak terkontaminasi dengan udara luar.
Alat ini dilengkapi dengan lampu UV,
dapat mematikan dalam ruangan laminar.
2 Sentrifus berfungsi untuk memisahkan

suatu larutan berdasarkan berat jenisnya.
3 Keterangan: Autoklav berfungsi untuk

sterilisasi peralatan kimia (alat gelas),
dengan temperatur 121oC dan tekanan
tinggi.
4 Digunakan untuk memanaskan dan

mengaduk larutan satu dengan yang lain.
5 Inkubator berfungsi untuk menginkubasi

atau penyiapan sampel pada temperature
tertentu dengan temperature penyimpanan
maksimal 70oC.
6 Inkubator Shaker berfungsi untuk

mengocok atau campuran bahan kimia
yang memerlukan temperature dan
keceparan (rpm) konstan, biasanya
digunakan untuk maserasi dan inkubasi
mikroba.
77

Badrya Draft Skripsi

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Badrya Draft Skripsi

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI

PENGHASIL BIOPLASTIK P(3HB) DARI SAMPEL

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

Penguraian sampah plastik dengan pembakaran akan menghasilkan senyawa dioksin

keywords : bioplastic, poly(3-hydroxybutyrate), gcms, Gunung Sarik Kuranji.

P(3HB) dengan Media CPO Bakto...............................................................49

Tabel 2. Data Hasil Uji Biokimia Isolat Bakteri.........................................................49

Tabel 3 Hasil Analisa Kuantitatif Kromatografi Gas pada P(3HB)...........................70

Lampiran 1. Skema Kerja...........................................................................................45

Lampiran 2. Lokasi Pengambilan Sampel..................................................................49

Lampiran 3. Sampel Tanah Gunung Sarik Kuranji....................................................51

Lampiran 4. Isolasi Bakteri P(3HB) Menggunakan Media CPO Bakto Agar............53

Lampiran 5. Skrining Bakteri.....................................................................................55

Lampiran 6. Isolat Bakteri pada Agar Miring.............................................................57

Lampiran 7. Fermentasi Media Inokulum Isolat Bakteri P(3HB)..............................57

Lampiran 8. Fermentasi Media Produksi Isolat Bakteri P(3HB)................................58

Lampiran 9. Biomassa Kering Bakteri P(3HB)..........................................................58

Lampiran 10. Lapisan Kloroform P(3HB)..................................................................59

Lampiran 11. Pengamatan Bentuk Sel Bakteri...........................................................59

Lampiran 12. Hasil Pengujian Uji Biokimia...............................................................59

Lampiran 13. Uji Gelatin............................................................................................64

Lampiran 14. Rumus dan Perhitungan........................................................................70

Lampiran 15. Alat yang Digunakan............................................................................76

Gambar 1. Bentuk Bakteri............................................................................................7

Gambar 2. Struktur Kimia P(3HB).............................................................................17

Gambar 3. Struktur Kimia P(3HB).............................................................................18

Gambar 4. Jalur Biosintesis P(3HB) dari Sumber Karbon.........................................21

Gambar 5. Lokasi Pengambilan Sampel.....................................................................50

Gambar 6. Skrining Bakteri TPP 1.1..........................................................................55

Gambar 7. Skrining Bakteri TPP 2.3..........................................................................55

Gambar 8. Skrining Bakteri TPP 5.1..........................................................................55

Gambar 9. Skrining Bakteri TPP 8.5..........................................................................56

Gambar 10. Skrining Bakteri TPP 10.3......................................................................56

Gambar 11. Kromatografi Standar P(3HB) A............................................................64

Gambar 12.Kromatografi TPP 1.1 A..........................................................................65

Gambar 13.Kromatografi TPP 1.1 B..........................................................................65

Gambar 14.Kromatografi TPP 2.3 A..........................................................................66

Gambar 15.Kromatografi TPP 2.3 B..........................................................................66

Gambar 16.Kromatografi TPP 5.1 A..........................................................................67

Gambar 17.Kromatografi TPP 5.1 B..........................................................................67

Gambar 18.Kromatografi TPP 8.5 A.........................................................................68

Gambar 19.Kromatografi TPP 8.5 B.........................................................................68

Gambar 20.KromatografiTPP 10.3 A.........................................................................69

Gambar 21.Kromatografi TPP 10.3 B.......................................................................69

tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Penguraian sampah plastik dengan

pembakaran akan menghasilkan senyawa dioksin yang berbahaya bagi kesehatan.

terdegradasi (biodegradable) atau bioplastik dan sulit terdegradasi (non

biodegradable) atau plastik konvensional (Kamsiati dkk., 2017).

Salah satu upaya untuk menanggulangi masalah tersebut adalah dengan

dapat dengan mudah terdegradasi baik melalui mikroorganisme maupun pengaruh

sejak puluhan tahun yang lalu (Djamaan, 2015).

mikroorganisme. Belakangan ini perhatian tertuju pada biosintesis secara fermentasi

atau disingkat dengan P(3HB) (Djamaan dkk, 2011).

intraven (Djamaan dkk, 2011).

Biopolimer merupakan bahan yang dapat mengalami penguraian secara alamiah

kimia, bahan pertanian, penyalut bahan obat yang memungkinkan terkendalinya

pelepasan obat-obatan. Beberapa mikroorganisme telah diketahui dapat menghasilkan

untuk pertumbuhannya pada keadaan pertumbuhan yang kurang menguntungkan,

2011). P(3HB) biasanya tumbuh pada lingkungan yang kurang menguntungkan

telah mengalami serangkaian pelapukan oleh proses alam sehingga membentuk

pertumbuhan tanaman (Saptiningsih, 2007)

Sebelumnya telah dilakukan penelitian isolasi dan karakterisasi bakteri penghasil

pada penelitian tersebut didapatkan hasil isolasi sebanyak 30 isolat bakteri 4

ITB 8, ITB 15, ITB 20, dan ITB 29 (Drajat, 2020).