Protokol Pewarnaan Williams (Kavak et al.

2004)

Bahan : 35 μL semen kambing

3.5 ml NaCl fisiologis
Minyak emersi

Cara Kerja : 1. Semen diencerkan dengan NaCl fisiologis

2. sebanyak 10 μL sampel diambil dan diteteskan di atas objek gelas serta dibuat
preparat ulas
3. fiksasi sampel preparat ulas di atas api Bunsen
4. Cuci preparat ulas dalam alkohol abosolute (etanol) selama 4 menit, lalu
dikeringudarakan
5. masukkan preparat dalam larutan 0.5% krolamin selama 1-2 menit, sampai mucus
hilang dan ulasan terlihat jernih
6. cuci dalam distilled water, dan selanjutnya dalam alkohol 95%
7. warnai dengan larutan Williams selama 8-10 menit
8. cuci dengan air mengalir dan keringkan
9. teteskan minyak emersi pada preparat dan amati di bawah mikroskop dengan
perbesaran 1000X. hitung minimal 200 sel spermatozoa ( normal dan abnormal)
 Protokol Pewarnaan Trypan Blue-Giemsa (TBG)
(Kovacs dan Foote 1992; Longobardi et al. 2020)

Bahan : 5 μL semen kambing

5 μL larutan trypan blue
Larutan natural red
Giemsa 7.5%

Cara Kerja : 1. Teteskan semen dan larutan TB secara bersamaan dandihomogenkan, selanjutnya
dibuat preparat ulas dan dikerigkan.
2. fiksasi preparat di dalam staining jar yang berisi larutan natural red selama 2 menit.
3. bilas preparat di bawah air mengalir dan dikeringkan
4. warnai preparat dengan menggunakan giemsa 7.5% yang terdapat di dalam staining
jar selama 12-20 jam pada suhu ruang.
5. bilas preparat di bawah air mengalir, selanjutnya dicelupkan ke dalam distilled water
selama 2 menit, selanjutnya dikeringkan.
6. amati di bawah mikroskop dengan perbesaran 400X dan hitung min. 200 sel
spermatozoa/10 LP. B
 Protokol Pewarnaan Eosin-Nigrosin

Bahan : 1 μL semen Kambing

3 μL pewarna Eosin-Nigrosin

Cara Kerja : 1.Teteskan sampel semen di atas gelas objek dan ditambahkan 3 μL
pewarnaan eosin-nigrosin.
2. Campuran sampel dihomogenkan dan dibuat preparat ulas.
3. Keringkan preparat ulas di atas heating table.
4. Amati preparat di bawah mikroskop dengan perbesaran 400X, hitung
min. 200 sel sperma/10 LP
 Protokol Motilitas (Indriastuti et al. 2020)

Bahan : 10 μL semen Kambing

40 μL NaCL

Cara Kerja : 1. Semen diencerkan dengan NaCl di atas gelas objek.

2. campuran semen dan NaCl ditutup dengan cover glas.
3. Amati sampel di bawah mikroskop sebanyak 5 LP.
 Protokol HOST (Jeyendran et al. 1984)

Bahan : 20 μL semen kambing

300 μL larutan HOST

Cara Kerja: 1. Siapkan mikrotube yang telah diisi dengan larutan HOST
2. Masukan sampel semen ke dalam mikrotub yang berisi larutan HOST
3. Inkubasi campuran semen dan larutan HOST selama 30 menit pada
suhu37°C
4. Ambil sebanyak 10 μL campuran di dalam mikrotub dan diteteskan di atas
gelas objek, kemudian ditutup dengan cover glass.
5. Amati di bawah mikroskop dengan perbesaran 400X
6. Hitung min. 200 sel spermatozoa atau 10 LP