Efek Rutin Flavonol Pada Kadar Besi Serum Dan Hati

Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.
com
Laporan Biosains(2021)41BSR20210720
https://doi.org/10.1042/BSR20210720
Artikel Penelitian
Efek rutin flavonol pada kadar besi serum dan hati

dalam model tikus genetik dari kelebihan zat besi
Zachary J. Hawula, Eriza S. Secondes, Daniel F. Wallace, Gautam Rishi dan V.Nathan Subramaniam
Pusat Genomik, Sekolah Ilmu Biomedis, Fakultas Kesehatan, Queensland University of Technology (QUT), Brisbane, Queensland 4059, Australia
Korespondensi:V.Nathan Subramaniam (nathan.subramaniam@qut.edu.au)
Rutin flavonol telah terbukti memiliki sifat antioksidan dan pengkelat besiin vitroDanin vivo. Sifat
ganda ini bermanfaat sebagai pilihan terapeutik untuk mengurangi akumulasi zat besi dan
pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS) yang dihasilkan dari kelebihan zat besi bebas. Efek rutin
pada metabolisme zat besi terbatas pada penelitian yang dilakukan pada tikus tipe liar baik yang
disuntikkan atau diberi diet tinggi zat besi. Efek rutin pada kelebihan zat besi yang disebabkan oleh
disregulasi genetik homoeostasis besi belum diteliti. Dalam penelitian ini kami menguji efek
pengobatan rutin pada pemuatan zat besi jaringan dalam model tikus genetik dari kelebihan zat
besi, yang mencerminkan pemuatan zat besi yang terkait dengan keturunan Tipe 3.
pasien hemokromatosis yang memiliki defek pada Transferrin Receptor 2 (TFR2). Tikus knockout (KO)
TFR2 jantan diberikan secara rutin melalui gavage oral selama 21 hari terus menerus. Setelah
pengobatan, kadar zat besi dalam serum, hati, duodenum dan limpa dinilai. Selain itu, kadar protein
feritin hati ditentukan oleh Western blotting, dan ekspresi gen homoeostasis besi dengan PCR real-
time kuantitatif. Pengobatan rutin menghasilkan penurunan yang signifikan dalam ekspresi protein
feritin hati dan saturasi transferin serum. Selain itu, tren penurunan kadar besi di hati dan serum,
dan peningkatan kapasitas pengikatan besi tak jenuh serum diamati. Ini adalah studi pertama yang
mengeksplorasi kegunaan rutin sebagai chelator besi potensial dan terapeutik pada model hewan
dari kelebihan zat besi genetik.
Perkenalan
Besi adalah mikronutrien mendasar untuk semua organisme; itu terlibat dalam beberapa fungsi penting seperti
metabolisme oksigen, transfer elektron dan enzim penting untuk sintesis DNA dan RNA [1]. Disregulasi besi dapat
menyebabkan berbagai gangguan klinis termasuk anemia dan hemokromatosis. Kelebihan zat besi adalah salah satu
toksisitas terkait logam yang paling umum dan sering disebabkan oleh cacat genetik dalam penyerapan zat besi,
pemberian zat besi parenteral (biasanya akibat anemia yang bergantung pada transfusi) atau kondisi patologis yang
ditandai dengan peningkatan zat besi [2].
Flavonoid adalah fitokimia polifenol alami yang ditemukan dalam buah-buahan dan sayuran serta
minuman termasuk teh dan anggur merah [3,4], di mana mereka memberi warna dan rasa pada makanan ini
Diterima: 25 Maret 2021
Direvisi: 14 Juni 2021 [5]. Keluarga senyawa flavonoid juga memiliki aktivitas farmakologis yang luas dan telah terbukti bermanfaat
Diterima: 21 Juni 2021 dalam berbagai penyakit termasuk diabetes mellitus, alergi, kanker, infeksi virus, sakit kepala, tukak lambung
dan duodenum, parodentosis dan peradangan [4,5]. Aktivitas farmakologi khas flavonoid termasuk interaksi
Naskah yang diterima online:
22 Juni 2021
dengan enzim, pembawa hormon, DNA, antioksidan (pemulungan radikal bebas) dan sifat pengkelat besi
Versi Catatan diterbitkan: [6-9]. Yang terakhir menjadikan senyawa ini pilihan menarik untuk pengobatan gangguan kelebihan zat besi.
09 Juli 2021
©2021 Penulis. Ini adalah artikel akses terbuka yang diterbitkan oleh Portland Press Limited atas nama Biochemical Society dan didistribusikan di bawah Creative Commons Attribution 1
License 4.0 (CC BY).
Rutin, juga dikenal sebagai rutoside, quercetin-3-Hai-rutinoside atau sophorin adalah glikosida flavonol [10]. Hal ini umumnya
ditemukan pada tanaman seperti soba dan tembakau [11] dan juga ditemukan di beberapa teh herbal [4]. Teh lima bunga emas
(yang mengandung sekitar 1,55 mg/g berat kering rutin) telah ditemukan menunjukkan sifat hepatoprotektif termasuk penurunan
kadar transaminase aspartat [12]. Bunga yang dapat dimakan lainnya sepertiSambucus nigraDanHedysarum coronariumyang
juga mengandung kandungan rutin yang tinggi ditemukan dapat menghambat ekspresi α-amilase dan α-glukosida [13]. Dalam
beberapa tahun terakhir, rutin juga menjadi pilihan pengobatan terapeutik yang potensial untuk berbagai kanker karena
kemampuannya untuk menargetkan berbagai penanda apoptosis, autophagic dan inflamasi termasuk, faktor-B nuklir, faktor
nekrosis tumor-α, rantai ringan3 / Beclin dan berbagai interleukin [ 9]. Namun, untuk penelitian ini sifat pengkelat besi rutin
diselidiki. Beberapain vitrostudi oleh kami dan orang lain telah dilakukan yang menunjukkan bahwa rutin memiliki aktivitas besi
chelating [14-16]. Husein dkk. [17,18] telah menunjukkan bahwa rutin yang diberikan secara oral secara signifikan menurunkan
kadar besi serum dan hati, kapasitas pengikatan besi total (TIBC), transferin (Tf), saturasi transferrin (TS) dan kadar protein feritin
dalam besi hidroksida polymaltose yang diinduksi besi albino pria. tikus. Selain itu, Gao et al. menemukan pengobatan dengan
rutin secara signifikan menurunkan kadar besi hati pada tikus Kunming betina [19]. Pengobatan rutin oral pada tikus knockout
ApoE diabetes pria secara signifikan mengurangi total besi non-hem dalam kelompok diabetes [20]. Namun, model ini tidak secara
akurat mencerminkan perolehan zat besi pada gangguan kelebihan zat besi genetik. Sepengetahuan kami, belum ada penelitian
yang menyelidiki peran flavonoid dalam konteks kelebihan zat besi genetik. Ini memberikan kesempatan untuk lebih memahami
potensi terapeutik rutin karena mutasi genetik yang mendisregulasi homoeostasis besi lebih cenderung menyebabkan kelebihan
zat besi pada manusia.
Transferin receptor 2 (TFR2) adalah homolog dari ransferrin receptor 1 (TFR1), protein serapan besi seluler utama [21].
TFR2 diekspresikan terutama dalam hepatosit dan sel prekursor eritroid [22], di mana ia diduga berperan dalam
pemantauan besi melalui kadar holo-Tf [23]. Grup kami sebelumnya telah merinci generasi totalTfr2knockout (KO) mouse
model, yang tidak menampilkan ekspresi protein Tfr2 [24]. Tikus-tikus ini memiliki kelebihan zat besi yang signifikan pada
manusia dengan hemokromatosis herediter Tipe 3 (HH) [24]. Dalam penelitian ini, kami memeriksaTfr2Model tikus KO dari
kelebihan zat besi untuk menentukan apakah pemberian rutin secara oral dapat digunakan untuk menyelamatkan tikus
dari kelebihan zat besi yang khas yang terlihat pada pasien Tipe 3 HH.
Bahan dan metode

Hewan percobaan
Tfr2−/−tikus jantan dengan latar belakang galur C57BL6 [24] (N= 6 untuk setiap kelompok) ditempatkan dan percobaan
dilakukan di Fasilitas Penelitian Biologi Universitas Queensland (UQBRF) di Translational Research Institute (TRI), Brisbane.
Tikus jantan dipilih untuk penelitian ini sebagai Hahn et al. sebelumnya tidak menunjukkan perbedaan jenis kelamin pada
tikus C57BL6 di hati, otak, jantung dan retina [25]. Semua prosedur eksperimental telah disetujui oleh Komite Etika Hewan
QUT dan UQ (nomor persetujuan QUT/TRI/511/16). Hewan menerima perawatan yang etis, manusiawi, dan bertanggung
jawab sesuai dengan kriteria yang diuraikan dalam 'Kode Australia untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan untuk
Tujuan Ilmiah, 2013'. Hewan memiliki akses gratis ke air dan makanan laboratorium standar dan ditempatkan di bawah
siklus terang/gelap 12 jam. Pada usia 5 minggu, tikus diberi oral gavage harian air steril (kontrol kendaraan) atau 60 mg /
kg (berat badan) rutin hidrat (Glentham Life Sciences, Wiltshire, Inggris Raya) dalam suspensi air steril selama 3 minggu
(21 terus menerus hari) . Dosis rutin yang disebutkan di atas dipilih berdasarkan penelitian sebelumnya dan laporan yang
menunjukkan bahwa rutin mengurangi kandungan besi dalam hewan ini [17,18,26,27]. Tikus ditimbang setiap hari untuk
menentukan jumlah pengobatan rutin, gavage oral harian dilakukan oleh staf teknis di UQBRF. Mencit yang kurus pada
awal pengobatan diberi bubur basah (nilai gizi identik dengan pakan normal) sebagai pengganti makanan kering untuk
mendorong penambahan berat badan. Suspensi rutin hidrat dibuat segar segera sebelum pemberian oral dengan
menambahkan air steril dan vorteks. Setelah perawatan (pada usia 8 minggu), tikus dibunuh, dan darah serta jaringan
dikumpulkan untuk analisis lebih lanjut. Jaringan dibekukan dalam es kering dan disimpan pada suhu −80◦C sampai waktu
analisis.
Parameter hematologis
Parameter hematologi diukur menggunakan Mindray BC-5000 Vet Hematology Analyzer (Mindray Medical
International Limited, Shenzhen, China) di TRI.
Indeks besi serum dan jaringan

Besi serum dan saturasi transferin diukur menggunakan kit reagen kapasitas pengikat besi total/besi (Pointe
Scientific, Canton, Michigan) sesuai petunjuk pabrik. Konsentrasi besi hati (HIC), duodenum (DIC), dan limpa
(SIC) ditentukan dengan menggunakan metode Torrance dan Bothwell [28].
2 ©2021 Penulis. Ini adalah artikel akses terbuka yang diterbitkan oleh Portland Press Limited atas nama Biochemical Society dan didistribusikan di bawah Creative Commons Attribution
Tabel 1Urutan primer PCR waktu nyata
Hamp-F AGAGCTGCAGCCTTTGCAC
Hamp-R ACACTGGGAATTGTTACAGCATTTA
Bmp6-F ATGGCAGGACTGGATCATTG
Bmp6-R CCATCACAGTAGTTGGCAGCG
Tfr1-F CATGAGGGAAATCAATGATCGTA
Tfr1-R GCCCCAGAAGATATGTCGGAA
Tfr2-F CTATCTGGTCCTGATCACCCCT
Tfr2-R TCAGGGTTGACATCTTCATCGA
Fpn1-F TTGCAGGAGTCATTGCTGCTA
Fpn1-R TGGAGTTCTGCACACCATTGAT
FtnH-F AAGTGCGCCAGAACTACCAC
FtnH-R GCCACATCATCTCGGTCAA
Smad7-F ACGGGAAGATCAACCCCGAG
Smad7-R TTCCGCGGAGGAAGGTACAG
Id1-F TCGTCGGTGGAACACATG
Id1-R ACCCTGAACGGCGAGATCA
Zip14-F GACAATTACGTCTCCAAGTCTGC
Zip14-R CTTCTTGGAAGGAAGTGTCTCG
Aktb-F GACGGCCAAGTCATCACTATTG
Aktb-R CCACAGGATTCCATACCCAAGA
Hprt-F GGACTGATTATGGACAGGA
Hprt-R GAGGGCCACAATGTGATG
Polr2a-F AGCTGGTCCTTCGAATCCGC
Polr2a-R CTGATCTGCTCGATACCCTGC
Pewarnaan histologis
Hati, duodenum, dan limpa difiksasi dalam formalin (10%), diproses dan dipotong di Fasilitas Histologis di QIMR Berghofer Medical
Research Institute. Jaringan diwarnai menggunakan Perls 'Prussian Blue untuk endapan besi seperti yang dijelaskan sebelumnya
oleh McDonald et al. [29]. Slide diwarnai balik dengan merah cepat nuklir (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri) selama 5 menit dan
dipasang dengan Depex (Sigma-Aldrich). Bagian-bagian tersebut dianalisis oleh perangkat lunak CaseViewer (3DHisTech,
Budapest, Hungaria).
PCR waktu nyata

Total RNA diisolasi dari hati menggunakan TRIzol (Life Technologies, Carlsbad, California) dan presipitasi isopropanol.
cDNA (menggunakan 1 μg total RNA dari hati) disintesis menggunakan kit sintesis cDNA SensiFAST (Bioline, Sydney, NSW,
Australia) dengan PCR kuantitatif waktu nyata (qPCR) yang dilakukan menggunakan kit SensiFAST SYBR No-Rox (Bioline).
Tingkat ekspresi semua gen target dihitung relatif terhadap rata-rata geometrik dari tiga gen referensi, β-aktin (Aktb),
hipoksantin-guanin fosforibosil transferase (Hprt) dan subunit RNA polimerase II yang diarahkan DNA RPB1 (Polr2a)
menggunakan 2−-CTmetode. Primer untuk mendeteksi gen target tercantum pada Tabel 1.
blotting Barat
Homogenat hati (20 μg) dielektroforesis pada gel SDS/poliakrilamida 12%. Protein kemudian dipindahkan ke membran
nitroselulosa (ukuran pori 0,2 μm) (Laboratorium Bio-Rad, Gladesville, NSW, Australia) menggunakan sistem blotting
Trans-blot Turbo (Bio-Rad). Membran kemudian diblokir dengan 10% susu skim dalam salin buffer Tris dengan 0,1%
Tween-20 (TBST) (Sigma-Aldrich)) dan kemudian diinkubasi dengan anti-GAPDH (1:360000, Merck Millipore, Bayswater,
Victoria, Australia) dan anti-ferritin (1:5000, Cell Signaling, Danvers, Massachusetts) diencerkan dalam susu skim 10%
semalam pada suhu 4◦C. Membran dicuci tiga kali dengan TBST sebelum diinkubasi dengan IgG anti-kelinci atau anti-tikus
sekunder terkonjugasi dengan horseradish peroxidase (1:1000) (65-6120, Invitrogen, Waltham, Massachusetts) diencerkan
dalam 10% susu skim selama 1 h pada suhu kamar. Membran selanjutnya dicuci sebelum diinkubasi dengan substrat
chemiluminescent (Lumina Forte; Merck Millipore) dan dicitrakan pada sistem pencitraan Chemidoc (Bio-Rad) untuk
berbagai titik waktu. Noda dikuantifikasi menggunakan ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland).
Gambar 1.Parameter hematologi air dan yang diolah dengan rutinTfr2tikus KO

Efek pengobatan rutin dengan oral gavage selama 21 hari berturut-turut pada (A) hemoglobin, (B) hematokrit, (C) Jumlah sel darah merah (sel darah
merah), (D) MCV (rata-rata volume sel), (e) MCH (rata-rata hemoglobin sel) dan (F) MCHC (konsentrasi hemoglobin sel rata-rata) diukur dalamTfr2Tikus
jantan KO diobati dengan rutin hidrat atau kontrol kendaraan (N= 6 di setiap kelompok) dengan oral gavage selama 21 hari berturut-turut. Data
ditampilkan sebagai plot titik, dengan garis yang menunjukkan rata-rata dan kesalahan standar rata-rata (SEM). Tidak ada perbedaan yang signifikan
secara statistik yang diamati antara kelompok yang menggunakan Student yang tidak berpasanganTtes (P>0,05).
Gambar 2.Indeks besi jaringan

Efek pengobatan rutin dengan oral gavage selama 21 hari berturut-turut pada (A) HIC (konsentrasi besi hati), (B) SIC (konsentrasi besi limpa), dan (C)
DIC (konsentrasi besi duodenum) diukur dalamTfr2Tikus jantan KO diobati dengan rutin hidrat atau kontrol kendaraan (N= 6 di setiap kelompok)
dengan oral gavage selama 21 hari berturut-turut. Data ditampilkan sebagai plot titik, dengan garis yang menunjukkan rata-rata dan kesalahan
standar rata-rata. HIC menunjukkan kecenderungan penurunan kandungan besi menggunakan Student yang tidak berpasanganTtes (P=0,15).
Analisis statistik
Analisis statistik variabel antar kelompok perlakuan dianalisis dengan menggunakan Student's tidak berpasanganTuji dalam
perangkat lunak GraphPad Prism 8.4.3 (GraphPad Software, San Diego, CA) denganP-nilai<0,05 dianggap signifikan secara
statistik.
Hasil
Parameter hematologis
Kami pertama kali melakukan analisis hematologis pada tikus yang dirawat secara rutin dan kendaraan. Analisis ini menunjukkan bahwa
perlakuan rutin selama 21 hari tidak berpengaruh nyata terhadap parameter hematologi mencit yang diberi perlakuan. Seperti dapat dilihat
pada Gambar 1, kadar hemoglobin, jumlah sel darah merah (RBC), hematokrit, hemoglobin sel rata-rata (MCH), volume sel rata-rata (MCV)
dan konsentrasi hemoglobin sel rata-rata (MCHC) semuanya sebanding antara rutin- dan kendaraan. -tikus kontrol yang dirawat. Tidak ada
perubahan yang terdeteksi pada kadar neutrofil, monosit dan basofil setelah pengobatan rutin (data tidak ditampilkan).
Penilaian status besi di hati, limpa, duodenum dan serum

Kami kemudian menentukan konsentrasi besi jaringan menggunakan uji kolorimetri untuk mendeteksi besi besi total di dalam
hati, limpa dan duodenum (Gambar 2). Besi serum total, kapasitas pengikatan besi total (TIBC), pengikatan besi tak jenuh
Gambar 3.indeks besi serum

Efek pengobatan rutin dengan oral gavage selama 21 hari berturut-turut pada (A) kandungan serum besi total, (B) UIBC (kapasitas pengikat
besi tak jenuh), (C) TIBC (kapasitas pengikatan besi total) dan (D) saturasi transferin diTfr2tikus jantan KO (N=5 kontrol kendaraan;N= 6 rutin
dirawat). Satu tikus kontrol dikeluarkan dari analisis karena hemolisis sampel darah. Data ditampilkan sebagai plot titik, dengan garis yang
menunjukkan rata-rata kesalahan standar rata-rata. Perbedaan yang signifikan secara statistik (Student'sTtes (P<0,05)) dilambangkan
dengan *.
kapasitas (UIBC) dan saturasi transferin (TS) juga diukur (Gambar 3). Pengobatan rutin menghasilkan
kecenderungan penurunan HIC (2635,39 μg/g − 404,15
SEM+ vs 1973,91 μg/g; SEM+− 307.41;P=0,15), sedangkan SIC (1747,62
mg/g SEM − + 149,49 vs 1829,13 μg/g; SEM+− 79,58;P=0,60) dan DIC (1419,65 μg/g SEM + − 143,19 vs 1307,00 μg/g;
SEM+− 117,35;P= 0,63) serupa pada tikus yang diberi perlakuan kendaraan dan rutin.
Analisis kadar besi serum (Gambar 3) mengidentifikasi kecenderungan penurunan besi serum total (P=0,098) dan peningkatan
UIBC (P=0,0554) dalam kelompok yang diberi perlakuan rutin. Yang penting kelompok yang dirawat secara rutin menunjukkan TS
yang menurun secara signifikan (P=0,0485) (Gambar 3D). Dalam analisis indeks besi serum, satu tikus dalam kelompok kontrol
harus dikeluarkan karena hemolisis sampel darah.
Pewarnaan Perls menunjukkan berkurangnya zat besi hati setelah pengobatan rutin
Pola pemuatan besi hati dinilai dengan pewarnaan Perls' Prussian Blue dari bagian hati yang representatif dari masing-masing kelompok
(berdasarkan rata-rata HIC) (Gambar 4A,B). Ini menunjukkan bahwa ada penurunan besi besi dalam kelompok yang diberi perlakuan rutin
dibandingkan dengan kelompok kontrol (ditunjukkan dengan pengurangan pola pewarnaan biru). Pewarnaan Perls pada duodenum
(Gambar 4C, D) dan limpa (Gambar 4E, F) dari tikus ini tidak menunjukkan perubahan distribusi besi besi antara kelompok kontrol dan
kelompok yang diberi perlakuan rutin.
Ekspresi mRNA dari gen terkait homoeostasis besi tidak terpengaruh oleh
pengobatan rutin
Tingkat mRNA gen yang dikenal untuk mengatur homoeostasis besi kemudian diukur dalam hati yang dirawat secara rutin dan
kendaraan.Tfr2-KO tikus menggunakan qPCR. TIDAKTfr2mRNA hadir pada tikus kontrol atau tikus yang dirawat secara rutin
(Gambar 5H) yang menunjukkan tikus benar-benar KO. Seperti dapat dilihat pada Gambar 5, protein morfogenetik tulang 6 (Bmp
6), feroportin (Fpn), rantai berat feritin (FtnH), penghambat pengikatan DNA 1 (Id1), SMA dan Mothers Against Decapentaplegic
homolog 7 (Smad7),Tfr1dan Zrt-, Irt-like protein-14 (Zip14) kadar mRNA tidak berbeda secara signifikan antara kelompok kontrol
dan kelompok yang diberi perlakuan rutin.Hampekspresi juga tidak berubah secara signifikan setelah pengobatan rutin (Gambar
5D).
Gambar 4.Pewarnaan histologis untuk besi

Pewarnaan Perls untuk (A,B) hati, (C,D) duodenum dan (e,F) bagian limpa dari perwakilanTfr2Tikus jantan KO yang diobati dengan kontrol kendaraan
(A,C,E) atau rutin hidrat (B,D,F) dengan gavage oral selama 21 hari berturut-turut, menunjukkan penurunan zat besi hati dalam kelompok yang diobati
secara rutin dibandingkan dengan kelompok kontrol sementara tidak ada perubahan yang terlihat pada limpa dan duodenum. Bilah skala =100 μm.
Gambar 5.ekspresi mRNA gen homeostasis besi

Ekspresi gen yang diketahui memodulasi homoeostasis besi di dalam hatiTfr2Tikus jantan KO diperlakukan baik rutin hidrat atau kontrol kendaraan (N
=6) dengan oral gavage selama 21 hari berturut-turut. tingkat ekspresi mRNA dari (A)Bmp6, (B)Fpn1, (C)FtnH, (D) hepsidin (Hamp), (e)Id1, (F)Smad7, (G)
Tfr1, (H)Tfr2Dan (SAYA)Zip14(relatif terhadap rata-rata geometris dari tiga gen referensi:Aktb,Hprt, Dan Polr2a). Data ditampilkan sebagai plot titik,
dengan garis yang menunjukkan nilai rata-rata dan bilah kesalahan menunjukkan kesalahan standar rata-rata. Tidak ada perbedaan yang signifikan
secara statistik yang diamati antara kelompok yang menggunakan Student yang tidak berpasanganTtes (P>0,05).
Gambar 6.Analisis western blot feritin

Ekspresi protein feritin di dalam hatiTfr2Tikus jantan KO diobati dengan rutin hidrat atau kontrol kendaraan (N=6) dengan oral gavage selama 21 hari
berturut-turut. (A) Analisis western blot 20 μg homogenat hati tikus dengan antibodi terhadap feritin dan GAPDH sebagai kontrol pemuatan, (B)
kuantifikasi kadar protein setelah normalisasi ke GAPDH. Pengobatan rutin menghasilkan penurunan kadar protein feritin secara signifikan pada
kelompok perlakuan dibandingkan dengan kelompok kontrol. Data ditampilkan sebagai plot titik, dengan garis yang menunjukkan rata-rata dan
kesalahan standar rata-rata. Perbedaan yang signifikan secara statistik (Student'sTtes (P <0,05)) dilambangkan dengan
*.
Ekspresi feritin hati menurun setelah pengobatan rutin

Karena ferritin adalah protein penyimpanan besi dan ekspresinya sebagian besar mencerminkan kadar besi di dalam hati, kami
selanjutnya menilai tingkat protein feritin di hati. Tingkat protein feritin ditentukan oleh Western blotting menggunakan antibodi
spesifik feritin yang diangkat terhadap subunit rantai berat (Gambar 6). Perbandingan intensitas pita aktin dan feritin yang
ditemukan, menunjukkan bahwa ekspresi protein feritin secara signifikan lebih rendah pada kelompok yang diberi perlakuan rutin
dibandingkan dengan tikus kontrol (Gambar 6B). Hal ini sesuai dengan pengurangan beban besi di hati seperti yang terlihat pada
pewarnaan Perls dan tren yang terlihat pada analisis HIC.
Diskusi
Rutin, sebuah flavonol, memiliki sifat antioksidan dan pengkelat besi [15,18,19,30,31]. Perawatan rutin telah ditemukan untuk mengurangi
kadar zat besi pada hewan yang disuntik dengan zat besi untuk menginduksi kelebihan zat besi [18,31]. Rutin mampu mengkelat besi
bahkan ketika diberikan secara oral [17-20]. Ini merupakan keuntungan yang jelas dibandingkan dengan chelator besi terapeutik yang saat
ini digunakan seperti DFO yang membutuhkan waktu injeksi yang lama, sangat berdampak pada tingkat kepatuhan pasien. Namun, sampai
saat ini belum ada penelitian yang dilakukan mengenai efek senyawa ini pada hewan dengan kecenderungan genetik untuk kelebihan zat
besi seperti yang terlihat pada pasien dengan HH. Hal ini mengakibatkan adanya kesenjangan pengetahuan tentang penerapan rutin
sebagai terapi penyakit, karena kelebihan zat besi dalam manusia lebih mungkin terjadi karena mutasi genetik yang menghasilkan
homoeostasis besi yang tidak teratur. Dalam penelitian ini, tikus yang meniru pola pemuatan zat besi HH Tipe III diberi perawatan rutin oral
setiap hari selama 21 hari terus menerus.
Tfr2Tikus KO mengalami peningkatan kadar besi hati setelah 3 minggu pada makanan laboratorium standar [32]. Perawatan
rutin tikus ini selama 3 minggu menghasilkan kecenderungan penurunan HIC dan penurunan ekspresi feritin yang signifikan
seperti yang diharapkan dari penghilangan besi dari jaringan ini. Sementara ekspresi ferritin juga dapat dipengaruhi oleh
rangsangan peradangan, tingkat neutrofil, monosit dan basofil tidak berbeda secara signifikan pada kelompok yang diobati
dengan rutin. Ini menunjukkan bahwa efek peradangan tidak mungkin mempengaruhi perubahan ekspresi feritin. Penurunan HIC
dan ferritin juga sesuai dengan sebelumnyain vivostudi yang melaporkan penurunan zat besi hati setelah pengobatan rutin pada
tikus yang mengandung zat besi. Pola perubahan UIBC, TIBC, besi total dan TS sebagai respons terhadap pengobatan rutin juga
sesuai dengan data yang dilaporkan sebelumnya [18].Tfr2Tikus KO diketahui mengalami peningkatan TS dibandingkan dengan
tikus WT setelah usia 3 minggu. Perawatan rutin menghasilkan penurunan TS yang signifikan pada tikus ini. Pengamatan serupa
dari penurunan TS dilakukan pada tikus yang diberi beban besi dengan pengobatan rutin [18]. Hewan-hewan ini juga
menunjukkan pengurangan zat besi total dan TIBC dengan peningkatan UIBC setelah pengobatan rutin. Tren serupa untuk
pengurangan total besi dan UIBC juga terlihat padaTfr2Tikus KO diobati dengan rutin. Pewarnaan Perls untuk besi besi hati juga
menunjukkan pengurangan simpanan besi pada tikus yang diobati secara rutin dibandingkan dengan kontrol kendaraan. Mengingat kadar
zat besi minimal dalam limpa dan duodenum, pengobatan rutin tampaknya tidak memiliki efek yang substansial seperti yang ditunjukkan
oleh pewarnaan Perls pada jaringan ini. Penurunan signifikan dalam ekspresi protein feritin dan TS, kecenderungan penurunan kandungan
besi dalam hati dan serum dan perbedaan yang diamati dalam pola pemuatan besi dengan pewarnaan Perls secara bersama-sama
menunjukkan bahwa rutin memang memiliki kemampuan untuk mengurangi besi hati dan serum dalam hal ini. model kelebihan besi
genetik.
Dalam beberapa tahun terakhir, sifat antioksidan dari rutin telah diteliti untuk pengobatan gangguan serval termasuk, sebagai
pelindung saraf [33], agen antitumor [34] dan untuk mencegah hepatotoksisitas pada cedera hati akibat alkohol [35]. Sifat
antioksidan dan anti-inflamasi rutin yang diketahui ini cenderung membantu dalam memerangi generasi spesies oksigen reaktif
(ROS) yang dihasilkan dari kelebihan zat besi. Aktivitas multimekanisme rutin ini merupakan keunggulan utama flavonoid
dibandingkan senyawa kimia lainnya untuk digunakan sebagai terapi.
Salah satu penjelasan untuk kurangnya penurunan yang signifikan dalam besi hati dalam kelompok yang diobati dengan rutin
mungkin merupakan akibat dari pola kelebihan zat besi yang berbeda. Model hewan sebelumnya memuat tikus dengan zat besi
melalui injeksi IP sebelum pemberian rutin [17,18]. Pertama, ini akan mengarah pada pola kelebihan zat besi yang berbeda
dibandingkan dengan penelitian saat ini karena jenis sel yang berbeda akan terpengaruh [36]. Selain itu, akumulasi zat besi setiap
hari di dalam tubuh kira-kira setara dengan hilangnya zat besi melalui pengelupasan membran mukosa [37]. Jumlah beban besi
tambahan selama periode pengobatan rutin pada penelitian sebelumnya menggunakan tikus yang disuntik besi akan minimal. Ini
kontras dengan penyerapan terus-menerus zat besi yang terlihat padaTfr2Tikus KO di mana pemuatan zat besi terlihat sebelum
dan selama pengobatan rutin. Karena penelitian ini hanya terdiri dari enam tikus per kelompok perlakuan, meningkatkan jumlah
tikus percobaan dan karenanya kekuatan penelitian, kemungkinan akan menghasilkan hasil yang lebih signifikan secara statistik.
Tidak ada perubahan signifikan yang terlihat pada ekspresi gen gen homoeostasis besi di hati. Pengurangan zat besi hati yang
disebabkan oleh rutin mungkin tidak cukup untuk mempengaruhi tingkat ekspresi beberapa gen, sepertiTfr1, yang tingkat
ekspresinya biasanya berkorelasi terbalik dengan simpanan besi seluler. Di bawah kondisi kelebihan zat besi pada hewan tipe liar,
Hamptingkat ekspresi diperkirakan akan menurun setelah khelasi besi [38] untuk meningkatkan penyerapan dan redistribusi
simpanan besi. Namun, tidak adanya perubahan dalamHampdalam penelitian kami kemungkinan karena regulasi hepcidin yang
tidak teratur akibat kurangnyaTfr2pada tikus ini. Karena TFR2 diketahui terlibat dalam penginderaan besi melalui jalur BMP-SMAD,
ini mungkin juga berkontribusi pada kesamaan ekspresi gen antara tikus yang dirawat dan yang tidak diobati dari gen lain yang
terlibat dalam jalur ini, sepertiBmp6,Id1DanSmad7.
Singkatnya, pengobatan rutin oral harianTfr2Tikus KO selama 21 hari menghasilkan penurunan kadar protein feritin hati dan TS
yang signifikan. Diambil bersama dengan kecenderungan penurunan kandungan besi hati, besi serum total, kapasitas pengikatan
besi tak jenuh dan pengurangan pewarnaan Perls di hati, hasil kami memberikan bukti bahwa pengobatan rutin oral memang
mengurangi simpanan besi. Penelitian ini memberikan analisis pertama tentang sifat pengkelat besi rutin dalam model tikus
genetik HH dan kemanjuran rutin untuk pengobatan potensial gangguan kelebihan zat besi genetik seperti HH. Studi selanjutnya
akan ditujukan untuk menentukan efek dari peningkatan konsentrasi rutin dan waktu pengobatan yang lebih lama serta efek pada
model genetik kelebihan zat besi dan talasemia lainnya.
Ketersediaan Data
Kumpulan data yang dihasilkan selama dan/atau dianalisis selama penelitian ini tersedia dari penulis yang sesuai berdasarkan permintaan yang
masuk akal.
Minat Bersaing
Para penulis menyatakan bahwa tidak ada persaingan kepentingan yang terkait dengan manuskrip tersebut.
Pendanaan
Pekerjaan ini didukung oleh Penghargaan Penelitian Pascasarjana QUT (untuk ZJH)]; dan sebagian oleh Hibah Proyek dari National
Health and Medical Research Council (NHMRC) Australia [nomor hibah APP1029574, APP1100088 (kepada VNS)]; dan NHMRC Senior
Research Fellowship [nomor hibah APP1118888 (kepada VNS)].
Sumber pendanaan tidak terlibat dalam desain studi, dalam pengumpulan, analisis dan interpretasi data, dalam penulisan laporan, dan
dalam keputusan penyerahan artikel untuk publikasi.
Kontribusi Penulis KREDIT

Zachary J. Hawula:Analisis formal, Investigasi, Metodologi, Penulisan—draf asli.Eriza S. Secondes:Konseptualisasi, Penyelidikan,
Metodologi, Penulisan—review dan penyuntingan.Daniel F. Wallace:Analisis formal, Pengawasan, Penulisan—review dan
8 ©2021 Penulis. Ini adalah artikel akses terbuka yang diterbitkan oleh Portland Press Limited atas nama Biochemical Society dan didistribusikan di bawah Creative Commons
Attribution License 4.0 (CC BY).
pengeditan.Resi Gautama:Konseptualisasi, Analisis formal, Pengawasan, Investigasi, Metodologi, Penulisan—review dan penyuntingan.V. Nathan
Subramaniam:Konseptualisasi, Metodologi, Analisis formal, Sumber Daya, Pengawasan, Akuisisi pendanaan, Penulisan—peninjauan dan
penyuntingan.
Singkatan
BMP6, protein morfogenetik tulang 6; DIC, konsentrasi besi duodenum; FtnH, rantai berat feritin; HH, hemokromatosis herediter;
HIC, konsentrasi besi hati; Id1, penghambat pengikatan DNA 1; KO, KO; qPCR, PCR kuantitatif waktu nyata; sel darah merah, sel
darah merah; ROS, spesies oksigen reaktif; SIC, konsentrasi besi limpa; SMAD, SMA dan Ibu Melawan Decapentaplegic; TBST,
saline buffer Tris dengan 0,1% Tween-20; TF, transferrin; TFR1, reseptor transferin 1; TFR2, reseptor transferin 2; TIBC, kapasitas
pengikatan besi total; TRI, Lembaga Penelitian Terjemahan; TS, saturasi transferin; UIBC, kapasitas pengikat besi tak jenuh;
UQBRF, Fasilitas Penelitian Biologi Universitas Queensland.
Referensi
1 Papanikolaou, G. dan Pantopoulos, K. (2017) Homeostasis besi sistemik dan erythropoiesis.Hidup IUBMB69, 399–413,
https://doi.org/10.1002/iub.1629
2 Crisponi, G. dan Remelli, M. (2008) Zat pengkelat besi untuk pengobatan kelebihan zat besi.Koord. kimia Putaran.252, 1225–1240,
https://doi.org/10.1016/j.ccr.2007.12.014
3 Mozaffarian, D. dan Wu, JHY (2018) Flavonoid, makanan olahan susu, dan kesehatan kardiovaskular dan metabolisme.Sir. Res.122, 369–384, https://
doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.309008
4 Zheng, J., Lu, B. and Xu, B. (2021) Pembaruan tentang manfaat kesehatan yang dipromosikan oleh bunga yang dapat dimakan dan mekanisme yang terlibat.Makanan Kimia.340, 127940,
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.127940
5 van Acker, SABE, van Balen, GP, van den Berg, DJ, Bast, A. dan van der Vijgh, WJF (1998) Pengaruh khelasi besi pada aktivitas antioksidan flavonoid.
Biokimia. Pharmacol.56, 935–943,https://doi.org/10.1016/S0006-2952(98)00102-6
6 Morel, I., Lescoat, G., Cogrel, P., Sergent, O., Pasdeloup, N., Brissot, P. et al. (1993) Aktivitas antioksidan dan pengkelat besi dari katekin flavonoid, quercetin dan diosmetin
pada kultur hepatosit tikus yang mengandung besi.Biokimia. Pharmacol.45, 13–19,https://doi.org/10.1016/0006-2952(93)90371-3 Sestili, P., Guidarelli, A., Dachà, M. dan
7 Cantoni, O. (1998) Quercetin mencegah kerusakan untai tunggal DNA dan sitotoksisitas yang disebabkan oleh tert-butilhidroperoksida: pemulungan radikal bebas versus
mekanisme pengkelat besi.Radikal bebas. Biol. Kedokteran25, 196–200, https://doi.org/10.1016/S0891-5849(98)00040-9
8 Nègre-Salvayre, A. dan Salvayre, R. (1992) Quercetin mencegah sitotoksisitas LDL teroksidasi pada garis sel limfoid.Radikal bebas. Biol. Kedokteran12,
101–106,https://doi.org/10.1016/0891-5849(92)90002-X
9 Nouri, Z., Fakhri, S., Nouri, K., Wallace, CE, Farzaei, MH and Bishayee, A. (2020) Menargetkan beberapa jalur pensinyalan pada kanker:
Pendekatan Terapi Rutin.Kanker (Basel)12, 2276,https://doi.org/10.3390/cancers12082276
10 Ganeshpurkar, A. dan Saluja, AK (2017) Potensi farmakologis Rutin.Farmasi Saudi. J.25, 149–164,
https://doi.org/10.1016/j.jsps.2016.04.025
11 Saldanha, E., Saxena, A., Kaur, K., Kalekhan, F., Venkatesh, P. and Fayad, R. (2019) Bab 23 - Polifenol dalam pencegahan kolitis ulserativa: a
mengunjungi kembali. Di dalamIntervensi Diet pada Penyakit Gastrointestinal(Watson, RR dan Preedy, VR, eds), hlm. 277–287, Academic Press
12 Zhao, C.-N., Tang, G.-Y., Liu, Q., Xu, X.-Y., Cao, S.-Y., Gan, R.-Y. et al. (2018) Teh bunga lima emas: ekstraksi hijau dan efek hepatoprotektif
terhadap kerusakan oksidatif.Molekul23, 2216,https://doi.org/10.3390/molecules23092216
13 Loizzo, MR, Pugliese, A., Bonesi, M., Tenuta, MC, Menichini, F., Xiao, J. et al. (2016) Bunga yang dapat dimakan: sumber fitokimia yang kaya dengan antioksidan
dan sifat hipoglikemik.J.Agri. Makanan Kimia.64, 2467–2474,https://doi.org/10.1021/acs.jafc.5b03092
14 Omololu, PA, Rocha, JB and Kade, IJ (2011) Lampiran rhamnosyl glucoside pada quercetin memberikan kemampuan pengkelat besi yang kuat pada antioksidannya
properti.Exp. Toksikol. Patol.63, 249–255,https://doi.org/10.1016/j.etp.2010.01.002
15 Horniblow, RD, Henesy, D., Iqbal, TH and Tselepis, C. (2017) Modulasi transport besi, metabolisme dan status oksigen reaktif oleh quercetin-iron
kompleks in vitro.Mol. Nutr. Makanan Res.61,https://doi.org/10.1002/mnfr.201600692
16 Hawula, ZJ, Davis, RA, Wallace, DF, Rishi, G. and Subramaniam, VN (2021) Identifikasi dan karakterisasi in vitro dari pengkelat besi
produk alami dan turunannya yang mengandung katekol.Biometal,https://doi.org/10.1007/s10534-021-00312-1
17 Hussein, S., Azab, ME dan Shall, SE (2013) Rutin melemahkan stres oksidatif hati yang diinduksi kelebihan zat besi pada tikus.Benha Vet. Kedokteran J.25, 84–98 18 Hussein,
SA, Azab, ME and Soheir, El (2014) Memperbaiki peran rutin pada stres oksidatif yang diinduksi oleh kelebihan zat besi pada jaringan hati tikus.Pak. J.
Biol. Sains.17, 964–977,https://doi.org/10.3923/pjbs.2014.964.977
19 Gao, Z., Xu, H. and Huang, K. (2002) Efek suplementasi rutin pada status antioksidan dan kandungan besi, tembaga, dan seng pada hati dan otak tikus.
Biol. Lacak Elem. Res.88, 271–279,https://doi.org/10.1385/BTER:88:3:271
20 Huang, R., Shi, Z., Chen, L., Zhang, Y., Li, J. and An, Y. (2017) Rutin meredakan kardiomiopati diabetik dan meningkatkan fungsi jantung pada penderita diabetes
Tikus ApoEknockout.eur. J. Pharmacol.814, 151–160,https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2017.08.023
21 Kawabata, H., Yang, R., Hirama, T., Vuong, PT, Kawano, S., Gombart, AF et al. (1999) Kloning molekuler reseptor transferin 2. Anggota baru dari
keluarga seperti reseptor transferin.J.Biol. kimia274, 20826–20832,https://doi.org/10.1074/jbc.274.30.20826
22 Deaglio, S., Capobianco, A., Cal, A., Bellora, F., Alberti, F., Righi, L. et al. (2002) Analisis struktural, fungsional, dan distribusi jaringan manusia
transferin reseptor-2 oleh antibodi monoklonal murine dan antiserum poliklonal.Darah100, 3782–3789, https://
doi.org/10.1182/blood-2002-01-0076
©2021 Penulis. Ini adalah artikel akses terbuka yang diterbitkan oleh Portland Press Limited atas nama Biochemical Society dan didistribusikan di bawah Creative Commons 9
Attribution License 4.0 (CC BY).
23 Johnson, MB dan Enns, CA (2004) Diferric transferrin mengatur stabilitas protein reseptor transferin 2.Darah104, 4287–4293,
https://doi.org/10.1182/blood-2004-06-2477
24 Wallace, DF, Summerville, L., Lusby, PE and Subramaniam, VN (2005) Deskripsi fenotip pertama dari tikus knockout reseptor transferrin 2, dan
peran hepsidin.Usus54, 980–986,https://doi.org/10.1136/gut.2004.062018
25 Hahn, P., Song, Y., Ying, G.-s, He, X., Beard, J. and Dunaief, JL (2009) Perubahan yang bergantung pada usia dan spesifik gender pada besi jaringan tikus karena regangan.
Exp. Gerontol.44, 594–600,https://doi.org/10.1016/j.exger.2009.06.006

26 Husein, SA, Azab, ME, Shalla, . dan Soheir, El (2013) Stres oksidatif hati yang diinduksi kelebihan zat besi pada tikus.Benha Vet. Kedokteran J.25, 84–98
27 Nkpaa, KW, Onyeso, GI dan Kponee, KZ (2019) Rutin membatalkan toksisitas striatal dan hippocampal yang diinduksi mangan melalui penghambatan penipisan zat besi,
stres oksidatif, peradangan dan menekan jalur pensinyalan NF-kappaB.J. Jejak Elem. Kedokteran Biol.53, 8–15,
https://doi.org/10.1016/j.jtemb.2019.01.014
28 Torrance, JD dan Bothwell, TH (1968) Teknik sederhana untuk mengukur konsentrasi zat besi penyimpanan dalam sampel hati yang diformalinisasi.S.Afr. J.Med. Sains.
33, 9–11
29 McDonald, CJ, Jones, MK, Wallace, DF, Summerville, L., Nawaratna, S. and Subramaniam, VN (2010) Peningkatan penyimpanan besi berkorelasi dengan penurunan
hasil penyakit dalam model tikus infeksi schistosomiasis.PLo SATU5, e9594,https://doi.org/10.1371/journal.pone.0009594
30 Kostyuk, VA dan Potapovich, AI (1998) Efek antiradikal dan chelating dalam perlindungan flavonoid terhadap cedera sel yang diinduksi silika.Lengkungan. Biokimia.
Biofisika.355, 43–48,https://doi.org/10.1006/abbi.1998.0708
31 Afanas'ev, IB, Dcrozhko, AI, Brodskii, AV, Kostyuk, VA and Potapovitch, AI (1989) Chelating dan mekanisme penghambatan radikal bebas
aksi rutin dan quercetin dalam peroksidasi lipid.Biokimia. Pharmacol.38, 1763–1769,https://doi.org/10.1016/0006-2952(89)90410-3
32 Subramaniam, VN, McDonald, CJ, Ostini, L., Lusby, PE, Wockner, LF, Ramm, GA dkk. (2012) Deposisi besi hati tidak memprediksi ekstrahepatik
pemuatan besi pada model tikus hemokromatosis herediter.Saya. J. Pathol.181, 1173–1179,https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.06.025 33 Budzynska, B.,
Faggio, C., Kruk-Slomka, M., Samec, D., Nabavi, SF, Sureda, A. et al. (2019) Rutin sebagai agen pelindung saraf: dari bangku ke samping tempat tidur.
Kur. Kedokteran kimia26, 5152–5164,https://doi.org/10.2174/0929867324666171003114154
34 Saleh, A., ElFayoumi, HM, Youns, M. and Barakat, W. (2019) Rutin dan orlistat menghasilkan efek antitumor melalui aksi antioksidan dan apoptosis.Naunyn
Lengkungan Schmiedebergs. Pharmacol.392, 165–175,https://doi.org/10.1007/s00210-018-1579-0
35 Lee, S., Lee, J., Lee, H. and Sung, J. (2019) Aktivitas protektif relatif dari quercetin, quercetin-3-glucoside, dan rutin pada cedera hati akibat alkohol.J.
Biokimia Pangan.43, e13002,https://doi.org/10.1111/jfbc.13002
36 Daba, A., Gkouvatsos, K., Sebastiani, G. and Pantopoulos, K. (2013) Perbedaan aktivasi hepcidin tikus dengan diet besi dan parenteral
dekstran besi yang diberikan: kompartementalisasi sangat penting untuk penginderaan besi.J.Mol. Kedokteran91, 95–102,https://doi.org/10.1007/
s00109-012-0937-5 37 Andrews, NC (1999) Gangguan metabolisme besi.N.Engl. J.Med.341, 1986–1995,https://doi.org/10.1056/NEJM199912233412607
38 El-Sheikh, AA, Ameen, SH and AbdEl-Fatah, SS (2018) Memperbaiki kelebihan zat besi dalam jaringan usus tikus jantan dewasa: quercetin vs deferoxamine.
J. Toksikol.2018, 8023840,https://doi.org/10.1155/2018/8023840
10 ©2021 Penulis. Ini adalah artikel akses terbuka yang diterbitkan oleh Portland Press Limited atas nama Biochemical Society dan didistribusikan di bawah Creative Commons Attribution License 4.0 (CC
BY).

Efek Rutin Flavonol Pada Kadar Besi Serum Dan Hati

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Efek Rutin Flavonol Pada Kadar Besi Serum Dan Hati

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

Efek rutin flavonol pada kadar besi serum dan hati

Korespondensi:V.Nathan Subramaniam (nathan.subramaniam@qut.edu.au)

Bahan dan metode

Indeks besi serum dan jaringan

Tabel 1Urutan primer PCR waktu nyata

PCR waktu nyata

Gambar 1.Parameter hematologi air dan yang diolah dengan rutinTfr2tikus KO

Gambar 2.Indeks besi jaringan

Penilaian status besi di hati, limpa, duodenum dan serum

Gambar 3.indeks besi serum

Gambar 4.Pewarnaan histologis untuk besi

Gambar 5.ekspresi mRNA gen homeostasis besi

Gambar 6.Analisis western blot feritin

Ekspresi feritin hati menurun setelah pengobatan rutin

Kontribusi Penulis KREDIT

Exp. Gerontol.44, 594–600,https://doi.org/10.1016/j.exger.2009.06.006

Anda mungkin juga menyukai