Praktikum

Farmakoterapi Penyakit
Infeksi & Pernafasan
MODUL 5

Penentuan
Konsentrasi Hambat
Minimum Dengan Metode
Pengenceran Tabung
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA
FAKULTAS FARMASI
OUTLINE

01 Capaian Pembelajaran Praktikum

Mampu mempraktekkan penentuan

KHM /MIC dengan metoda dilusi

02 Tujuan Praktikum
Mampu mempraktekkan penentuan
KHM /MIC dengan metoda dilusi
Teori Pengantar
Bakteri
A series of culture tubes are prepared, each containing a liquid medium a
nd a different concentration of a chemotherapeutic agent. The tubes
are then inoculated with the test organism and incubated for 16-20 h
ours at 35C. After incubation, the tubes are examined for turbidity (g
rowth).
Minimum Inhibitory Concentration (MIC): Is the lowest concentration o
f chemotherapeutic agent capable of preventing growth of the test or
ganism.
Minimum Bactericidal Concentration (MBC): Is the lowest concentrati
on of the chemotherapeutic agent that results in no growth (turbidity)
of the subcultures.
MIC
Minimal inhibitory concentration The lowest concentr
ation of antimicrobial agent that inhibits the growth of
a bacterium
 Metode

Difusi dan Dilu

Difusi Dilusi bioautografi
si

Kirby-Bauer Method ( Epsilometer test

cakram kertas) Makrodilusi Langsung
(E-Test)

Well difussion metho

d (perforasi) Mikrodilusi Tidak Langsung
Alat dan Bahan
 Alat Dan Bahan
Alat Bahan
o Alat gelas yang biasa digunakan di la
Antibiotik Uji
boratorium farmasi
Bakteri Uji Gram positif dan gram negative,
o alat Labu Takar 100 mL Inkubator
Media MHB dan MHA ,Air Steril
o Tabung reaksi
o Labu takar 25mL, 50 mL Cakram
o Kertas Alumunium Foil
o Kapas Berlemak Pinset Mikroba Uji
o Air Steril Gelas Piala Otoklav o Staphylococcus aureus
o Oven o Escherichia Coli
o Cawan petri. Pipet ukur Jarum ose
o Batang pengaduk Vortex
o Spektrofotometer.
PROSEDUR
 Pembuatan Media
o MHA o MHB
38 g Muehler Hilton a
23 g Muehler Hilton br
gar
oth
1 L aguadest dipanas
1 L aguadest
kan
dipanaskan

o PDB o PDA
36 g Potato Dextrose
39 g Potato Dextrose
Broth
agar
1 L aguadest
1 L aguadest
dipanaskan
dipanaskan

Disterilisasi dengan menggunakan autoklaf pada suhu 1210 C pada tekanan

2 atm selama 15 menit.
 Pembuatan Media
 INOKULASI MIKROBA

• Mikroba uji harus berasal dari galur murni, dapat memberi

kan respon yg bertingkat antara peningkatan konsentrasi d
gn peningkatan daerah hambatannya.

• Mikroba uji utk jenis antibiotik tertera pada Tabel FI IV, dip
elihara pada agar miring dan diremajakan setiap minggu
 INOKULASI MIKROBA
  PEMBUATAN SUSPENSI MIKROBA

• Inokula diperbanyak dalam media cair, inkubasi dilakukan

selama 24 jam hingga transmitan suspensi inokula 25%
blanko
• Skala McFarland adalah standard yang digunakan sebagai
referensi utk menentukan kekeruhan suspensi inokula uji,
sehingga jumlah inokula sesuai dengan kisaran yang
dipersyaratkan
  PEMBUATAN SUSPENSI MIKROBA

• Standard McFarland awalnya dibuat dengan mencampurkan

jumlah tertentu BaCl dengan H2SO4. campuran keduanya ak
an menyebentuk barium sulfat yang tersuspensi, sehingga m
enyebabkan kekeruhan
• Saat ini standard McFarland dibuat dari suspensi partikel
latex yg lebih awet dan stabil.
• Standard diperbandingkan secara visual dengan suspensi
inokula yang ditumbuhkan pada nutrient broth. Jika suspense
inokula terlalu keruh, maka dilakukan penambahan larutan
media. Jika suspensi inokula kurang keruh, maka dapat
ditambahkan suspensi bakteri
 Skala McFarland
McFarland Standard No. 0.5 1 2 3 4
1.0% Barium chloride (ml) 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4
1.0% Sulfuric acid (ml) 9.95 9.9 9.8 9.7 9.6
Approx. cell density (1X10^8 CFU/mL
1.5 3.0 6.0 9.0 12.0
)
% Transmittance* 74.3 55.6 35.6 26.4 21.5
Absorbance* 0.132 0.257 0.451 0.582 0.669
Panjang gelombang 600 nm
 PEMBUATAN SUSPENSI MIKROBA
 PEMBUATAN LARUTAN UJI

amoxicillin 1 gram/10 ml
 PENGUJIAN  1
Masukan Media MHB kesetiap tabung reaksi sebanyak 9 ml menggunakan
pipet volume.
  PENGUJIAN  2

Masukan Larutan Uji 1 ml kedalam tabung reaksi nomer 3 kemudian vortex.

Ambil 1 ml dari Ambil 1 ml dari Ambil 1 ml dari Ambil 1 ml dari
tabung 3 ke 4 ke tabung 4 ke 5 ke tabung 5 ke 6 ke tabung 6 ke 7 ke
mudian vortex mudian vortex mudian vortex mudian vortex

amoxicillin 1 gram/10 ml

Media MHB 9 ML Media MHB 9 ML Media Media Media Media

Media MHB 9 MHB 9 MHB 9 MHB 9
MHB 9 ML ML ML ML
ML
PPM ? PPM ? PPM ? PPM ? PPM ?
  PENGUJIAN  3

Masukan Suspensi bakteri 0.1 ml kedalam tabung reaksi nomer 2,3,4,5,

6,7 kemudian vortex.

Suspensi Bakteri

Kontrol - Kontrol + Media Media Media Media

Media MHB 9 MHB 9 MHB 9 MHB 9
MHB 9 ML ML ML ML
ML
 PENGUJIAN  4

INKUBASI
Pengamatan
Pengamatan

10 ppm 1000 ppm Kontrol +

1 ppm 100 ppm 10000 ppm Kontrol -
Pengamatan

10 ppm 1000 ppm Kontrol +

1 ppm 100 ppm 10000 ppm Kontrol -
Pengamatan

10 ppm 1000 ppm Kontrol +

1 ppm 100 ppm 10000 ppm Kontrol -
Pengamatan

10 ppm 1000 ppm Kontrol +

1 ppm 100 ppm 10000 ppm Kontrol -
  PENGUJIAN  4
Penentuan KBM

Masukan Media MHA (+15ml) kedalam cawan petri homogenkan

dan biarkan memadat

10 ppm inkubasi
1000 ppm Kontrol +
1 ppm 100 ppm 10000 ppm Kontrol -
Penentuan KBM

Apabila di cawan petri tidak tumbuh biakan bakteri

maka dosis 10000 ppm adalah KBM
Penentuan KBM

Apabila di cawan petri tumbuh biakan bakteri maka

dosis 10000 ppm bukan KBM hanya KHM saja

Kontrol -
CONTOH LAIN
10000 1000 100 10 P
PPM PPM PPM PM

Masukan Media MHA (+15ml) kedalam cawan petri homogenkan

dan biarkan memadat

10 ppm
1000 ppm Kontrol + inkubasi
1 ppm 100 ppm 10000 ppm Kontrol -
Penentuan KBM

10000 PPM 1000 PPM 100 PPM 10 PPM

Pengamatan
 Interpresentasi DATA

• Pengujian Antibiotik Amoksisilin dengan bakteri e.coli deng

an metode pengenceran tabung memiliki konsentrasi hamb
at minimum (KHM) sebesar 10000 ppm dan konsnetrasi B
unuh Minimum (KBM) 10000 ppm
 Thank you
Insert the title of your subtitle Here