PRAKTIKUM FARMAKOLOGI 2

MODUL 3
PENGUJIAN AKTIVITAS ANTIMIKROBA DENGAN METODE BROTH MICRODILUTION

UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA

UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

1. Kompetensi yang Dicapai :

Mahasiswa mampu melakukan penentuan nilai KHM dan KBM dengan metode broth
microdilution

1. Tujuan Praktikum :
Setelah menyelesaikan percobaan ini mahasiswa dapat memiliki keterampilan dalam
penentuan KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) dan KBM (Kadar Bunuh Minimum)
dengan metode broth microdilution method.”

2. Prinsip
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

ALAT DAN BAHAN

Alat Bahan
o Alat gelas yang biasa digunakan di
Tetrasiklin, Ciprofloksasi, dan Penicillin, Muehler
laboratorium farmasi
Hinton(MH) Broth dan MH Agar, Kapas berlemak,
o inkubator, oven, autoclaf, mikropipet,
cakram kertas, aluminium foil, air steril
Well plate, cawan petri

Mikroba Uji
o Staphylococcus aureus
o Escherichia Coli
o Pseudomonas aeruginosa
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

ALAT DAN BAHAN

UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

PENGANTAR

Metode

Difusi dan
Difusi Dilusi bioautografi
Dilusi

Kirby-Bauer
Epsilometer test
Method (cakram Makrodilusi Langsung
(E-Test)
kertas)

Well difussion
method Mikrodilusi Tidak Langsung
(perforasi)
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

Lanjutan
 Pembuatan Media

o MHA o MHB
38 g Muehler Hilton agar 23 g Muehler Hilton broth
1 L aguadest 1 L aguadest
dipanaskan dipanaskan

o PDB
36 g Potato Dextrose
o PDA
Broth 39 g Potato Dextrose
1 L aguadest agar
dipanaskan 1 L aguadest
dipanaskan

Disterilisasi dengan menggunakan autoklaf pada

suhu 1210 C pada tekanan 2 atm selama 15 menit.
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

Prosedur
 INOKULASI MIKROBA

Staphylococcus aureus
Eschericia coli
Pseudomonas aeruginosa
Candida Albicans MHA
PDA
MHA
PDA

Jamur diinkubasi selama 48 jam pada suhu 250 C

Bakteri diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370 C
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

Prosedur
 PEMBUATAN SUSPENSI MIKROBA

Vortek

1 µL jamur / bakteri
Kedalam 10 ml NaCl
0,9 % fisiologis

Dihasilkan Suspensi
bakteri yang sesuai
108 yeast/mL

Bandingkan dengan
MC.Forland
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

Pembuatan Larutan Uji

1024 ppm 1024 ppm 1024 ppm 1024 ppm

Amoksisilin Tetrasiklin ciproflokcaci Azitromicin

1 2 4 8 16 32 64 128 256 512

V1xN2=V2xN2
100 microx512ppm=200microliterxn2
N2=128 ppm
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

Prosedur
 MIKRODILUSI o Metode: Mikrodilusi
o Media: Bakteri MHB, Jamur
KHM PDB
Suspensi bakteri atau jamur sebanyak 5 μL o Suhu dan waktu inkubasi:
ditambahkan ke dalam 10 mL media Bakteri 37 oC selama 24 jam,
PDB/MHB kemudian diaduk dengan alat Jamur 25 oC selama 24-72 jam
o Pengamatan: Kejernihan
vortex.
100 μL Kolom
Masukan 100 μL
media Suspensi bakteri
Control _

Masukan 100 μL
Larutan Uji mulai
dari kolom 12

Control +

Didapat Kolom bening sebagai

KHM
Dari Zona Bening
Ambil 5μL
kemudian masukan
ke media
KBM
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

Pembahasan
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA 2020

TERIMA KASIH