Laporan singkat
DOI: 10.4274/tjh.2015.0335
Turk J Hematol 2016;33:153-155
Sel T Regulator pada Pasien dengan Idiopathic
Thrombocytopenic Purpura
Sel T Regulator pada Kasus Purpura Trombositopenik Idiopatik
Alev Akyol Erikci, Bulent Karagoz, Oguz Bilgi
Akademi Medis Militer Gülhane, Rumah Sakit Pelatihan dan Penelitian Haydarpaşa, Klinik Hematologi, İstanbul,
TurkiDiri Abstrak
Objektif:Immune thrombocytopenic purpura (ITP) adalah
gangguan perdarahan yang dimediasi oleh imun di mana
trombosit diopsonisasi oleh autoantibodi dan dihancurkan oleh
fagositosis yang dimediasi reseptor Fc oleh sistem
retikuloendotelial di dalam limpa. Proses autoimun juga
dipertimbangkan dalam patogenesis gangguan ini. Sel
CD4+CD25+FoxP3+ regulator T (Treg) dan CD8+CD28- sel
Treg berperan dalam penyakit autoimun. Kami menyelidiki sel
pengatur ini pada pasien ITP.
Bahan dan metode:Kami menyertakan 22 pasien ITP dan 16
subyek sehat yang sesuai usia. Sel CD4+CD25+FoxP3+ Treg
dan sel CD8+CD28- diselidiki dengan sitometri aliran tiga
warna. Rasio populasi sel ini terhadap total limfosit dihitung.
Analisis statistik dilakukan dengan uji Mann-Whitney U.
Hasil:Sel CD4+CD25+ Treg masing-masing adalah
9,69±3,70% dan 12,99±5,58% pada pasien dengan ITP dan
tinggi
kontrol. CD4+CD25 Sel FoxP3+ masing-masing adalah
27,72±19,74% dan 27,55±23,98% pada pasien ITP dan
kontrol. Persentase kedua jenis sel ini tidak signifikan secara
statistik jika dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Kesimpulan:Kami tidak menemukan perbedaan dalam rasio
sel Treg CD4+CD25+FoxP3+ atau sel CD8+CD28-T dalam
limfosit antara pasien dan subyek sehat. Kami menyimpulkan
bahwa sel-sel peredaran darah ini tidak berbeda pada ITP,
tetapi penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengeksplorasi
peran yang diduga dari sel-sel pengatur ini.
Kata kunci:Purpura trombositopenik idiopatik, Sel T regulator
Perkenalan
SAYAmmune thrombocytopenia (ITP) adalah kelainan
perdarahan autoimun yang berhubungan dengan
peningkatan penghancuran trombosit dan gangguan
produksi trombosit. Ini dimediasi oleh autoantibodi
antiplatelet IgG di mana targetnya adalah glikoprotein
membran trombosit (GP), seperti GPIIb/IIIa dan GPIb/IX.
Sel T (Treg) regulator CD4+CD25+ dan limfosit T
CD8+CD28-T memiliki peran utama dalam toleransi diri.
Untuk menjaga toleransi kekebalan tubuh
Alamat Korespondensi:Alev AKYOL ERIKCI, M.D.,
Tujuan:Immune thrombocytopenic purpura (ITP) adalah
gangguan perdarahan yang dimediasi oleh kekebalan di mana
trombosit diopsonisasi oleh autoantibodi dan dihancurkan di
limpa oleh fagositosis yang dimediasi reseptor Fc oleh sistem
retikuloendotelial. Proses autoimun juga dianggap
bertanggung jawab atas patogenesis gangguan ini. Sel
CD4+CD25+Foxp3+ regulator T (Treg) dan CD8+CD28- sel
Treg berperan dalam penyakit autoimun. Dalam penelitian
kami, kami menyelidiki sel-sel pengatur ini pada pasien
dengan ITP.
Bahan dan metode:Dua puluh dua pasien dengan ITP dan 16
orang sehat dengan usia yang sama dimasukkan. Sel
CD4+CD25+Foxp3+ Treg dan sel CD8+CD28- dipelajari
dengan tricolor flow cytometry. Rasio populasi sel ini terhadap
semua limfosit dihitung. Mann dalam evaluasi statistik
Tes Whitney U digunakan.
Hasil:Sel CD4+CD25+ Treg terdeteksi pada ITP dan
kelompok kontrol pada 9,69±3,70% dan 12,99±5,58%.
CD4+CD25 sel FoxP3+ tinggi ditemukan 27,72±19,74% dan
27,55%±23,9% pada ITP dan kelompok kontrol. Kedua jenis
sel tidak signifikan secara statistik bila dibandingkan dengan
kelompok kontrol.
Kesimpulan:Kami tidak dapat menemukan perbedaan dalam
rasio sel Treg CD4+CD25+Foxp3+ dan sel T CD8+CD28-
dalam limfosit. Dalam penelitian kami, kami tidak menemukan
perbedaan sel pengatur yang bersirkulasi pada ITP, tetapi
diperlukan penelitian yang lebih komprehensif.
Kata kunci:Purpura trombositopenik idiopatik, Sel T regulator
dan untuk mencegah penyakit autoimun, sel Treg
CD4+CD25+FoxP3+, sel T CD4+ dengan ekspresi CD25
yang tinggi, dan faktor transkripsi forkhead box P3
(FoxP3), juga disebut sebagai sel T regulasi FoxP3,
memainkan peran penting. Sel Treg berjumlah sekitar 5%
dari sel T CD4+ yang bersirkulasi. Penurunan jumlah sel
 Treg telah dilaporkan pada pasien dengan berbagai
penyakit autoimun, termasuk ITP, rheumatoid
dan lupus eritematosus sistemik [1,2,3,4,5].
Tanggal Diterima/Diterima:22 September 2015
Akyol Erikci A, dkk.Sel T Regulator pada Pasien dengan Idiopatik Thrombocytopenic Purpura Turk J Hematol 2016;33:153-155
Dalam kasus defisiensi Treg, toleransi perifer bisa gagal,
menyebabkan perkembangan autoimunitas. Tujuan dari
penelitian ini adalah untuk mengevaluasi sel Treg pada
kasus ITP yang baru didiagnosis sebelumnya dan tidak
diobati.
Bahan dan metode
Aliran Sitometri
Sampel darah tepi diperoleh dan dipelajari saat masih
segar. Flow cytometry digunakan untuk menghitung sel
Treg CD4+CD25+ dan sel penekan CD8+CD28. Flow
cytometry dilakukan pada Becton Dickinson
FACSCalibur. Data diperoleh dan dianalisis
menggunakan perangkat lunak CellQuest.
Antibodi Monoklonal
Antibodi monoklonal antimanusia terkonjugasi dengan
fluorokrom dan kontrol isotipe yang sesuai digunakan:
fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated anti-CD28
(BD Pharmingen Catalog No: 555728), anti-CD4 (Caltag
Laboratories Catalog No: MHCD0401),
phycoerythrin-cyanine 5 (PC5) terkonjugasi anti-CD8
(Katalog eBioscience No: 15-0088), anti
CD25 (Katalog BD Pharmingen No: 555433), dan
phycoerythrin (PE) terkonjugasi anti-FoxP3 (Katalog
eBioscience No: 12-4776).
Persiapan Sel dan Pewarnaan Permukaan
Sel mononuklear darah tepi manusia diisolasi
menggunakan sentrifugasi gradien Histopaque (Sigma
Catalog No: 1077). Aliquot 100 µL dipindahkan ke tabung
reaksi polipropilen (12x75 mm; Katalog Bioscience BD
No: 352052) dan 20 µL antibodi monoklonal terkonjugasi
atau kontrol isotipe ditambahkan ke setiap tabung.
Analisis flow cytometric dilakukan oleh BD FACSCalibur
setelah protokol pewarnaan yang sesuai.
Pewarnaan FoxP3
Pewarnaan permukaan CD4 dan CD25 dilakukan.
Tabung CD4+CD25 kemudian dicuci dengan PBS dingin
dan disuspensikan kembali, ditambahkan 1 mL larutan
Akademi Medis Militer Gülhane, Rumah Sakit Pelatihan dan
Penelitian Haydarpaşa, Klinik Hematologi, İstanbul, TurkiTelepon
arthritis, :+90 532 733 03 14
Surel :aleverikci@yahoo.com
Diterima/Tanggal Kabul:08 Oktober 2015
153
kerja fiksasi/permeabilisasi yang baru disiapkan, dan
tabung diinkubasi pada suhu 4 °C selama 30-60 menit
dalam gelap dan dicuci dua kali dengan menambahkan 2
mL buffer permeabilisasi 1X. Selanjutnya, 20 μL antibodi
antihuman FoxP3 terkonjugasi PE dalam buffer
permeabilisasi 1X ditambahkan dan tabung diinkubasi
pada suhu 4 ° C selama 30 menit dalam gelap.
Pencucian diulang dua kali dengan 2 mL buffer
permeabilisasi 1X. Setelah resuspensi, analisis dilakukan
dengan flow cytometry.
Analisis
Persentase sel CD8+CD28 dievaluasi menggunakan
pewarnaan ganda anti CD28/anti-CD8 pada sel berpagar
limfosit. Sel CD8+CD28-, sel CD8+CD28+, dan rasio
sel-sel ini dihitung.
Pewarnaan rangkap tiga Anti-CD4/anti-FoxP3/anti-CD25
dilakukan untuk jumlah sel Treg CD4+CD25+.
tinggi
CD4+CD25 limfosit diberi gerbang dan kemudian
tinggi
CD4 + CD25 Sel FoxP3+ dihitung dalam histogram
CD4/FoxP3.
Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan SPSS.
Tes Mann Whitney U digunakan untuk menyelidiki
parameter imunologi pasien ITP dan untuk perbandingan
dengan data subyek sehat.
Hasil
Kami mendaftarkan 22 pasien yang sebelumnya tidak
diobati yang baru didiagnosis dengan ITP (19 laki-laki, 3
perempuan) dan 16 kontrol dengan usia yang sama (13
laki-laki, 3 perempuan). Semua pasien dirawat di klinik
rawat jalan kami. Trombositopenia baru terdeteksi dan
mereka belum menerima pengobatan sebelumnya. Para
pasien diselidiki untuk kemungkinan penyebab
trombositopenia. Serologi virus dan penyakit autoimun
lain yang mendasari diskrining. Temuan demografi
diilustrasikan pada Tabel 1. Kami melakukan aspirasi dan
biopsi sumsum tulang pada pasien yang relatif tua
(pasien nomor 5, 9, dan 17). Tidak ada temuan patologis
seperti displasia yang terdeteksi. Temuannya konsisten
Tabel 1. Karakteristik Pasien
 Nomor pasien Usia Seks Trombosit 13 22 Pria 88
9
(x10 /L)
14 34 Pria 49
1 22 Pria 19
15 21 Pria 23
2 19 Pria 34
16 39 Pria 76
3 21 Pria 58
17 64 Perempu 35
4 32 Pria 46 an

5 51 Perempu 22 18 42 Perempu 79
an an

6 21 Pria 18 19 21 Pria 17

7 22 Pria 65 20 22 Pria 29

8 27 Pria 42 21 19 Pria 53

9 61 Pria 31 22 25 Pria 27

10 20 Pria 52

11 21 Pria 37

12 37 Pria 16
154
Turk J Hematol 2016;33:153-155Akyol Erikci A, dkk.Sel T Regulator pada Pasien dengan Idiopathic Thrombocytopenic Purpura
menurut jumlah trombosit. Pada pasien dengan jumlah
trombosit rendah tidak ada penurunan persentase sel
dengan ITP, termasuk megakaryocytes normal atau Treg bila dibandingkan dengan jumlah trombosit lebih
meningkat.
dari 100.000/µL [11]. Dalam studi oleh Yu et al., sel Treg
tinggi CD25 yang bersirkulasi terdeteksi pada pasien dengan
CD4+CD25+ sel Treg dan CD4+CD25 Sel FoxP3 +
ITP kronis [12].
dihitung dalam limfosit. Sel CD4+CD25+ Treg
masing-masing adalah 9,69±3,70% dan 12,99±5,58% Namun, ada juga penelitian yang gagal mendeteksi
tinggi
pada pasien dengan ITP dan kontrol. CD4+CD25 Sel adanya perbedaan frekuensi Treg pasien dengan ITP
FoxP3+ masing-masing adalah 27,72±19,74% dan dibandingkan dengan kontrol yang sehat [13,14].
27,55±23,98% pada pasien ITP dan kontrol. Kedua
Mirip dengan hasil kami, Mazzucco et al. mendeteksi
jumlah sel ini secara statistik tidak berbeda antar
tidak ada perbedaan yang signifikan antara sel Treg dan
kelompok.
jumlah trombosit pada pasien dengan ITP dan kelompok
Kami juga mendeteksi tidak ada perbedaan yang kontrol [15].
signifikan secara statistik pada sel penekan CD8+CD28
Dalam penelitian kami, kami menyelidiki pasien ITP baru
antara pasien ITP dan kontrol (masing-masing
yang didiagnosis sebelumnya tidak diobati. Kami
12,50±9,40% dan 11,77±4,64%).
mendeteksi tidak ada perbedaan yang signifikan dalam
frekuensi sel Treg pada pasien ITP dan kontrol. Kami
Diskusi berpikir bahwa penelitian lebih lanjut diperlukan untuk
Sel Treg menekan aktivasi sel T efektor, yang mengarah mengeksplorasi peran yang diduga dari sel pengatur ini,
pada induksi toleransi imun [6]. Untuk alasan ini terutama dalam hal tindak lanjut jangka panjang dan
diasumsikan bahwa kegagalan sistem sel T regulator respons terhadap pengobatan.
dapat menyebabkan autoimunitas [7,8,9]. Etika
Ada semakin banyak penelitian yang menunjukkan Informed Consent: Sudah diambil.
bahwa penurunan frekuensi sel Treg berperan dalam
ITP. Liu dkk. melaporkan bahwa persentase sel Treg Kontribusi Kepenulisan
menurun secara signifikan pada pasien ITP dengan
penyakit aktif di mana tidak ada remisi yang dicapai [10]. Konsep: Alev Akyol Erikçi; Desain: Alev Akyol Erikci;
Sakakura dkk. melaporkan variasi dalam jumlah Treg Pengumpulan atau Pemrosesan Data: Bülent Karagöz,
Oğuz Bilgi, Alev Akyol
Erikci; Analisis atau Interpretasi: Bülent Karagöz,
Penelusuran Literatur: Bülent Karagöz, Oğuz Bilgi, Alev
Akyol Erikçi; Penulisan: Alev Akyol Erikci, Bulent
Karagoz.
Konflik Kepentingan: Para penulis makalah ini tidak
memiliki konflik kepentingan, termasuk kepentingan
keuangan tertentu, hubungan, dan/atau afiliasi yang
relevan dengan pokok bahasan atau materi yang
disertakan.
Pengungkapan Keuangan: Kontribusi Masyarakat
Hematologi Turki.
Referensi
1. Cines DB, Blanchette VS. Purpura trombositopenik imun. N Engl J
Med 2002;346:995-1008.
2. Semple JW, Freedman J. Peningkatan reaktivitas limfosit T helper
antiplatelet pada pasien dengan trombositopenia autoimun. Darah
1991;78:2619-2625.
3. Kuwana M, Kaburaki J, Ikeda Y. Autoreactive T cells to platelet
GPIIb-IIIa in immune thrombocytopenic purpura: role in production of
anti-platelet autoantibody. J Clin Investasikan 1998;102:1393-1402.
4. Ogawara H, Handa H, Morita K, Hayakawa M, Kojima J, Amagai H,
Tsumita Y, Kaneko Y, Tsukamoto N, Nojima Y, Murakami H. Rasio
Th1/Th2 yang tinggi pada pasien dengan purpura trombositopenik
idiopatik kronis. Eur J Haematol 2003;71:283-288.
5. Semple JW, Milev Y, Cosgrave D, Mody M, Hornstein A, Blanchette V,
Freedman J. Perbedaan kadar sitokin serum pada purpura
trombositopenik autoimun akut dan kronis: hubungan dengan fenotip
trombosit dan reaktivitas sel T antiplatelet. Darah
1996;87:4245-4254.
6. Itoh M, Takahashi T, Sakaguchi N, Kuniyasu Y, Shimizu J, Otsuka F,
Sakaguchi S. Timus dan autoimunitas: produksi CD25+CD4+ sel T
yang anergik dan supresif secara alami sebagai fungsi utama timus
dalam menjaga kekebalan tubuh sendiri toleransi. J Immunol
1999;162:5317-5326.
7. Nugent DJ. Purpura trombositopenik imun pada masa kanak-kanak.
Hematologi 2006;2006:97-103.
8. Cruvinel WM, Mosque D Jr, Araujo JAP, Salmazi KC, Kallas EG,
Andrade LEC. Sel T pengatur alami pada penyakit rematik. Rev Bra
Rheumatol 2008;48:342-355.
9. Sakaguchi S, Ono M, Setoguchi R, Yagi H, Hori S, Fehervari Z,
Shimizu J, Takahashi T, Nomura T. Foxp3+CD25+CD4+ sel T
pengatur alami dalam toleransi diri dominan dan penyakit autoimun.
Immunol Rev 2006;212:8-27.
10. Liu B, Zhao H, MC Poon, Han Z, Gu D, Xu M, Jia H, Yang R, Han
ZC. Kelainan CD4+CD25+ sel T regulator dalam purpura
trombositopenik idiopatik. Eur J Haematol 2007;78:139-143.
11. Sakakura M, Wada H, Tawara I, Nobori T, Sugiyama T, Sagawa N,
Shiku H. Reduced Cd4+CD25+ Sel T pada pasien dengan purpura
trombositopenik idiopatik. Thromb Res 2007;120:187-193.
12. Yu J, Heck S, Patel V, Levan J, Yu Y, Bussel JB, Yazdanbakhsh K.
Sel T regulator CD25 sirkulasi yang rusak pada pasien dengan
purpura trombositopenik imun kronis. Darah 2008;112:1325-1328.
13. Andersson PO, Stockelberg D, Jacobsson S, Wadenvik H. Faktor
pertumbuhan transformasi-B1-mediated bystander imun supresi
dapat dikaitkan dengan remisi purpura trombositopenik idiopatik
kronis. Ann Hematol 2000;79:507-513.
14. Nishimoto T, Kuwana M. CD4+CD25+Foxp3+ sel T pengatur dalam
patofisiologi trombositopenia imun. Semin Hematol 2013;50(Suppl
1):S43-S49.
15. Mazzucco KL, Junior LM, Lemos NE, Wieck A, Pezzi A, Laureano
AM, Amorin B, Valim V, Silla L, Daudt LE, Marostica PJ. Penilaian sel
T regulator pada purpura trombositopenik imun masa kanak-kanak.
ISRN Hematol 2013;2013:143687.
155