Karakteristik Patogen Oportunistik Burkholderia

Cepacia Pada Infeksi Manusia

SEMINAR UMUM 1
Rabu, 30 Oktober 2019

Penyusun
Siti Kusmaryeni, S.Si (Mikrobiologi)

Pembimbing
Dr. Dra. Conny Riana Tjampakasari, M.Biomed, DMM

Pembahas
1. Pitra Rahmawati, S.Si (Sains Reproduksi)
2. Aisyah Safrina, S.Si (Histologi)

PROGRAM MAGISTER ILMU BIOMEDIK

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS INDONESIA
JAKARTA
2019

1
ii
 DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN………………………………………….............................. ii
DAFTAR ISI…………………………………………………………………………… iii
ABSTRAK……………………………………………………………………………... iv
BAB I PENDAHULUAN……………………………………………………………… 1
BAB II ISI……………………………………………………………………………… 3
2.1. Burkholderia cepacia………………………………………………………….. 3
2.1.1. Klasifikasi…………………………………………………………………..... 3
2.1.2. Karakteristik…………………………………………………………………. 3
2.2. Epidemiologi………………………………………………………………….. 4
2.3. Patogenesis dan Virulensi……………………………………………………... 6
2.3.1. Alternative Sigma Factor……………………………………………….. 6
2.3.2. Lipopolysaccharides and extracellular polysaccharides………………… 7
2.3.3. Biofilms………………………………………………………………...... 8
2.3.4. Quorum sensing………………………………………………………...... 9
2.3.5. Protein secretion systems………………………………………………… 9
2.3.6. Iron uptake………………………………………………………………. 10
2.3.7. Resistance of antimicrobial……………………………………………… 11
2.3.8. Motility………………………………………………………………....... 11
2.3.9. Intracelullar survival…………………………………………………....... 12
3.1. Diagnosis…………………………………………………………………….... 13
A. Phenotypical tests…………………………………………………………….. 14
B. Whole-cell protein analysis……………………………………………… 15
C. AFLP fingerprinting…………………………………………………....... 15
D. PCR-based identiftcation…………………………………………………...... 1 6
E. Whole-cell fatty acid analysis……………………………………………...... 17
BAB III PENUTUP……………………………………………………………………… 21
DAFTAR PUSTAKA…………………………………………………………………….
22

iii
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Pendahuluan
Burkholderia cepacia merupakan bakteri Gram negatif yang termasuk ke
dalam kelompok Burkholderia cepacia complex (Bcc). Bcc merupakan pathogen
yang bersifat oppurtunis dimana akan menyebabkan infeksi pada orang dengan
sistem imun yang lemah seperti pada pasien Cystic Fibrosis (CF). 1 Dalam
beberapa jurnal terbaru mengatakan bahwa Bcc merupakan kelompok yang
terddiri dari 18 spesies yang secara fenotip serupa namun secara genetik berbeda.2
Burkholderia cepacia complex dulunya dikenal sebagai pseudomonas
cepacia dan dikenal menyebabkan beberapa isu kesehatan seperti endokarditis,
infeksi luka, infeksi terkait kateter, bakterimia terkait pemasangan infus dan
infeksi pada kaki. Bcc merupakan organisme yang hidup bebas, bergerak,
berbentuk batang, tidak memiliki spora dan masuk kedalam bakteri Gram negatif
aerob yang tidak memfermentasikan glukosa.3,4 Genus Burkholderia masuk
kedalam kelas β-proteobacteriae dengan B. mallei sebagai parasit obligat pada sel
eukariotik sedangkan sisanya merupakan bakteri saprofit. 5
Infeksi Bcc merupakan jenis infeksi Non-Fermenting Gram Negative
Bacilli (NFGNB) tersering ke empat setelah infeksi Acinetobacter baumanii,
Pseudomonas aeruginosa dan Stereophimonas maltophilia. 2
Bcc pertama kali
menjadi perhatian dunia setelah diketahui sebagai salah satu agen infektif
opportunis pada pasien CF yang bermanifestasi sebagai percepatan penurunan
fungsi pulmonary dan penurunan kemampuan pasien untuk bertahan pasca
transplantasi. Sindrom cepacia merupakan pneumonia yang bersifat nekrotik yang
berkaitan dengan septicaemia. Sindrom cepacia dikenal memiliki angka mortalitas
yang tinggi karena sulitnya untuk mengeradikasi patogen dikarenakan adanya
resistensi terhadap berbagai jenis obat.6

1
 Pada tahun 2011, terdapat data di Indonesia yang menyatakan bahwa
14% dari anak yang dirawat di ruang rawat intensif Rumah Sakit Cipto
Mangunkusumo (RSCM) Jakarta didapatkan memiliki hasil kultur yang positif
untuk Bcc dengan antibiotik yang masih sensitif adalah cefefim dan levofloksasin.
Penelitian yang dilakukan oleh Omar dkk yang dilakukan 6 tahun setelahnya
melaporkan bahwa penyebaran infeksi nosokomial dari Bcc pada pasien non-CF
semakin meningkat dengan 87,5% didapatkan dari sampel pus, 11,4% didapatkan
dari sampel sputum dan 2,9% dari sampel urin. 7 Penelitian terbaru yang dilakukan
oleh Srinavian dkk pada tahun 2016 menunjukkan bahwa infeksi Bcc paling
banyak menyebar lewat pernapasan dengan 53,6% berasal dari ICU dan 44,7%
berasal dari kamar perawatan. Sampel sebesar 52,2% bersal dari darah, 22,5%
berasal dari pus dan 5% dari sputum.8
Infeksi Bcc menjadi masalah yang besar dan menjadi perhatian akibat
sulitnya Bcc untuk dieradikasi. 9 Kebanyakan Bcc sudah menjadi resisten terhadap
berbagai obat beberapa mekanisme diduga menjadi penyebab adanya resistensi
terhadap berbagai obat pada Bcc diantaranya adalah sifat Bcc yang dapat
membentuk biofilm, merubah envelope sel sehingga menurunkan permeabilitas
membran serta mengaktifkan efflux pump yang dapat mengeksklusi zat antibiotik
dari dirinya.3

2
 BAB II
ISI

2.1. Burkholderia cepacia

Burkholderia cepacia mengacu pada sekelompok bakteri yang dapat
menyebabkan infeksi dalam tubuh, paling sering menginfeksi paru-paru. Biasanya
ditemukan di tanah basah dan tanaman busuk tertentu, seperti bawang. Bakteri
jenis ini dapat menyebabkan kerusakan pada paru-paru, yang dapat
mengakibatkan komplikasi yang sangat serius, bahkan kematian. B. cepacia
paling sering menginfeksi orang yang sudah sakit, terutama dengan penyakit yang
mempengaruhi paru-paru, seperti pneumonia dan cystic fibrosis.9

2.1.3. Klasifikasi
Burkholderia cepacia termasuk ke dalam Domain: Bacteria; Phylum:
Proteobacteria; Class: Betaprotebacteria; Order: Burkholderiales; Family:
Burkholderiaceae; Genus: Burkholderia. Burkholderia cepacia Kompleks terdiri
dari sembilan spesies genom yang disebut genomovars: B. cepacia, B.
multivorans, B. cenocepacia, B. vietnamiensis, B. stabilis, B. ambifaria, B. dolosa,
B. anthina, dan B. pyrrocinia.

2.1.4. Karakteristik
Burkholderia cepacia pertama kali ditemukan oleh Walter Burkholder
dari Cornell University pada tahun 1949 yang merupakan bakteri penyebab busuk
umbi bawang. Awalnya bernama Pseudomonas cepacia dan kemudian diubah
menjadi nama saat ini. Burkholderia cepacia mengacu pada kompleks dari
sembilan spesies yang telah di sebutkan di atas. Burkholderia cepacia bakteri
Gram negatif motil berbentuk-hidup, hidup-bebas dan memiliki ukuran mulai dari
1,6-2,2 μm. Ditemukan memiliki flagela polar yang banyak dan pili yang

3
digunakan untuk keterikatan. Burkholderia cepacia dapat ditemukan di tanah, air,
dan tanaman, hewan, dan manusia yang terinfeksi.10
Penampilan spesies Burkholderia cepacia bervariasi berdasarkan strain
dan media kultur yang digunakan. Terdapat tiga media saat ini digunakan untuk
mengisolasi bakteri Burkholderia cepacia. Mereka adalah sebagai berikut:
Pseudomonas cepacia agar (PCA), oksidasi fermentasi polymyxin bacitracin
lactose agar (OFBL), dan Burkholderia cepacia selective agar (BCSA). Media
terakhir terbukti paling efektif karena dapat menekan pertumbuhan bakteri non-
Burkholderia cepacia. Bakteri Burkholderia cepacia akan membentuk koloni
pinpoint dalam 24 jam, dan koloni tampak halus dan agak tinggi.

2.2. Epidemiologi
Semua spesies Bcc sebenarnya patogen potensial untuk pasien CF.
Namun, epidemiologi penelitian telah menunjukkan distribusi geografis dan
regional yang tidak merata dari isolat klinis di antara spesies Bcc, dengan
dominasi Burkholderia cenocepacia, diikuti oleh Burkholderia multivoran.
Penelitian awal yang dilakukan selama 1980 dan 1990 telah menunjukkan bahwa
disamping kasus-kasus infeksi kronis yang disebabkan strain tertentu, banyak
wabah yang dilaporkan di Eropa dan Amerika Utara disebabkn oleh penyebaran
strain yang sangat ganas yang mudah di sebarluaskan melalui pusat CF tertentu.11
Beberapa jenis epidemi menjadi terkenal karena alasan terburuk.
Mungkin, jenis yang paling terkenal adalah garis keturunan Edinburgh-Toronto
yang juga dikenal sebagai klon ET12, klon antar benua yang bertanggung jawab
atas beberapa infeksi dan kematian di pusat CF di Inggris dan Kanada. Strain
representatif yang paling terkenal dari klon yang sangat mudah ditularkan ini
adalah strain B. cenocepacia J2315.12 Contoh lain dari strain yang disebarluaskan
di dalam pusat dan bahkan di antara pusat adalah strain PHDC. Strain, yang
bertanggung jawab untuk prevalensi hampir 20% di satu pusat CF di AS,
kemudian ditemukan di pusat CF lain, di mana peningkatan prevalensi Bcc
dialami. Penyebaran strain dikaitkan dengan transfer pasien yang terinfeksi dari
pusat awal ke yang kedua.13 Penelitian selanjutnya oleh Coenye et al.
menunjukkan bahwa jenis PHDC juga ada pada pasien Eropa (yaitu di Perancis,

4
Italia, dan Inggris), menyimpulkan bahwa jenis PHDC adalah klon transatlantik
Bcc yang diidentifikasi kedua. Yang menarik, kedua klon antarbenua itu termasuk
dalam spesies B. cenocepacia, meskipun ET12 milik subkelompok IIIA dan
PHDC milik subkelompok IIIB. Spesies B. cenocepacia termasuk klon lain yang
menyebar di antara pusat-pusat CF, yaitu klon Amerika Midwest dan klon
epidemi Ceko CZI.14,15 Bukti penularan terutama jenis epidemi B. cenocepacia
mengarah pada pengenalan langkah-langkah pemisahan di pusat CF di Eropa dan
Amerika, dengan pengurangan yang signifikan dari prevalensi infeksi. Namun,
kebijakan segregasi ini memiliki dampak buruk pada pasien yang terinfeksi Bcc
karena isolasi sosial dan stigma dan dampak psikologis negatif. Meskipun efektif
dalam mengganggu transmisi regangan, tindakan pemisahan tidak mencegah
akuisisi baru. Namun demikian, langkah-langkah ini mengarah pada pengurangan
prevalensi infeksi Bcc dari lebih dari 20% di beberapa pusat menjadi kurang dari
5% di AS dan sebagian besar negara Eropa. Namun, prevalensi infeksi Bcc kronis
masih berkisar 5-10% di Denmark, Portugal, Republik Slovakia, Federasi Rusia,
dan Latvia, masing-masing mencapai nilai 15 dan 23% di Serbia dan Lituania.
15,16,17

Meskipun strain Bcc yang bertanggung jawab untuk sebagian besar

infeksi baik di Eropa dan Amerika Utara milik spesies B. cenocepacia, bukti
terbaru menunjukkan perubahan epitologi. B. multivoran muncul sebagai spesies
dominan di Perancis pada tahun 2004 dan sebagai spesies terpenting kedua di AS
[31, 32]. Laporan terbaru juga menunjukkan kontaminan Burkholderia sebagai
spesies Bcc yang muncul terkait dengan infeksi CF. Laporan awal tentang
tingginya insiden spesies di antara pasien CF datang dari Portugal dan Argentina.
Menariknya, dalam kasus populasi CF Portugal, dua klon B. kontaminan
yang menginfeksi pasien CF ditemukan tidak dapat dibedakan dari dua strain B.
kontaminan yang diisolasi dari larutan salin nasal nonsteril yang berasal dari
komersial selama pengawasan rutin oleh Otoritas Obat dan Produk Kesehatan
Portugal [ 36]. Sebuah karya terbaru oleh Medina-Pascual dan koleganya tentang
pengawasan infeksi Bcc pada pasien CF Spanyol juga melaporkan a B.
kontaminan keseluruhan insiden 36,5% pada periode 2008-2012, melebihi spesies
dominan sebelumnya B. cenocepacia dan B. multivoran. Munculnya B.

5
kontaminan di antara pasien CF Spanyol dihipotesiskan karena keuntungan
ekologis yang tidak ditentukan yang memungkinkan spesies untuk meningkatkan
kehadirannya di rumah sakit atau di lingkungan. Dalam kasus pasien CF Swiss, B.
cenocepacia adalah spesies yang paling sering diisolasi pada periode 1998-2013,
tetapi B. multivoran dan B. kontaminan muncul selama tahun-tahun terakhir
periode penelitian. Sebuah studi 30 tahun tentang infeksi Bcc di antara pasien CF
dari British Columbia (Kanada) membuktikan dampak utama dari tindakan
pemisahan dalam epidemiologi Bcc; sementara B. cenocepacia dominan sebelum
pengenalan langkah-langkah ini, strain B. multivoran menjadi dominan setelah
penerapan langkah-langkah pengendalian infeksi baru pada tahun 1995. Studi ini
dan lainnya menyoroti dampak langkah-langkah pengendalian infeksi pada
spesies Bcc yang pulih dari pasien CF. Sekarang jelas bahwa sementara jenis
epidemi B. cenocepacia mendominasi pada tahun-tahun awal, jenis non-klonal B.
multivoran dan B. kontaminan muncul.18,19

2.3. Patogenesis dan Virulensi

Struktur bakteri seperti flagela, pili kabel, dan adhesin 22-kDa dianggap
sebagai faktor virulensi karena mereka memainkan peran penting dalam langkah-
langkah awal interaksi dengan sel inang, mempromosikan kepatuhan pada
permukaan paru-paru dan invasi sel epitel paru-paru.23,24 Selain itu, sebagian besar
strain B. cenocepacia mampu bertahan hidup dan bereplikasi secara intraseluler
dalam sel epitel saluran napas dan makrofag, menghindari mekanisme pertahanan
seluler primer paru-paru dan menghindari pembersihan. Faktor-faktor yang
terlibat dalam kemampuan ini, biosintesis exopolysaccharide (EPS), pembentukan
biofilm, resistensi terhadap antibiotik, dan resistensi stres oksidatif, serta
kemampuan akuisisi zat besi juga di antara penentu virulensi yang dijelaskan
untuk Bcc.22,23

2.3.10. Alternative Sigma Factor

RpoE dan RpoN adalah dua faktor sigma alternatif yang terlibat dalam
pengaturan kemampuan B. cenocepacia intraseluler untuk menunda fusi
fagolysosomal pada makrofag murine. RpoE adalah regulator respon stres ekstra-

6
sitoplasma yang dibutuhkan oleh B. cenocepacia untuk tumbuh dalam kondisi
osmolaritas tinggi dan suhu tinggi. RpoN, atau faktor sigma σ54, terkenal karena
keterlibatannya dalam regulasi gen yang terkait nitrogen. Dalam B. cenocepacia,
σ54 terlibat dalam motilitas dan pembentukan biofilm. Hasil dari pemetaan σ54
regulator dan karakteristik mutan B. cenocepacia H111 turunan σ54 menunjukkan
bahwa faktor sigma alternatif ini memainkan peran penting dalam kontrol
metabolisme nitrogen, dalam adaptasi metabolik dari B. cenocepacia H111
terhadap lingkungan yang stres dan terbatas nutrisi dan virulensi terhadap
nematoda Caenorhabditis elegans. Selain itu, juga dilaporkan bahwa RpoN
mengatur gen yang terlibat dalam produksi exopolysaccharide, pembentukan
biofilm, motilitas, dan virulensi B.cenocepacia cacat mutan dalam gen yang
mengkode regulator transkripsi terkait σ54 (BCAL1536) ditemukan dilemahkan
dalam model infeksi manik agar tikus.24,25,26

2.3.11. Lipopolysaccharides and extracellular polysaccharides

Salah satu komponen sentral dari membran luar pada bakteri Gram-
negatif adalah lipoplysaccharide (LPS), molekul kompleks yang tersusun oleh
lipid A, oligosakarida inti, dan gugus O-antigen. Gen yang terlibat dalam produksi
LPS oleh B. cenocepacia terletak di kromosom I, diorganisasikan dalam tiga
kelompok utama, satu untuk setiap komponen LPS (lipid A: BCAL1929 hingga
BCAL1935; inti: BCAL2402 hingga BCAL2408; inti: BCAL3110 hingga
BCAL3125) bersama dengan gen tambahan yang mengkode enzim modifikasi
gula. LPS bakteri Bcc berbeda dari bakteri LPS Gram-negatif lainnya karena
kurangnya residu yang bermuatan negatif dan keberadaan heterogenimerik D-
glycero-D-talo-oct-oct-2-ulosonic acid- (2-4) - 3-deoxy-D-manno-oct-2-ulosonic
acid (Ko- (2-4) -Kdo) di daerah inti; adanya resi 4-amino-4-deoxyarabinose
(Ara4N), baik dalam inti atau dalam lipid A; dan struktur antigen-O. Komposisi
khusus ini mengubah muatan permukaan bakteri, menghambat aksi pengikatan
dan keberhasilan antibiotik, berkontribusi terhadap persistensi infeksi bakteri [51].
Baru-baru ini, ditunjukkan bahwa meskipun modifikasi L-Ara4N tidak
mempengaruhi pengakuan, mereka sangat penting untuk pembentukan infeksi.
Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa ketika neutrofil berinteraksi

7
dengan Bcc LPS, ekspresi CD11b pada permukaannya meningkat, menstimulasi
respons burst respiratorik neutropil. Selain itu, makrofag dan sel darah manusia
juga distimulasi oleh Bcc LPS, menghasilkan sitokin pro-inflamasi seperti TNF-α,
IL-6, dan IL-8. 22,23
B. cenocepacia J2315 tidak dapat menghasilkan antigen-O. Dalam strain
khusus ini, ini disebabkan oleh gangguan pada pengkodean gen wbcE BCAL
3125. Ekspresi antigen O oleh strain Bcc ditunjukkan untuk mengurangi
fagositosis oleh makrofag tanpa mengganggu kelangsungan hidup bakteri
intraseluler.26
Produksi exopolysaccharides (EPSs) dideskripsikan untuk beberapa
spesies Burkholderia. Produksi EPS oleh Bcc dianggap memainkan peran penting
dalam kronisitas infeksi Bcc. Cepacian adalah EPS paling umum yang diproduksi
oleh spesies Bcc dan non-Bcc, baik dari sumber klinis dan lingkungan. Cepacian
mengganggu fagositosis oleh neutrofil manusia, memfasilitasi persistensi bakteri
dalam model infeksi tikus. EPS ditunjukkan untuk menghambat produksi ROS
oleh neutrofil dan untuk mengais spesies oksigen reaktif (ROS), memainkan peran
dalam kelangsungan hidup galur penghasil cepacian di lingkungan yang berbeda.
Sebagai hasil dari mutasi frameshift pada gen bceB (BCAM0856) yang mengkode
putatif glikosiltransferase, Cepacian tidak diproduksi oleh strain B. cenocepacia
ET12 representatif J2315.

2.3.12. Biofilms
Bakteri Bcc ditemukan bertahan dalam biofilm in vitro. Pembentukan
dan pematangan biofilm tergantung pada banyak faktor, termasuk produksi EPS,
motilitas, ketersediaan besi, dan sistem pengatur banyak gen, seperti penginderaan
kuorum, faktor sigma alternatif, atau pengatur global seperti ShvR dan AtsR.
Selain itu, Bcc dapat membentuk varian koloni kecil in vitro, morfologi koloni
yang terkait dengan peningkatan pembentukan biofilm, resistensi antibiotik, dan
persistensi. Beberapa penelitian telah dilakukan untuk memahami pentingnya dan
relevansi pembentukan biofilm dalam biologi Bcc. Bakteri Bcc yang tumbuh
dalam biofilm biasanya lebih toleran terhadap beberapa antibiotik, meskipun
kerentanan serupa dilaporkan untuk sel plancktonic dan biofilm dengan antibiotik

8
kanamycin, amikacin, dan ciprofloxacin. Baru-baru ini, biofilm Bcc terbukti
mengandung sel persister yang mampu bertahan hidup dengan adanya antibiotik
konsentrasi tinggi dengan menghindari produksi spesies oksigen reaktif. Selain
itu, dengan menggunakan sel-sel dHL60 yang mirip dengan neutron, ditunjukkan
bahwa keberadaan sel-sel sistem kekebalan ini meningkatkan pembentukan
biofilm yang melindungi bakteri Bcc terhadap neutrofil dengan menginduksi
nekrosis mereka, bertindak sebagai penghalang untuk migrasi neutrofil, dan
menutupi bakteri yang dikenali oleh neutrofil. Meskipun beberapa bukti
menunjukkan bahwa pembentukan biofilm berperan dalam persistensi bakteri
dalam saluran udara CF, topik ini perlu dipelajari lebih lanjut.23,25

2.3.13. Quorum sensing

Penginderaan kuorum adalah mode pengaturan ekspresi gen yang
tergantung pada kepadatan populasi bakteri. Bakteri Bcc memiliki setidaknya
empat sistem penginderaan kuorum. Sistem penginderaan kuorum CepIR
homolog dengan sistem LuxIR dari Vibrio fischeri. Sistem CepIR secara positif
mengatur virulensi B. cenocepacia terhadap organisme model seperti C. elegans,
Galleria mellonella, tikus, ikan zebra, alfalfa, dan bawang. Selain CepIR, B.
cenocepacia mengkodekan CciIR, CepR2, dan sistem penginderaan kuorum
BDSF. Sementara sistem penginderaan kuorum CepIR dan CciR mengandalkan
asil homoserine lactone sebagai molekul pensinyalan, sistem BDSF menggunakan
asam cis-2-dodecenoic sebagai molekul pensinyalan, dan CepR2 adalah sistem
penginderaan kuorum anak yatim. Sebuah gudang gen yang diatur oleh quorum
sensing pada bakteri Bcc telah dijelaskan, termasuk sintesis siderofor yang diatur
secara negatif dan ekspresi positif dari gen yang mengkode seng metalloproteases
(Zmps), motilitas yang berkerumun dan pembentukan biofilm, semuanya
dianggap memiliki dampak ketika bakteri menginfeksi pasien CF.24

2.3.14. Protein secretion systems

Bakteri Gram-negatif dan positif menggunakan sistem sekresi protein
untuk mengeluarkan racun atau protein lain, baik secara langsung ke lingkungan
atau ke dalam sel inang. Sistem ini   sangat dipelajari dengan baik dalam CF

9
patogen Bcc dan Pseudomonas aeruginosa. Misalnya, strain Bcc dari garis
keturunan ET12 dan sistem sekresi tipe I dan II pelabuhan Burkholderia
vietnamiensis (T1SS, T2SS) terlibat, misalnya, dalam sekresi protein hemolitik.
T2SS juga terlibat dalam sekresi B. cenocepacia dari dua metalloproteases seng,
ZmpA dan ZmpB, yang berperan dalam virulensi. Dua T4SS dikodekan oleh B.
cenocepacia; T4SS-1 dikodekan dalam plasmid, dan T4SS-2 dikodekan dalam
kromosom 2. Sampai saat ini, hanya T4SS-1 yang diidentifikasi dalam strain B.
cenocepacia yang diperlukan untuk virulensi dalam bawang dan kelangsungan
hidup intraseluler dalam fagosit. Dalam model infeksi manik agar tikus, T3SS
telah terbukti penting untuk patogenesis bakteri. Meskipun mekanisme tepatnya
masih belum jelas, T3SS tampaknya tidak memainkan peran dalam kelangsungan
hidup intraseluler B. cenocepacia. Empat sistem sekresi tipe V dikodekan dalam
genom B. cenocepacia J2315. Protein yang diangkut oleh transporter jenis ini
mengandung domain pertaktin dan hemagglutinin dan diduga berperan dalam
adhesi bakteri. B. cenocepacia juga mengkode T6SS, yang terbukti mempengaruhi
sitoskeleton aktin makrofag dan perakitan dari nikotinamid adenin dinukelotida
fosfat (NADPH) oksidase tereduksi dalam B. vakuola yang mengandung cepacia
yang mengandung vakuola (BcCV) dengan inaktivasi Rac1 dan Cdc42. B.
cenocepacia ditemukan untuk secara efisien mengaktifkan inflammasome oleh
efektor T6SS yang belum dikarakterisasi.23,24,25
Akibatnya, monosit dan sel THP-1 melepaskan IL-1β dengan cara yang
bergantung pada pyrin-, Asc-, dan T6SS. T6SS juga meningkatkan aktivasi
caspase-1, yang diatur secara negatif oleh regulator sensor kinase-respons AtsR.
Selain itu, sebuah makalah baru-baru ini menunjukkan bahwa T6SS mungkin
penting untuk sekresi efektor T2SS ke dalam sitoplasma host, seperti ZmpA dan
ZmpB, mengungkapkan peran yang tidak terduga untuk sistem sekresi tipe II
dalam kelangsungan hidup intraseluler dan replikasi B. cenocepacia. Meskipun
vesikel membran tidak dapat dianggap sebagai sistem sekresi kanonik, mereka
secara efektif dapat memungkinkan sekresi beberapa enzim hidrolitik dan racun.25

2.3.15. Iron uptake

10
 Untuk melakukan chelation dan serapan besi, anggota Bcc dapat
menghasilkan hingga empat siderofor yang berbeda: ornibactin, pyochelin,
cepabactin, dan cepaciachelin. Ornibactin tampaknya menjadi siderofor paling
penting dan berlimpah yang diproduksi oleh strain B. cenocepaci. Jalur dan
mekanisme pengaturan sintesis dan penyerapan ornibactin relatif terkenal.
Persyaratan siderofor ini untuk virulensi B. cenocepacia ditunjukkan dalam model
infeksi yang berbeda, termasuk manik agar tikus, G. mellonella, dan C. elegans.
Persaingan untuk mendapatkan zat besi oleh bakteri Bcc dan organisme kolonisasi
paru CF lainnya seperti P. aeruginosa dilaporkan terjadi pada paru-paru CF,
meskipun tidak sepenuhnya jelas bagaimana organisme Bcc memperoleh zat besi
dari protein inang.

2.3.16. Resistance of antimicrobial

Kesulitan dalam memberantas infeksi Bcc terutama hasil dari resistensi intrinsik
mereka terhadap beberapa antibiotik, termasuk polimiksin, aminoglikosida, dan
sebagian besar β-laktam. Selain itu, bakteri ini memiliki kemampuan untuk
mengembangkan resistensi in vivo terhadap hampir semua kelas antibiotik.
Pemberian antibiotik untuk pasien CF juga dilaporkan mempengaruhi profil
resistensi bakteri Bcc. Berbagai mekanisme yang terlibat dalam resistensi Bcc
terhadap beberapa antibiotik telah dideskripsikan dan termasuk inaktivasi
enzimatik (β-laktamase, enzim inaktivasi aminoglikosida, dihydrofolate
reductase), perubahan target obat, integron, kerusakan dinding sel, dan pompa
efflux aktif. Namun, kontribusi utama untuk resistensi intrinsik dan yang didapat
dari multi-obat oleh Bcc tampaknya disebabkan oleh pompa efluks dari keluarga
pembelahan sel nodulasi (RND). Faktanya, genom B. cenocepacia J2315
mengkodekan setidaknya 16 sistem penghabisan dari keluarga RND. Paling tidak
enam dari pompa efluks RND ini diimplantasikan dalam resistansi obat — RND-
1, RND-3, RND-4, RND-8, RND-9, RND-9, dan RND-10. Pompa efluks RND-3
dan RND-4 digambarkan terlibat dalam resistensi terhadap berbagai obat
antimikroba termasuk tobramycin dan ciprofloxacin; sistem eflux RND-3, RND-
8, dan RND-9 melindungi sel yang ditumbuhkan dengan biofilm terhadap
tobramycin; pompa eflux RND-8 dan RND-9 tidak terlibat dalam resistensi

11
ciprofloxacin; dan pompa efluks RND-10 tampaknya memberikan resistensi
terhadap kloramfenikol, fluoroquinolon, dan trimetoprim. Disarankan bahwa
mutasi pada gen RND-3 regulator-encoding mungkin bertanggung jawab atas
overekspresi yang umum dari pompa penghabisan ini dalam isolat Bcc klinis,
berkontribusi pada tingginya tingkat resistensi antibiotik.17,24,25

2.3.17. Motility
Gen yang terlibat dalam sintesis dan perakitan B. cenocepacia flagella
terletak di chromo-I, didistribusikan dalam lima kelompok, dengan dua gen
tambahan yang ditemukan pada kromosom 2 dan 3. Gen-gen ini ditemukan
diregulasi ketika organisme diinkubasi dalam sputum CF, berkontribusi terhadap
virulensinya dalam model infeksi manik agar-murine. Baru-baru ini, ekspresi
flagelin dan morfologi flagellar dari B. cenocepacia tumbuh dalam media yang
meniru sputum CF dianalisis. Kondisi gizi tersebut menyebabkan peningkatan
motilitas dan ekspresi flagelin, dengan menginduksi sintesis beberapa flagela pada
permukaan sel B. cenocepacia K56-2. Hubungan antara hilangnya motilitas
bakteri dan perkembangan sindrom cepacia baru-baru ini dibuat berdasarkan
analisis transkriptomika yang membandingkan isolat B. cenocepacia ST32 CF
yang pulih dari aliran darah, pada saat sindrom cepacia, dengan rekan sputumnya,
pulih sebelum perkembangan sindrom ini, mengungkapkan bahwa gen flagel
diturunkan regulasi pada isolat yang pulih dari aliran darah.25

2.3.18. Intracelullar survival

Tes infeksi menggunakan amuba yang hidup bebas menunjukkan bahwa B.
cenocepacia dapat bertahan hidup dalam kompartemen intraseluler yang
diasamkan. Bakteri ini juga terbukti memiliki kemampuan untuk menunda
pematangan fagolisosom pada makrofag murine. Meskipun B. cenocepacia yang
mengandung vakuola (BcCVs) berkembang secara normal ke tahap fobali awal,
fusi BcCV dengan endosom akhir dan pematangan berikutnya secara signifikan
tertunda dibandingkan dengan vakuola yang mengandung bakteri yang terbunuh
panas [94]. Berbeda dengan bakteri yang terbunuh oleh panas yang berakhir di
phagolysosomes dengan pH 4,5, BcCVs tidak mengasamkan secara normal

12
mempertahankan pH luminal sekitar 6,4. Kemampuan B. cenocepacia untuk
mengubah pengasaman vakuola tampaknya berkorelasi dengan keterlambatan
perekrutan atau perakitan pada membran BcCV dari kedua subunit 16-kDa dari
ATPase fagosomal vacuolar ATPase (vATPase) dan fagosit oksidase NADPH.
Sebaliknya, Al-Khodor dan rekannya menunjukkan bahwa B. cenocepacia J2315
hanya berinteraksi secara sementara dengan jalur endositik, setelah itu bakteri
dapat dengan cepat melarikan diri ke sitosol. Bakteri yang lolos kemudian
ditargetkan oleh jalur autophagy inang, melalui perekrutan ke sekitar bakteri dari
sistem konjugasi ubiquitin, adaptor autophagy p62 dan NDP52, dan protein
terkait-membran autophagosome LC3B. Namun, tampaknya, kontrol sel inang
melalui autophagy akhirnya gagal dalam proporsi tinggi sel yang terinfeksi,
menjadi B. cenocepacia mampu memblokir penyelesaian autophagosome dan
mereplikasi dalam cososol sel inang. Untuk lebih memahami perilaku intraseluler
B. cenocepacia pada pasien yang terinfeksi CF, penelitian juga telah dilakukan
pada Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) - makrofag
yang rusak. Hebatnya, keterlambatan pematangan penangkapan BcCV's lebih
dibesar-besarkan dalam makrofag CFTR-rusak daripada di makrofag normal dan
khusus untuk hidup B. cenocepacia. Meskipun tidak jelas bagaimana defek CFTR
meningkatkan kelangsungan hidup intraseluler B. cenocepacia, ada bukti
hubungan antara CFTR yang rusak dengan defisiensi autophagy dan penurunan
pembersihan agregat protein dan peradangan. Penjelasan dari rincian
kelangsungan hidup ini, terutama kemampuan B. cenocepacia untuk bersinergi
dengan cacat CFTR dan konsekuensinya pada mekanisme autophagy akan
memberikan jalan baru untuk mengeksplorasi pendekatan terapi baru untuk pasien
CF.22,23

2.4. Diagnosis
Identifikasi organisme yang dikultur dari spesimen pernapasan yang
diperoleh dari pasien CF tidak mudah. Dengan menggunakan sistem komersial,
anggota kompleks B. cepacia telah salah diidentifikasi sebagai (antara lain) B.
gladioli, R. pickettii, Alcaligenes spp., Pseudomonas spp., S. malphorphia,
Flavobacterium spp., Dan Chryseobacterium spp., dan galur dari berbagai spesies

13
ini juga telah salah diidentifikasi sebagai milik kompleks B. cepacia. Metode
untuk mengidentifikasi organisme yang mirip B. cepacia harus mampu
mengidentifikasi secara akurat beragam varietas nonfermenter gram negatif, baik
yang membedakannya dari kompleks B. cepacia dan mengidentifikasi masing-
masing anggota kompleks B. cepacia. Selain itu, metode ini harus relatif cepat dan
mudah dilakukan, mengingat relevansi klinis organisme ini dan jumlah isolat yang
terlibat relatif besar (misalnya, Cystic Fibrosis Found). Untuk dapat
menfidentifikasi Burkholderia cepacia dilakuakan beberapa cara yaitu:

F. Phenotypical tests
Dalam laboratorium klinis rutin, identifikasi isolat B. cepacia kompleks
putatif umumnya dilakukan dengan menggunakan kombinasi media selektif,
analisis biokimia konvensional, dan / atau sistem komersial. Beberapa media yang
berbeda telah dikembangkan untuk isolasi selektif dari isolat B. cepacia complex
dari dahak pasien CF. Media ini termasuk media P. cepacia (agar PC)
(mengandung 300 U polimiksin B per ml dan 100 μg ticarilin per ml); agar
oksidasi-fermentasi ditambah dengan laktosa, 300 U polimiksin B per ml, dan 2,0
U dari bacitracin per ml (OFPBL agar) (113); dan B. cepacia selective agar
(BCSA) (mengandung 1% laktosa dan 1% sukrosa dalam basis kasein dan ekstrak
ragi yang diperkaya dengan 600 U polimiksin B per ml, 10 mg gentamisin per ml,
dan 2,5 mg vancomycin per ml). BCSA dilaporkan lebih unggul dari OFPBL dan
PCA dalam hal kecepatan (pemulihan 100% setelah 72 jam inkubasi) dan kualitas
(70% isolat menunjukkan pertumbuhan yang baik setelah 72 jam inkubasi)
pemulihan B. organisme cepacia complex dari spesimen pernapasan CF dan
penghambatan organisme lain. Organisme yang tidak termasuk dalam kompleks
B. cepacia yang mampu tumbuh pada BCSA termasuk B. gladioli dan Ralstonia
spp. Sensitivitas dan spesifisitas beberapa atau semua media yang disebutkan di
atas untuk isolasi lingkungan “B. isolat cepacia” mungkin jauh lebih rendah, dan
oleh karena itu penggunaan media lain, seperti media PCAT (mengandung asam
azelaic dan tryptamine) atau medium TB-T (mengandung glukosa, asparagine,
trypan blue, dan tet-racycline) mungkin direkomendasikan. Ada beberapa laporan

14
yang menggambarkan kegagalan sebagian besar sistem uji komersial untuk
mengidentifikasi isolat B. cepacia complex dengan sensitivitas dan spesifisitas
yang cukup, dengan isolat yang umumnya salah diidentifikasi sebagai B. gladioli,
S. maltophilia, atau Ralstonia spp. Adanya variasi fenotipik yang dapat terjadi
dalam spesies dan perbedaan hasil diperoleh dengan metodologi yang berbeda,
identifikasi kompleks B. cepacia berdasarkan analisis fenotipik harus dikonfirmasi
oleh laboratorium referensi yang dilengkapi untuk memberikan analisis yang lebih
lengkap. Pertimbangan juga harus diberikan pada penggunaan laboratorium
rujukan untuk setiap nonfermenter gram negatif yang identifikasi spesiesnya tetap
samar setelah analisis fenotipik.15,16

G. Whole-cell protein analysis

Data berdasarkan penenlitian yang dilakukan oleh Vandamme et al.
menunjukkan bahwa elektroforesis gel natrium dodecyl sulfate-polyacrylam-ide
(SDS-PAGE) dari protein sel utuh adalah teknik yang cocok untuk identifikasi
anggota kompleks B. cepacia. Namun, perbandingan hasil identifikasi yang
diperoleh dengan metode ini dengan yang diperoleh dengan pendekatan
identifikasi lain mengungkapkan terdapat perbedaan antara B. genomovar cepacia
I dan III, B. stabilis, dan B. ambifaria dicatat. Keuntungan dari teknik ini adalah
penerapannya pada berbagai organisme, fakta bahwa sedikit pengetahuan
sebelumnya tentang isolat diperlukan, dan kesederhanaan relatifnya. Kelemahan
dari metode ini untuk identifikasi isolat B. cepacia-like adalah bahwa pola protein
seluruh sel sering ditandai oleh distorsi bagian dari pola pita. Distorsi ini secara
signifikan mempengaruhi tingkat korelasi antara pola protein. Oleh karena itu,
penting untuk membandingkan hasil analisis numerik dari pola protein dengan
profil itu sendiri untuk menggambarkan kelompok. SDS-PAGE protein sel utuh
tetap menjadi alat yang berharga untuk identifikasi B. cepacia complex dan B.
cepacia-like isolat dalam pengaturan penelitian, di mana personel yang
berpengalaman hadir untuk interpretasi profil protein; Namun kekurangan yang
disebutkan di atas, membuatnya tidak cocok untuk digunakan dalam pengaturan
klinis.17

15
H. AFLP fingerprinting
Dalam dekade terakhir, berbagai metode berbasis urutan asam nukleat
telah dikembangkan untuk mengidentifikasi dan mengetik bakteri patogen. Salah
satu metode ini adalah sidik jari polymorphism (AFLP), teknik sidik jari
berdasarkan amplifikasi PCR selektif dari fragmen restriksi genomik. Metode ini
menggabungkan penerapan luas dengan reproduksibilitas tinggi dan kekuatan
diskriminatif. Data yang lain menunjukkan bahwa AFLP adalah teknik yang dapat
digunakan untuk mengidentifikasi anggota kompleks B. cepacia dan bakteri B.
cepacia lainnya. Namun, metode ini secara teknis menuntut dan format padat
karya dan radioaktif tidak praktis untuk penggunaan klinis. Kemajuan yang
signifikan telah dibuat dengan format fluoresen, tetapi biaya pemasangan yang
tinggi terkait dengan pembelian sekuensing DNA mungkin menjadi penghalang
bagi sebagian besar laboratorium. Reproduksibilitas tinggi dari pola pita untuk
strain yang diberikan memfasilitasi pembangunan basis data dan penggunaan
database tersebut untuk mengidentifikasi strain bakteri baru. Namun, keberadaan
pita intensitas tinggi dalam pola beberapa galur dan posisi taksonomi menengah
dari beberapa galur (seperti yang diungkapkan oleh hibridisasi DNA-DNA) pada
akhirnya mungkin memerlukan pengujian tambahan sebelum beberapa galur dapat
diidentifikasi secara meyakinkan, sekali lagi membuat ini metode yang tidak
sesuai untuk aplikasi di laboratorium mikrobiologi diagnostik rutin. Namun, ini
merupakan alat yang berharga dalam studi taksonomi dan tambahan selamat
datang untuk SDS-PAGE protein sel utuh untuk identifikasi organisme yang
mudah salah diidentifikasi oleh metode yang terakhir.14,15

I. PCR-based identiftcation
Sebagian besar studi tentang identifikasi berbasis PCR anggota
Kompleks B. cepacia yang telah dilakukan sejauh ini didasarkan pada
keanekaragaman dalam urutan nukleotida dari 16S dan / atau 23S rDNA dan
keduanya ditujukan pada pengembangan spesies dan / atau primer spesifik
genomovar atau RFLP analisis gen 16S rRNA yang diamplifikasi PCR. Hasil dari
penelitian ini jelas menunjukkan bahwa B. multivorans, B. vietnamiensis, dan B.
cepacia genomovar VI masing-masing dapat dipisahkan dari semua anggota lain

16
dari kompleks B. cepacia. B. cepacia genomovars I dan III, B. stabilis, B.
ambifaria, dan B. pyrrocinia dapat diidentifikasi sebagai suatu kelompok, tetapi
variasi dalam operon rRNA jelas terlalu kecil untuk memisahkan semua anggota
dari B. cepacia complex, dan karena batasan diskriminatif ini, Mahenthiral-ingam
et al. mengembangkan tes identifikasi berbasis PCR baru berdasarkan gen recA.
Gen recA menunjukkan kesamaan 94 hingga 95% antara genomovar yang
berbeda, dan biasanya 98 hingga 99% kesamaan dapat ditemukan dalam
genomovar. Namun, B. cepacia genomovar I dan III masing-masing mengandung
dua subpopulasi dengan alel recA yang berbeda. Pada saat penulisan ini, pasangan
primer turunan gen recA tersedia untuk identifikasi B. cepacia genomovar I, B.
cepacia genomovar III, B. multivoran, B. stabilis, B. vietnamiensis, dan B.
ambifaria ( belum ada primer yang tersedia untuk B. pyrrocinia atau B. cepacia
geno-movar VI). Sebagai tambahan untuk primer spesifik spesies yang diturunkan
dari gen recA, pendekatan RFLP berbasis gen recA, memungkinkan pengenalan
beberapa tipe dalam setiap genomovar, dikembangkan.
Pengembangan alat molekuler baru ini merupakan cara yang cepat,
mudah, dan ilmiah untuk mengidentifikasi strain individu yang termasuk dalam
kelompok organisme yang kompleks taksonomi ini. Kerugian dari metode
berbasis PCR termasuk kebutuhan untuk langkah-langkah yang tepat untuk
menghindari kontaminasi silang (termasuk penggunaan kontrol negatif dan
penggunaan area yang berbeda untuk manipulasi PCR) dan fakta bahwa primer
PCR tidak tersedia untuk semua organisme B. cepacia (misalnya, belum ada
primer yang dipublikasikan yang tersedia untuk identifikasi spesies Pandoraea
atau Ralstonia). Selain itu, perhatian harus diberikan pada interpretasi hasil PCR
negatif (yaitu, dalam membedakan antara yang benar dan hasil negatif palsu), dan
secara umum dapat dinyatakan bahwa laboratorium yang terlibat dalam
identifikasi B. cepacia harus dilengkapi dengan tepat pada tingkat teknis dan
harus mematuhi persyaratan kontrol kualitas yang ketat untuk mengecualikan
kesalahan identifikasi.23,24

J. Whole-cell fatty acid analysis

17
 Tingkat otomatisasi yang tinggi, kesederhanaan relatif, dan biaya yang
cukup rendah terkait dengan analisis asam lemak seluruh sel menjadikannya
teknik yang berharga untuk identifikasi cepat isolat di laboratorium klinis.
Namun, Vandamme et al. melaporkan kegagalan analisis asam lemak seluruh sel
untuk membedakan antara lima spesies pertama yang diketahui dari kompleks B.
cepacia, dan data yang lebih baru mengkonfirmasi kesimpulan ini. Itu juga
menunjukkan bahwa analisis asam lemak tidak dapat membedakan anggota
kompleks B. pacacia dari B. gladioli. Dari perbandingan data yang dipublikasikan,
jelas bahwa ada perbedaan kualitatif dan kuantitatif dalam komposisi asam lemak
anggota kompleks B. cepacia dan spesies B. cepacia lainnya, seperti Pandoraea
spp. dan Ralstonia spp. Tetapi mempertimbangkan standar deviasi, tampaknya
dapat dipertanyakan apakah perbedaan ini akan cukup untuk mengidentifikasi
semua isolat baru ke tingkat spesies. Oleh karena itu, semua organisme yang
diidentifikasi dengan analisis asam lemak seluruh sel sebagai bagian dari
kompleks B. cepacia, B. gladioli, genus Pandoraea, atau genus Ralstonia harus
diselidiki lebih lanjut dengan metode yang lebih cocok untuk identifikasi B. isolat
mirip cepacia. ke tingkat spesies. Keuntungan utama dari teknik ini adalah adanya
database komersial (ID mikroba) untuk identifikasi isolat yang memungkinkan
pemisahan cepat organisme kompleks B. cepacia dan organisme terkait baik dari
nonfermenter gram negatif lainnya (seperti P. aeruginosa dan S. maltophilia) dan
dari Enterobacteriaceae. Teknik ini juga dapat digunakan untuk menetapkan isolat
yang tidak dapat diklasifikasikan dengan metode penyaringan lainnya ke garis
keturunan filogenetik utama.25,26

2.5. Strategi untuk melawan infeksi dari Bcc

Tidak ada pedoman obyektif untuk strategi pemberantasan yang tersedia
untuk infeksi Bcc, karena patogen ini secara intrinsik resisten terhadap sebagian
besar antimikroba klinis yang tersedia. Saat ini, tidak ada strategi imunoterapi
untuk melindungi pasien CF dari infeksi Bcc. Beberapa penelitian tentang respon
imun yang ditimbulkan oleh spesies Bcc pada pasien CF telah dilakukan; Namun,
mereka menantang karena kemampuan bakteri ini untuk memodulasi dan

18
mengatasi respon imun inang dan kemampuan untuk bertahan hidup secara
intraseluler dalam fagosit dan sel-sel epitel.
Aspek penting untuk dipertimbangkan selama desain vaksin adalah
keseimbangan optimal dari respons Th1 dan Th2 yang diperlukan untuk
pembersihan patogen yang efektif. Sebagai contoh, bias Th1 memunculkan
respons yang dimediasi sel, sementara Th2 menginduksi respon imun humoral.
Dalam kasus CF, fenotip imun mereka tampaknya condong ke arah respon Th2.
Dalam kasus Bcc, jenis respon host yang diperlukan untuk membersihkan patogen
masih belum sepenuhnya dipahami, sehingga sulit untuk mengembangkan vaksin
pelindung. Baru-baru ini, tikus BALB / c yang diimunisasi secara intraperitoneal
dengan protein Linocin dan OmpW menunjukkan pengurangan yang signifikan
dari sel B. cenocepacia dan B. multivoran di paru-paru dan penyebaran bakteri
yang lebih rendah ke limpa. Sementara Linocin menghasilkan respons Th1 yang
kuat, OmpW menghasilkan respons Th1 / Th2 yang beragam. Perlindungan yang
dicapai dengan protein ini lebih besar terhadap infeksi B. cenocepacia, dan
imunisasi OmpW lebih efisien dalam mengurangi beban bakteri paru-paru.28
Protein membran luar yang tidak dimurnikan (OMP) dari B. multivoran,
ditambah dengan adjuvant adamantylamide dipeptide (AdDP) mukosa yang
mempromosikan respon Th2 yang kuat, diuji untuk imunisasi tikus BALB / c.
Peningkatan yang signifikan secara statistik pada IgG dan pada antibodi spesifik
IgA OMP mukosa diamati, bersama-sama dengan pengurangan beban B.
multivoran dan patologi paru-paru, tetapi hanya perlindungan silang moderat
untuk B. cenocepacia yang dilaporkan. Spesifisitas respon imun ditemukan
melawan 90, 72, 66, dan 60 kDa protein. Elicitasi antibodi IgA spesifik dengan
imunisasi mukosa juga dilaporkan penting untuk mencegah kolonisasi saluran
pernapasan oleh bakteri Bcc. Dalam penelitian lain, imunisasi intranasal dari tikus
CD-1 dengan protein membran luar (OMP) dari B. cenocepacia digambarkan
berasal respon Th2-bias dengan pemeliharaan beban bakteri, sementara tikus
diimunisasi dengan OMP dan non-flammatory. nanoemulsion adjuvant mukosa
(NE) menimbulkan respon seimbang Th1 / Th2 yang menyebabkan pengurangan
signifikan dari beban sel B. cenocepacia. Serum yang diperoleh dari tikus yang
divaksinasi dengan OMP-NE juga dapat menghambat pertumbuhan B.

19
multivorans sebesar 80,1%, menunjukkan bahwa induksi antibodi lintas reaktif
terjadi setelah imunisasi tikus. Selain itu, protein seperti 17-kDa OmpA yang
sangat terkonservasi baru-baru ini diidentifikasi sebagai epitop imun-dominan
baru dalam imunisasi mukosa.
Metalloproteases juga dianggap sebagai kandidat potensial yang efektif untuk
pengembangan vaksin. Itu menunjukkan bahwa imunisasi tikus menggunakan
seng metalloprotease peptide 15 (PSCP) yang dilestarikan mengurangi keparahan
infeksi B. cenocepacia dan kerusakan paru-paru berkurang 50% pada tantangan
dengan strain B. cenocepacia setelah imunisasi.
Pada 2012, ditunjukkan bahwa permukaan bakteri polisakarida poli-β-
(1-6) -N-asetil-glukosamin (PNAG) memiliki kekebalan perlindungan terhadap
infeksi Bcc dalam model tikus peritonitis yang mematikan. Dalam penelitian ini
oleh Skurnik dan rekannya menggunakan tes opsophagocytic, diamati bahwa
antibodi kambing terhadap PNAG dapat membunuh strain Bcc (> 80%) dari B.
cenocepacia, Burkholderia dolosa dan B. multivoran. Selain itu, pembunuhan
bakteri ditemukan tergantung pada keberadaan komplemen [164]. Protein lain dari
aktivitas imunogenik diduga telah dilaporkan sebagai kandidat vaksin potensial.
Namun, studi dalam model hewan infeksi Bcc masih kurang. Salah satu antigen
yang menjanjikan ini adalah protein BCAL2958 yang menyerupai Ompa yang
terbukti sangat terkonservasi dalam Bcc, untuk memperoleh antibodi IgG pada
pasien CF dan untuk mendapatkan peningkatan TNFα, elastase, NO, dan MPO
dalam neutrofil.
Musson dan koleganya telah menunjukkan bahwa hibridoma sel-T
melawan protein flagel Burkleeria pseudomallei flagel FliC bereaksi silang
dengan sekuens FliC ortologis dari sekuens B. multivoran dan B. cenocepacia.
Epitop FliC dapat diakses untuk pemrosesan dan presentasi dari bakteri B.
cenocepacia yang hidup atau mati panas, menunjukkan bahwa flagellin memasuki
jalur presentasi Ag HLA kelas II selama infeksi makrofag dengan B. cenocepacia.
Studi yang disebutkan di atas mengungkapkan bahwa vaksin subunit yang hanya
menghasilkan respon antibodi tidak dapat sepenuhnya mencegah infeksi yang
disebabkan oleh bakteri Bcc. Oleh karena itu, vaksin Bcc yang mengandung
banyak antigen yang menghasilkan respons Th1 dan Th2 yang seimbang

20
diharapkan efektif dalam mencegah infeksi Bcc. Dengan tujuan ini, pendekatan
imunoproteomik telah dilakukan. Sebagai contoh, Mariappan dan rekannya
mengidentifikasi 18 protein imunogenik dari supernatan kultur B. cepacia yang
bereaksi dengan antibodi tikus yang ditimbulkan melawan seluruh sel B. cepacia
yang tidak aktif. Baru-baru ini, analisis imunoproteom dari dua strain klinis yang
relevan dari B. cenocepacia dan B. multivorans mengungkapkan 15 protein
imunoreaktif umum yang bereaksi dengan sampel serum CF manusia.26,27

BAB III
PENUTUP

Burkholderia cepacia merupakan bakteri Gram negatif yang termasuk ke

dalam kelompok Burkholderia cepacia complex (Bcc), pathogen yang bersifat
oppurtunis dimana akan menyebabkan infeksi pada orang dengan sistem imun
yang lemah seperti pada pasien Cystic Fibrosis (CF). Bakteri jenis ini dapat
menyebabkan kerusakan pada paru-paru, yang dapat mengakibatkan komplikasi
yang sangat serius, bahkan kematian. B. cepacia paling sering menginfeksi orang
yang sudah sakit, terutama dengan penyakit yang mempengaruhi paru-paru,
seperti pneumonia dan cystic fibrosis. Burkholderia cepacia complex (Bcc) dapat
ditemukan di tanah, air, dan tanaman, hewan, dan manusia Terjadinya infeksi
akibat Burkholderia cepacia disebabkan oleh beberapa faktor yakni Alternative
Sigma Factor, Lipopolysaccharides and extracellular polysaccharides, Biofilms,
Quorum sensing, Protein secretion systems, dan Iron uptake. Diagnosis untuk

21
Burkholderia cepacia yaitu dengan menggunakan Phenotypical tests, AFLP
fingerprinting, PCR, dan Whole-cell fatty acid analysis. Salah satu strategi untuk
mengatasi infeksi dari Burkholderia cepacia adalah dengan menggunakan vaksin.

DAFTAR PUSTAKA

1. Acker Heleen, Sass Anrea, Bazzini Silvia, dkk. BiofilmGrown

Burkholderia Cepacia Complex Cell Seuvive Antibiotic Treatment by
Avoiding Production of Reactive Oxygen Species. Plos One. 2013; 8(3)
2. Gonzales Esther, Bakuoui Saesane, Gomes Margarida, dkk. A Functional
oriT in the Ptw Plasmid of Burkholderia Cenocepacia Can Be
Recognized by The R388Relaxase TrwC. Frontiers in Molecular
Biosciences. 2016; 3(16)
3. Gautam Vikas, Patil Prashant, Kumar Sunil, dkk. Multilocus Sequence
Analysis reveals high genetic diversity in clinical isolates of
Burkholderia Cepacia Compleks From India. Scientific Report; 2016.
4. Attia Mohamed Ahmed Mahmoud. A Study on Burkholderia Cepacia in
Susceptible Pharmaceutical Produts : Detection and Characteristic.
Departement of Microbiology & Immunology Cairo University; 2016.
5. Deng Peng, Wang Xiaoqiang, Baird Sonya, dkk. Comparative Genomw-
wide analysis reveals that
Burkholderia contaminant MS14 Possese Multiple Antimicrobial
biosynthesis genes but not major genetic loci required for pathogenesis.

22
 Microbiology Open; 2016.
6. Paul Liz, Hegde Ashwini, Pai Tanvi, dkk. An Outbreak of Bukholderia
cepacia Bacteremia in a Neonatal Intensive Care Unit. Indian J Pediatr;
2016.
7. Martinuci M, Rosceto E, Lula V.D, dkk. Accurate Identification of
Members of Burkholderia Cepacia Complex in Cystic Fibrosis Sputum.
Letters in Applied Microbiology; 2015.
8. Lestari E.S &Severin J.A. Antimicrobial Resistance in Indonesia.
Erasmus University Rotterdam; 2009.
9. Omar Nancy, Raof Hala, Okasha Hadir, dkk. Microbiological Assesment
of Burkholderia cepacia complex (Bcc) Isolates in Alexandria Main
University Hospital. Alexandria Journal of Medicine. 2015;51:p.41-46
10. Miller SC, LiPuma JJ, Parke JL “Culture based and Non-Growth
Dependent Detection of the Burkholderia cepacia complex in Soil
Environments” Applied Environmental Microbiology, August 2002
11. Schweizer Katherine. Antibiotic Resistance in Burkholderia Species.
Drug Resisitance Updares; 2016.
12. Srinivasan Shoba, Arora Maj, Sahai Kavita. Report on the newly
Emerging Nosocomial Burkholderia Cepacia in a Tertiary Hospital.
Elsevier Medical Journal ARMED Forces India. 2016;70(6):p.4-8
13. Mahenthiralingam E, Urban TA, Goldberg JB. The multifarious,
multireplicon Burkholderia cepacia complex. Nat Rev Microbiol. 2005;
3:144-156. DOI:10.1038/nrmicro1085.
14. Coenye T, Spilker T, Van Schoor A, LiPuma JJ, Vandamme P. Recovery
of Burkholderia cenocepacia strain PHDC from cystic fibrosis patients in
Europe. Thorax. 2004; 59:952-954. DOI:10.1136/thx.2003.019810.
15. Johnson WM, Tyler SD, Rozee KR. Linkage analysis of geographic and
clinical clusters in Pseudomonas cepacia infections by multilocus
enzyme electrophoresis and ribotyping. J Clin Microbiol. 1994; 32:924-
930.
16. Martina P, Bettiol M, Vescina C, Montanaro P, Mannino MC, Prieto CI,
Vay C, Naumann D, Schmitt J, Yantorno O, Lagares O, Bosch A.

23
 Genetic diversity of Burkholderia contami- nans isolates from cystic
fibrosis patients in Argentina. J Clin Microbiol. 2013; 51:339-344.
DOI:10.1128/JCM.02500-12.
17. Medina-Pascual MJ, Valdezate S, Carrasco G, Villalón P, Garrido N,
Saéz-Nieto JA. Increase in isolation of Burkholderia contaminans from
Spanish patients with cystic fibro- sis. Clin Microbiol Infect. 2015;
21:150-156. DOI:10.1016/j.cmi.2014.07.014
18. Tomlin KL, Malott RJ, Ramage G, Storey DG, Sokol PA, Ceri H.
Quorum-sensing muta- tions affect attachment and stability of
Burkholderia cenocepacia biofilms. Appl Environ Microbiol. 2005;
71:5208-5218. DOI:10.1128/AEM.71.9.5208-5218.2005.
19. Kooi C, Subsin B, Chen R, Pohorelic B, Sokol PA. Burkholderia
cenocepacia ZmpB is a broad-specificity zinc metalloprotease involved
in virulence. Infect Immun. 2006; 74(7):4083-4093.
DOI:10.1128/IAI.00297-06.
20. Govan JR, Deretic V. Microbial pathogenesis in cystic fibrosis: mucoid
Pseudomonas aeru- ginosa and Burkholderia cepacia. Microbiol Rev.
1996; 60:539-574.
21. Andrew McDowell, Eshwar Mahenthiralingam, John E. Moore, Kerstin
E. A. Dunbar, A Kevin Webb. “PCR-Based Detection and Identification
of Burkholderia cepacia Complex Pathogens in Sputum from Cystic
Fibrosis Patients” J Clin Microbiol. 2001 December
22. A. M. Jones, M. E. Dodd, A. K. Webb "Burkholderia cepacia: current
clinical issues, environmental controversies, and ethical dilemnas"
European Respiratory Journal. 2001; 17:295-301
23. Mohr, Christian D., Christine A. Herfst, and Miaden Tomich. "Cellular
Aspects of Burkholderia Cepacia Infection." Microbes and Infection 3
(2001): 425-35. Science Direct. Web. 27 Apr. 2010.
24. Hughes JE, Stewart J, Barclay GR, Govan JR. Priming of neutrophil
respiratory burst activity by lipopolysaccharide from Burkholderia
cepacia. Infect Immun. 1997; 65:4281-4287.
25. Huber B, Riedel K, Köthe M, Givskov M, Molin S, Eberl L. Genetic

24
 analysis of func- tions involved in the late stages of biofilm development
in Burkholderia cepacia H111. Mol Microbiol. 2002; 46(2):411-426.
DOI:10.1046/j.1365-2958.2002.03182.x.
26. Peeters E, Nelis HJ, Coenye T. In vitro activity of ceftazidime,
ciprofloxacin, meropenem, minocycline, tobramycin and
trimethoprim/sulfamethoxazole against planktonic and sessile
Burkholderia cepacia complex bacteria. J Antimicrob Chemother. 2009;
64:801-809. DOI:10.1093/jac/dkp253.
27. Tseng SP, Tsai WC, Liang CY, et al. The contribution of antibiotic
resistance mecha- nisms in clinical Burkholderia cepacia complex
isolates: an emphasis on efflux pump activity. PLoS One. 2014;
9(8):e104986. DOI:10.1371/journal.pone.0104986.
28. Regan KH, Bhatt J. Eradication therapy for Burkholderia cepacia
complex in people with cystic fibrosis. Cochrane Database Syst Rev.
2014; 10:1-21. CD009876. DOI:10. 1002/14651858.CD009876.pub2.

25