Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.
com
Sklerosis lateral amiotrofik: Mekanisme yang diusulkan
Ayako Okado-Matsumoto dan Irwin Fridovich*
Departemen Biokimia, Duke University Medical Center, Durham, NC 27710
Disumbangkan oleh Irwin Fridovich, 2 Mei 2002
Mutasi missense pada akun Cu,Zn-superoksida dismutase (SOD1).-20% dari
familial amyotrophic lateral sclerosis (FALS) melalui beberapa, yang belum
ditentukan, peningkatan fungsi toksik yang menyebabkan kematian
neuron motorik secara bertahap. Pembengkakan dan vakuolisasi
mitokondria adalah tanda awal kematian neuron motorik yang baru jadi
pada FALS. Kami sebelumnya melaporkan bahwa SOD1 ada di ruang antar
membran mitokondria. Di sini, kami menunjukkan bahwa masuknya SOD1
ke dalam mitokondria tergantung pada demetalasi dan bahwa protein kejut
panas (Hsp70, Hsp27, atau Hsp25) memblokir pengambilan SOD1 mutan
terkait FALS (G37R, G41D, atau G93A), sementara tidak memiliki efek pada
SOD1 tipe liar. Pengikatan SOD1 mutan ke Hsps dalam ekstrak sel
neuroblastoma menyebabkan pembentukan agregat yang dapat
mengendap. Banyak efek antiapoptosis Hsps telah dilaporkan. Kami
sekarang mengusulkan bahwa pengikatan Hsps ini ke bentuk protein
mutan yang berlimpah di neuron motorik, seperti SOD1, membuat Hsps
tidak tersedia untuk fungsi antiapoptosis mereka dan akhirnya
menyebabkan kematian neuron motorik. Tampaknya juga kompleks Hsp-
SOD1 merekrut protein lain yang ada dalam sel neuroblastoma dan
mungkin dalam neuron motorik untuk membentuk agregat yang dapat
mengendap.
A
myotrophic lateral sclerosis (ALS) terjadi dalam bentuk
familial (FALS) dan sporadis (SALS) dan disebabkan oleh
hilangnya neuron motorik yang lambat dan progresif, yang
menyebabkan kelumpuhan dan kematian. FALS dan SALS dapat
dibedakan secara genetik, tetapi tidak secara klinis. Sekitar 20%
Diunduh dari https://www.pnas.org oleh 125.167.59.128 pada 16 April 2023 dari alamat IP 125.167.59.128.
kasus FALS telah dikaitkan dengan lebih dari 90 mutasi berbeda
pada Cu,Znsuperoksida dismutase (SOD1). Mutasi ini sebagian
besar adalah penggantian asam amino tunggal yang tampaknya
tersebar secara acak di seluruh struktur metalloprotein 32.000-Da
homodimerik ini. Sebagian besar SOD mutan ini pada dasarnya
mempertahankan aktivitas penuh, sebagaimana diukurin vitro,
dan ada banyak bukti untuk fungsi racun sebagai penyebab
penyakit (1, 2).
Keuntungan umum fungsi apa yang mungkin disebabkan oleh
banyak mutasi titik berbeda di SOD1 dan bagaimana kesamaan
dalam FALS dan SALS dapat dijelaskan? Berikut ini kami membuat
laporan yang menyatakan bahwa: FALS mungkin disebabkan oleh
pengikatan protein ke bentuk mutan SOD1 (3); SOD1 mutan
adalah proapoptosis dalam garis sel neuroblastoma (4); efek
proapoptotik dari SOD1 mutan pada kultur fibroblas ditentang
oleh heat shock protein (Hsp) 70 (5); dan SOD1 mutan mengikat
Hsp70, Hsp40, dan-B-kristal (6).
Karena pembengkakan mitokondria dan vakuolisasi adalah tanda
awal kematian neuron motorik yang baru jadi (1, 2) dan karena SOD1
ditemukan di ruang antarmembran tikus (7) dan ragi (8), mitokondria
dan SOD1 terakumulasi dalam mitokondria neuron dari tikus
transgenik yang mengekspresikan keduanya. tipe liar (WT) atau mutan
SOD1 (9); kami mulai dengan memeriksa penyerapan SOD1 ke dalam
organel ini. Kami sekarang menunjukkan bahwa sementara SOD1
demetalasi sebagian atau seluruhnya dibawa ke mitokondria, enzim
holo tidak. Ini berlaku untuk SOD mutan terkait WT dan FALS. Yang
mengejutkan, fraksi sitosol dari sel N2A neuroblastoma tikus yang
disetrum panas menghambat penyerapan ini, sedangkan sitosol dari
sel N2A, tidak diperlakukan demikian, tidak. Selain itu, pengambilan
SOD1 mutan diblokir oleh sitosol dari sel yang disetrum panas,
penyerapan WT SOD1 jauh lebih sedikit terpengaruh. Temuan ini
menunjukkan bahwa beberapa sengatan panas dapat diinduksi
9010–9014-PNAS -25 Juni 2002-vol. 99 - tidak. 13
protein secara istimewa mengikat SOD1 mutan dan dengan demikian
mencegah penyerapan mitokondria dari SOD1 mutan.
Bahan dan metode
Penyerapan SOD1 oleh mitokondria.SOD1 WT dan G93A telah dipra-
dikupas (10) dan kemudian dihilangkan logamnya seperti yang
dijelaskan (11, 12). Tikus (C57BL6) dibunuh oleh CO2inhalasi, dan hati
dengan cepat dihapus dan digunakan. Sel N2A neuroblastoma tikus
(Duke University Cell Culture Facility) ditumbuhkan seperti yang
dijelaskan (4). Mitokondria diisolasi dari hati tikus atau sel N2A yang
tidak ditransfeksi seperti yang dijelaskan (13) dan disuspensikan
dalam media MRM (250 mM sukrosa-10 mM Hepes-KOH-1 mM ATP-5
mM Na-suksinat-0,08 mM ADP-2 mM K2HPO4, pH 7,5) (13).
Mitokondria ini diinkubasi dengan 20-g-ml manusia WT atau G93A
SOD1 -5-M bongkrekic acid (Sigma) atau -40-g-ml alamethicin (Sigma)
selama 1 jam pada 25°C. Mitokondria kemudian diendapkan dan tiga
kali dicuci dalam media MRM dingin, sebelum dilisiskan dalam buffer
lisis [50 mM Hepes-150 mM NaCl-0,5% NP-40 (igepal CA-630,
Sigma)-0,2% digitonin (Sigma)- 0,23 mM PMSF] pada pH 7,6 selama 1
jam pada 0°C, diikuti dengan 10 menit pada 25°C. Ketika efek sitosol
diperiksa, mitokondria ditangguhkan dalam 35.000 -G fraksi
supernatan dari sel N2A nontransfeksi yang diberi perlakuan kejut
panas atau yang tidak ditransfusikan yang dihomogenisasi dalam
media MRM. Ketika efek Hsp diperiksa, 1-g Hsp70 (StressGen
Biotechnologies, Victoria, Kanada) ditambahkan ke suspensi
mitokondria dengan media MRM, bukan fraksi sitosol. Lisat
mitokondria diklarifikasi dengan sentrifugasi pada 15.000 -G selama
10 menit dan dikenai SDS-PAGE pada 10-g jalur protein.
Immunoblotting.Manusia WT, G37R, atau G41D SOD1 secara permanen
mentransfusikan sel N2A dari DR Borchelt (Sekolah Kedokteran Johns
Hopkins, Baltimore) (4) dan M. Patel (Pusat Penelitian dan Medis
Yahudi Nasional, Denver) difraksinasi untuk mitokondria (13) dan
sitosol (35.000 -Gsurpernatan), dan kemudian dielektroforesis (5-g-
lane). Elektroferogram yang dihasilkan dihilangkan ke membran
nitroselulosa (Amersham Pharmacia). Analisis imunoblot
menggunakan antibodi SOD1 anti-manusia yang bereaksi silang
dengan SOD1 tikus atau tikus (1:1.000, Santa Cruz Biotechnology) dan
reagen chemiluminescence yang ditingkatkan (ECL-plus, Amersham
Pharmacia). Pembengkakan mitokondria yang tersuspensi dalam
medium MRM diikuti dengan penurunan absorbansi pada 540 nm
(14). Pita SOD1-positif, setelah immunoblotting, dikuantifikasi dengan
densitometri dengan National Institutes of HealthGAMBAR 1.62
perangkat lunak. Kami dengan sangat hati-hati memeriksa
densitometri bercak ECL untuk memastikan bahwa kuantisasi
didasarkan pada bagian linier dari kurva kalibrasi.
Imunopresipitasi.Sel N2A yang ditransfeksi SOD1 manusia dilisiskan dalam
buffer lisis pada pH 7,6 selama 1 jam pada 0°C, diikuti dengan 10 menit
pada 25°C. Immunoblot diperiksa dengan imunopresipitasi baik sebelum
dan sesudah klarifikasi sentrifugal pada 15.000 -Gselama 10 menit. Untuk
imunopresipitasi, anti-Hsp25 poliklonal kelinci (1:100, StressGen) atau anti-
Hsp70 monoklonal tikus [1:100, W27 yang bereaksi dengan Hsp70 (Hsp70
yang dapat diinduksi; Hsp72) dan Hsc70
Singkatan: ALS, amyotrophic lateral sclerosis; FAL, ALS familial; SALS, ALS sporadis; SOD1, Cu,Zn-
superoksida dismutase; Hsp, protein kejut panas; WT, tipe liar; AIF, faktor penginduksi
apoptosis.
* Kepada siapa permintaan cetak ulang harus ditujukan. E-mail: fridovich@biochem.duke.edu.
www.pnas.org-cgi-doi-10.1073-pnas.132260399

Diunduh dari https://www.pnas.org oleh 125.167.59.128 pada 16 April 2023 dari alamat IP 125.167.59.128.
Gambar 1. Penyerapan SOD1 dan pembengkakan mitokondria tikus. (A) Penyerapan
SOD1 oleh mitokondria hati tikus.Mitokondria yang diisolasi diinkubasi dengan holo
atau SOD1 demetallasi dan kemudian dianalisis kandungan SOD1 dengan
immunoblotting seperti yang dijelaskan dalamBahan dan metode. CuZn, enzim holo; EE,
apo; CuE, SOD1 kekurangan Zn; EZn, SOD1 kekurangan Cu. Setiap jalur diisi dengan 10-
g protein. (B) Pembengkakan mitokondria. Suspensi mitokondria dalam medium MRM
pada suhu 25°C diinkubasi - asam bongkrekat pada suhu 5-M atau alamethicin pada
usia 40-g-ml dan pembengkakan diikuti pada 540 nm.
(Hsp70 konstitutif; Hsp73), Bioteknologi Santa Cruz] ditambahkan ke
800-g (lihat Gambar 4A) atau 3 mg (lihat Gambar 4B) protein dalam 1
ml dan diinkubasi pada suhu 4 ° C semalam dengan agitasi konstan.
Imunokompleks diendapkan dengan protein-G-Sepharose (Amersham
Pharmacia) dengan inkubasi pada suhu 4 ° C selama 3 jam. Manik-
manik dicuci empat kali dengan buffer lisis dan diekstraksi dengan
buffer sampel SDS-PAGE pada 100 ° C selama 5 menit, dan kemudian
mengalami SDS-PAGE. Protein dipisahkan pada 9% (Hsps 25 dan 70)
atau 12% (SOD) SDS-PAGE, dihilangkan, dan ditingkatkan dengan ECL-
plus seperti dijelaskan di atas untuk analisis imunoblot. Analisis
imunoblot menggunakan antibodi Hsp25 (1:1.000), antibodi Hsp70
(1:1.000), atau antibodi SOD1 (1:1.000).
Hasil
Pengaruh Pembengkakan pada Serapan Mitokondria Hati Tikus Apo-SOD1.
Ketika SOD1 manusia diinkubasi dengan mitokondria tikus
yang diisolasi, yang kemudian dicuci tiga kali, enzim holo tidak
diambil, tetapi enzim yang kekurangan Zn, Cu, atau keduanya,
diambil dan disimpan oleh organel ini. Bongkre-
Okado-Matsumoto dan Fridovich
Gambar 2.Efek sitosol dan Hsp70 pada pengambilan SOD1 ke dalam mitokondria
N2A. (A) Serapan mitokondria SOD1. (B) Pengaruh Hsps.Penyerapan SOD1 oleh
mitokondria yang diisolasi dari sel N2A diperiksa seperti pada Gambar. 1 dengan
tidak adanya dan adanya fraksi sitosol. (A) Dengan tidak adanya fraksi sitosol. (B)
Di hadapan sitosol, sitosol dari sel yang disetrum panas, atau 1-g Hsp70
(StressGen). CuZn, enzim holo; EE, apo; CuE, SOD1 kekurangan Zn; EZn, SOD1
kekurangan Cu.
asam kic, yang menghambat pembengkakan mitokondria, tidak
mempengaruhi serapan SOD1 demetallasi, tetapi alamethicin, yang
menyebabkan pembengkakan mitokondria, sangat meningkatkan
serapan ini (Gbr. 1A). Pengaruh asam bongkrek dan alamethicin pada
pembengkakan mitokondria, di bawah kondisi yang dipaksakan,
ditunjukkan pada Gambar. 1B. Jelas, ada sedikit pembengkakan
mitokondria selama durasi 60 menit dari inkubasi ini, dan
pembengkakan kecil itu dihambat oleh asam bongkrek dan sangat
diperkuat oleh alamethicin. Hasil pada Gambar. 1 sepenuhnya sesuai
dengan penelitian yang menunjukkan keberadaan SOD1 di ruang
intermembran mitokondria (7, 8) dan penyerapan apo yang diusulkan,
tetapi bukan holo, SOD1 ke dalam organel ini (8).
Pengaruh Sitosol pada Serapan Mitokondria Apo-SOD1.Mitokhon-
dria, diisolasi dari sel N2A, seperti yang diisolasi dari hati tikus, mengambil
demetallasi, tetapi bukan holo, SOD1, seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 2A.
Sitosol dari sel-sel N2A yang disetrum panas, tetapi tidak normal, memblokir
penyerapan SOD1 yang terdemetalasi dan memblokir G93A SOD1 lebih dari WT
SOD1 (Gbr. 2B). Data ini menunjukkan bahwa beberapa protein yang diinduksi
kejutan panas dapat mengikat secara selektif dan dengan demikian mencegah
pengambilan SOD1 mutan oleh mitokondria.
Pengaruh Kejutan Panas pada Tingkat SOD1 di Sel N2A.Ditransmisikan secara stabil
sel N2A yang terinfeksi yang mengekspresikan SOD1 WT, G37R, atau G41D
manusia digunakan untuk studi selanjutnya. Gambar 3Amenunjukkan
bahwa WT manusia, G37R, dan G41D diekspresikan dalam sel-sel ini dan
ditemukan baik dalam sitosol maupun mitokondria, seperti SOD1 tikus
endogen. Gambar 3Bmenunjukkan bahwa sengatan panas meningkatkan
proporsi SOD1 tikus yang ditemukan di mitokondria, mungkin karena
sengatan panas menyebabkan pembengkakan mitokondria (15). Gambar 3
C menunjukkan bahwa sementara sengatan panas juga memengaruhi
jumlah SOD1 WT tikus dan manusia dalam sitosol sel N2A, hal itu secara
khusus menurunkan jumlah mutan G37R dan G41D dalam mitokondria.
Temuan ini menunjukkan bahwa SOD1 mutan, setelah sintesis dalam
sitosol, dan sebelum metalasi, dapat dicegat oleh beberapa protein yang
dapat diinduksi panas dan dicegah memasuki mitokondria.
NEUROBIOLOGI
Hsp25 dan Hsp70 Mengikat Mutan SOD1 Secara Istimewa.Kami selanjutnya berbalik
untuk imunopresipitasi, menggunakan antibodi terhadap Hsp25, Hsp27, Hsp70,
dan SOD1, untuk secara langsung menunjukkan apa yang dapat disimpulkan dari
Gambar. 3. Dengan demikian sel N2A, baik yang normal maupun yang disetrum
panas, dilisiskan, dan satu bagian dari setiap lisat diklarifikasi
PNAS -25 Juni 2002-vol. 99 - tidak. 13 -9011
 Gambar 3.Pengaruh sengatan panas pada tingkat SOD1 dalam sel N2A. (A) Immunoblot SOD1,WT manusia, G37R, atau G41D-SOD1 sel N2A tikus yang ditransfusikan
secara permanen difraksinasi, dielektroforesis (5-g-lane), dan diperiksa seperti Gambar 1. (B) SOD1 sitosolik dan mitokondria endogen tikus.Pita dikuantifikasi dengan
densitometri dengan National Institutes of HealthGAMBAR 1.62perangkat lunak. Efek sengatan panas (HS) pada rasio SOD1 tikus mitokondria-sitosol ditunjukkan. (C)
Sitosol manusia (Cyt) dan mitokondria (Mit) SOD1 dinormalisasi menjadi SOD1 sitosol-mitokondria endogen tikus. Efek sengatan panas pada rasio sitosolik-mitokondria
manusia WT, G37R, dan G41D SOD1s dinormalisasi dengan rasio SOD1 tikus yang sesuai.
Diunduh dari https://www.pnas.org oleh 125.167.59.128 pada 16 April 2023 dari alamat IP 125.167.59.128.

dengan 10 menit sentrifugasi pada 15.000 -G; sedangkan bagian lainnya
digunakan tanpa klarifikasi. Gambar 4Amenunjukkan bahwa sengatan
panas dari sel-sel ini meningkatkan ekspresi Hsp25 dalam sitosol (16),
dalam kasus sel yang mengekspresikan WT SOD1, tetapi memiliki efek yang
jauh lebih kecil pada sel yang mengekspresikan SOD1 mutan. Kami dapat
mendeteksi Hsp25 atau Hsp70 dalam sel pengekspres SOD1 mutan yang
tidak mengalami kejutan panas ketika kami menggunakan protein 3 mg
per jalur (data tidak ditampilkan). Tetapi 3 mg protein terlalu banyak dalam
kasus ekstrak sel yang diberi perlakuan kejut panas. Konsekuensi-
sering kali kami hanya menampilkan data yang diperoleh dengan
menggunakan 800-g protein per jalur. Perlu dicatat bahwa
sentrifugasi lisat sebelum imunopresipitasi menurunkan Hsps
yang terdeteksi dan SOD1 mutan. Oleh karena itu, SOD1 mutan
membuat sebagian besar Hsp25 tidak larut, kemungkinan besar
dengan mengikatnya. Hasil serupa diperoleh untuk Hsp70 yang
diinduksi dan konstitutif (Gbr. 4A). Ketika bercak diperiksa dengan
anti-SOD (Gbr. 4B) SOD1 mutan, tetapi bukan tikus endogen dan
SOD1 WT manusia, terlihat mengikat Hsp25 dan Hsp70. Ini

Gambar 4.Pengikatan preferensial SOD1 mutan oleh Hsp70 dan Hsp25. (A) Induksi Hsp25 dan Hsp70. (B) SOD mutan mengikat Hsps. Pengikatan SOD1 mutan dan
Hsps diperiksa dengan imunopresipitasi (IP) dan imunobloting (IB). Lisis sel total dari sel N2A tikus normal atau yang disetrum panas yang secara permanen
mentransfeksi WT manusia, G37R, atau G41D SOD1 diperiksa sebelum (total) dan setelah (sup) klarifikasi sentrifugal dengan imunopresipitasi. (A) Immunoprecipitation
dan immunoblotting digunakan dengan antibodi anti-Hsp25 atau anti-Hsp70. (B) Imunopresipitasi digunakan dengan antibodi anti-Hsp25 atau anti-Hsp70, dan
imunoblotting digunakan dengan antibodi anti-SOD1.

9012-www.pnas.org-cgi-doi-10.1073-pnas.132260399 Okado-Matsumoto dan Fridovich

 Gambar 5.Usulan efek mutan (MT) SOD1 pada penyerapan WT SOD1 ke dalam mitokondria.
efek lebih besar dengan lisat dari sel yang disetrum panas, seperti
yang diharapkan karena induksi Hsps ini dengan kejut panas. Sesuai
dengan hasil ini, Hsp27, Hsp25, dan Hsp70 (StressGen) yang diisolasi
terlihat mengikat ke G93A SOD1 tetapi tidak ke WT SOD1 (tidak
diperlihatkan).
Diskusi
Neuron mengalami stres oksidatif kronis yang disebabkan oleh
eksitotoksisitas tingkat rendah. Patut dicatat dalam konteks ini bahwa
antagonis glutamat menunda kematian pada model tikus FALS (17).
Hubungan antara eksitotoksisitas dan stres oksidatif telah ditinjau
(18). Neuron motorik sangat rentan terhadap hasil stres ini karena
aksonnya yang sangat panjang dan transportasi aksonal yang lambat
membuat pergantian makromolekul yang rusak menjadi proses yang
lambat. Kondisi proapoptotik ini biasanya ditentang oleh efek
antiapoptosis dari Hsps; namun, keberadaan protein bermutasi yang
melimpah, yang karena pelipatan yang sedikit menyimpang mengikat
Diunduh dari https://www.pnas.org oleh 125.167.59.128 pada 16 April 2023 dari alamat IP 125.167.59.128.
Hsps, akan berdampak pada penurunan ketersediaannya untuk fungsi
antiapoptosis lainnya. SOD1 adalah protein berlimpah yang bentuk
mutannya mengikat Hsps dan dengan demikian menyebabkan
apoptosis akhirnya.
Pada manusia, dengan FALS yang disebabkan oleh mutasi
pada SOD1, kita dapat mengharapkan ruang intermembran
mitokondria pada neuron tersebut menjadi kekurangan
SOD1, karena pemblokiran pengambilan ke dalam organel ini
akibat pengikatan Hsps di sitosol. Mitokondria dalam neuron
dengan demikian akan ditolak efek perlindungan penuh dari
SOD1 dan dengan demikian secara selektif rentan terhadap
kerusakan oksidatif. Proposal ini diilustrasikan pada Gambar.
5, yang menunjukkan di sebelah kiri mitokondria bahwa dimer
SOD1 demetalasi apakah WT atau mutan diambil oleh organel
ini. Di sebelah kanan mitokondria kita melihat bahwa WT
SOD1, yang tidak mengikat Hsp, diambil; sedangkan
homodimer dari SOD1 mutan atau heterodimer yang
mengandung satu subunit mutan dan salah satu WT
berikatan dengan Hsp dan ditolak masuk.
Ulasan terbaru (1, 2) menyajikan bukti yang mendukung peran agregat
protein toksik, defek mitokondria, apoptosis, eksitotoksisitas, dan stres
oksidatif dalam etiologi ALS. Ini sekarang dapat dirakit menjadi satu
kesatuan yang koheren. Dengan demikian, eksitotoksisitas diketahui
menimbulkan stres oksidatif (1, 19), yang diketahui
1. Cluskey, S. & Ramsden, DB (1991)J.Clin. Patol. Mol. Patol.54, 386–392.
2. Julien, JP (2001)Sel104,581–591.
3. Kunst, CB, Mezey, EM, Brownstein, J. & Patterson, D. (1997)Nat. Genet.
15,91–94.
4. Pasinelli, P., Borchelt, DR, Houseweart, MK, Cleveland, DW & Brown,
RH, Jr. (1998)Proses Natl. Acad. Sains. Amerika Serikat95,15763–15768.
Okado-Matsumoto dan Fridovich
proapoptosis. Efek antiapoptosis dari Hsp27, Hsp70, dan Hsp90
ditetapkan (20). Faktor penginduksi apoptosis (AIF) ada di ruang
intermembran mitokondria, seperti halnya Hsp70 (21), dan pengikatan
satu ke yang lain akan menjadi antiapoptosis (22). SOD1 mutan di
ruang ini bersaing dengan AIF untuk berikatan dengan Hsp70
sehingga meningkatkan level AIF bebas (Gbr. 5). Ekspresi dan aktivitas
proteasome telah dilaporkan menurun seiring bertambahnya usia di
sumsum tulang belakang (23). Mutan SOD1 berubah lebih cepat
daripada WT SOD1, dan penghambat aksi proteasome menghambat
pergantian ini dan dengan demikian secara selektif meningkatkan
tingkat kondisi mapan SOD1 mutan (24). Dengan demikian,
penurunan ekspresi dan aktivitas proteasome yang bergantung pada
usia dengan cara ini akan menjelaskan timbulnya gejala ALS yang
biasanya terlambat pada manusia yang terkena.
Ada banyak protein lain di neuron, dan bentuk mutannya dapat
memiliki efek serupa dan dengan demikian dapat bertanggung
jawab atas 80% kasus FALS yang tidak terkait dengan mutasi pada
SOD1. Dalam nada yang sama SALS bisa disebabkan olehde novo
mutasi pada protein apa pun yang berlimpah di neuron motorik.
Perlu dicatat di sini bahwa agregat protein neuron terlihat pada
FALS dan SALS dan mengandung SOD1 pada kasus sebelumnya
tetapi tidak pada kasus terakhir (25). Penyakit neurologis lainnya
juga dapat disebabkan oleh pengikatan Hsps pada protein yang
menyimpang. Jadi pada penyakit ekspansi poliglutamin, seperti
penyakit Huntington, Hsp40 dan Hsp70 mengikat perburuan yang
menyimpang telah dilaporkan (26).
Karenanya neuron motorik bertahan berdasarkan
keseimbangan antara efek proapoptosis dari stres oksidatif dan
efek antiapoptosis Hsps. Mutasi pada protein apa pun yang
berlimpah di neuron ini memiliki kemungkinan memaksakan
pengikatan Hsps dan pembentukan agregat protein dan
penipisan Hsps bebas, yang pada akhirnya akan memberi
keseimbangan pada apoptosis. Selain alasan yang telah dibahas,
neuron motorik mungkin berisiko secara selektif karena tingkat
ekspresi SOD1 yang tinggi (27).
Kami berhutang budi kepada Drs. Manisha Patel dan David R. Borchelt,
yang memasok sel N2A yang ditransfusikan SOD; Drs. Jonathan S. Stamler
dan Paul Blackwelder, yang memasok hati tikus; dan Dr. Paul Modrich, yang
dengan baik hati menyediakan fasilitas kultur sel. Pekerjaan ini didukung
oleh hibah dari National Institutes of Health (1RO1DK59868-01), the
Amyotrophic Lateral Sclerosis Association, dan Incara Pharmaceuticals Inc.
5. Bruening, W., Roy, J., Giasson, B., Figlewicz, DA, Mushynski, WE & Durham, HD
NEUROBIOLOGI
(1999)J. Neurochem.72,693–699.
6. Shinder, GA, Lacourse, MC, Minotti, S. & Durham, HD (2001)J.Biol. kimia276,
12791–12796.
7. Okado-Matsumoto, A. & Fridovich, I. (2001)J.Biol. kimia276,38388–38393.
8. Sturts, LA, Diekert, K., Jensen, LT, Lill, R. & Culotta, VC (2001)J.Biol. kimia276,
38084–38089.
PNAS -25 Juni 2002-vol. 99 - tidak. 13 -9013
 9. Jaarsma D., Rognoni, F., Duijn, WV, Verspaget, HW, Haasdijk, ED & Holstege, JC
(2001)Acta Neuropatol.102,293–305.
10. Liochev, SI, Chen, LL, Hallewell, RA & Fridovich, I. (1997)Lengkungan. Biokimia.
Biofisika.346,263–268.
11. Sutter, B., Bounds, PL & Koppenol, WH (2000)Purif Ekspresi Protein.
19,53–56.
12. Valentine, JS & Pantoliano, MW (1981) diIon Logam dalam Biologi, ed. Spiro,
TG (Wiley, New York), Vol. 3, hlm. 291–358.
13. Goping, IS, Gross, A., Lavoie, JN, Nguyen, M., Jemmerson, R., Roth, K.,
Korsmeyer, SJ & Shore, GC (1998)J. Sel Biol.143,207–215.
14. Jiang, D., Sullivan, PG, Sensi, SL, Pelayan, O. & Weiss, JH (2001)J.Biol. kimia276,
47524–47529.
15. Welch, WJ & Suhan, JP (1985)J. Sel Biol.101,1198–1211.
16. Garrido, C., Bruey, JM, Fromentin, A., Hammann, A., Arrigo, AP & Solary,
E.(1999)FASEB J.13,2061–2070.
17. Gurney, ME, Cutting, FB, Zhai, P., Doble, A., Taylor, CP, Andrus, PK & Hall, ED
(1996)Ann. Neurol.39,147–157.
18. Bondy, SC & LeBel, CP (1993)Bio Radikal Bebas. Kedokteran14,633–642.
19. Li, QY, Pedersen, C., Day, BJ & Patel, M. (2001)J. Neurochem.78,746–755.
Diunduh dari https://www.pnas.org oleh 125.167.59.128 pada 16 April 2023 dari alamat IP 125.167.59.128.
9014-www.pnas.org-cgi-doi-10.1073-pnas.132260399
20. Garrido, C., Gurbuxani, S., Ravagnan, L. & Kroemer, G. (2001)Biokimia.
Biofisika. Res. Komunal.286,433–442.
21. Bruey, JM, Ducasse, C., Bonniaud, P., Ravagnan, L., Susin, SA, DiazLatoud, C.,
Gurbuxani, S., Arrigo, AP, Kroemer, G., Solary, E. & Garrido , C.(2000)Nat. Bio
Sel.2,645–652.
22. Ravagnan, L., Surbuxani, S., Susin, SA, Maisse, C., Daugas, E., Zamzami, N.,
Mak, T., Jaattela, M., Penninger, JM, Garrido, C. & Kroemer, G. (2001)Nat. Bio
Sel.3,839–843.
23. Keller, JN, Huang, FF & Markesbery, WR (2000)Ilmu saraf98, 149–156.
24. Hoffman, EK, Wilcox, HM, Scott, RW & Siman, R. (1996)J. Neurol. Sains.
139,15–20.
25. Fukuda, K., Nagano, S., Satoh, M., Tohyama, C., Nakanishi, T., Shimizu, A.,
Yanagihara, T. & Sakoda, S. (2001)eur. J. Neurosci.14,2032–2036.
26. Wyttenbach, A., Carmichael, J., Swartz, J., Furlong, RA, Narain, Y., Rankin,
J. & Rubinsztein, DC (2000)Proses Natl. Acad. Sains. Amerika Serikat97,2898–2903.
27. Pardo, CA, Xu, Z., Borchelt, DR, Harga, DL, Sisodia, SS & Cleveland,
DW (1995)Proses Natl. Acad. Sains. Amerika Serikat92,954–958.
Okado-Matsumoto dan Fridovich