TUGAS TEKNIK PENGAMBILAN SAMPEL

REVIEW JURNAL INTERNASIONAL

OLEH :

MUHAMMAD ARSYAD
2104111859

LABORATORIUM BIOLOGI PERAIRAN

FAKULTAS PERIKANAN DAN KELAUTAN
UNIVERSITAS RIAU
PEKANBARU
2023
 KATA PENGANTAR

Puji Syukur penulis ucapkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan
kita Rahmat dan Karunianya sehingga penulis dapat menyelesaikan Tugas Teknik

pengambilan sampel alga dengan judul ” Non-Lethal Blood Sampling of Fish in the lab

and Field With Methods for Dried Blood Plasma Spot Omic Analyses”.
Dalam pengerjaan tugas, penulis mengucapkan banyak terimakasih Kepada Dosen
Teknik pengambilan sampel, Terutama kepada bapak Dr.Eddiwan, S.Pi, M.Si dan para
asistennya yang telah membimbing penulis dalam mengajarkan makalah ini, serta penulis
ucapkan terimakasih kepada semua pihak yang telah membantu dan memberi motivasi
dalam mengerjakan makalah hingga makalah ini selesai.
Bila penulisan makalah masih ada kesalahan-kesalahan yang penulis tidak ketahui,
oleh karena itu kepada ibuk mohon dikritik dan sarannya,untuk penulisan makalah untuk
dapat lebih baik lagi kedepannya.

Pekanbaru, 3 September 2023

Muhammad Arsyad
 DAFTAR ISI

Isi Halaman

KATA PENGANTAR.......................................................................... i
DAFTAR ISI ........................................................................................ ii

A. Penentuan Lokasi ....................................................................... 1

B. Titik Sampling ............................................................................ 2
C. Analisis Data........................................................................... 3
D. Metode Teknik Pengambilan Sampel......................................... 4
E. Tujuan Pengambilan Sampel....................................................... 5

DAFTAR PUSTAKA
 Non-Lethal Blood Sampling of Fish in the lab and Field With
Methods for Dried Blood Plasma Spot Omic Analyses

A. Penentuan Lokasi

Komite perawatan hewan di Ontario Tech University meninjau dan

menyetujui penggunaan hewan dalam percobaan lanjutan berdasarkan
protokol penggunaan hewan 15031. Kami menampung 80 ikan rainbow trout
(kira-kira 200–300 g) di empat tangki aliran 1000 L (20 ikan per tangki)
dengan lima pergantian per hari, menggunakan air kota yang telah
dideklorinasi pada suhu 12°C, dan fotoperiode 16:8 terang:gelap. Kami
memelihara 5 ikan dari setiap perlakuan di masing-masing empat tangki (20
ikan per tangki), menjadikan setiap tangki sebagai replika teknis dengan lima
ulangan semu. Untuk melacak setiap perlakuan, kami menandai ikan di
jaringan otot punggung dengan floy tag; masing-masing memiliki ID unik.
Perlakuan pasca pengambilan sampel meliputi penggunaan pembalut cair,
penyeka Betadine®, penyeka yang berisi lendir ikan itu sendiri, atau tidak ada
pascaperawatan (hanya dengan tekanan). Kami membiarkan ikan
menyesuaikan diri di laboratorium selama beberapa minggu sebelum
pengambilan sampel darah dan memberi mereka makanan 1,6% bb (Corey
Aquafeeds, pelet ukuran Optimum™ 3,0 mm) setiap hari selama penelitian.
Kami menganestesi ikan menggunakan tricaine methanesulfonate dan
mengukur berat badan, panjang, dan menempatkan ikan dalam bak V yang
basah dan berbusa untuk mengambil sampel darah dari pembuluh darah ekor,
dengan jarum masuk di posterior sirip dubur (Gambar 1A). Kami mengambil
sekitar 1 μl darah per gram berat badan menggunakan jarum ukuran 22 dan
spuit heparinisasi. Kami memberikan tekanan dan menunggu minimal 30 detik
untuk menghentikan pendarahan sebelum memberikan setiap perawatan
pengambilan sampel darah. Kami membiarkan setiap ikan pulih dari obat bius
dalam ember aerasi dan kemudian memindahkannya ke tangki penampungan
aslinya. Sebelumnya, kami menemukan bahwa heparinisasi jarum tidak
 diperlukan dan dapat menyebabkan pendarahan berlebihan bahkan setelah
memberikan tekanan pada luka selama 30 detik.

B. Titik Sampling

Kami mengamati satu kematian di lapangan sekitar 24 jam setelah

kejadian pengambilan sampel darah, pada ikan yang darahnya telah diambil
sampelnya. Tidak ada tanda-tanda eksternal dari trauma atau infeksi yang
menunjukkan bahwa kematian tersebut kemungkinan besar disebabkan oleh
stres umum yang terkait dengan penanganan.

Semua ikan diamati telah sembuh total 2 minggu setelah pengambilan

sampel darah (Gambar Tambahan S5). Terdapat beberapa goresan dan luka
kecil pada 3 ikan yang terpisah dari lokasi tusukan sebenarnya dan oleh karena
itu tidak terkait dengan pengambilan sampel namun dengan cedera umum
yang dapat terjadi akibat penanganan dan pengangkutan ikan.

Semua ikan jelas dalam keadaan sehat, dan sebagian besar ikan sampel
darah tidak dapat dibedakan dari ikan kontrol (Gambar tersedia Bahan
Pelengkap). Ikan-ikan tersebut tidak diberi tag sehingga fakta bahwa tidak ada
tanda-tanda pengambilan sampel darah pada 11 dari 20 ikan menunjukkan
bahwa pengambilan sampel tersebut dapat ditoleransi dengan baik.
Sehubungan dengan 9 ikan lainnya, lokasinya telah pulih sepenuhnya tetapi
ada bekas luka kecil yang terlihat di lokasi pengambilan sampel (Gambar 1B).
C. Analisis Data

Kami mengumpulkan semua data kelangsungan hidup yang dikumpulkan

dari laboratorium dan studi pengambilan sampel lapangan ke dalam tabel
kontingensi 2x2. Sehubungan dengan studi percontohan laboratorium,
perlakuan “hanya tekanan” berfungsi sebagai kontrol negatif dibandingkan
dengan perlakuan pasca pengambilan sampel lainnya.

Kami menganalisis data secara statistik menggunakan lingkungan perangkat

lunak R (V 4.0.5) dengan paket “Exact” (V. 2.1) diinstal. Kami melakukan uji
CSM Barnard pada data kelangsungan hidup karena uji ini ditentukan sebagai
uji yang lebih sesuai dengan kekuatan statistik yang lebih besar daripada uji
eksak Fisher untuk eksperimen dengan desain satu margin tetap (Lydersen et
al., 2009). Lebih khusus lagi, kami menggunakan fungsi “exact.test” dengan
argumen: alternatif = “lebih besar”, metode = “CSM”, conf.in = TRUE) yang
menentukan penggunaan uji Barnard satu sisi karena frekuensi kematian
hanya diharapkan meningkat dari frekuensi nol. Program ini juga menghitung
interval kepercayaan 95% untuk setiap kelompok eksperimen menggunakan
argumen conf.in = TRUE. Sehubungan dengan studi percontohan
laboratorium, kami mengoreksi nilai p yang diperoleh untuk setiap perlakuan
pasca pengambilan sampel untuk beberapa perbandingan menggunakan fungsi
p.adjust yang tersedia di basis R yang melakukan koreksi FDR Benjamini-
Hochberg. Keluaran dari uji statistik ini tersedia di Materi Pelengkap.

Banyak penelitian telah mengambil sampel darah melalui kanulasi aorta dorsal
atau melalui tusukan ekor pada spesies ikan yang berbeda, dan telah
mengamati kelangsungan hidup setelah berhari-hari hingga berbulan-bulan
(Lowe-Jinde dan Niimi, 1983; Foo dan Lam, 1993; Mazik dkk., 1994; Lo
dkk., 2003; Djordjevic dkk., 2012). Cook dkk., 2011 bahkan mengamati
kelangsungan hidup ikan bass mulut besar yang dilepasliarkan setelah satu
tahun di danau penelitian swasta. Namun, belum ada penelitian terpublikasi
yang kami ketahui, yang secara eksplisit mengukur dan melaporkan hasil
 kelangsungan hidup setelah pengambilan sampel darah. Dengan demikian,
tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi dampak
pengambilan sampel darah melalui tusukan ekor terhadap penyembuhan dan
kelangsungan hidup ikan, dan untuk mengevaluasi metode yang berbeda untuk
mengumpulkan dan menyimpan sampel plasma dari darah. Penelitian ini
dilakukan dalam tiga bagian; 1) sampel darah dari ikan rainbow trout diambil
di laboratorium dan beberapa perawatan pasca pengambilan sampel diberikan
untuk menguji adanya perbaikan dalam penyembuhan dan kelangsungan
hidup; 2) Eksperimen lanjutan dilakukan untuk mengevaluasi pengaruh
pengambilan sampel darah terhadap kelangsungan hidup ikan rainbow trout
yang dikurung di lapangan; dan terakhir 3) kami mengevaluasi kegunaan
bercak darah kering untuk analisis metabolomik dan proteomik.

D. Metode Teknik Pengambilan Sampel

Ada beberapa metode pengambilan sampel darah untuk ikan antara lain
ablasi ekor, tusukan jantung, tusukan aorta dorsal, dan tusukan pembuluh
darah ekor (Duman et al., 2019). Pengambilan sampel darah melalui
pembuluh darah ekor dijelaskan dengan baik oleh Lawrence et al. (2020) dan
secara umum dianggap paling aman, karena meminimalkan waktu
penanganan dan dapat diberikan pada berbagai ukuran ikan. Disarankan
untuk menggunakan anestesi saat pengambilan sampel darah ikan, untuk
meminimalkan pergerakan selama pengambilan sampel yang dapat
menyebabkan cedera serius pada hewan (Barton dan Iwama, 1991). Metode
anestesi tradisional mencakup anestesi kimia seperti tricaine
methanesulfonate dan minyak cengkeh, namun metode ini tidak
memungkinkan waktu induksi atau pemulihan ikan yang cepat, dan biasanya
memerlukan periode depurasi yang tidak praktis dari badan pengawas (yaitu,
Badan Pengawas Obat dan Makanan AS). Administrasi dan Kesehatan
Kanada) sebelum dilepaskan kembali ke lapangan (Health Canada, 2010;
Trushenski et al., 2013). Elektro-anestesi/elektro-sedasi adalah teknik yang
telah banyak digunakan selama beberapa dekade dalam budidaya perikanan
dan perikanan untuk imobilisasi dan penanganan sementara (Robb dan Roth,
 2003; Reid et al., 2019). Ini ideal untuk penanganan ikan di lapangan karena
waktu induksi dan pemulihan yang cepat, tanpa memerlukan periode depurasi
seperti yang diperlukan dengan anestesi kimia (Keep et al., 2015; Abrams et
al., 2018; Reid et al., 2019) .

E. Tujuan Pengambilan Sampel

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui dampak pengambilan

sampel darah dalam jumlah kecil pada ikan berbadan besar terhadap
kelangsungan hidup dan penyembuhan. Selain mengevaluasi kelangsungan
hidup setelah pengambilan sampel darah, kami mengevaluasi kegunaan bercak
darah kering sebagai alternatif pemrosesan dan penyimpanan sampel di
lapangan. Dalam pendekatan kami, kami menampung 80 ikan rainbow trout
(Oncorhynchus mykiss) di fasilitas akuatik yang mengalir. Kami kemudian
dibius menggunakan MS-222 dan mengambil sampel 1 μl/g bb darah melalui
tusukan pembuluh darah ekor. Kami menguji empat perawatan pengambilan
sampel pasca-darah yang berbeda pada luka tusukan: 1. penerapan perban cair;
2. kapas betadine; 3. usap lendir ikan; dan 4. membandingkan hasil
kelangsungan hidup dengan kelompok yang tidak melakukan pasca
pengobatan (kontrol negatif). Secara keseluruhan, kami mengamati 90%
kelangsungan hidup di antara semua perlakuan, dengan pendekatan yang
paling efektif adalah kontrol negatif (100% kelangsungan hidup).
 DAFTAR PUSTAKA

Abrams A. E. I., Rous A. M., Brooks J. L., Lawrence M. J., Midwood J. D.,
Doka S. E., et al. (2018). Comparing Immobilization, Recovery, and
Stress Indicators Associated with Electric Fish Handling Gloves and a
Portable Electrosedation System. Trans. Am. Fish. Soc. 147 (2), 390–
399. 10.1002/tafs.10034.
Andrew S. C., Primmer C. R., Debes P. V., Erkinaro J., Verta J.-P. (2021).
The Atlantic salmon Whole Blood Transcriptome and How it Relates to
Major Locus Maturation Genotypes and Other Tissues. Mar. Genomics
56, 100809. 10.1016/j.margen.2020.100809 [PubMed] [CrossRef]
[Google Scholar].
Aristizabal Henao J. J., Metherel A. H., Smith R. W., Stark K. D. (2016).
Tailored Extraction Procedure Is Required to Ensure Recovery of the
Main Lipid Classes in Whole Blood when Profiling the Lipidome of
Dried Blood Spots. Anal. Chem. 88 (19), 9391–9396.
10.1021/acs.analchem.6b03030 [PubMed] [CrossRef] [Google
Scholar].
Barton B. A., Iwama G. K. (1991). Physiological Changes in Fish from Stress
in Aquaculture with Emphasis on the Response and Effects of
Corticosteroids. Annu. Rev. Fish Dis. 1, 3–26. 10.1016/0959-
8030(91)90019-G [CrossRef] [Google Scholar].