BAKTERI TAHAN TERHADAP LOGAM BERAT KADMIUM (Cd)

DAN APLIKASINYA PADA TANAMAN

Nurul Jannah
E-mail: Nurul.jannah6867@grad.unri.ac.id
Pasca Sarjana Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan
Universitas Riau

ABSTRACT
Heavy metals are metals that hold biological significance. One example of a heavy metal is
Cadmium (Cd), classified as a toxic metal. Various heavy metals such as zinc, lead, copper,
and cadmium have been detected in the soil, posing a significant threat to the environment
and populations. Environmental pollution with heavy metals has become a critical issue due
to the difficulty of absorption by microorganisms, posing a threat to various ecosystems.
Generally, the toxic effects of heavy metals result from the interaction between metals and
enzymes, leading to the inhibition of metabolic processes. These metals are present in the
environment and can flow through the food chain. Therefore, it is essential to study the
bacterial processes involved in addressing heavy metal pollution in agricultural plants. The
method employed involves a literature review in international journals. It was found that in
Cd-contaminated areas with a concentration of 0.43 mg/L, bacteria such as Bacillus cereus
MG257494.1 (MR99) and Alcaligenes faecalis were able to survive in such conditions. This
finding is supported by research reports indicating that these bacteria can help corn plants
withstand Cd stress, although higher Cd concentrations can damage the plants. Bacillus
pumilus has shown significant potential for remediating Cd from the soil and reducing the
availability of Cd phyto and its toxicity.

Key words: Cadmium, Heavy metals, Agricultural plant, Bacillus genus

PENDAHULUAN
Logam berat merupakan sekelompok besar unsur yang memiliki signifikansi biologis.
Logam ini dapat dikategorikan menjadi tiga bagian, pertama logam beracun (seperti Hg, Cr,
Pb, Zn, Cu, Ni, Cd, As, Co, Sn, dan lain-lain.), logam mulia (seperti Pt, Ag, Au, Ru, dan lain-
lain) dan radionuklida (seperti U, Th, Ra, Am, dan lain-lain). Pencemaran global meningkat
karena variasi dalam aktivitas alami dan antropogenik, menyebabkan kontaminasi di berbagai
ekosistem akuatik dan terestrial dengan logam berat, senyawa kimia organik dan anorganik.
(Suharjo et al., 2022)
Berbagai logam berat seperti seng, timbal, tembaga, dan kadmium telah terdeteksi
dalam tanah yang merupakan ancaman besar bagi lingkungan dan populasi. Pencemaran
lingkungan dengan logam berat telah menjadi masalah kritis karena kesulitan penyerapan
oleh mikroorganisme dan menjadi ancaman bagi berbagai lingkungan. Selain itu, logam berat
tidak dapat terurai secara biologis dan bertahan secara permanen di lingkungan, serta
ditransfer melalui rantai makanan menyebabkan bahaya serius bagi kesehatan manusia (El-
Meihy et al., 2019).
Secara umum, efek toksik logam berat berasal dari interaksi antara logam dan enzim
yang menyebabkan inhibisi proses metabolisme. Diantara logam-logam tersebut, kadmium
adalah salah satu logam berat yang paling beracun dan termasuk dalam sepuluh besar dalam
daftar hitam Organisasi Kesehatan Dunia (WHO). Selain itu, kadmium adalah logam berat
beracun yang terjadi secara alami dan memasuki tanah dan air melalui beberapa cara, serta
memiliki potensi tinggi untuk mengendap di jaringan hidup (mikroorganisme, tanaman, dan
hewan) menyebabkan berbagai penyakit pada hewan dan manusia seperti gangguan ginjal
dan paru-paru, kerusakan sel darah merah, mutasi, kerusakan pada untai DNA, kerusakan
kromosom, transformasi sel, dan beberapa jenis kanker. Selain itu, keracunan kadmium
kronis menyebabkan kematian pada penderita penyakit Itai-Itai. Di tanah terkontaminasi,
mikroorganisme berevolusi dengan berbagai mekanisme yang memungkinkan mereka
bertahan dalam lingkungan stres, seperti pengecualian logam oleh penghalang permeabilitas,
penahanan seluler.(Uqab et al., 2022)
Untuk itu dalam artikel ini dikaji mengenai pentingnya bakteri tahan terhadap limbah
berat Cd untuk kemudian dikembangkan di lahan pertanian yang aman untuk tanaman.

METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan dengan metode studi literatur. Metode ini dilakukan dengan cara
literasi digital melalui berbagai jurnal dan artikel yang ada di internet. Analisis yang
digunakan yaitu secara deskriptif dengan menganalisis informasi mengenai bakteri yang
tahan terhadap logam berat Kadmium (Cd).

PEMBAHASAN
Logam Berat Kadium
Logam berat paling beracun, 10 besar daftar hitam Organisasi Kesehatan Dunia (WHO).
Logam berat beracun secara alami dan memasuki tanah dan air melalui beberapa cara, serta
memiliki potensi tinggi untuk mengendap di jaringan hidup (mikroorganisme, tanaman, dan
hewan). Penyebab berbagai penyakit pada hewan dan manusia seperti gangguan ginjal dan
paru-paru, kerusakan sel darah merah, mutasi, kerusakan pada untai DNA, kerusakan
kromosom, transformasi sel, dan beberapa jenis kanker. Keracunan kadmium kronis
menyebabkan kematian pada penderita penyakit Itai-Itai. (Bravo & Braissant, 2022).

Gambar 1. Sumber Cadmium

Baku Mutu Logam Kadium di Lingkungan

Komisi Codex Alimentarius dari program Standar Makanan bersama FAO/WHO
konsentrasi maksimum Cd yang diperbolehkan dalam beras poles dan kakao‐ produk
turunannya (yaitu 0.4 atau 0.8 mg kg −1 masing-masing untuk beras dan coklat dengan %
padatan kakao). Oleh karena itu, penggunaan CdtB kini menjadi relevan untuk bioremediasi
tanah pertanian bahkan pada konsentrasi Cd yang rendah. Pentingnya CdtB terletak pada
kemampuannya berinteraksi dengan Cd dalam tanah (mikrobiogeokimia) untuk membentuk
antarmuka nukleasi.Antarmuka mikroba ini terlibat dalam berbagai reaksi geokimia. Dalam
reaksi ini, peran sifat fisikokimia tanah/sedimen, seperti bahan organik tanah (SOM), fosfor,
kandungan kalium dan asosiasi organo-mineral Ca pada lahan pertanian sangat berperan.
disorot. Efek antarmuka CdtB meningkatkan reaksi yang menghasilkan bioweathering
Cd. Bioweathering menyebabkan bentuk mineral Cd tahap awal anhidrat dan kristalin pada
permukaan bakteri dan menurunkan konsentrasi logam dari larutan tanah. (Bravo &
Braissant, 2022)

Toleransi Bakteri Tahan Logam Berat

Toleransi yaitu kemampuan bakteri menggunakan kandungan Cd yang tersedia dalam sistem
tanaman sebagai sumber energi. Untuk mengaktifkan berbagai mekanisme. Salah satu mekanisme ini
adalah pompa penghabisan, yang secara aktif mengatur stres oksidatif seluler dan proses akumulasi
Cd. Respons sel individu terhadap gangguan, yang berdampak pada stabilitas komunitas secara
keseluruhan dan terkait dengan aktivasi mekanisme protektif atau adaptif untuk bertahan hidup.
Bakteri toleran kadmium membentuk kelompok heterogen yang terdapat di tanah, air, dan udara.
(Nath et al., 2018)
Interaksi Bakteri Tahan Logam Berat dengan Tanaman Biosorpsi

Biosorben
Biosorben merupakan bahan biologis yang mampu mengakumulasi logam berat dari
lingkungan. Biosorben (Produk sampingan pertanian, campuran kitin, gambut, dan biomassa
mikroba) bertanggung jawab atas interaksi asam-basa, khelasi, kompleksasi, interaksi
elektrostatik, pertukaran ion, dan interaksi van der Waals. Biomaterial berinteraksi dengan
adsorben mineral, seperti tanah liat dan zeolit yang terdapat di tanah, untuk melumpuhkan
Cd. Biosorpsi juga dapat dikaitkan dengan komunitas mikroba, termasuk populasi
CdtB. Menurut literatur, biomassa mikroba dapat mengikat logam berat baik secara aktif,
pasif, atau melalui kombinasi kedua proses tersebut tergantung pada populasi biosorben yang
digunakan. Biomassa mikroba yang terdiri dari CdtB dapat meningkatkan kapasitas biosorpsi
menggunakan kemampuan pengikatannya, yaitu tarikan elektrostatik antara ion Cd dan
tempat reaksi bermuatan negatif pada dinding sel bakteri atau eksopolimer yang dihasilkan
(EPS) akan membuka jalan bagi pembentukan bioadsorben biologis.

Biotransformasi
Transformasi ion Cd pada permukaan sel biologis merupakan langkah pertama dalam interaksi antara
logam dan sel bakteri.Ion Cd mengalami berbagai reaksi biokimia, proses migrasi dan transformasi
pada antarmuka sel-logam. Salah satunya melibatkan produksi EPS, yang merupakan ciri utama
toleransi Cd. Secara khusus, EPS yang kaya asam uronat memiliki kemampuan mengikat Cd yang
tinggi.

Biodegradasi
Bakteri toleran kadmium juga diketahui memiliki fungsi metabolisme dalam biodegradasi
hidrokarbon (yaitu hidrokarbon aromatik polisiklik atau PAH), yang dimediasi oleh penghambatan Cd
dalam percobaan yang terkontaminasi. Penelitian lain menunjukkan bahwa meskipun konsentrasi Cd
yang lebih tinggi menghasilkan penurunan pertumbuhan strain P. aeruginosa , laju biodegradasi
deca-bromo-diphenyl ether (BDE-209) pada 1 mg kg −1 Cd lebih besar dibandingkan kandungan Cd
lainnya yang dinilai. Dalam penelitian, sebagian besar Cd yang ditambahkan dikomplekskan menjadi
CdHPO 4 , yang umumnya dilaporkan non-bioavailable. Hal ini menegaskan peran CdtB dalam
biodegradasi PAH dari lokasi yang terkontaminasi.
Bioweathering
Pelarutan batuan dan substrat mineral yang dilakukan terutama oleh mikroorganisme. Proses
bioweathering adalah pembentukan dan pengendapan terus menerus dari bentuk mineral Cd yang
tidak larut yang diasingkan. Dimediasi oleh aktivitas metabolisme mikroorganisme yang
menyebabkan perubahan lingkungan di lapisan bawah permukaan. Hal ini dapat menurunkan rasio
asimilasi Cd pada akar kakao, serta akumulasi pada biji kakao. Bioweathering berarti konversi sumber
Cd yang dapat larut, seperti CdCl 2 atau CdNO 3 , menjadi bentuk yang kurang larut atau tidak dapat
larut, seperti CdO, Cd‐β(OH) 2 , CdCO 3 , CdSO 4 atau CdSe, yang merupakan bentuk sekunder yang
timbul dari aktivitas metabolisme bakteri, didukung oleh bukti yang ditemukan di perkebunan kakao.
Perubahan spesiasi kimia yang dimediasi oleh CdtB mempengaruhi kelarutan produk akhir dalam
air. Ini merupakan kriteria remediasi yang penting karena ketika logam diendapkan ke dalam tanah
tempat tanaman ditanam, laju biotranslokasi dan bioakumulasinya dalam jaringan tanaman juga
berkurang. Oleh karena itu, produk akhir dari jalur biogeokimia ini menghasilkan spesies kimia Cd
yang bersifat geostabil dan tinggal di dalam tanah.

Kemisorpsi
Mengacu pada adhesi zat terlarut (terutama ion Cd) ke molekul asal biologis (terutama protein
atau peptida) yang terjadi pada permukaan biomassa. Pada tanah yang ditanami tanaman, rasio
kandungan Cd/Fe,/Mn atau/bahan organik mempunyai pengaruh penting terhadap kemisorpsi
logam. Kemisorpsi bakteri terjadi ketika komposisi unsur dalam tanah menyukai gradien Cd yang
akan teradsorpsi karena aktivasi metabolik sistem limbah Cd. Menariknya, sistem yang sama juga
digunakan untuk mengurangi stres seng. Oleh karena itu, toleransi bakteri terhadap Cd dicapai melalui
dua mekanisme penghabisan : menggunakan sistem pompa ATPase tipe-P dan menggunakan
mekanisme transporter yang digerakkan oleh protein pembelahan sel (RND) yang resisten-nodulasi-
pembelahan sel, yang terlibat dalam transit logam seperti Cd. Sistem efluen ATPase tipe P
menyebabkan pengangkutan logam melalui hidrolisis ATP, sehingga reaksinya dianggap endotermik,
karena memerlukan energi untuk menghidrolisis ATP.
Sebagai perbandingan, transporter yang digerakkan oleh RND tidak memperoleh energi
melalui hidrolisis ATP untuk membawa logam ke dalam sel bakteri. Beragam populasi mikroba yang
secara unik menyesuaikan diri dengan kondisi nyata keberadaan Cd di lingkungannya, berevolusi baik
dalam satu atau lebih metabolisme. Mekanisme untuk bertahan melawan toksisitas. Operon yang
paling baik dijelaskan sejauh ini adalah cad , yang, seperti disebutkan sebelumnya, terkait dengan
protein dinding bakteri yang bergantung pada ATP Tipe P, diikuti oleh gen met , terkait dengan
produksi protein MET yang ditemukan dalam sitosol bakteri.
Bioakumulasi
Dalam mekanisme ini, sistem transportasi membran yang terkait dengan mangan
sangat penting, seperti yang telah dijelaskan sebelumnya (Smiejan dkk. 2003). Model-model
bioakumulasi kadmium (Cd), seperti model aktivitas ion bebas dan model ligan biotik,
menyatakan bahwa internalisasi oleh organisme adalah proses orde pertama yang membatasi
laju, dan toksisitasnya berkorelasi dengan aliran masuk Cd oleh dinding sel bakteri (Smiejan
dkk. 2003). Laju transportasi melintasi membran (arus masuk) diasumsikan berbanding lurus
dengan konsentrasi ion logam bebas dalam larutan atau konsentrasi Cd yang terikat pada
transporter permukaan. Penelitian terbaru mengungkapkan bahwa Burkholderia sp. tanah
CdR15, sebuah bakteri liar yang awalnya tumbuh di tanah yang tidak terkontaminasi, secara
artifisial beradaptasi dengan konsentrasi Cd yang meningkat hingga 274 ± 98 mg/l. Strain ini
menonjol karena mekanisme adaptasinya dalam bioakumulasi (Lee 2020).
 Gambar 2. Mekanisme Bakteri Tahan Logam Berat Pada Lahan Pertanian

Proses Isolasi Bakteri Tahan Logam dari Tanah Tercemar

Koleksi Sampel Sedimen
Koleksi Sampel Sampel sedimen dikumpulkan dari tiga lokasi yang terkontaminasi logam
berat di hulu (UR), tengah aliran (MR), dan hilir (DR) dari AlRahawy drain, Giza
Governorate, Mesir. Selain itu, dua sampel tanah pertanian yang diirigasi dengan air limbah
dikumpulkan dari wilayah Al-Gable Al-Asfar (GS) dan desa Kafr-Ilwan (KI), Kaluy.

Analisis Logam Berat

Konsentrasi Cd2+, Cu2+, Pb2+, dan Zn2+ dalam sampel yang dikumpulkan ditentukan
menggunakan spektrofotometer serapan atom (Buck Model 210 VGP).

Isolasi Bakteri Toleran Kadmium

Isolasi bakteri toleran kadmium dilakukan pada medium Muller-Hinton broth (pH 7.3)
(HIMEDIA Co., Jerman) yang ditambahkan dengan 250 mg/l Cd2+ (2.04 g/l) sebagai CdCl2
(HIMEDIA Co., Jerman. Erlenmeyer flask berisi 150 ml media sebelumnya diinokulasi
dengan 10 g dari setiap sampel sedimen atau tanah dan diinkubasi pada suhu 30 °C ±2 selama
72 jam dengan pengocokan (150 rpm/min).
Kultur yang mengalami kekeruhan setelah 3 hari inkubasi diencerkan hingga 10^(-6)
menggunakan air suling steril, dan kemudian diinokulasi kembali dalam cawan Petri yang
berisi medium yang telah mengeras. Koloni yang muncul di dalam cawan dan berbeda dalam
bentuk, warna, dan tepi dipurnakan dan dipelihara dalam medium sebelumnya serta disimpan
pada suhu 5 °C untuk penelitian lebih lanjut (Moghannem et al., 2015).

Metode Isolasi Bakteri

Isolasi bakteri yang toleran terhadap kadmium dilakukan pada medium Muller-Hinton broth
(pH 7,3) yang ditambahkan dengan 250 mg/l Cd^2+ (2,04 g/l) sebagai CdCl2. Tabung Erlenmeyer
berukuran 150 ml yang berisi 90 ml media sebelumnya diinokulasi dengan 10 g dari masing-masing
sedimen atau sampel tanah dan diinkubasi pada suhu 30 °C ± 2 selama 72 jam dengan pengocokan
(150 rpm/min).
Kultur yang diperkaya yang menunjukkan kekeruhan setelah 3 hari inkubasi diencerkan hingga
10^6 menggunakan air destilasi steril, lalu diinokulasi kembali dalam cawan Petri yang berisi medium
yang telah mengeras. Koloni yang muncul pada cawan dan berbeda dalam bentuk, warna, dan tepi
dipurifikasi dan dipelihara dalam medium sebelumnya serta disimpan pada suhu 5 °C untuk penelitian
lebih lanjut.

Konsentrasi Inhibitor Minimum (MIC) dan Konsentrasi Toleransi Maksimum (MTC)

terhadap kadmium
Konsentrasi hambat minimum (MIC) dan konsentrasi toleransi maksimum (MTC) untuk
kadmium MIC dan MTC kadmium pada enam puluh sembilan isolat bakteri. Medium agar Muller-
Hinton yang diperbaiki dengan berbagai konsentrasi Cd 2+ yaitu, 500, 1000, 1500, dan 2000 mg/l
digunakan. Setiap isolat di streak secara individual pada cawan Petri yang berisi medium tersebut dan
kemudian diinkubasi pada suhu 30 °C ± 2 selama 72 jam.
MIC adalah konsentrasi terendah yang sepenuhnya menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang
terlihat, sedangkan konsentrasi tertinggi di mana isolat bakteri dapat tumbuh dianggap sebagai MTC.

Ketahanan galur-galur yang efektif terhadap Zn2+, Cu2+, dan Pb2+

Strain yang paling toleran terhadap kadmium dibiakkan pada medium agar Muller-Hinton yang
mengandung berbagai konsentrasi tiga logam berat. Selain kadmium, yaitu: seng pada 2000, 3000,
4000 mg/l sebagai ZnSO4; timbal pada 1000, 2000, 3000 mg/l sebagai Pb(CH3COO)2, tembaga pada
1000, 1500, 2000 mg/l sebagai CuSO4, dan kadmium pada 1000, 1500, 2000 mg/l sebagai CdCl2;
untuk menentukan strain yang paling toleran terhadap logam-logam tersebut yang disebutkan di atas.

Penemuan dan identifikasi isolat bakteri dengan toleransi kadmium tertinggi

Isolat bakteri yang paling toleran terhadap kadmium tertinggi dipilih untuk diidentifikasi.
Karakteristik morfologis (bentuk, pembentukan spora, dan pewarnaan Gram) serta karakteristik
biokimia (enzim oksidase, katalase, dan amilase, uji indol, uji metil merah, uji Voges Proskauer, dan
fermentasi gula) sesuai dengan kunci manual sistematis bakteriologi Bergey. Isolat bakteri yang
paling toleran terhadap kadmium tertinggi dipilih untuk diidentifikasi. Karakteristik morfologis
(bentuk, pembentukan spora, dan pewarnaan Gram) serta karakteristik biokimia (enzim oksidase,
katalase, dan amilase, uji indol, uji metil merah, uji Voges Proskauer, dan fermentasi gula) sesuai
dengan kunci manual sistematis bakteriologi Bergey. Ekstraksi total DNA dilakukan dengan metode
CTAB. Bakteri diidentifikasi melalui sekuens parsial gen 16S rRNA mengikuti prosedur yang telah
dilaporkan sebelumnya.
Produk sepanjang 1466 bp diamplifikasi menggunakan gen 16S rDNA dengan primer sebagai
berikut:
Primer forward : 50-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30
Primer reverse : 50-CGGYTACCTTGTTACGACTT-30
Primer maju : 50-AAACTYAAAKGAATTGACGG-30
Primer mundur : 50-ACGGGCGGTGTGTRC-30
Sampel diidentifikasi melalui analisis BLAST dari sekuens parsial dan disimpan dalam NCBI
GenBank. Sekuens disimpan di GenBank dengan nomor akses. Produk PCR (1.5 kb) dari gen 16S
rRNA digunakan untuk sekuensing DNA. Sekuens bakteri terkait dengan kemiripan terbesar dengan
sekuens 16S rRNA dari isolat bakteri terpilih diekstraksi dari basis data sekuens nukleotida dan
diselaraskan menggunakan CLUSTAL W (1.81) Multiple Sequence. Pohon filogenetik dibangun
menggunakan metode jarak neighbor-joining dengan perangkat lunak MEGA4. dan keandalan
konsensus bootstrap disimpulkan dari 1000 replikasi. Sekuens gen 16S rRNA dari isolat bakteri yang
dilaporkan dalam makalah ini disimpan dalam basis data sekuens nukleotida DDBJ/EMBL/GenBank
dengan nomor akses: MR99: Bacillus MG257494.1 dan MR108: Alcaligenes MG966440.1.
Pengaruh pH terhadap pertumbuhan dan potensi biosorpsi logam berat pada isolat yang paling
toleran terhadap kadmium
Isolat yang paling toleran terhadap kadmium dibiakkan dalam medium Muller-Hinton yang
diperkaya dengan empat logam berat, yaitu Zn2+, Cd2+, Pb2+, dan Cu2+ pada konsentrasi 1000 mg/l,
dan disesuaikan dengan berbagai nilai pH (5,0, 6,0, 7,0, 8,0, dan 9,0), yang dipertahankan selama
eksperimen dengan penambahan 0,1N HCl atau 1N NaOH sesuai kebutuhan.
Tabung-tabung tersebut diinkubasi pada suhu 30 °C ± 2 selama 72 jam dengan pengocokan (150
rpm/min.). Ketebalan optik pertumbuhan bakteri diukur pada panjang gelombang 600 nm (OD600)
menggunakan spektrofotometer (Sco. Tech, SP UV-19) (Stevenson et al., 2016). Selanjutnya, kultur
bakteri dipusatkan pada 5000 g selama 20 menit. Kemudian, parameter-parameter berikut diestimasi:
Berat kering bakteri ditentukan dengan mengumpulkan sel dengan sentrifugasi pada 5000 g selama 20
menit. Sel yang dikumpulkan dicuci dua kali dengan air destilasi dan dikeringkan dalam oven pada
suhu 80 °C selama 48 jam. Konsentrasi ion residual logam terdeteksi dalam supernatan menggunakan
spektrofotometer serapan atom (Model Buck 210 VGP). Berat kering bakteri ditentukan dengan
mengumpulkan sel dengan sentrifugasi pada 5000 g selama 20 menit. Sel yang dikumpulkan dicuci
dua kali dengan air destilasi dan dikeringkan dalam oven pada suhu 80 °C selama 48 jam. Konsentrasi
ion residual logam terdeteksi dalam supernatan menggunakan spektrofotometer serapan atom.
(Rahayu & Mangkoedihardjo, 2022)

Uji Antioksidan Enzimatik

Tiga enzim oksidatif (katalase, peroksidase, dan polifenol oksidase) diukur secara spektrofotometri
sebagai berikut:

Aktivitas katalase (CAT) (EC 1.11.1.6).

Aktivitas CAT diukur dengan memantau penurunan absorbansi pada 240 nm yang dihasilkan dari
dekomposisi H2O2. Campuran reaksi lengkap mencakup 1500 μL dari 100 mM potassium phosphate
buffer (pH 7.0), 500 μL H2O2 75 mM, 200 μL ekstrak enzim, dan 800 μL air suling ganda (DDW).
Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai absorbansi per menit. (Chellaiah, 2018)

Aktivitas peroksidase (PO) (EC 1.11.1.9).

PO diukur menggunakan 4-metil katekol sebagai substrat. Peningkatan absorpsi yang disebabkan oleh
oksidasi 4-metil katekol oleh H2O2 diukur pada 420 nm. Campuran reaksi mengandung 100 μL
dari 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0), 500 μL 4-metil katekol 5 mM, 500 μL
H2O2 5 mM, dan 500 μL ekstrak kasar dalam total volume 4000 μL dengan DDW pada suhu
ruangan. Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai perubahan 0,001 absorbansi per
menit, di bawah kondisi pengujian (Onsa et al., 2004).

Kegiatan polifenol oksidase (PPO) (EC 1.10.3.1)

Diukur dengan cara memantau peningkatan absorbansi pada panjang gelombang 420 nm
untuk 4-metil katekol. Pengujian dilakukan menggunakan 100 μL larutan buffer natrium
fosfat 100 mM (pH 7,0), 500 μL 4-metil katekol 5 mM, dan 500 μL ekstrak kasar pada suhu
kamar. Total volume campuran reaksi adalah 3000 μL dengan aqua destilata. Satu unit (U)
aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menyebabkan perubahan sebesar
0,001 dalam absorbansi per menit (Oktay et al., 1995) (lihat Tabel 1).
Tabel 1. Konsentrasi Logam Berat Dalam Sampel Sedimen dan Tanah
Logam berat Satuan Sampel
UR MR DR GS KI
Cd mg/L 0.431 0.035 0.001 4.44 3.38
Cu 0.411 0.0170 0.013 5.85 0.70
Zn 0.224 0.195 0.033 4.63 3.20
Pb 0.070 0.005 0.004 0.25 0.15
UR: Upstream Al-Rahawy drain sediment MR: Midstream Al-Rahawy drain sediment.
DR: Downstream Al-Rahawy drain sediment GS: Al-Gable, Al-Asfar. KI: Kafr Ilwan soil.
Isolat-isolat ini diidentifikasi sebagai Bacillus cereus MG257494.1 (MR99) dan Alcaligenes
faecalis MG966440.1 (MR108) berdasarkan karakteristik morfologi, budaya, biokimia, dan urutan
parsial 16S rDNA.

Aplikasi Bakteri Tahan Terhadap Logam Berat Pada Tanaman

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh (Shahzad et al., 2021) bahwa bakteri dari genus
Bacillus mampu yang mengubah sifat-sifat tanah dan secara negatif memengaruhi pertumbuhan
tanaman. Menggunakan mikroorganisme dan tanaman dapat menghilangkan polutan-polutan ini dari
tanah. Untuk mengevaluasi efek yang diinduksi oleh Bacillus pumilus pada tanaman jagung dalam
tanah terkontaminasi kadmium (Cd) digunakan tiga konsentrasi Cd yang berbeda (yaitu 0,25, 0,50,
dan 0,75 mg kg−1) diaplikasikan dalam tanah di bawah tanah di mana tanaman jagung ditanam.
Persentase perkecambahan, panjang tunas, panjang daun, jumlah daun, panjang akar, berat segar, dan
serapan nutrisi oleh tanaman jagung ditentukan. Eksperimen tersebut dengan menggunakan desain
acak lengkap (CRD) dengan tiga ulangan. (Yustikarini et al., 2016)
Hasilnya menunjukkan bahwa Persentase perkecambahan, panjang tunas, panjang daun,
panjang akar, jumlah daun, dan berat segar tanaman berkurang sebesar 37, 39, 39, 32, dan 59%
masing-masing pada konsentrasi CdSO4 sebesar 0,75 mg kg−1. Ketika benih jagung diinokulasi
dengan Bacillus pumilus, persentase perkecambahan, panjang tunas, panjang daun, jumlah daun, dan
berat segar tanaman signifikan meningkat pada berbagai konsentrasi CdSO4. Protein tanaman
meningkat secara signifikan sebesar 60% pada T6 (0,25 mg kg−1 CdSO4 + benih diinokulasi) dan
Peroxidase dismutase (POD) juga signifikan lebih tinggi sebesar 346% pada T6 (0,25 mg kg−1
CdSO4 + benih diinokulasi). Uperoxide dismutase (SOD) lebih tinggi secara signifikan pada T5 (0,75
mg kg−1 CdSO4 + benih tanpa inokulasi) dan 769% lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol.
Kandungan Cd dalam akar dan tunas jagung yang diinokulasi Bacillus pumilus menurun. Penelitian
ini menunjukkan bahwa inokulasi tanaman jagung dengan Bacillus pumilus dapat membantu tanaman
jagung bertahan dari stres Cd tetapi konsentrasi Cd yang lebih tinggi dapat merusak tanaman. Bacillus
pumilus memiliki potensi yang baik untuk meremediasi Cd dari tanah dan juga berpotensi mengurangi
ketersediaan fito dan toksisitas Cd. (Fahruddin et al., 2020)
Peranan Cadmium yang Dibolehkan untuk Tanaman

Secara biologis, Cd tidak penting bagi tanaman; namun, unsur ini mudah diperoleh oleh
tanaman karena unsur hara mikro dari rizosfer tanah (antarmuka tanah-akar) . Kehadiran Cd telah
diamati di tanah berkisar antara 0,07 hingga 1,1 mg kg –1 tanah ( Organisasi Kesehatan Dunia
[WHO], 2007). Tingkat ambang batasnya adalah sekitar 100 mg kg –1 pada tanah pertanian.
Kadmium (Cd) terutama terdapat dalam bentuk ion Cd atau membentuk kompleks, yaitu organik dan
anorganik dalam larutan tanah.
Bentuk Cd anionik dan kationik ada di tanah. Bentuk anioniknya adalah CdCl 3 – ,
Cd(OH) 3 – , Cd(OH) 4 2– , dan Cd(HS) 4 2– , sedangkan bentuk kationiknya adalah CdCl + ,
CdOH + , CdHS + , dan CdHCO 3+ . Telah ditemukan bahwa 99% Cd terdapat dalam larutan tanah
dalam bentuk ionik bebas. Beberapa reaksi kimia yaitu pelarutan/presipitasi, desorpsi/adsorpsi, dan
pembentukan ligan Cd mempengaruhi partisi Cd dalam tanah. Proses-proses ini terutama dipengaruhi
oleh ligan (organik dan anorganik), kondisi redoks , pH tanah, kandungan logam, dan suhu.
 Berikut tabel mengenai pemulihan tanah oleh Cd pada tanaman(Zulfiqar et al., 2022) :
Tabel 2. Pemulihan Tanah yang Tercemar Cd dengan Bantuan Regulator Pertumbuhan Tanaman

Penyerapan Cd pada Tanaman

Akumulasi Cd diatur oleh beberapa proses, termasuk sekuestrasi vakuolar, pemuatan xilem,
sitoplasma melintasi membran, transpor yang digerakkan oleh energi, adsorpsi dinding sel, dan
masuknya apoplastik Cd ke dalam jaringan akar. Salah satu prasyarat yang diusulkan untuk
bioremediasi adalah logam berat diangkut dan diasingkan di bagian udara. Transportasi jarak jauh
berkontribusi besar dalam mempertahankan konsentrasi Cd yang rendah di akar, dan berperan dalam
mekanisme perlindungan luapan. Proses ini dimediasi oleh beberapa keluarga yang terkait dengan
transpor logam dan metaloid, seperti P1B-ATPase [(enzim yang mengkatalisis hidrolisis ikatan fosfat
(P) dalam adenosin trifosfat (ATP) untuk membentuk adenosin difosfat (ADP)]. Ketika berada dalam
bentuk ionik, transpor Cd dari akar ke jaringan lain dimediasi oleh tiga sistem transpor utama [,
seperti transporter kalsium (Ca) afinitas rendah 1 (TaLCT1) ZIP [(Zn transporter protein (ZRT)- dan
protein mirip transporter yang diatur Fe (IRT)] transporter, TcZNT1/TcZIP4 dan protein mirip
transporter yang diatur Zn/Fe (AtRT), dan protein makrofag terkait resistensi alami (NRAMP) , yang
mencakup OsNARMP1, 5, dan 6. (Deep et al., 2020)
Selain itu, sistem transportasi serapan Fe juga terlibat dalam serapan Cd.Takahashi dkk dan
Milner dkk juga mengamati bahwa OsNramp1 meningkatkan akumulasi Cd pada pucuk Selanjutnya,
pengangkut Fe berbentuk garis kuning 1 (YS1/YSL1) mengangkut Fe dalam bentuk pengkhelatnya.
Mengidentifikasi transporter fitosiderofor Fe (HvYS1) dalam jelai, yang menunjukkan spesifisitas
yang ketat untuk logam dan ligan. Selain itu, Sasaki dkk. dan Ishimaru dkk. menyimpulkan
bahwa OsNRAMP yang memainkan peran penting dalam transpor Mn 2+ dan juga menunjukkan jalur
utama transpor Cd dalam beras. Dari semua transporter yang dilaporkan di atas, NRAMP mungkin
terlibat dalam beberapa fungsi, seperti detoksifikasi logam, penyerapan, transportasi intraseluler, dan
translokasi, di banyak tanaman.
Selain itu, penghambat Ca 2+ juga menghambat transpor Cd di salsa Suada , menunjukkan
kontribusinya terhadap transpor Cd . Secara kolektif, Cd diangkut melalui transporter Zn, Fe, dan Ca
pada tanaman yang mencakup keluarga LCT1 dan ZIP (transporter Zn/Fe), terutama ZIP-IRT , dan
saluran Nramp protein makrofag . Karena itu, menunjukkan ringkasan transporter Cd, fungsi, dan
lokasinya pada tumbuhan. (Deep et al., 2020)

Gambar 2. Penggambaran transporter utama yang terdapat pada akar, pucuk, dan daun untuk
penyerapan dan penyimpanan Cd (proses ini terkait dengan fitoremediasi).

Gambar 3. Representasi pengangkut floem dan xilem. Pengangkut kalsium 1 (LCT1) berafinitas
rendah dan ATPase pengangkut logam (HMA2) yang berfungsi dalam translokasi Cd
ke dalam floem. Pengangkut utama pemuatan Cd ke xilem adalah HMA2 dan HMA4.

AtPDR8 adalah transporter ABC yang terlibat dalam homeostasis logam dan toleransi Cd, dan
terutama terlokalisasi pada epidermis dan membran rambut akar. Setelah diambil oleh akar, Cd
kemudian diangkut ke xilem dan bagian pucuk lainnya. Perbedaan transpor transpor Cd pada xilem
dan pucuk disebabkan oleh variasi genetik. Protein toleransi logam (MTPs) dan fasilitator difusi
kation (CDFs) dapat terlibat dalam keseluruhan proses ini. Selain itu, transporter logam ATPase
(HMA) tipe P 18 juga mengambil bagian dalam transpor Cd melintasi membran, yang diperlukan
untuk homeostasis logam. Saat mengerjakan mutan Arabidopsis hma2/hma4 , diamati bahwa OsHMA
(transporter pericycle) juga mengangkut Cd. OsHMA2 telah digambarkan sebagai transporter utama
Cd vaskular.
Mutan knockout OsHMA2 menghasilkan pengurangan Cd pada pucuk dan biji-bijian, yang telah
dikonfirmasi dalam beberapa penelitian. Selanjutnya, pengangkut kation berafinitas rendah OsLCT1
memuat logam Cd ke dalam getah floem. Glutathione (GSH) dan turunannya, fitokelatin (PCs),
menunjukkan ikatan yang kuat dengan As, Hg, dan Cd. Kompleks Cd dengan PC juga terlihat pada
getah floem lobak. Menurut Mendoza-Cozatl dkk. dan Kato dkk. , GSH-Cd (kompleks GSH-Cd
tereduksi) berkontribusi terhadap transportasi jarak jauh Cd di floem. Namun, PC muncul dalam
getah floem setelah penerapan Cd, dan mereka menunjukkan afinitas yang kuat terhadap
Zn. Mendoza-Cozatl dkk mengamati konjugat tiol dalam floem yang diangkut dalam wadah berbeda
setelah penyerapan dari protein C subfamili kaset pengikat ATP (ABCC1 dan ABCC2). Konjugat
PCs-Cd terlibat dalam penyerapan Cd vakuola akar, sedangkan kompleks GSH-Cd hanya terdeteksi
pada sumber benih. Selain itu, transporter LCT1 juga memediasi distribusi Cd berbasis floem.

Mekanisme Cd Melintasi Membran Plasma Akar

Pada membran plasma akar, H 2 CO 3 berdisosiasi menjadi HCO 3 dan H + melalui respirasi
akar, sehingga H + yang diserap dengan cepat ditukar dengan Cd + , kemudian Cd diserap pada
permukaan sel epidermis akar, dan ditukar menjadi epidermis akar. Lapisan sel terjadi melalui jalur
apoplastik. Rambut akar menyediakan area permukaan yang luas untuk penyerapan Cd dari tanah
melalui difusi. Akar tanaman juga mengeluarkan senyawa organik tertentu, seperti khelat, yang
berkompleks dengan ion Cd untuk membentuk ligan, sehingga memungkinkan masuknya senyawa
tersebut ke dalam epidermis akar. Selain itu, Cd juga diambil oleh saluran kation non-selektif,
transporter yang diatur Zn/Fe , dan MTPI. Selain itu, transpor protein tertentu, seperti NRAMPs,
ATPase tipe-P (AtHMA4 dan AtHMA9) , transporter ABC (OsPDR9 dan AtPDR8, dan keluarga
CAX (AtCAX2 dan AtCAX5) , berperan penting dalam transpor Cd melintasi membran plasma akar.
Secara umum, setelah serapan Cd oleh akar tanaman, sebagian besar Cd terfraksinasi ke dalam akar,
dan hanya sebagian kecil yang terfraksinasi ke areal bagian atas.

Proses Bakteri Mengikat Logam Berat CD

Gambar 4. Ilustrasi skema fitoremediasi Cd oleh mikroba. Dalam proses fitoekstraksi, produksi
siderofor dan asam organik oleh mikroba tanah mempengaruhi kapasitas fitoekstraksi
akumulator secara positif. Pembentukan zat polimer oleh mikroba tanah menjaga logam
 Cd dalam bentuk statis, sehingga memfasilitasi proses biosorpsi dan bioakumulasi.

Transformasi logam berat dari bentuk tidak tersedia menjadi tersedia merupakan faktor penting
yang menentukan nasib fitoremediasi. Banyak mikroba telah dilaporkan memulai fitoremediasi Cd
dengan memfraksinasinya di dalam tanah dan memungkinkan tanaman untuk menyerapnya. Kelas
mikroba yang berbeda (bakteri dan jamur) memainkan peran penting dalam fitoremediasi Cd dengan
mengaktifkan berbagai mekanisme dan menghasilkan senyawa yang berbeda, seperti siderofor, asam
organik, zat polimer, bioakumulasi, dan biosorpsi. Siderofor adalah khelator besi dengan berat
molekul rendah dan umumnya membantu dalam fitoremediasi Cd. Asam organik, yang meningkatkan
bioavailabilitas Cd, diproduksi oleh mikroba tanah. Selain itu, asam organik mempengaruhi tingkat
pH tanah dengan menjaganya tetap rendah, yang memfasilitasi proses fitoekstraksi dan karenanya
penting untuk fitoremediasi Cd . Sekresi senyawa polimer ekstraseluler (eksopolisakarida,
mukopolisakarida, dan glomalin) mengurangi mobilitas dan bioavailabilitas Cd, yang menjadikannya
elemen penting dalam proses fitoremediasi Cd. Biosorpsi dan bioakumulasi mengacu pada proses
penyerapan dan akumulasi logam oleh tanaman dengan bantuan mikroba tanah. Biosorpsi dan
bioakumulasi berkontribusi besar terhadap fitoremediasi Cd dengan melakukan fitostabilisasi Cd di
zona

Kesimpulan
Cadmium adalah Logam berat paling beracun, 10 besar daftar hitam Organisasi Kesehatan
Dunia (WHO). Logam berat beracun secara alami dan memasuki tanah dan air melalui beberapa cara,
serta memiliki potensi tinggi untuk mengendap di jaringan hidup (mikroorganisme, tanaman, dan
hewan) dan Penyebab berbagai penyakit pada hewan dan manusia. Tingkat ambang batas cadmium
adalah sekitar 100 mg kg –1 pada tanah pertanian. Dalam penelitian ditemukan strain bakteri yang
tahan terhadap logam berat yaitu MR99: Bacillus MG257494.1 dan MR108: Alcaligenes
MG966440.1. Dalam penelitian menunjukkan bahwa inokulasi tanaman jagung dengan Bacillus
pumilus dapat membantu tanaman jagung bertahan dari stres Cd tetapi konsentrasi Cd yang lebih
tinggi dapat merusak tanaman. Bacillus pumilus memiliki potensi yang baik untuk meremediasi Cd
dari tanah dan juga berpotensi mengurangi ketersediaan fito dan toksisitas Cd.

Mekanisme masukknya Cd Pada akar melalui membran plasma akar, H 2 CO 3 berdisosiasi

menjadi HCO 3 dan H + melalui respirasi akar, sehingga H + yang diserap dengan cepat ditukar dengan
Cd + , kemudian Cd diserap pada permukaan sel epidermis akar, dan ditukar menjadi epidermis akar.
Lapisan sel terjadi melalui jalur apoplastik. Sekresi senyawa polimer ekstraseluler (eksopolisakarida,
mukopolisakarida, dan glomalin) mengurangi mobilitas dan bioavailabilitas Cd, yang menjadikannya
elemen penting dalam proses fitoremediasi Cd. Biosorpsi dan bioakumulasi mengacu pada proses
penyerapan dan akumulasi logam oleh tanaman dengan bantuan mikroba tanah. Biosorpsi dan
bioakumulasi berkontribusi besar terhadap fitoremediasi Cd dengan melakukan fitostabilisasi Cd di
zona akar.

DAFTAR PUSTAKA

Bravo, D., & Braissant, O. (2022). Cadmium-tolerant bacteria: current trends and
applications in agriculture. Letters in Applied Microbiology, 74(3), 311–333.
https://doi.org/10.1111/lam.13594
Chellaiah, E. R. (2018). Cadmium (heavy metals) bioremediation by Pseudomonas
aeruginosa: a minireview. Applied Water Science, 8(6), 1–10.
https://doi.org/10.1007/s13201-018-0796-5
Deep, A., Murthy, S., & Bhat, J. (2020). Geneticus Investigatio: a technology-enhanced
learning environment for scaffolding complex learning in genetics. Research and
Practice in Technology Enhanced Learning, 15(1). https://doi.org/10.1186/s41039-020-
00145-5
El-Meihy, R. M., Abou-Aly, H. E., Tewfike, T. A., El-Alkshar, E. A., & Youssef, A. M.
(2019). Characterization and identification of cadmium-tolerant bacteria isolated from
contaminated regions in Egypt. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 21(July),
101299. https://doi.org/10.1016/j.bcab.2019.101299
Fahruddin, F., Santosa, S., & . S. (2020). Toleransi logam berat timbal (Pb) pada bakteri
indigenous dari air laut Pelabuhan Paotere, Makassar (Heavy metal lead [Pb] tolerance
of indigenous bacteria from Seawater in Paotere Port, Makassar). Aquatic Science &
Management, 8(1), 8. https://doi.org/10.35800/jasm.8.1.2020.29572
Nath, S., Deb, B., & Sharma, I. (2018). Isolation of toxic metal-tolerant bacteria from soil and
examination of their bioaugmentation potentiality by pot studies in cadmium- and lead-
contaminated soil. International Microbiology, 21(1–2), 35–45.
https://doi.org/10.1007/s10123-018-0003-4
Rahayu, D. R., & Mangkoedihardjo, S. (2022). Kajian Bioaugmentasi untuk Menurunkan
Konsentrasi Logam Berat di Wilayah Perairan Menggunakan Bakteri (Studi Kasus:
Pencemaran Merkuri di Sungai Krueng Sabee, Aceh Jaya). Jurnal Teknik ITS, 11(1).
https://doi.org/10.12962/j23373539.v11i1.82791
Shahzad, A., Qin, M., Elahie, M., Naeem, M., Bashir, T., Yasmin, H., Younas, M., Areeb, A.,
Irfan, M., Billah, M., Shakoor, A., & Zulfiqar, S. (2021). Bacillus pumilus induced
tolerance of Maize (Zea mays L.) against Cadmium (Cd) stress. Scientific Reports,
11(1), 1–11. https://doi.org/10.1038/s41598-021-96786-7
Suharjo, M. H., Ernawati, R., & Nurkhamin. (2022). Cekaman Logam Berat Cromium
Terhadap Tanaman ( Chromium Heavy Metal Stress on Plants ). Jurnal Teknologi
Mineral FT UNMUL, 10(1), 8–16.
Uqab, B., Nazir, R., Ganai, B. A., & Rahi, P. (2022). In vitro Sequestration of Molecular and
Mass Spectra Characterized Metallophilic Cadmium Tolerant Bacteria for Sustainable
Agriculture. Frontiers in Microbiology, 13(March).
https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.845853
Yustikarini, N. M., Yowani, S. C., & Wirajana, I. N. (2016). Isolasi DNA metagenomik dari
sputum pasien tuberkulosis dan amplifikasi dengan primer promoter inhA. Cakra Kimia
(Indonesian E-Journal of Applied Chemistry), 3(2), 56–62.
Zulfiqar, U., Jiang, W., Xiukang, W., Hussain, S., Ahmad, M., Maqsood, M. F., Ali, N.,
Ishfaq, M., Kaleem, M., Haider, F. U., Farooq, N., & Naveed, M. (2022). Cadmium
Phytotoxicity , Tolerance , and Advanced Remediation Approaches in Agricultural
Soils ; A Comprehensive Review. Frontiers in Plant Science, 13(March), 1–33.
https://doi.org/10.3389/fpls.2022.773815