ELEKTROFORESIS PROTEIN

Pemisahan protein merupakan tahap yang dilakukan untuk mempelajari

sifat dan fungsi protein. Protein dapat dipisahkan dari protein jenis lain atau dari
molekul lain berdasarkan ukuran, kelarutan, muatan dan afinitas ikatan. Salah satu
teknis yang digunakan untuk melihat profil protein dan menentukan bobot
molekulnya dengan elektroforesis
Elektroforesis adalah suatu teknik yang mengukur laju perpindahan atau
pergerakan partikel-partikel bermuatan dalam suatu medan listrik. Di dalam
elektroforesis digunakan sumber arus listrik searah (DC), ruang untuk
elektroforesis (cetakan wadah gel), larutan buffer (buffer ionik dan loading
buffer), matriks elektroforesis, marker dan gel.

Prinsip kerja dari elektroforesis berdasarkan pergerakan partikel-partikel

bermuatan negatif (anion) yaitu DNA, yang bergerak menuju kutub positif
(anoda), sedangkan partikel-partikel bermuatan positif (kation) akan bergerak
menuju kutub negatif (katoda). Elektroforesis digunakan dengan tujuan untuk
mengetahui ukuran, bentuk dan hasil amplifikasi dari DNA suatu protein.
Teknik elektroforesis mempergunakan medium yang terbuat dari gel.
Perpindahan partikel pada medium gel tersebut dipengaruhi oleh faktor-faktor
seperti ukuran partikel, komposisi dan konsentrasi gel, densitas muatan, kuat
medan listrik dan sebagainya. Semakin kecil partikel tesebut, maka pergerakan
atau migrasinya akan semakin cepat, karena matriks gel mengandung jaringan
kompleks berupa pori-pori sehingga partikel-partikel tersebut dapat bergerak
melalui matriks tersebut.
 Hasil elektroforesis yang terlihat adalah terbentuknya band yang
merupakan fragmen DNA hasil amplifikasi dan menunjukkan potongan-potongan
jumlah pasangan basanya.

Cara membaca hasil elektroforesis adalah dengan membandingkan DNA

sampel dengan DNA standards. Seperti pada gambar di samping. Pada well-1
diketahui ada 8 band dengan panjang DNA yg sudah diketahui. Jika ingin
mengetahui panjang DNA yang berada di well-2, kita harus memperkirakannya.
Misalkan pada well-1 band-1 panjangnya sekitar 2 dan di well-1 band-2
panjangnya sekitar 6,5. Lalu lihat pada well-2 band-1 panjang DNAnya berada
diantara 2 dan 6,5 maka dari itu diperkirakan panjang DNAnya sepanjang fi.
Elektroforesis tidak bisa memberikan Panjang DNA yang pasti tetapi hanya bisa
memperkirakan dengan melihat DNA standardsnya.

Kelebihan dan Kekurangan

Kelebihan :

- Metode pemisahan dengan elektroforesis cukup dengan peralatan yang

sederhana
- Digunakan untuk memisahkan suatu sampel molekul besar seperti protein,
asam nukleat, asam amino, dan karbohidrat
- Proses pengerjaan mudah dan sederhana

Kekurangan:

- Memiliki keterbatasan dalam hal efisiensi yang rendah

- waktu pemisahan yang relative lama
- hanya berlaku untuk senyawa yang berwarna saja.