MAKALAH

MIKROBIOLOGI FARMASI

Dosen Pengampu: Melia Sari, S.Si, M.Si

Oleh
Nadia Irhas : (2201011194)

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

FAKULTAS FARMASI DAN KESEHATAN
INSTITUT KESEHATAN HELVETIA
MEDAN
 KATA PENGANTAR

Dalam era yang dipenuhi oleh kemajuan ilmiah dan teknologi,

mikrobiologi telah menjadi salah satu bidang yang sangat signifikan dalam
pemahaman kita terhadap dunia mikroskopis yang tersembunyi di sekitar kita.
Mikroorganisme, baik yang bersifat patogen maupun yang bermanfaat, memiliki
peran penting dalam berbagai aspek kehidupan, mulai dari kesehatan manusia,
ekologi, pertanian, hingga industri.

Dalam makalah ini, kami juga akan membahas topik-topik menarik dalam
mikrobiologi seperti resistensi antibiotik, bioteknologi mikroba, dan peran
mikroorganisme dalam siklus biogeokimia. Selain itu, kita akan membahas
perkembangan terbaru dalam bidang ini, termasuk teknologi penelitian
mikrobiologi modern yang telah mengubah cara kita memahami dan
memanfaatkan mikroorganisme.

Kami berharap makalah ini dapat memberikan pemahaman yang lebih

dalam tentang pentingnya mikrobiologi dalam kehidupan kita sehari-hari dan
memberikan wawasan yang bermanfaat kepada pembaca. Terima kasih kepada
semua pihak yang telah memberikan dukungan dan inspirasi dalam penulisan
makalah ini.

Semoga makalah ini bermanfaat dan dapat menjadi sumber pengetahuan

yang berguna bagi semua pembaca.

Terima kasih,

Penulis

ii
 DAFTAR ISI
BAB I................................................................................................................................1
PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI.................................................................1
1. Tujuan....................................................................................................................1
2. Teori Pendahuluan.................................................................................................1
1.1. Pengenalan Alat................................................................................................1
1.2. Pengenalan Bahan Media................................................................................3
1.3. Sterilisasi...........................................................................................................4
3. Alat dan Bahan.......................................................................................................4
4. Prosedur Kerja........................................................................................................5
5. Hasil Percobaan......................................................................................................6
BAB II...............................................................................................................................7
PENANAMAN BAKTERI..............................................................................................7
1. Tujuan....................................................................................................................7
2. Teori.......................................................................................................................7
3. Alat dan Bahan.......................................................................................................7
4. Prosedur Kerja........................................................................................................7
5. Hasil Percobaan......................................................................................................8
BAB III.............................................................................................................................9
INOKULASI.....................................................................................................................9
1. Tujuan....................................................................................................................9
2. Teori.......................................................................................................................9
3. Prosedur Kerja......................................................................................................10
4. Hasil dan Pembahasan..........................................................................................10
BAB IV............................................................................................................................12
PENGECATAN GRAM................................................................................................12
1. Tujuan..................................................................................................................12
2. Teori.....................................................................................................................12
3. Alat dan Bahan.....................................................................................................14
4. Prosedur Kerja......................................................................................................14
5. Hasil dan Pengamatan..........................................................................................14
BAB V.............................................................................................................................16
PENETAPAN ANGKA LEMPENG TOTAL..............................................................16

iii
 1. Tujuan..................................................................................................................16
2. Teori.....................................................................................................................16
3. Alat dan Bahan.....................................................................................................18
4. Prosedur Kerja......................................................................................................19
5. Hasil dan Pengamatan..........................................................................................19
BAB VI............................................................................................................................21
UJI SENSITIFITAS BAKTERI DENGAN MENGGUNAKAN ANTIBIOTI..........21
1. Tujuan..................................................................................................................21
2. Teori.....................................................................................................................21
3. Alat dan Bahan.....................................................................................................23
4. Prosedur Kerja......................................................................................................23
5. Hasil dan Pengamatan..........................................................................................24
Kesimpulan..................................................................................................................25

iv
 BAB I

PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI

1. Tujuan
 Memperkenalkan alat-alat yang digunakan untuk pemeriksaan
Mikrobiologi dan bermacam-macam media pertumbuhan bakteri

 Mengetahui cara-cara sterilisasi alat dan bahan yang dilakukan

dilaboratorium Mikrobiologi

2. Teori Pendahuluan
2.1. Pengenalan Alat
No Nama Alat Gambar Alat
1. Oven
Merupakan alat yang digunakan untuk
sterilisasi atau pembersihan dengan
menggunakan udara kering. Alat
sterilisasi ini dipakai untuk mensterilkan
alat-alat gelas seperti
Erlenmeyer,Petridish (cawan petri),
tabung reaksi dan gelas lainnya.
2. Inkubator
Untuk tempat pengeraman (inkubasi)
bakteri dan jamur.

3. Autoklaf
Alat sterilisasi yang digunakan untuk
mensterilkan media.

1
4. Jarum Ose
Digunakan untuk pengambilan dan
pengkulturan atau penanaman bakteri
pada media.

5. Cawan Petri
Tempat meletakkan media dan tempat
pertumbuhan bakteri.

6. Gelas Ukur
Alat untuk mengukur volume suatu
cairan.

7. Tabung Reaksi
Tempat media cair atau padat/tempat
membiakkan bakteri

8. Erlenmeyer
Wadah untuk meletakkan bahan-bahan
cair untuk membuat media.

9. Pipet
Alat untuk mengambil cairan/zat warna.

2
 10. Penjepit Tabung
Untuk menjepit objek glass pada waktu
fiksasi

11. Objek Glass dan Dek Glass

Objek Glass : Tempat pewarnaan
bakteri/tempat meletakkan preparat.
Dek Glass : Kaca penutup preparate
12. Mikroskop
Untuk melihat preparate

13. Lampu Spiritus

Untuk mensterilisasi Jarum Ose.

14. Rak Tabung

Untuk meletakkan tabung reaksi.

15. Bola Hisap

Untuk menghisap sejumlah sampel yang
diperlukan

2.2. Pengenalan Bahan Media

a. Media

Media berfungsi untuk menumbuhkan bakteri, isolasi,

memperbanyak jumlah, menguji sifat-sifat fisiologidan perhitungan

3
 jumlah bakteri, dimana dalam proses pembuatannya harus
disterilisasi dan menerapkan metode aseptis untuk menghindari
kontaminasi pada media.

b. Sifat Media

Penggunaan media bukan hanya untuk pertumbuhan dan

perkembangbiakkan mikroba, tetapi juga untuk tujuan-tujuan lain
seperti isolasi, seleksi dan diferensiasi biakan yang didapat.
Artinya penggunaan beberapa jenis zat tertentu yang mempunyai
pengaruh terhadap pertumbuhan dan perkembangbiakkan mikroba,
banyak juga dilakukan dan digunakan. Sehingga masing-masing
media mempunyai sifat (spesifikasi) tersendiri sesuai dengan
maksudnya.

2.3. Sterilisasi
Sterilisasi yaitu proses atau kegiatan menghancurkan atau
memusnahkan semua mikroorganisme termasuk spora, dari sebuah
benda atau lingkungan.

Macam-macam Sterilisasi
 Sterilisasi secara mekanik.
 Sterilisasi secara fisik dan pemanasan & penyinaran.
 Sterilisasi secara kimia.

3. Alat dan Bahan

Alat-alat Bahan
 Oven - Kertas Perkamen Kajang
 Autoklaf - Tali ( Benang Bola )
 Batang Pengaduk
 Beaker Glass
 Cawan Petri
 Erlenmeyer
 Gelas Ukur
 Jarum Ose
 Tabung Reaksi

4
  Pipet Tetes
 Pipet Ukur
 Pinset
 Hekter
 Gunting

4. Prosedur Kerja
a. Sterilisasi Panas Kering

 Dilakukan pengemasan pada alat-alat yang akan disterilkan

yaitu cawan petri, batang pengaduk, tabung reaksi, pipet tetes,
dibungkus menggunakan perkamen, sedangkan gelas ukur
beaker glass dan Erlenmeyer hanya bagian atasnya saja yang
dibungkus kertas perkamen.

 Dimasukkan kedalam oven

 Dihidupkan oven dan diatur suhunya 170 derajat celcius

 Dihiting selama 1 jam, pada saat suhu telah mencapai 170

derajat celcius

 Dimatikan oven dan ditunggu sampai oven dingin

 Dikeluarkan alat dari oven

b. Sterilisasi Uap

 Dilakukan untuk bahan-bahan yang tidak tahan pemanasan

yaitu, seperti media agar dan kapas dan bahan karet.

 Dimasukkan media dan bahan lainnya kedalam autoklaf

 Ditutup autoklaf, diatur suhunya menjadi 121 derajat celcius

 Dihitung selama 15 menit pada saat suhu telah mencapai 121

derajat celcius

 Dibuka dan ditunggu sampai uap panas keluar dan tunngu

tekanan dalam kompartemen turun hingga sama dengan

5
 tekanan udara dilingkungan (jarum pada preisure gauge
menunjukkan angka nol) kemudian klep-klep pengaman dibuka
dan dikeluarkan isi autoklaf dengan hati-hati.

5. Hasil Percobaan
 Hasil dan Pengamatan

No Nama Alat Metode Suhu dan Paraf

Sterilisasi Waktu Dosen
1. Cawan Petri Panas Kering 170º 1jam

2. Gelas Ukur Panas Kering 170º 1jam

3. Tabung Reaksi Panas Kering 170º 1jam

4. Erlenmeyer Panas Kering 170º 1jam

5. Pipet Tetes Panas Kering 170º 1jam

6. Barang Pengaduk Panas Kering 170º 1jam

7. Bola Hisap Uap Panas

8. Sarung Tangan

9. Beaker Glass kering 170º 1jam

10. Jarum Ose

BAB II

PENANAMAN BAKTERI
1. Tujuan

6
  Untuk mengetahui ada atau tidaknya bakteri yang terdapat didalam
sampel yang diperiksa
 Untuk mengetahui cara penanaman bakteri pada media yang sesuai

2. Teori
Mikroorganisme harus dibiakkan dilaboratorium pada bahan
nutrient yang berperan penting untuk pertumbuhan dan
perkembangbiakannya. Susunan bahan nutrient, baik bahan alami maupun
sintetik/buatan, yang dipergunakan untuk pertumbuhan dan perkembangan
bakteri.
Media yang mengandung mikroorganisme disebut dengan kultur.
Jika kultur tersebut hanya terdiri dari satu jenis mikroorganisme maka
disebut dengan kultur murni.
Persiapan proses sterilisasi Mikroorganisme Secara Aseptik
 Sterilisasi alat-alat yang digunakan.
 Sterilisasi ruangan laboratorium.
 Kurangi potensi terjadinya kontaminasi.
 Tertib

3. Alat dan Bahan

Alat-alat Bahan
- Tabung Reaksi - Cutton Buds
- Rak Tabung - Media Lactose brotth
- Lampu Spiritus - Korek Api
- Inkubator - Kapas

4. Prosedur Kerja
 Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan
 Dibuat media lactose broth
 Dimasukkan kedalam lubang reaksi dan ditutup dengan kapas
 Diambil sampel yang akan diperiksa dengan menggunakan pipet
tetes

7
  Dimasukan pipet tetes yang berisi kotoran kedalam tabung reaksi
yang sebelumnya telah dipijar terlebih dahulu
 Dipijar Kembali mulut tabung reaksi kemudian ditutup kapas
 Diinkubasi selama 1x24 jam
 Diamati pertumbuhan bakterinya

5. Hasil Percobaan
 Hasil dan Pengamatan

NO Nama Jenis Pengamatan Ada/tidaknya Paraf

Media Kotoran bakteri dosen

1 Anal Daki Penanaman Ada

conkeyagar meja bakteri

2 Mac Air Penanaman Ada

conskeyagar Keran bakteri

GAMBAR HASIL PERCOBAAN

8
 BAB III

INOKULASI
1. Tujuan
Untuk mengetahui metode-metode yang digunakan dalam
menginokulasikan bakteri pada media yang sesuai.

2. Teori
Teknik membuat biakan murni

Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisakhkan atau

memindahkan mikroba tertentu dari lingkungan sehingga diperole kultur
murni atau biakan murni.

Pengembangan dalam cawan petri ada beberapa metode, yaitu :

 Metode Cawan Gores (Steak Plate)

 Metode Cawan Sebar (Spread Plate)

 Teknik Dilusi (Pengenceran)

9
 Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan
Teknik penanaman bakteri (inokulasi) yaitu:

 Menyiapkan ruangan

 Pemindahan dengan pipet

 Pemindahan dengan kawat inokulasi

3. Prosedur Kerja
 Disiapkan alat dan bahan yang digunakan

 Dipijar jarum ose dengan menggunakan spiritus dan dibiarkan agar

tidak terlalu panas

 Dibuka tutup tabung reaksi

 Dipanaskan mulut tabung reaksi

 Dimasukkan jarum ose kedalam biakan bakteri

 Diinokulasikan pada media yang digunakan dengan metode yang

sesuai

 Dipijar Kembali jarum ose

 Ditutup cawan petri atau tabung reaksi

 Dibungkus cawan petri dengan kertas perkamen

 Dimasukkan kedalam incubator

 Diinkubasi selama 1 x 24 jam

4. Hasil dan Pembahasan

 Hasil dan Percobaan

No Metode Jenis media Jenis bakteri Ada/tidaknya

Inokulasi yang yang koloni
digunakan digunakan
1. Metode Mac Air keran Ada

10
 Kuadran konceyagar

2. Metode Mac Daki Ada

Rudian konceyagar

GAMBAR HASIL PERCOBAAN

11
 BAB IV

PENGECATAN GRAM

1. Tujuan
 Agar mahasiswa mengenal dan dapat mengerjakan pengecatan gram
dengan baik. Sebelum melakukan pewarnaan, sediaan yang
mengandung bakteri yang akan diamati terlebih dahulu diletakkan atau
fiksasi pada permukaan objek glass yang bersih dan bebas dari lemak.
Fiksasi ini harus dilakukan dengan baik agar hasil pengecatannya
mudah diamati dengan mikroskop
 Untuk melihat golongan bakteri apakah gram positif atau gram
negative secara mikroskop

2. Teori
Pewarnaan gram atau metode gram adalah salah satu teknik
pewarnaan yang paling penting dan luas yang digunakan untuk
mengidentifikasi bakteri.
Metode ini diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan
Denmark Hans Cristian Gram (1853-1938) yang mengembangkan teknik
ini pada tahun 1884 untuk membedakan antara pneumukokus dan bakteri
Klebsiella pneumoniae.
Proses pewarnaan bakteri lazim disebut pengcatan (Gandjar dkk.,
1992). Zat warna dapat dibedakan menjadi dua kelompok berdasarkan
sifat muatannya, yaitu pewarna asam (acidic dyes) dan pewarna basa
(basic dyes).
Sebelum melakukan proses pewarnaan sederhana, perlu
dilakukakan fiksasi. Proses fiksasi mempunyai fungsi yang banyak dalam
membantu proses pengecatan menjadi lebih baik.
Bentuk-bentuk bakteri
Bakteri adalah makhluk hidup mikroskopis yang memiliki ukuran
sangat kecil dan tak dapat dilihat dengan mata telanjang. Secara umum,

12
bakteri memiliki Panjang antara 0,5 sampai 3 mikron dan lebar antara 0,1
sampai 0,2 mikron. Adapaun bakteri berdasarkan bentuknya
dikelompokkan menjadi 3 macam, yaitu:
a. Bakteri bentuk batang (basil)
Bakteri yang berbentuk batang atau silinder (basil) dapat kita temui
dalam keadaan Tunggal, berpasangan maupun koloni yang berbentuk
rantai.
b. Bakteri bentuk bulat
Sama seperti bentuk batang, bakteri dalam bentuk bulat (kokus) juga
dapat kita temui dalam keadaan Tunggal, berpasangan maupun koloni
yang berbentuk rantai, atau membentuk gumpalan seperti buah anggur.
c. Bakteri bentuk spiral
Bakteri bentuk spiral dapat dibedakan menjadi 3 macam, yaitu :
 Koma, adalah bakteri yang bentuknya melengkung setengah
lingkaran atau kurang.
 Spiral, adalah bakteri yang bentuknya melengkung lebih dari
setengah lingkaran.
 Spiroseta, adalah bakteri yang bentuknya berupa spiral dengan
tekstur halus dan lentur.

13
3. Alat dan Bahan
Alat Bahan
Mikroskop Biakan bakteri
Objek glass Akuades
Dek glass Alkohol
Jarum Ose Gentien Violet
Spiritus Safranin
Penjepit tabung Lugol
Pipet tetes Imersi Oil

4. Prosedur Kerja
 Disiapkan alat dan bahan
 Dibebaskan lemakkan objek glass menggunakan alcohol, lalu difiksasi
 Diteteskan 1 tetes akuades pada objek glass
 Dipijar jarum ose dengan menggunakan spiritus
 Diambil biakan bakteri dengan menggunakan jarum ose, lalu
digoreskan pada objek glass lalu difiksasi
 Ditambahkan 1 tetes larutan gentien violet sampai menutupi bakteri
didiamkan selama 1-2 menit
 Dicuci dengan menggunakan akuade secara perlahan
 Ditambahkan 1 tetes larutan lugol dan didiamkan 1-2 menit
 Dicuci denganmenggunakan alcohol hingga tetesan tidak berwarna
 Dicucui dengan air mengalir
 Ditambahkan 1 tetes safranin dibiarkan selama 20 detik
 Dicuci dengan akuades, kemudian dikeringkan
 Ditambah 1 tetes imersi oil dan ditutup dengan dek glass
 Dilihat dengan menggunakan mikroskop, amati warna dan bentuk
bakteri

5. Hasil dan Pengamatan

 Hasil percobaan

14
Kesimpulan:

15
 BAB V

PENETAPAN ANGKA LEMPENG TOTAL

1. Tujuan
Untuk mengetahui ada atau tidak adanya bakteri dalam sampel dan
menghitung angka lempeng total bakteri

2. Teori
Teori angka lempeng total adalah angka yang menunjukkan jumlah bakteri
mesofil dalam tiap-tiap satu ml atau 1 gram sampel makanan yang
diperiksa. Prinsip dari alt adalah menghitung pertumbuhan koloni bakteri
acrob mesofil setelah sampel makanan ditanam pada lempeng media yang
sesuai dengan cara tuang kemudian di kemudian dieramkan dalam 24
sampai 48 jam pada suhu 35-37°c (joko wibawa listanto, 1989. Uji angka
lempeng total merupakan metode yang umum digunakan untuk
menghitung adanya bakteri yang terhadap dalam kesediaan yang diperiksa.
a. Psikopilik adalah kelompok mikroorganisme yang hidup pada suhu
kurang dari 20°C
b. Mesofilik adalah kelompok mikroorganisme yang hidup pada suhu
20°C-40°C
c. Termofilik adalah kelompok mikroorganisme yang hidup pada
suhu lebih besar dari 40°C
Angka lempeng total agrove adalah jumlah mikroorganisme hidup
yang membutuhkan oksigen yang terdapat dalam suatu produk yang diuji
titik pertumbuhan mikroorganisme aerob dan anaerob (fisik ropilic,
mesofilik dan termofilik) setelah contoh hasilkan dalam media agar pada
suhu 35°C=1°C selamat 24 jam 48 jam = satu jam mikroorganisme
ditumbuhkan pada suatu media agar maka mikroorganisme tersebut akan
tumbuh dan berkembang biak dengan membentuk koloni yang dapat
langsung dihitung artinya bila percobaan menunjukkan data terdapat
populasi 20 koloni pada pelat hasil pengenceran ke-4 dan 200 koloni pada

16
pengenceran ke-3, maka kesimpulannya adalah bahan uji
mengandung=200 ×10³=200,000 kaloni bakter / ml atau perhitungan
berdasarkan pada koloni yang tumbuh pada hasil pengenceran ke-3.
Perhitungan angka mikroba
Menghitung atau menentukan banyaknya mikroba dalam suatu bahan
(makanan, minuman, dan lain-lain) dilakukan untuk mengetahui sampai
beberapa jauh bahan itu tercemar oleh mikroba dengan mengetahui jumlah
mikroba maka dapat diketahui kualitas mikrobiologi dari bahan tersebut.
Persyaratan perhitungan angka lempeng total
adanya jumlah angka lempeng total yang ditentukan pada suatu sampel
dapat dijadikan acuan bahwa sampel tersebut masih layak atau dikonsumsi
atau tidak.
Cara perhitungan angka lempeng total
Hasil menyatakan sebagai angka lempeng total dalam tiap gram contoh
untuk beberapa kemungkinan lain yang berbeda dari pernyataan di atas,
maka petunjuk sebagai berikut:
1. bila suatu di antara petri dari pengenceran yang sama
menunjukkan jumlah 36-300 koloni, dihitung rata-rata kedua
cawan dikalikan faktor pengenceran.
2. bila pada cawan petri pada kedua tingkat pengenceran yang
berurutan menunjukkan jumlah antara 30-300 kalau nikoma maka
dihitung jumlah kalori dan dikalikan faktor pengenceran kemudian
diambil rata-rata, jika pengenceran yang lebih tinggi didapat
jumlah kalori lebih besar dari dua kali jumlah kalori pada
pengenceran di bawahnya.
3. bila dari seluruh cawan petri tidak ada satupun yang menunjukkan
jumlah antara 30-300 kalo nikoma maka dicatat angka sebenarnya
dari tingkat pengenceran terendah dan dihitung sebagai angka
lempeng total perkiraan.
4. bila tidak ada pertumbuhan pada semua cawan dan bukan
disebabkan karena faktor inhibitor, maka angka lempeng total

17
 dilaporkan sebagai kurang dari satu dikalikan faktor pengenceran
terendah
5. bila jumlah kalori percawan lebih dari 300, maka cawan dengan
tingkat pengenceran tertinggi dibagi dalam beberapa sektor (2,4dan
8) jumlah kalori dikalikan dengan faktor pengencerannya. Hasil
dilaporkan sebagai angka lempeng total perkiraan.
6. bila jumlah kalori lebih besar dari 200 dari bagian cawan, maka
jumlah koloni adalah 200 × 8 × faktor pengenceran titik angka
lempeng total perkiraan dihitung sebagai lebih besar dari jumlah
kalori diperoleh.
Total accout
Total accout yaitu jika perhitungan jumlah tidak berdasarkan pada
jenis bakteri, tetapi secara kasar terdapat golongan atau kelompok besar
mikroorganisme umum seperti bakteri fungsi mikroalge ataupun terhadap
kelompok bakteri tertentu titik total count fungsi dilakukan metode yang
sama. Kecuali temperatur inkubasi 281°C
Pengenceran
Bahan yang diperkirakan mengandung lebih dari 300 sel mikroba per
mil per gram atau per cm, memerlukan perlakuan pengenceran sebelum
ditumbuhkan pada medium agar di dalam cawan petri, sehingga
setelah inkubasi
Factor pengenceran = pengenceran x jumlah yang ditumbuhkan
Jumlah koloni = jumlah x 1/ factor pengenceran

3. Alat dan Bahan

Alat Bahan
Cawan petri Sampel makanan/minuman
Tabung reaksi Akuades
Rak tabung Media agar
Bola hisap Kapas
Pipet ukur
Inkubator
Coloni counter

18
 4. Prosedur Kerja
 Disisipkan tabung reaksi dan cawan petri steril masing-masing sebanyak 3
buah dan diberi label I,II,III
 Dibuat media agar yang sesuai
 Dimasukkan akuades sebanyak 4,5 ml kedalam masing-masing tabung
reaksi dan ditutup dengan kapas steril
 Dipipet sampel sebanyak 0,5 ml dan masukkan ke dalam tabung I, lalu
dihomogenkan (pengenceran 100x)
 Diambil 0,5 ml dari tabung I, dan masukkan kedalam tabung II,lalu di
homogenkan (pengenceran 100x)
 Diambil 0,5 ml dari tabung II, dan masukkan kedalam tabung III,lalu di
homogenkan (pengenceran 100x)
 Dipipet sebanyak 0,5 ml larutan dari tabung I, lalu diletakkan dalam
Petridis I, lalu ditutup
 Dipipet sebanyak 0,5 ml larutan dari tabung II, lalu diletakkan dalam
Petridis II, lalu ditutup
 Dipipet sebanyak 0,5 ml larutan dari tabung II, lalu diletakkan dalam
Petridis III, lalu ditutup
 Dituang media agar ke dalam masing-masing cawan petri sebanyak 20 ml,
kemudian ditutup dan dihomogenkan
 Dibiarkan sampai memadat dan dibungkus dengan kertas perkamen
dengan posisi terbalik
 Dimasukkan kedalam incubator selama 24 – 48 jam
 Dihitung jumlah bakterinya dengan menggunakan colony counter
Perhitungan :

Angka lempeng total (/ml sampel) = jumlah koloni x factor pengenceran

5. Hasil dan Pengamatan

Hasil
No Data Sampel Pengamatan Perhitungan Kesimpulan

19
 1. Air keran Jumlah 101 x 10 = Semakin tinggi
tabung 1 koloni 1010 konsentrasi
bakteri/angka pengenceran maka
lempeng nilai alat semakin
total tinggi
2. Air keran Jumlah 84 x 100 = Semakin tinggi
tabung 2 koloni 8400 konsentrasi
bakteri/angka pengenceran maka
lempeng nilai alat semakin
total tinggi
3. Air keran Jumlah 71 x 1000 = Semakin tinggi
tabung 3 koloni 71000 konsentrasi
bakteri/angka pengenceran maka
lempeng nilai alat semakin
total tinggi

BAB VI

UJI SENSITIFITAS BAKTERI DENGAN MENGGUNAKAN

ANTIBIOTI

1. Tujuan
 Untuk mengetahui kemampuan beberapa macam antibiotic dalam
menghambat pertumbuhan bakteri

20
  Untuk mengetahui apakah antibiotic yang digunakan masih sensitif
atau telah resisten

2. Teori
Antibiotik maupun jenis-jenis antimikroba lainnya telah umum
dikenal dikalangan Masyarakat. Penggunaan dari antibiotic dan mikroba
ini pun telah meningkat, namun serigkali disalah artikan atau disalah
gunakan pada orang awam.
Dalam percobaan ini akan dilakukan uji sensitifitas,
yangmerupakan suatu Teknik untuk menetapkan sensitifitas suatu
antibioktika dengan mengukur efek senyawa tersebutpada pertumbuhan
suatu mikrorganisme serta berhubungan dengan waktu inkubasi untuk
melihat anti biotik mana yang kerjanya lebih cepat menghambat atau
membunuh mikroba lain.
Penggunaan antibiotic sebenarnya tidak membuat kondisi tubuh
semakin baik, justru merusak system kekebalan tubuh karena imunitas bisa
menurun akibat pemakaiannya. Antibiotik hanya melawan infeksi bakteri
dan tidak bekerja melawan infeksi virus gondokdan bronchitis.
Uji sensitifitas bakteri merupakan suatu metode untuk menentukan
tingkat kerentanan bakteri terhadap zat anti bakteri dan untuk mengetahui
senyawa murni yang memiliki aktivitas antibakteri
Sensitivitas merupakan suatu keadaan dimana mikroba sangat peka
terhadap antibiotic atau sensitivitas adalah kepekaan suatu antibiotic yang
masih baik untuk memberikan daya hambat terhadap mikroba.
Intermediet adalah suatu keadaan dimana terjadi pergeseran dari
keadaan sensitive ke keadaan yang resisten tetapi tidak resistek
sepenuhnya.
Resisten adalah ketahan suatu mikroorganisme terhadap suatu anti
mikroba atau antibiotic tertentu.
Zona hambat merupakan tempat dimana bakteri terhambat
pertumbuhannya akibat anti bakteri atau antimikroba

21
 Antibiotik merupakan zat kimia yang dihasilkan mikroorganisme
yang dalam jumlah amat kecil atau rendah bersifat merusak atau
menghambat mikroorganisme lain.
Menurut Waluyo (2008), pemeriksaan kepekaan kuman terhadap
antibioktika dilakukan dengan :
a. Cara cakram
b. Cara tabung
c. Cara penipisan seri agar lempeng.
d. Pepton

3. Alat dan Bahan

Alat Bahan
Cawan petri Biakan bakteri
Cakram antibiotic Akuades
Spiritus Media agar
Inkubator

22
 Pinset
Jangka sorong

4. Prosedur Kerja
 Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan
 Dibuat media agar
 Dimasukkan biakan bakteri pada cawan petri dengan metode tuang
 Ditambahkan media agar yang telah dibuat sebanyak 20 ml dan
dihomogenkan
 Ditutup cawan petri dan dibiarkan memadat
 Dibuka cawan petri dan dimasukkan cakram antibiotic kedalam
cawan petri pada posisi Tengah
 Ditutup Kembali cawan petri dan dibungkus dengan posisi terbalik
 Diinkubasi selama 1 x 24 jam
 Diamati dan diukur zona bening yang terbentuk

5. Hasil dan Pengamatan

Gambar hasil percobaan dan beri keterangan

23
 Kesimpulan
Steril adalah suatu kondisi bebas dari mikroorganisme hidup. Sterilisasi
adalah proses penghilangan semua jenis organisme hidup dalam hal ini adalah
mikroorganisme (prototoa fungi bakteri mycoplasma virus) yang terdapat dalam
suatu benda.

Antiseptik biasanya digunakan untuk cuci tangan, disinfeksi kulit,

perawatan kulit terinfeksi, dan obat kumur, sementara disinfektan biasanya

24
digunakan untuk ruangan, lantai, peralatan dan kamar mandi. Disinfektan adalah
bahan kimia yang digunakan untuk menghambat atau membunuh mikroorganisme
(misalnya pada bakteri, virus dan jamur kecuali spora bakteri) pada permukaan
benda mati, disinfektan tidak digunakan pada kulit maupun lender, karena akan
beresiko mengiritasi kulit.

Pertumbuhan pada bakteri umumnya sangat dipengaruhi oleh asupan

nutrisi, suhu, ph, air, dan oksigen. Perubahan factor-faktro ini dapat
mengakibatkan perubahan sifat bentuk secara morfologi dan cara kerja secara
risiologi.

Inokulasi: penanaman Kembali mikroorganisme media yang lama kedalam

media yang baru dengan metode sesuai. Sedangkan isolasi adalah suatu cara untuk
memisahkan atau memindahkan microba tertentu dan lingkungan sehingga
diperoleh biakan murni. Media pertumbuhan mengandung 5 unsur jenis mikro
yang dibutuhkan mikroba yaitu karbon, hydrogen, oksigen, nitrogen, phostor

Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tersusun dari lapisan
peptidoglikon yang lebih tebal. Bakteri negative memiliki lapisan peptidoglikon
yang tipis dan mempunyai struktur lipopolisakarida yang tebal. Gentien violet
untuk mengatasi infeksi jamur serta mencegah infeksi pada kulit & rongga mulut.
Safranin hanyalah sebagai pembeda (kontras) terhadap zat warna kristal violet.
Lugol merupakan reagen yang sering digunakan untuk uji karbohidrat dan fiksatif
pengamat mikroskopis
Fungsi fiksasi antara lain untuk membunuh bakteri secara cepat dengan
relative tidak menyebabkan perubahan bentuk dan struktur bakteri, melekatkan
bakteri diatas kaca objek, dan meningkatkan sifat apinitas pewarna

kegunaan dilakukan pengenceran 10, 100 dan 1000 kali ialah untuk
mengurangi jumlah kandungan mikroba dalam sampel sehingga dapat di amati
dan diketahui jumlah mikroorganisme secara spesifik agar dapat diperhitungkan
yang tepat

25
 Daerah sekeliling cakram disk yang tidak ditrmukan adanya pertumbuhan
bakteri stepfaccus mutans atau zona page 324 bening yang terdapat pada media
mueler hinton agar (MHA) yang diukur dengan jangka sorong. Bakteriostik hanya
menghambat pertumbuhan bakteri dan tidak mematikan sedangkan bakterisid
dapat membunuh bakteri.

26