Karakterisasi Protein Bovine Serum Albumine dengan Metode Elektroforesis SDS-

PAGE

Aldhi Ya Ganni (210105003)

Program Studi Bioteknologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Muhammadiyah Bandung

Jl. Soekarno-Hatta, No. 752, Cipadung Kidul, Panyileukan, Bandung

Email: aldhiswift@gmal.com

ABSTRAK: Bovine Serum Albumin (BSA) merupakan protein dengan kandujngan yang
berlimpah karakterisasi oleh metode Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel
Elektroforesis atau yang disingkat SDS-PAGE merupakan teknik pemisahan rantai
polipeptida pada protein berdasarkan kemampuannya untuk bergerak pada arus listrik.
Hal ini akan dicapai dengan menambahkan deterjen SDS dan pemanasan untuk merusak
struktur tiga dimensi pada protein dengan terpecahnya ikatan sulfide yang selanjutnya
direduksi menjadi gugus sulfidihidril. SDS akan membentuk protein dan kompleks
bermuatan negatif karena gugus-gugus anionic dari SDS (Dunn, 2014). Prinsip kerja SDS-
PAGE yaitu saat makromolekuk bermuatan listrik molekul-molekul akan berpindah kutub
negatif atau postif berdasarkan muatan yang berada didalamnya.

Kata Kunci: min. 3 kata kunci (SDS-PAGE, Protein, Elektroforesis).

Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide tenaga listrik. Molekul-molekul tersebut

Gel Elektroforesis atau yang disingkat akan berpindah menuju kutub positif atau
SDS-PAGE merupakan teknik pemisahan kutub negatif berdasarkan muatan yang
rantai polipeptida pada protein berada di dalamnya. Molekul-molekul
berdasarkan kemampuannya untuk yang bermuatan negatif (anoda) akan
bergerak pada arus listrik. Hal ini akan bergerak menuju kutub positif (katoda),
dicapai dengan menambahkan deterjen sedangkan molekul-molekul yang
SDS dan pemanasan untuk merusak bermuatan positif (katoda) akan
struktur tiga dimensi pada protein dengan bergerak menuju kutub negatif
terpecahnya ikatan sulfide yang (anoda). Elektroforesis gel memisahkan
selanjutnya direduksi menjadi gugus molekul DNA menjadi pita-pita yang
sulfidihidril. SDS akan membentuk protein masing-masing terdiri atas molekul DNA
dan kompleks bermuatan negatif karena dengan panjang yang sama(Setiawan,
gugus-gugus anionic dari SDS (Dunn, 2018).
2014).
Bovine Serum Albumin (BSA) merupakan
Prinsip kerja elektroforesis gel pada protein dengan kandujngan yang
saat makromolekul yang bermuatan berlimpah dalam plasma dengan
listrik ditempatkan pada medium berisi konsentrasi 5g/500 ml., BSA mempunyai
komposisi asam amino sebanyak 20
macam (Suryanatha, 2006).
MATERIAL DAN METODE
Metode
Pembuatan Gel(Separating Gel)
Pada proses separating gel dicampurkan
4 mL bis-akrilamid, 17,5 µL akuades, 5
mL buffer triss-CL 1,5 M (pH 8,8 ), 50 µL
APS 10%, dan 5 mL TEMED. Setelah itu
dimasukan kedalam cetakan dan
dibiarkan memadat (sekitar 30-45 menit).
Stacking gel (4%)
Pada proses stacking gel dicampurkan
500 µL bis-akrilamid, 2,3 mL akuades, 1
mL buffer triss-CL 0,5 M (pH 6,8), 30 µL
APS, 5 µL dan 5 µL TEMED. Lalu
dilarutkan keatas separating gel yang
sudah memadat, sebelum stacking gel
memadat sisir dipaasangkan dan
didiamkan sekitar 20-30 menit.
Preparasi sampel
Pada proses preparasi, 20 µL sampel
protein Bovine serum albumine
dicampurkan dengan 5 µL buffer sampel
pada tabung mikro 1,5 mL, lalu
dipanaskan dalam air mendidih selama
15 menit, setelah itu di spin down selama
2 menit.
Elektroforesis
Gel dimasukan ke dalam chamber
elektroforesis, ditambah running buffer,
sebanyak 10 µL sampel protein
dimasukan pada sumur, elektroforesis
pada tegangan 100 V selama 100 menit,
lalu dimasukan marka protein untuk
dibandingkan dengan sampel, setelah itu
alat elektroforesis dimatikan.
Staining
Gel dikeluarkan dari plat kaca dan dicuci
3 kali selama 5 menit lalu direndam
dalam larutan staining sebanyak 20 mL,
dibiarkan sampai pita protein terlihat
jelas, setelah itu gel yang sudah bersih
dibandingkan dengan marka protein.
Bahan
Bahan yang digunakan pada praktikum
kali ini adalah akuades, APS, asam
asetat glasial, coomasie brilliant blue,
gliserol, metanol teknis, SDS, TEMED,
tris, 40& bis-akrilamid.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Fungsi Separating Gel(dengan buffer
triss-CL pH 8.8)
Pada proses separating gel yang
berfungsi untuk memisahkan protein
berdasarkan berat molekul, Di dalam
separating gel terdapat TEMED dan APS
yang berfungsi untuk polimerisasi agar
larutan dapat memadat dan membentuk
gel yang dimana fungsi stacking gel ini
untuk menyamakan point protein sebelum
dijalankan(Oktaviani & Ekaningtias,
2015). Fungsi buffer triss-CL 1,5 M (pH
8,8 )untuk memisahkan gel selama SDS-
PAGE dan membuat zona pemisahan
yang terdiri dari pori-pori yang lebih kecil
dan mediumnya sangat basa(Bio, 2022).
Stacking Gel(dengan buffer pH 6.8)
Setelah proses separating gel yaitu
dilakukannya proses stacking gel dengan
semua bahan dicampur dengan buffer
triss-CL(pH 6.8) untuk membantu
memisahkan protein dengan
elektroforesis(Bio, 2022).
Preparasi Sampel(BSA).
20ml sampel BSA dan buffer dicampur
untuk menyederhanakan struktur protein ,
sampel dipanaskan bertujuan untuk
mempercepat reaksi denaturasi protein
dan dilanjut dispindown selama 2 menit
dikecepatan 10.000g disuhu 4ºC agar
sampel tidak rusak(Hermanto dkk., 2015).
Elektroforesis Sampel
Gambar 1. Hasil elektroforesis sampel
dengan sampel Bovine Serum Albumin
(BSA) dengan panjang 66 kDa menurut
(Hallen, 2018) merupakan protein berasal
dari darah sapid dan hasil dari
elektroforesis ini juga menghasilkan 55
kDa yang menandakan benar bahwa
sampel ini adalah sampel BSA.
KESIMPULAN
Hasil elektroforesis menunjukan dengan
panjang 66 kDa yang merupakan protein
dari darah sapi yaitu Bovine Serum
Albumin (BSA)
DAFTAR PUSTAKA
Dunn, M.J. (2014). Gel Electrophoresis of
Proteins. Edisi Revisi.
Elsevierdeman,John M. 2008.
Kimia Makanan. Institute Teknologi
Bandung, Vol.2
Budiarto, R.B. (2015). POLYMERASE
CHAIN REACTION (PCR) :
Perkembangan Dan Peranannya
Dalam Diagnostik Kesehatan.
BioTrends Vol.6 No.2
Sourav Bio. (2022). Pembuatan Buffer
Tris-SDS pH 6.8 dan 8.8 untuk
SDS PAGE. Diambil 14 Juli 2023
dari
http://microbiologynote.com/id/hala
man-sd/Peninsular India. African
Journal of Biotechnology, 5 (3),
230-234.
Handoyo, D., Rudiretna, A. (2000).
Prinsip Umum dan Pelaksanaan
Polymerase Chain Reaction Pusat
Studi Bioteknologi – Universitas
Surabaya unitas, Vol. 9, No. 1
Setiawan, A. 2018. Laporan Praktikum
Instrumentation & Biomolecular
Technique Electroforesis Vertical
SDS-PAGE- Program Magister
Ilmu Biomedik Fakultas
Kedokteran Universitas Brawijaya
Malang