Metode

Transformasi Gen
Pada Tanaman
 2

Transformasi Genetik
⊗ Suatu teknik dalam bidang rekayasa genetika untuk
mengintroduksikan atau menyisipkan DNA asing ke sel penerima
yang sesuai
⊗ DNA asing merupakan DNA yang dilepaskan oleh sel donor, baik
berupa fragmen DNA bebas atau fragmen DNA yang disisipkan ke
dalam vektor.
⊗ Metode Transformasi:
⊙ Metode Mediasi oleh Agrobacterium tumefaciens
⊙ Metode Elektroporasi
⊙ Metode Karbid Silika
⊙ Metode Senjata gen atau penembakan mikro-proyektil
 3

Metode Mediasi Argobacterium

⊗ Metode mediasi Agrobacterium
menggunakan bakteri tanah dikenal
sebagai Agrobacterium tumefaciens
yang memiliki kemampuan untuk
menginfeksi sel-sel tumbuhan dengan
sepotong DNA-nya.
⊗ Bakteri Agrobacterium
tumefaciens dapat menginfeksi
tanaman karena memiliki plasmid Ti,
suatu vektor (pembawa DNA) untuk
menyisipkan gen asing
⊗ Selanjutnya, A. tumefaciens secara
langsung dapat memindahkan DNA
asing pada plasmid tersebut ke dalam
genom (DNA) sel penerima
 4

Metode Elektroporasi
⊗ Pada metode elektroporasi ini, sel tanaman yang akan menerima gen asing harus
mengalami pelepasan dinding sel hingga menjadi protoplas (sel yang kehilangan
dinding sel).
⊗ Selanjutnya sel diberi kejutan listrik dengan voltase tinggi untuk membuka pori-pori
membran sel tanaman sehingga DNA asing dapat masuk ke dalam sel dan bersatu
(terintegrasi) dengan DNA kromosom tanaman.
⊗ Integritas membran akan kembali membaik seperti semula dalam beberapa detik
sampai semenit setelah perlakuan listrik.
⊗ Metode ini menggunakan perantara senyawa PEG untuk memudahkan proses
elektroporasi.
⊗ Polythyleneglycol (PEG) memudahkan presipitasi DNA dan membuat kontak lebih
baik dengan protoplas, juga melindungi DNA plasmid mengalami degradasi dari
enzim nuklease.
 5

Metode Elektroporasi
 6

Metode Karbid Silika

⊗ Suspensi sel tanaman yang akan
ditransformasi dicampur dengan serat
silicon carbide dan DNA plasmid dari
gen yang diinginkan dimasukkan
kedalam tabung Eppendorf, kemudian
dilakukan pencampuran dan pemutaran
dengan vortex.
⊗ Serat karbid berfungsi sebagai jarum
injeksi mikro (micro injection) untuk
memudahkan transfer DNA kedalam sel
tanaman
 7

Transformasi Biolistic (microprojectile

bombardment)
⊗ Metode ini menggunakan mikroproyektil
berkecepatan tinggi untuk memindahkan substansi
ke dalam sel atau jaringan
⊗ DNA dilapiskan di permukaan emas atau tungsten
berukuran mikron (0,5 – 1,5 µm) melalui
presipitasi dengan kalsium klorida dan PEG atau
spermidin
⊗ Jutaan partikel logam yang dilapisi DNA
ditembakkan ke sel atau jaringan target
menggunakan perangkat biolistik atau “gene gun”
⊗ DNA yang ditembakkan akan masuk ke dalam sel
atau jaringan dan melakukan integrasi ke dalam
DNA kromosom secara acak
 8

Daftar Pustaka
⊗ Anonim. 2008. Jurnal Bioteknologi: Metode Transformasi Genetik Pada tanaman.
Bogor. Biogen Litbang Pertanian.
⊗ Biocyclopedia.com. 2018. Particle bombardment gun - Genetic Engineering
Technique. [online] tersedia di:
https://biocyclopedia.com/index/biotechnology/genes_genetic_engineering/
⊗ techniques_of_genetic_engineering/biotech_particle_bombardment.php [Diakses
tanggal 2 Desember 2018].
⊗ Slamet-Loedin IH. 1994. Transformasi Genetik pada tanaman: Beberapa teknik
dan aspek penting. Hayati 1 (2): 66 - 67
⊗ Suwanto A. 1998. Bioteknologi molekuler: Mengoptimalkan manfaat
keanekaragaman hayati melalui teknologi DNA rekombinan. Hayati 5: 25-28