Zhoupeng Zhang, Wei Tang. 2018.

Drug
metabolism in drug discovery and
KIMIA MEDISINAL development. Acta Pharmaceutica Sinica
B 2018;8(5):721–732

kelompok 1AC
Cindy Ramadhani Sapni 11171020000002
Amanda Dwi Alleynisa 11171020000005
Tanisa Intan Murbarani 11171020000009
Putri kurniasih 11171020000013
Dery Akmal Arhandika 11171020000017
Chintia Rakhmadhani 11171020000021
Hasbiah Luthfi 11171020000025
Rana Aulia Fadhilla 11171020000054
Rahmah Dinda Purnama 11171020000060
An nisa Patimah Az zahrah 11171020000064
Wulan Sari 11171020000069
 METABOLISME OBAT
DALAM PENEMUAN DAN
PENGEMBANGAN
OBAT
 Pendahuluan

• Penemuan dan pengembangan obat memakan waktu lama dan mahal.

Studi Pengembangan Obat rata-rata, dibutuhkan lebih dari 10 tahun dan
lebih dari $ 2,6 miliar = 39 triliun rupiah. Desain obat rasional merupakan
pendekatan untuk mempercepat dan mengefisiensikan proses,
menggabungkan ilmu pengetahuan dan teknologi terbaru.
• Disposisi obat dalam tubuh melibatkan absorpsi, distribusi, metabolisme,
dan ekskresi (ADME). ADME adalah komponen penting dalam proses
desain obat, yang mempelajari nasib molekul obat setelah pemberian.
• proses ini melibatkan transporter dan metabolisme enzim dengan
konsekuensi fisiologis pada efek farmakologis dan toksikologis, dan dapat
memainkan peran utama dalam desain obat untuk mengidentifikasi
molekul obat yang lebih baik dengan cara yang lebih efisien.
• Metabolisme obat dalam tubuh adalah proses biotransformasi
yang kompleks, obat dimodifikasi secara struktural untuk
molekul yang berbeda (metabolit) oleh berbagai enzim
metabolism.
• Studi tentang metabolisme obat adalah proses kunci untuk
mengoptimalkan farmakokinetik / farmakodinamik, untuk
mengidentifikasi entitas kimia baru berdasarkan temuan
metabolit aktif, untuk meminimalkan potensi keselamatan yang
kurang karena pembentukan metabolit terjadi reaktif atau
toksik, dan untuk membandingkan metabolisme praklinis pada
hewan dengan manusia untuk memastikan potensi cakupan
yang memadai dan untuk mendukung prediksi dosis manusia,
dll
 Ulasan ini berfokus pada studi metabolisme
obat sebagai peran dalam mengoptimalkan :

1 2

farmakokinetik farmakodinamik
(PK) (PD)

profil keamanan kandidat obat

dalam penemuan dan
pengembangan obat
2. Meningkatkan sifat farmakokinetik
dan farmakodinamik
2.1 Metabolic soft spot
Studi metabolisme in vitro
dalam persiapan jaringan
manusia dan hewan (mis.,
Hati) dan / atau studi
metabolisme in vivo pada
hewan adalah pendekatan
yang berguna untuk
mengidentifikasi jalur
metabolisme utama (“soft
spots”) obat.
• Diketahui bahwa ikatan C – H benzilik, metil alilik dan gugus O-, N-,S
metil adalah soft spots metabolik yang paling disukai ketika
kelompok-kelompok ini tidak terhalang secara sterik, yang
mengalami metabolisme termediasi P450. Karena sifat dari reaksi
hidroksilasi enzimatisatalisasi, kemo dan regiospesitas oksidasi
substrat serta laju metabolisme sangat ditentukan oleh reaktivitas
intrinsik dari situs substrat yang dapat diakses oleh spesies
pengoksidasi feri di kompleks substrat P450.
• Dengan demikian, kecenderungan untuk menjadi soft spots
metabolik akan tergantung pada reaktivitas intrinsik dari gugus
fungsional dan spesifikasi substrat dari molekul tertentu yang
mengandung gugus fungsi khusus ini (soft spots) dalam metabolisme
sistem enzim.
• Salah satu pendekatan umum untuk mengatasi masalah soft spot
metabolik adalah dengan menggunakan bioisoster untuk
menggantikan soft spot yang diidentifikasi.
• Bioisoster adalah substituen atau kelompok yang memiliki kesamaan
kimia atau fisik dan bentuk molekul terkait dan dapat menghasilkan
sifat biologis yang hampir sama.
• Misalnya, dalam beberapa kasus, ketika gugus metil benzilik
diidentifikasi sebagai titik lunak metabolik, fluorin atau atom klor,
atau gugus -CF3, dapat digunakan untuk menggantikan gugus metil
benzilik.
• Dalam studi kasus hubungan struktur-metabolisme, memblok
soft spot metabolik adalah salah satu pendekatan untuk
menurunkan intrinsik yang dapat mengarah pada total
clearance yang lebih rendah dan, dengan asumsi tidak ada
perubahan dalam volume distribusi, waktu paruh yang lebih
lama untuk molekul yang dimodifikasi.
Sebagai contoh, zileuton adalah
penghambat 5-lipoksigenase (5-LO)
yang digunakan untuk perawatan
pemeliharaan asma pada manusia.
Zileuton menunjukkan waktu paruh 0,4
jam pada monyet cynomolgus, dan 2,4
jam pada manusia in vivo. Jalur
metabolisme utama untuk zileuton pada
monyet cynomolgus dan manusia
adalah glukuronidasi pada gugus N-
hydroxyurea untuk menghasilkan
metabolit 2 dengan ekskresi urin
selanjutnya. Dengan demikian,
modifikasi struktural pada zileuton
untuk meminimalkan glukuronidasi
hanya dapat difokuskan pada
penghubung dan bagian benzotiofena
dari zileuton.
Studi SAR pada bagian linker
menunjukkan bahwa senyawa
dengan hubungan asetilena
umumnya memiliki tingkat
glukuronidasi yang lebih rendah.
Studi SAR pada bagian
benzotiofena menunjukkan bahwa
penggunaan cincin tiofena
sederhana sebagai pengganti
bagian benzotiofena dapat secara
signifikan mengurangi tingkat
glukuronidasi.
Akibatnya, ABT-761 menunjukkan
peningkatan yang signifikan dalam
efikasi relatif terhadap zileuton pada
dosis yang sama. Berkat potensi yang
meningkat dan sifat PK yang
ditingkatkan, ABT-761 hanya
membutuhkan dosis sekali sehari
ABT-761 dengan cincin furan
pada manusia, dibandingkan dengan tunggal dan penghubung
rejimen dosis harian untuk zileuton. asetilena diidentifikasi sebagai
Studi ini menunjukkan bahwa inhibitor 5-LO generasi kedua
memblokir titik lemah metabolisme yang menunjukkan tingkat
memang dapat meningkatkan sifat PK glukuronidasi 412 kali lipat dan
dari suatu zat kimia baru (NCE) sambil 429 kali lipat lebih rendah pada
mempertahankan yang sama atau masing-masing cynomolgus
menghasilkan lebih baik aktivitas monyet dan mikrosom hati
manusia daripada zileuton,.
farmakologis.
 2.2 Pergantian metabolik dan
penggantian deurium
● Banyak obat molekul kecil dimetabolisme oleh sitokrom
P450 (CYP) enzim dalam tubuh. CYP, terutama yang berada
di retikulum endoplasma hepatosit, adalah kelas enzim yang
mengkatalisis berbagai biotransformasi oksidatif dan
reduktif, termasuk hidroksilasi karbon, oksidasi heteroatom,
desaturasi hidrokarbon ikatan oksidasi, desaturasi
hidrokarbon ikatan, dan dehalogenasi halokarbon, dll
● obat untuk metabolit umumnya melibatkan pengikatan awal
obat ke situs aktif enzim, diikuti oleh pergantian katalitik
obat ke metabolit melalui siklus P450 yang disebut katalitik
Hubungan metabolisme struktur obat
● secara umum metabolisme obat utama enzim CYP,
mis. , CYP3A, memiliki situs aktif yang besar dan
lebih suka substrat lipofilik.
● Pembentukan dan orientasi substrat sering
ditentukan oleh

hidrofobik dan Interaksi asam amino spesifik di

sterik substrat situs aktif enzim CYP

● Interaksi hidrofobik dan sterik bergantung pada

lipofilisitas (mis., LogP) dan struktur sterik substrat
Pergantian katalitik

● Pergantian katalitik selanjutnya akan mengoksidasi ikatan

C-H dari substrat menjadi ikatan C-OH untuk menghasilkan
metabolit spesifik
● Salah satu pendekatan umum untuk memperlambat atau
memblokir metabolisme pada lokasi spesifik molekul
adalah dengan menggunakan substituen, (misalnya,
bioisostere, kelompok besar, halogen atau atom deuterium)
untuk menggantikan atom H dari atom
● Ikatan CH dari molekul untuk menempatkan kelompok
besar di posisi tetangga untuk mengurangi atau memblokir
aksesibilitas spesies pengoksidasi besi dari enzim P450
● Setelah molekul terikat dalam situs aktif, situs spesifik
metabolisme dalam substrat di mana modifikasi struktural
terjadi, kemudian sebagian besar ditentukan oleh reaktivitas
intrinsik dari situs pada molekul yang dapat diakses oleh spesies
pengoksidasi mereka di situs aktif CYP.
● Karena sifat situs aktif enzim CYP (misalnya, CYP3A4) dengan
kantong pengikat ruang yang besar, penyumbatan situs yang labil
secara metabolik (atau titik lunak) dari molekul timah dengan
menggunakan salah satu substituen yang disebutkan di atas
dapat mengakibatkan perubahan pengikatan dan orientasi
molekul yang baru disintesis, mengalihkan situs metabolisme
asli ke ikatan CH yang berbeda dan menghasilkan pembentukan
metabolit lain menjadi lebih besar.
Fenomena switching metabolik ini tidak biasa.

Sebagai contoh,
Pergantian 2 atom hidrogen dengan atom deuterium pada α-karbon (11)
(pengurangan 2 kali lipat)

Dimetabolisme

peningkatan 5 kali lipat

dengan metabolit minor
melalui oksidasi yang
dimediasi CYP1A1
pada tikus
Secara mekanis

Ikatan C-H pada Menghasilkan zat Menghasilkan

karbon α pada antara hemiasetal metabolit 7-
awalnya dioksidasi yang tidak stabil, yang hidroksikoumarin,
kemudian kehilangan
[D2] -7-
asetaldehida
Ethoxycoumarin
• Dengan demikian, mengatasi tempat-tempat yang labil secara metabolik
(atau bintik-bintik lunak) dari molekul penuntun adalah proses SAR yang
sistematis, di mana banyak faktor, termasuk lipofilisitas, stereokimia, dan
reaktivitas intrinsik harus dipertimbangkan dalam proses desain obat.
● Penggantian atom hidrogen dengan
atom deuterium menjadi memblokir
titik lunak metabolisme atau untuk
mengubah rute metabolism disebut
"efek isotop"
● Karena ikatan karbon-deuterium
lebih sulit diputuskan daripada
ikatan karbon-hidrogen, molekul
deuterasi mungkin telah mengurangi
metabolisme pada atom karbon di
mana atom deuterium berikatan,
berpotensi menurunkan in vitro
dan in vivo clearance atau
mengubah metabolisme
 Mengidentifikasi modulator alosterik negatif
selektif-mGlu3 dan CNS baru
Senyawa timah dengan aktivitas biologis yang baik :
● Senyawa 16 secara metabolik
tidak stabil pada mikrosom
hati manusia dan tikus dengan
pembersihan hepatik
terhitung 18,9 mL / menit / kg
pada manusia dan 54,1 mL /
menit / kg pada tikus.
● Jalur metabolisme utama (titik
lunak) untuk 16 adalah
demetilasi O yang dimediasi
CYP. Masalah soft spot ini
tidak dapat diperbaiki melalui
tradisi elektronik atau
gangguan sterik karena ligan
alosterik SAR yang sangat
dangkal.
Namun, dengan mengganti atom hidrogen dari gugus -OCH 16 dengan
atom deuterium (17, Gbr.3), pembersihan hepatik pada tikus menurun dari
54.1mL / min / kg untuk senyawa 16 hingga 35.9mL / min / kg untuk (17).
Sejalan dengan itu, pembersihan plasma pada tikus setelah pemberian IV
menurun dari 5,2 mL / menit / kg untuk 16 hingga 2,9 mL / menit / kg
untuk. Efek deuterium tereduksi yang teramati mungkin disebabkan oleh
kemungkinan pergantian metabolik untuk 17.
Pendekatan penggantian deuterium ini menghasilkan penemuan senyawa
baru yang memerlukan pengujian in vitro dan in vivo lebih lanjut 20.
● Contoh lain tetrabenazine (18, Gambar. 3), di mana versi yang
dideuterasi mewakili bentuk obat baru dengan profil keamanan yang
jauh lebih baik.
● Tetrabenazine adalah obat yang dipasarkan untuk perawatan chorea
yang berhubungan dengan penyakit Huntington dan dimetabolisme
secara luas untuk membentuk metabolit aktif

dimetabolisme dimetabolisme

(enzim polimorfik (enzim polimorfik

CYP2D621) CYP2D621)

● Namun, efek samping klinis yang diamati, misalnya, sedasi,

mengantuk, kelelahan, dan insomnia mungkin terkait dengan tidak
hanya Cmax yang tinggi dari obat itu sendiri tetapi juga dengan
tingkat variabel metabolit aktif pada pasien karena polimorfisme
CYP2D621.
•Auspex Pharmaceuticals adalah versi tetrabenazine yang dideuterasi dengan upaya untuk
mengubah reaksi demetilasi O 22. SD-809 menunjukkan waktu paruh yang lebih lama
dan paparan yang lebih tinggi dengan sedikit peningkatan Cmax relatif terhadap
tetrabenazine pada manusia 22.
•Hal ini memungkinkan pasien untuk mengambil dosis SD-809 yang jauh lebih rendah
untuk mencapai paparan yang sama dengan Cmax yang lebih rendah daripada
tetrabenazine.
•Dengan demikian, jika efek samping yang diamati pada manusia terkait dengan
pemberian tetrabenazine digerakkan oleh Cmax, SD-809 dapat memberikan profil
keamanan yang lebih baik.
•Auspex Pharmaceuticals mengumumkan bahwa SD-809 menunjukkan hasil yang kuat
dan aman dalam studi uji registrasi klinis fase 3 dalam rilis berita pada 16 Desember
2014. SD-809 (Austedo) yang disetujui FDA untuk perawatan chorea terkait dengan
penyakit Huntington pada 3 April 2017. SD-809 (Austedo) memang merupakan produk
deuterasi pertama yang disetujui oleh FDA untuk penggunaan manusia.
 2.3 prodrugs atau metabolit aktif
sebagai kandidat obat baru
Prodrugs adalah kelas obat dalam bentuk tidak aktif
secara farmakologis yang secara enzimatik atau kimia
dikonversi menjadi bentuk aktif secara farmakologis
melalui reaksi kimia. Prodrugs biasanya memiliki gugus
fungsi ester, amida, fosfat, karbonat, atau karbamat yang
mudah terpecah secara enzimatis atau kimiawi dalam
tubuh.
Bentuk prodrug digunakan untuk memodifikasi secara
kimiawi molekul-molekul yang aktif secara farmakologis
untuk mengatasi masalah yang terkait dengan hambatan
penyerapan, rute pemberian, metabolisme, ekskresi,
toksikologi, serta pengantaran site-selektif.
 salah satu penggunaan umum prodrug adalah untuk
meningkatkan bioavailabilitas oral. Contoh: obat
tenofovir (penghambat nukleotida dari reverse
transcriptase, enzim virus yang penting dalam infeksi
human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) yang
menunjukkan bioavailabilitas oral yang sangat rendah
pada manusia (<5%) karena hidrofilisitas yang tinggi dari
gugus asam fosfonat. Pengembangan dilakukan pada ester
bis-karbonat dari tenofovir menghasillkan tenofovir
disoproxil prodrug dengan bioavailabilitas oral 39% pada
manusia.
Secara mekanis, tenofovir disoproxil pada awalnya dihidrolisis
menjadi zat antara (karboksesterester) atau secara kimiawi, diikuti
dengan hilangnya CO2 dan formaldehida secara spontan untuk
menghasilkan perantara monoester. Fosfodiesterase mungkin
merupakan enzim yang bertanggung jawab untuk hidrolisis akhir
dari monoester menengah ke tenofovir obat aktif.
 Metabolit aktif

Pada tahap metabolisme obat, tempat metabolisme tidak dapat

diprediksi dan metabolit bisa saja tidak memiliki aktivitas farmakologis atau
memiliki aktivitas kurang dari, setara dengan, atau lebih dari pada molekul
induk. Metabolit dengan aktivitas farmakologis yang sama atau lebih baik
biasanya dianggap sebagai metabolit aktif.
Ketidakpastian pembentukan metabolit melalui metabolisme suatu
obat dalam tubuh menawarkan kesempatan untuk mengidentifikasi
metabolit aktif sebagai NCE (obat baru) atau templat struktural baru untuk
optimisasi lebih lanjut dalam penemuan obat.
Petunjuk adanya metabolit aktif dapat berasal dari kurangnya korelasi
Farmakokineik-Farmakodinamik atau karena kurangnya korelasi efikasi
invivo-potensi in vitro dari molekul obat.
Contoh: losartan digunakan sebagai antagonis
reseptor angiotensin II untuk pengobatan
hipertensi pada manusia. Gugus fungsi alkohol
losartan dioksidasi menjadi gugus asam
karboksilat untuk menghasilkan metabolit
EXP3174 (salah satu metabolit utama yang
bersirkulasi pada manusia) dalam tubuh. Studi
in vitro menunjukkan bahwa EXP3174 memiliki
IC50 0,2 nmol / L terhadap reseptor
angiotensin II, sedangkan losartan hanya 4
nmol / L . Dengan mempertimbangkan potensi
in vitro, paparan plasma dan fraksi bebas
dalam plasma, diperkirakan bahwa metabolit
aktif EXP3174 mungkin telah berkontribusi
sekitar 14 kali dari aktivitas in vitro-in vivo
losartan itu sendiri, menunjukkan bahwa
diperlukan penelitian in vitro dan in vivo lebih
lanjut pada EXP3174.
Pengembangan metabolit aktif sebagai obat baru:
Amitriptyline adalah obat yang
banyak digunakan untuk
pengobatan gangguan mental,
termasuk depresi dan kecemasan.
Amitriptyline dimetabolisme oleh
CYP2D6, 3A4 dan 2C19 menjadi
sebuah metabolit demetilasi.
Metabolit ini merupakan inhibitor
reuptake norepinefrin yang lebih
kuat dan selektif dengan Ki 4,4 nmol
/ L, dibandingkan dengan 22,4
nmol / L untuk amitriptyline
terhadap transporter norepinefrin.
Akhirnya, metabolit ini
dikembangkan menjadi obat yaitu
nortriptyline.
 3. Meningkatkan profil keamanan
obat baru

3.1 Perbedaan spesies dalam

metabolisme obat
Obat-obatan diubah menjadi berbagai metabolit dengan
memetabolisme enzim dalam tubuh, dan beberapa metabolit
dapat menyebabkan konsekuensi toksikologis. Studi
metabolisme in vitro dari kandidat obat harus awalnya
dilakukan untuk membandingkan kesamaan nasib metabolisme
dari kandidat obat antara manusia dan spesies hewan, dan hasil
in vitro ini perlu dikonfirmasi lebih lanjut pada hewan in vivo.
• Hewan dengan nasib metabolisme yang mirip dengan
manusia akan dipilih sebagai spesies yang aman dengan
harapan bahwa setiap metabolit utama yang terbentuk pada
manusia akan ada pada hewan pada tingkat yang sama dalam
studi penilaian keselamatan praklinis.
• Selain itu, kesamaan metabolisme in vitro dan in vivo dari
kandidat obat pada hewan akan memberikan bukti
pendukung bagi kita untuk menggunakan ekstrapolasi in
vitro-in vivo (IVIVE) untuk memprediksi sifat PK manusia
(R) -N- (3- (6- (4- (1,4-dimethyl-3-
oxopiperazin-2-yl) phenylamino) -4-
metil-5-oxo-4,5-dihydropyrazin- 2-yl)
-2-methylphenyl) -4,5,6,7-
tetrahydrobenzo [b] thiophene-2-
carboxamide GDC-0834 adalah
inhibitor ampuh dan selektif dari
tirosin kinase Bruton (BTK) untuk
potensi pengobatan rheumatoid
arthritis.

Studi metabolisme in vitro pada

hepatosit menunjukkan bahwa GDC-
0834 dimetabolisme secara luas pada
manusia (80% ), dimetabolisme sedang
pada tikus (56% ) dan monyet
cynomolgus ( 53%) dan relatif stabil
pada tikus (20%) dan anjing (17% )
setelah inkubasi 3 jam.
Metabolit seperti terhidrolisis anilin utama 32 yang terdeteksi
dalam inkubasi hepatosit sekitar 62% (manusia), 9% (tikus), 4%
(monyet cynomolgus), 9% (tikus) dan 12% (anjing) dari GDC-
083432.

Jumlah metabolit 32 adalah 2 kali lipat lebih banyak

daripada GDC-0834 dalam hepatosit manusia pada 3 jam,
sedangkan jumlah GDC-0834 adalah komponen utama yang
berhubungan dengan obat dalam hepatosit tikus,
cynomolgus monyet, tikus dan anjing
Studi in vivo menunjukkan bahwa metabolit 32 adalah minor (pada
tikus dan monyet cynomolgus) hingga sedang (pada anjing), dan GDC-
0834 adalah komponen utama yang berhubungan dengan obat dalam
plasma setelah pemberian GDC-0834 secara oral ke monyet
cynomolgus, tikus dan anjing . Jika korelasi in vitro-in vivo untuk 32
pada hewan ini berlaku untuk manusia, maka metabolit 32 mungkin
merupakan metabolit bersirkulasi yang paparannya mungkin jauh lebih
tinggi daripada GDC-0834
Prediksi PK manusia selanjutnya menggunakan metode
penskalaan IVIVE dan alometrik memberikan berbagai macam
pembersihan darah manusia (5,4-19 mL / min / kg) . Perbedaan
signifikan dalam rute utama metabolisme pada manusia dan
hewan yang masih diragukan terhadap prediksi PK manusia,
mendorong para peneliti untuk melakukan studi dosis tunggal
pada sukarelawan sehat untuk menilai dengan cepat PK
manusia GDC-0834.
Anilin atau amina aromatik adalah golongan senyawa
yang diketahui yang berpotensi menyebabkan
methaemoglobinemia, agranulositosis, anemia aplastik,
hepatotoksisitas, hipersensitivitas kulit, dan peningkatan
risiko mutagenisitas pada hewan dan manusia.
Secara mekanis, nitrogen anilin dapat dioksidasi menjadi
hidroksilamin, nitroso, nitro, dan spesies terkait. Metabolit atau
perantara ini bersifat reaktif secara kimiawi atau dapat dimetabolisme
lebih lanjut menjadi metabolit reaktif terhadap protein dan DNA.
Siklus redoks antara spesies anilin teroksidasi (mis., Nitroso dan nitro)
mengarah pada pembentukan spesies oksigen reaktif (mis., Hidrogen
peroksida, superoksida, dll.) Yang dapat menyebabkan stres oksidatif
ke sel
kasus ini menunjukkan bahwa penting untuk
mempertimbangkan dampak potensial dari perbedaan
spesies dalam metabolisme obat dan potensi cakupan
metabolit manusia utama pada hewan harus dinilai
dengan cermat dalam desain obat. Dari perspektif
pengaturan, sangat dianjurkan untuk mengidentifikasi
metabolit yang bersirkulasi sedini mungkin dalam uji
klinis. Ini akan memastikan bahwa paparan metabolit
manusia tercakup pada hewan dalam studi penilaian
keselamatan praklinis.
 3.2. Meminimalkan risiko polimorfik
metabolisme obat terkait risiko dan
potensi interaksi obat-obat
• Sebagian besar obat dibersihkan dari tubuh melalui proses
metabolisme yang dimediasi enzim34.
• Beberapa enzim metabolisme (mis., CYP2D6, 2C9 dan 2C19,
dll.) Bersifat polimorfik dan ada dalam dua atau lebih bentuk
varian dengan aktivitas enzimatik yang berbeda pada individu
yang berbeda.
• Metabolisme yang buruk (individu dengan aktivitas enzimatik
rendah atau tidak) dapat memiliki paparan obat yang jauh
lebih tinggi daripada metabilisator luas (individu dengan
aktivitas enzimatik tinggi) ketika diberikan dosis obat tertentu.
• Enzim metabolisme diperlukan untuk mengubah prodrug menjadi
obat aktif, konsentrasi obat aktif bisa lebih rendah pada pasien
dengan metabolisme yang buruk dibandingkan pada pasien
normal, sehingga menghasilkan efek terapi yang kurang optimal.
Kandidat obat yang sebagian besar di metabolisme oleh enzim
polimorfik dapat memiliki efek farmakologis dan toksikologis yang
berbeda.
• Contohnya codein (analgesic opioid), Codeine adalah prodrug yang
mengikat reseptor opioid untuk memberikan efek analgesik. Enzim
polimorfik CYP2D6 mengkatalis O-demethylation dari codeine
menjadi obat aktif, yaitu morfin, yang memiliki 200 kali lipat
afinitas yang lebih besar daripada codein.
• Pasien metabolisme buruk dengan aktivitas CYP2D6 yang rendah
memiliki level morfin yang lebih rendah, sehingga menghasilkan
efek analgesik yang kurang optimal. Namun, metabolisme
ultrarapid pasien dengan aktivitas CYP2D6 yang lebih tinggi dapat
meningkatkan level morfin.
Enzim polimorfik
CYP2D6
Pada penelitian SAR, modifikasi struktural senyawa penuntun sebagian
besar di metabolisme oleh enzim polimorfik. Contohnya, metoprolol
(penghambat reseptor β1 selektif) untuk pengobatan hipertensi, di
metabolisme oleh CYP2D6 di mikrosom hati manusia. Metoprolol
mempunyai bioavailabilitas oral yang rendah dan onset cepat, karena
metabolisme di hati yang cepat. Obat dengan gugus siklopropil dipakai
untuk mengganti metoprolol menjadi betaxolol, yang mempunyai
metabolisme jauh lebih lambat. Betaxolol di metabolisme oleh CYP2D6
(40%) dan CYP1A2. Betaxolol memiliki risiko polimorfisme terkait
CYP2D6 yang jauh lebih rendah pada manusia.
Beberapa obat dapat menjadi inhibitor atau penginduksi enzim
metabolisme.
1) Obat yang merupakan penghambat enzim pemetabolisme untuk
obat lain :
Ketika dua obat diberikan bersama ke tubuh, paparan obat lain bisa
lebih tinggi dari yang diharapkan, menghasilkan masalah keamanan
potensial jika margin keamanan dari obat itu terbatas.

2) Obat yang merupakan penginduksi enzim yang memetabolisme

untuk obat lain:
Ketika dua obat diberikan bersama, paparan obat lain bisa lebih
rendah dari yang diharapkan, sehingga menghasilkan efek
farmakologis yang kurang optimal pada tubuh.
• Paparan sistemik suatu obat dipengaruhi oleh pemberian
bersama obat lain yang disebut sebagai interaksi obat-obat
(DDI), sehingga diinginkan untuk meminimalkan potensi DDI
dalam proses desain obat.
• Dalam kasus di mana obat ditemukan memiliki potensi DDI
yang tinggi dengan obat lain, maka pengembangan secara
umum dihentikan dan obat baru dengan potensi DDI yang
lebih rendah mungkin perlu diidentifikasi.
• Contoh, dalam upaya untuk mengembangkan agonis parsial α7 nicotinic
acetylcholine (α7 nAChR) yang potensial untuk pengobatan potensial
dari beberapa gangguan neurologis dan psikiatrik termasuk- disfungsi
kognitif, (R) -3 ′ - (5-chlorothiophen-2-yl) spiro [1-azabicyclo [2.2.2]
octane-3,5′-oxazolidin] -2′-one (37, Gambar 4) diidentifikasi sebagai
timah dengan afinitas tinggi (Ki 9 nmol / L) menuju α7 nAChR38 .
• Namun, senyawa 37 juga menunjukkan penghambatan potensial
terhadap CYP2D6 dengan IC50 2,0 mol / L.
• Sebaliknya, senyawa 38 (Gbr. 4), yang diturunkan dari penggantian
cincin 5-chlorothiophene dengan cincin benzene menunjukkan
penghambatan minimal terhadap CYP2D6 (IC50430 mol / L),
• Menunjukkan bahwa masalah penghambatan CYP2D6 dapat diatasi
dengan modifikasi struktural di sekitar cincin 5-chlorothiophene dari 37.
Skema 3 : Mekanisme yang diusulkan untuk bioaktivasi [3H] 40.
3.3 Meminimalkan potensi toksisitas
yang terkait dengan bioaktivasi
Memiliki profil keamanan yang dapat diterima adalah
salah satu persyaratan paling penting bagi NCE untuk
menjadi obat yang berhasil. Namun, dalam beberapa
kasus, pengembangan obat dihentikan karena
pengamatan toksisitas praklinis atau klinis. Cedera
hati yang disebabkan oleh obat Drug-induced liver
injury (DILI) dan genotoksisitas adalah di antara
toksisitas yang paling sering diamati.
 Ada banyak kemungkinan penyebab yang mengarah pada toksisitas
praklinis dan klinis. Salah satu penyebabnya adalah bioaktivasi yang
berhubungan dengan metabolisme. Dalam beberapa kasus, metabolisme
dapat mengubah obat menjadi metabolit / intermediet yang reaktif secara
kimia. Karena sifat elektrofilisitasnya yang tinggi, metabolit reaktif tersebut
dapat bereaksi dengan komponen protein seluler, DNA, atau bahkan enzim
metabolisme (yang mengkatalisasi pembentukan metabolit reaktif) untuk
membentuk zat tambahan protein obat, tambahan obat-DNA obat, dll.
Ada banyak kemungkinan penyebab yang mengarah pada toksisitas
praklinis dan klinis. Salah satu penyebabnya adalah bioaktivasi yang
berhubungan dengan metabolisme. Dalam beberapa kasus, metabolisme
dapat mengubah obat menjadi metabolit / intermediet yang reaktif secara
kimia. Karena sifat elektrofilisitasnya yang tinggi, metabolit reaktif tersebut
dapat bereaksi dengan komponen protein seluler, DNA, atau bahkan enzim
metabolisme (yang mengkatalisasi pembentukan metabolit reaktif) untuk
membentuk zat tambahan protein obat, tambahan obat-DNA obat, dll.
proses bioaktivasi dapat
mengganggu fungsi seluler
normal atau memicu respons
imun berurutan dan mungkin
merupakan salah satu penyebab
yang mungkin menyebabkan
DILI atau genetoksisitas yang
diamati. Dalam desain obat,
adalah bijaksana untuk
merancang / memilih senyawa
yang memiliki kecenderungan
rendah untuk membentuk
metabolit reaktif untuk
pengembangan lebih lanjut.
Metabolit reaktif elektrofilik,
secara umum, sangat tidak
stabil, dan siap bereaksi
dengan makromolekul
nukleofilik (protein, DNA dll)
dalam sistem biologis. Karena
sifatnya yang sangat reaktif,
metabolit-metabolit ini
seringkali berumur pendek
dan jarang terdeteksi per se
bahkan menggunakan
instrumentasi modern yang
canggih
Pada kasus dimana obat berlabel 3H- atau 14C- tidak tersedia, beberapa
pendekatan dicoba untuk memberikan pengukuran semi-kuantitatif potensi
bioaktivasi obat dalam sistem biologis. Salah satu pendekatannya adalah
menggunakan agen perangkap (trapping agent) berlabel radioabel yang
tersedia secara komersial (misal [35S] Sistein atau [14C] sodium sianida,
dsb) dalam penelitian trapping dengan senyawa uji berlabel dalam sistem
biologi. Dansyl glutathione (dGSH) ditandai fluoresen turunan GSH,
merupakan satu dari agent trapping yang lain yang digunakan untuk semi-
kuantifikasi potensi bioaktivasi senyawa uji
Ikatan Obat dGSH dideteksi menggunakan kedua deteksi spektroskopi
fluoresen dan LC-MS. Informasi struktural dari ikatan obat dGSH yang
diperoleh dari LCMS digunakan untuk mendalilkan struktur metabolit
reaktif yang terbentuk dalam sistem biologis. Pada waktu yang sama,
jumlah relative dari ikatan dGSH dapat dikuantifikasi dengan deteksi
fluoresen. Pendekatan ini juga dapat digunakan untuk menentukan
tingkatan senyawa dengan struktur yang serupa
Pada usaha sebelumnya untuk mengembangan modulator reseptor
estrogen yang selektif (SERM) dengan selektivitas subtipe estrogen
reseptor- α (ER- α) untuk potensi pengobatan osteoporosis, (2S,3R)-3-
(4-hydroxyphenyl)-2-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]2,3-dihydro-1,2-
benzoxathiin-6-ol 40 diidentifikasi sebagai penuntun yang poten dan
aktivitas antagonis ER-α selektif in vitro dan in vivo pada hewan. Nilai
ikatan protein kovalen in vitro dari [3H]40 adalah 1106 pmol-equiv/mg
protein pada mikrosom hati manusia, dan 170 pmol-equiv/mg protein
pada hepatosit manusia, ketika [3H]40 (10 μmol/L) diinkubasi di dalam
mikrosom hati manusia (1 mg protein/mL) selama 45 menit atau di
dalam hepatosit manusia (1 x 10^6 cells/mL) selama 60 menit. Studi in
vitro mengidentifikasi metabolit kuinon 41 dan metabolit hidrokuinon
43 yang mungkin terbentuk dari reduksi metabolit para-quinon reaktif.
Studi trapping in vitro berikutnya mengidentifikasi ikatan bis-cyano 45,
menunjukan pembentukan jenis ion iminium reaktif. 44.
Hasil ini menunjukan bahwa senyawa 40 merupakan subjek untuk
bioaktivasi melalui jalur yang melibatkan jenis kuinon reaktif 41 dan
jenis iminium 44. Kemudian, (2S,3R)-(+)-3-(3-hydroxyphenyl)-2-[4-(2-
pirolidin-1-ylethoxy)phenyl]2,3-dihydro-1,4-benzoxathiin-6-ol 46
disintesis dalam upaya untuk meminimalkan pembentukan metabolit
reaktif. Nilai ikatan protein kovalen in vitro dari [3H]46 (10 μmol/L)
menunjukan nilai ikatan protein kovalen 461 pmol-equiv/mg protein
pada mikrosom hati manusia dan 48 pmol-equiv/mg protein pada
hepatosit manusia, ketika [3H]46 (10 μmol/L) diinkubasi dalam
mikrosom hati manusia (1 mg proteins/mL) selama 45 menit atau
dalam hepatosit manusia (1 x 10^6 cells/mL) selama 60 menit. Nilai
ikatan protein kovalen in vitro dari [3H]46 lebih rendah dari [3H]40 .
Studi metabolisme in vitro [3H]46 mengidentifikasi metabolit
hidrokuinon 46 dan metabolit biphenyl hydroquinone 50. Metabolit
48 dan 50 dapat terbentuk dari reduksi kuionon reaktif berturut-turut
antara 47 dan 49.
tambahan studi in vitro trapping mengidentifikasi ikatan NAC 51
dengan struktur yang dikonfirmasi dengan LC-MS/MS dan NMR.
Namun, tidak ada ikatan cyano yang terdeteksi pada studi trapping di
kalium sianida. Hasil ini menunjukan bahwa penggantian dari grup
piperidin dari 40 dengan grup pirolidin memblok jalur untuk
membentuk ion iminium reaktiff 44. Namun, jalur menuju
pembentukan metabolit kuinon reaktif 47 dan 49 masih ada, yang
memungkinkan bertanggung jawab untuk pengikatan protein kovalen
yang diamati pada mikrosom hati dan hepatosit manusia. Studi ini
menandakan bahwa pemahaman mengenai mekanisme bioaktivasi
dapat membantu ahli kimia untuk merancang molekul lebih baik
dengan kecenderungan rendah terhadap bioaktivasi dan akhirnya
menemukan kandidat obat dengan risiko yang lebih rendah dari
toksisitas yang disebabkan oleh metabolisme obat
Pada beberapa kasus dimana bioaktivasi diyakini menjadi salah satu
penyebab genotoksisitas yang diamati, studi trapping obat dengan
DNA atau basa-basa DNA dapat dilakukan untuk menjelaskan struktur
metabolit reaktif yang terbentuk dalam sistem biologis. Sebagai
contoh, senyawa penuntun baru yang disebutkan diatas 46
menunjukan genetoksisitas dalam uji aberasi kromosom pada sel-sel
ovarium hamster Cina secara in vitro dan uji induksi mikronukleus
dalam sumsum tulang tikus secara in vivo . Kemudian studi trapping
in vitro menggunakan basa-basa DNA menunjukan hingga lima
adenine terdeteksi dalam inkubasi 46 dengan mikrosom hati manusia
dan dan monyet atau CPY3A4 rekombinan manusia. Berdasarkan data
LCMS/MS dan NMR, adenine adduct utama 50 memiliki struktur
siklik. Ini lebih lanjut mengkonfirmasi keberadaan perantara para-
kuinon cincin terbuka yang reaktif sebagaimana dibahas di atas. Uji
gel elektroforesis sel tunggal (uji komet) dalam hepatosit manusia
lebih lanjut menunjukan bahwa 46 menyebabkan kerusakan DNA
dalam cara yang bergantung pada dosis. Ini memungkinkan bahwa
bioaktivasi dari 46 dapat berhubungan dengan genetoksisitas yang
diamati.
• Dalam beberapa jalur yang dapat mempengaruhi
berjalannya rekasi intermedia yang terbentuk pada
sistem biologis. Berikut adalah skema yang
menampilkan kemungkin jalur-jalur yang memerlkukan
pembentukan CYP terkalisasi dari intermediate epoxide
yang reaktif.
Skema di samping
menjelaskan dari proses
untuk bioaktivasi obat
dikatalisis oleh enzim
sitokrom P450.
A: pengikatan obat ke situs
aktif P450;
B:pembentukan
intermediat reaktif di situs
aktif;
C: pengikatan intermediet
reaktif ke P450;
D: pelepasan reaktif antara
dari situs aktif;
E: pembentukan adduct
obat-GSH;
F: hidrasi zat antara
reaktif;
G: pengikatan intermediet
reaktif terhadap protein
dalam sistem biologis
Penjelasan proses skema
1. Mengikat obat ke situs aktif enzim CYP, diikuti dengan
bantuan sitokrom P450 reduktase dan sitokrom b5,
memicu pembentukan spesies oksigen oksidatif yang
terkait dengan enzim CYP (jalur A)
2. Spesies oksigen mengoksidasi molekul obat di dekatnya
untuk membentuk intermediat epoksida reaktif di situs
aktif (jalur B)
3. Intermediat epoksida reaktif ini dapat bereaksi dengan
residu asam amino dari enzim CYP untuk membentuk
zat tambahan pada ikatan obat-CYP (obat-protein)
(Jalur C)
Pembentukan ikatan obat-CYP mungkin atau
mungkin tidak menunjukkan inaktivasi
tergantung-waktu dari aktivitas katalitik enzim
CYP ini, tergantung pada ikatan kovalen dari
intermediat yang reaktif terhadap residu asam
amino pada daerah spesifik di enzim CYP.
Berdasarkan kasus hipotesis yang ekstrim bahwa
intermediat ini sangatlah reaktif dan kebanyakan
dapat membentuk sisi aktif yang dapat bereaksi
dengan residu asam amino secara insitu dan
membentuk ikatan obat-CYP
4. Jadi, hanya sedikit jumlah zat antara reaktif yang lolos dari situs aktif ke
sistem biologis (Jalur D)
5. Sisanya ialah terjebak dengan agent penjerat (ex. GSH) untuk
membnetuk ikatan obat-GSH. (Jalur E)
6. Dalam kasus lain di mana zat antara epoksida reaktif cukup stabil,
sebagian zat antara reaktif ini dapat keluar dari situs aktif CYP (jalur D)
7. Zat intermediat epoxide ini dapat dihidrasi dengan epoksida hidrolase,
diikuti dehidrasi untuk menghasilkan metabolit mono-oksigen (Jalur F)
8. Atau terkadang zat intermediat ini dapat berekasi dengan protein
sekitar termasuk enzim CYP, untuk membentuk ikatan obat-protein
(Jalur E)
9. Dengan kehadiran dari agen penjerat (ex. GSH), intermediat epoxide
reaktif ini dapat berekasi juga dengan agen penjerat ini untik
membentuk ikatan drug-GSH (Jalur G)

Dalam hal ini, jalur E, F dan G bersifat kompetitif, dan jumlah ikatan obat-
GSH yang terdeteksi tergantung pembagian pada antara jalur ini.
• Sifat dari masing2 jalur ini akan bergantung pada senyawa dan
tidak dapat diprediksi dengan mudah.
• Selain itu, metabolit mono-teroksigenasi, dibentuk melalui
jalur epoksida hidrolase F, juga dapat dibentuk melalui
abstraksi hidrogen langsung yang dimediasi CYP, diikuti oleh
mekanisme rebound oksigen. Hal ini membuat mustahil untuk
menggunakan pembentukan metabolit ini yang terbentuk dari
perantara epoksida sebagai ukuran tambahan untuk menilai
potensi bioaktivasi suatu senyawa.
• Ada kemungkinan bahwa satu senyawa dengan jumlah adduct
GSH yang lebih sedikit mungkin memiliki potensi bioaktivasi
yang lebih tinggi untuk membentuk lebih banyak ikatan
protein-obat daripada senyawa lainnya dengan ikatan GSH
yang lebih banyak.
 Penutup
• Metabolisme obat memainkan peran penting dalam menentukan
farmakologis dan efek toksikologis suatu obat pada manusia.
• Dari perspektif metabolisme obat, karakteristik obat yang ideal harus
mencakup bioavailabilitas oral yang tinggi (untuk dosis peroral) atau
kelarutan yang baik (untuk dosis intravena), eliminasi memadai t1/2 untuk
interval dosis yang dimaksudkan, seimbang antara metabolisme hati,
ekskresi empedu dan ginjal, metabolisme oleh berbagai enzim, berpotensi
rendah untuk menghambat atau menginduksi enzim metabolisme dan
pengangkut, rendah kecenderungan untuk bioaktivasi, dan sebanding
secara in vitro dan profil metabolit plasma pada manusia dan spesies
toksikologi.
• Semua kontribusi dari metabolisme obat harus dipertimbangkan dalam
merancang obat untuk populasi pasien yang ditargetkan sehubungan
dengan profil keamanan dan kemanjuran.
Thank You!
Any Questions?