GAS-LIQUID CHROMATOGRAPHY

MAUDY AFRILIN (1601016)

PRISQILA TRIVENA YAHYA (1601035)
EGA DESNIATI P (1601051)
CHRYSILLIA VANIA RETNO SELE (1601014)
ANGGUN PARAMITA SYAFRUDDIN (1601029)
TENRI ZULFA AYU DWI PUTRI (1601042)
OKTAFIANA A NAHAK
 PENDAHULUAN

KEUNTUNGAN DAN KERUGIAN

ALAT DAN BAHAN

METODE KERJA

KESIMPULAN
 PENDAHULUAN

Kromatografi adalah suatu metode pemisahan fisik, di

mana komponen-komponen yang dipisahkan didistribusikan
di antara dua fasa, salah satu fasa tersebut adalah suatu lapisan
stasioner dengan permukaan yang luas, yang lainnya sebagai
fluida yang mengalir lembut di sepanjang landasan stasioner.
Fasa stasioner bisa berupa padatan maupun cairan, sedangkan
fasa bergerak bisa berupa cairan maupun gas (Day dan
Underwood, 2010).
 LANJUTAN....

Keterangan :
GLC = Gas Liquid Chromatography
GSC = Gas Solid Chromatography
LLC = Liquid Liquid Chromatography
LSC = Liquid Solid Chromatography
PC = Paper Chromatography
TLC = Thin Layer Chromatography
GP = Gel Permeation
GF = Gel Filtration
HPLC = High Performance Liquid Chromatography
 KROMATOGRAFI GAS
PADAT
Prinsip kerja GLC, yaitu berdasarkan
proses partisi atau pemisahan komponen.
Partisi komponen cuplikan didasarkan atas
kelarutan uap komponen bersangkutan
pada zat cair (fasa diam). Jadi, bergantung
pada kesetimbangan gas cair yang terjadi
dalam kolom.
CAIR
suatu metode pemisahan campuran dengan
memanfaatkan volatilitas dari senyawa
campuran yang akan dianalisis, oleh karena
itu kromatografi gas cair hanya bisa
digunakan untuk memisahkan campuran
senyawa yang mudah menguap. Fase diam
sekali lagi adalah cairan yang diadsorbsi
pada zat padat berpori, tetapi fasa geraknya
adalah gas (Oxtoby, 2001).
 FASA GERAK
Gas pembawa merupakan istilah pengganti fase gerak dalam kromatografi gas. Gas ini
terdapat pada suatu tanki bertekanan sangat tinggi (± 150 atm). Persyaratan ideal gas
pembawa antara lain :
1. Gas pembawa harus bersifat inert
2. Murni dan mudah dibawah
3. Pemilihan gas pembawa sangat tergantung pada jenis detektor yang digunakan.
4. Sistem pendukung gas pembawa harus menyediakan molecular sieves sebagai bahan
untuk menghilanngkan air dan impurities yang lain.
Berikut jenis gas yang sering digunakan dapat dilihat pada tabel berikut :
FASA DIAM

Fase diam Non-polar, seperti

metil polisiloksan (HP-1;
DB-1; SE-30; CPSIL-5) dan
fenil 5%-
metilpolisiloksan 95%
(HP-5; DB-5; SE-52;
CPSIL-8).
Fase diam semi polar,
seperti fenil 50%-
metilpolisiloksan 50%
(HP-17; DB-17; CPSIL-
19)

Fase diam polar, seperti

polietilen glikol (HP-20M;
DB-WAX; CP-WAX;
Carbowax-20M)
 Keuntungan

Kecepatan.
Gas merupakan fase bergerak sangat cepat mengadakan
kesetimbangan anatara fase bergerak dan fase diam.
Sensitive
Karena sensitivitas yang tinggi dari kro,matografi gas
cair, maka hanya memerlukan sejumlah kecil dari
cuplikan, biasanya dalam ukuran mL.
Sederhana
Alat GLC relatif sangat mudah dioperasikan. Intrepretasi
langsung dari data yang diperoleh dapat dikerjakan
 DEVELOPMENT AND VALIDATION OF
GC METHOD FOR THE ESTIMATION OF
EUGENOL IN CLOVE EXTRACT
(Pengembangan dan Validasi Metode GC
Untuk Estimasi Eugenol dari Ekstrak Tunas
Cengke)
 Abstrak
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengembangkan metode kromatografi
gas yang sederhana, sensitif dan tepat untuk analisis eugenol dalam alkohol
dan ekstrak air cengkeh dan validasi sesuai dengan pedoman ICH saat ini.
Eugenol adalah salah satu konstituen aktif utama dari tunas cengkeh. Ekstrak
air-etanol cengkeh disiapkan dan diekstrak lebih lanjut dengan menggunakan
pelarut metanol.
Metode GC digunakan untuk penentuan analitik Eugenol. Sampel
diperkirakan menggunakan gas kromatografi dengan ionisasi api sebagai
detektor. Nitrogen pada laju aliran 1.18 mL/menit digunakan sebagai gas
pembawa dan total waktu operasi adalah 10 menit. Port injeksi dan suhu
detektor diatur masing-masing pada suhu 225℃ dan 270 ℃. Waktu retensi
Eugenol ditemukan menjadi 5.8 menit. Linearitas dari metode yang
dikembangkan diuji dalam kisaran 200 ng/mL-1000 ng/mL untuk
Eugenol, batas deteksi ditemukan menjadi 64.31 ng/mL dan persentase
pemulihan adalah 98.1 %.
Metode GC-FID yang sederhana, tepat dan akurat telah dikembangkan
untuk penentuan Eugenol dalam ekstrak air-etanol.
 PENDAHULUAN
Cengkeh adalah kuncup bunga kering beraroma dari Myrtaceae. Cengkeh (Syzygium
aromaticum) berasal dari pulau-pulau Maluku di Indonesia yang digunakan sebagai bumbu masakan
di seluruh dunia. Eugenol terdiri dari 72-90% dari minyak esensial yang diekstraksi dari cengkeh dan
bertanggung jawab atas aromanya dari cengkeh. Konstituen minyak atsiri penting lainnya dari minyak
cengkeh termasuk acetyl eugenol, ß-caryophyllene, vanillin, asam crategolic, tanin seperti bicornin,
asam gallotannic, metil salisilat, flavonoid seperti eugenin, kaempferol, rhamnetin, dan eugenitin,
triterpenoid seperti oleanolicacid, stigmasterol dan campesterol dan beberapa seskuiterpen. Minyak
cengkeh (Syzygium aromaticum) banyak digunakan sebagai parfum dan penyedap makanan sebagai
obat untuk pengobatan asma dan berbagai gangguan alergi di Korea dan sebagai antiseptik umum
dalam dunia medis praktek dokter gigi. Bahan penting yang bertanggung jawab untuk itu Aktivitas
antijamur adalah eugenol dari cengkeh. Minyak cengkeh, diaplikasikan pada rongga di gigi yang
membusuk, juga meredakan sakit gigi. Eugenol, konstituen utama minyak cengkeh, telah banyak
digunakan untuk aksi anestetik dan analgesik dalam kedokteran gigi. Pameran Eugenol efek
farmakologis pada hampir semua sistem. Cengkeh memiliki sifat antioksidan yang signifikan, anti-
inflamasi dan kardiovaskular, di samping aktivitas anestesi analgesik dan lokal. Eugenol mengobati
abses gigi yang dinginkan, penyakit gusi, sakit telinga dan nyeri radang sendi. Ia juga bertindak
sebagai anti-jamur, antikonvulsan, dan aktivitas anti kanker dan antimutagenik. Dari literatur Tinjau itu
menunjukkan bahwa ada beberapa metode yang dikembangkan untuk cengkeh dengan kromatografi
gas dan HPLC. Karya ini menjelaskan metode kromatografi gas yang sederhana, sensitif dan tepat
untuk analisis eugenol dari ekstrak cengkeh. Metode ini divalidasi sesuai standar ICH guidelines dan
digunakan untuk penentuan eugenol dalam ekstrak alkohol-air.
 KLASIFIKASI TANAMAN

Kingdom : Plantae
Divisio : Angiospermae
Sub divisio : Eudikotils
Kelas : Rosids
Ordo : Myrtales
Family : Myrtaceae
Genus : Syzygium
Spesies : Syzygium aromaticum
 ALAT DAN BAHAN

• Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah
alat-alat umum yang digunakan dalam laboratorium.
Selain itu digunakan alat khusus seperti blender,
destilasi, detektor Shimadzu, FID, filter 2 μm
syringe, injeksi split , kolom RTX-5, komputer LC,
oven, refluks.
• Bahan
Bahan yang digunakan, yaitu bubuk ekstrak
cengkeh, diphenyl, dimethylpolysiloxane, eugenol,
etanol dan nitrogen.
METODE KERJA
1. Ekstraksi sampel
- Persiapan ekstrak
- Persiapan larutan standar

2. Fraksinasi sampel

3. Analisis sampel
 Ekstraksi sampel

• Persiapan Ekstrak
Cengkeh dikumpulkan lalu dicuci dengan air dan dikeringkan. Setelah
kering, simplisia dihaluskan dengan menggunakan blender. Simplisia
cengkeh sebanyak 50 gram dimaserasi menggunakan refluks selama 2
jam pada suhu 80 ° C hingga 90 ° C. Pelarut dituang dan disaring
dengan kertas saring dan dilanjutkan menggunakan destilasi. Ekstrak
dikeringkan di bawah air mendidih masing-masing pada suhu 60 ° C
hingga 70 ° C.
• Persiapan Larutan Standar
Larutan stok standar eugenol (20mg / mL) dibuat dengan melarutkan
9,3 mL eugenol yang ditimbang dengan akurat dalam 99,9% etanol
dan volume dibuat hingga 10 mL. Dari larutan stok standar, diambil
200-1000 ng/mL lalu disiapkan untuk metode kromatografi gas cair.
 Fraksinasi sampel

Ditimbang 10 mg ekstrak etanol dan diukur air

cengkeh sebanyak 10 mL menggunakan labu ukur.
Dilarutkan dengan 99,9% metanol diikuti oleh
sonication selama 5 hingga 10 menit dan volume
dibuat menggunakan pelarut yang sama. Larutan
disaring menggunakan filter 2 µm syringe.
Diambil 1 ml larutan stok disuntikkan pada kepala
injektor. Konsentrasi ini digunakan untuk
memperkirakan eugenol dari ekstrak cengkeh.
 Analisis sampel

Kuantitas yang dibutuhkan dari ekstrak

ditimbang secara akurat dan dipindahkan ke
dalam labu ukur 10 mL, dilarutkan dalam
metanol dan disonikasi selama 5 menit.
Larutanya disaring dengan filter 2µm syringe.
Dari larutan sampel 1 μL disuntikkan pada
kepala injektor.
Gambar Kromatogram Larutan Eugenol Murni
Gambar Kromatogram Ekstrak Cengkeh
 Eugenol adalah produk volatil yang dipisahkan pada
waktu retensi 5.8 dalam kromatogram seperti yang ditunjukkan
pada Gambar 2, Itu dielusi menggunakan kolom GC kapiler,
yang memiliki puncak tunggal. Reaksi itu dilakukan
menggunakan metanol. Tanggapan GC yang lebih baik (rata-
rata tinggi puncak / puncak daerah) diamati.
Campuran reaksi disonikasi pada suhu kamar 30˚C
selama 5-10 menit dan respons optimalnya diamati dalam 10
menit. Kromatogram etanol dan ekstrak air ditunjukkan pada
Gambar 4 & Gambar 5. Kromatogram minyak cengkeh
ditunjukkan pada Gambar 6. Dari hasil kromatogram yang
diperoleh, karakteristik waktu retensi ditentukan untuk obat
sebagai dasar untuk identifikasi kualitatif. Dari kromatogram
kedua ekstrak tersebut, jelas bahwa ekstrak air cengkeh tidak
mengandung eugenol sedangkan ekstrak etanol cengkeh
mengandung eugenol.
 KESIMPULAN

Metode yang dikembangkan divalidasi sesuai

pedoman ICH dan ditemukan berada dalam
batas yang ditentukan. Hal ini menyimpulkan
bahwa metode yang dikembangkan sederhana,
akurat, sensitif dan tepat. Itu Metode ini sangat
cocok untuk analisis throughput yang tinggi
terhadap sampel botani dan formulasi herbal
yang mengandung eugenol.
 Daftar Pustaka
Day, R.A dan Underwood. 2010. Analisis Kimia
Kuantitatif Edisi VI. Erlangga : Jakarta.
Oxtoby, dkk. 2001. Prinsip-Prinsip Kimia Modern
Edisi IV. Erlangga : Jakarta.
Rubiyanto, D. 2016. Teknik Dasar Kromatografi.
Depublish : Yogyakarta.
Sruthi, dkk. 2014. Development and Validation GC
Method For The Estimation Of Eugenol In Clove
Extract. Academic Sciences. Vol. 6(2)