Bile esculin Uji

TUJUAN Untuk mengisolasi dan mengidentifikasi bakteri mampu menghidrolisis esculin di hadapan
empedu. Umumnya digunakan untuk identifikasi dugaan kelompok D streptococci dan
enterococci, yang semuanya positif. Grup D streptococci dan enterococci termasuk
patogen oportunistik seperti Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, dan
Bovis streptococcus.
Media PRINSIP empedu esculin mengandung esculin dan pepton untuk nutrisi dan empedu
menghambat bakteri Gram-positif selain Grup D streptokokus dan enterococci. Empedu
esculin azide agar menggunakan natrium azida untuk menghambat bakteri Gram-negatif, tapi kami
tidak
termasuk natrium azida karena masalah keamanan. Karena Anda akan menggunakan Gram terisolasi
kultur positif, itu tidak perlu. Ferri sitrat ditambahkan sebagai indikator warna.
Esculin adalah glikosida (molekul gula terikat oleh hubungan asetil ke
alkohol) terdiri dari glukosa dan esculetin. hubungan ini dengan mudah dihidrolisis
di bawah kondisi asam. Banyak bakteri dapat menghidrolisis esculin, tetapi hanya sedikit bisa
melakukannya di
kehadiran empedu.
Organisme yang membelah molekul esculin dan menggunakan glukosa dibebaskan untuk
kebutuhan pasokan energi melepaskan esculetin ke dalam media. The esculetin bebas bereaksi
dengan
sitrat besi dalam medium untuk membentuk kompleks besi fenolik, yang mengubah agar miring
coklat tua sampai hitam. Sebuah agar miring yang lebih dari setengah gelap setelah tidak lebih dari
Inkubasi 48 jam adalah empedu-esculin positif. Jika kurang dari setengah miring telah gelap, yang
Hasil negatif.

Pengakuan dan diferensiasi katalase-negatif, alpha-hemolitik dan nonhemolitik gram positif cocci
berpasangan dan rantai sebagai enterococci, kelompok D streptococci (mainlyStreptococcus bovis);.
Dan non-group D viridans streptococci kelompok yang penting secara klinis (10) bile- The tes esculin
secara luas digunakan untuk membedakan enterococci dan kelompok D streptococci, yang empedu
toleran dan dapat menghidrolisis esculin untuk esculetin, dari non-grup D viridans streptococci
kelompok, yang tumbuh buruk pada empedu. Pertama dijelaskan pada tahun 1926 oleh Meyer dan

Schonfeld (8) , uji empedu esculin-ditunjukkan oleh Facklam dan Moody (2, 3, 5) memiliki sensitivitas
100% dan spesifisitas 97% untuk mengidentifikasi enterococci dan kelompok D streptokokus. hasil ini
diperoleh dengan miring agar yang mengandung 4% oxgall (garam empedu), diinokulasi dengan 1
atau 2 tetes dari 24 jam Todd-Hewitt kedua budaya organisme ("hari berikutnya" inokulasi), dan
diinkubasi selama 48 jam. Di bakteriologi diagnostik rutin, protokol tersebut tidak praktis , karena
memerlukan 3 hari dari koloni waktu terdeteksi di piring primer. buku dan manual prosedur
merekomendasikan inokulasi agar slants langsung dari beberapa koloni ("hari yang sama" inokulasi)
bukan dari subkultur 24 jam dalam kaldu, Kebanyakan tapi data pendukung teknik alternatif ini
nonstandardized kurang.

Oleh karena itu, kami mengevaluasi sensitivitas dan spesifisitas uji empedu esculin-dengan dua
metode yang berbeda dari hari yang sama inokulasi (standar dan nonstandardized) dan dua kali
inkubasi yang berbeda (24 dan 48 jam). Kami juga dibandingkan esculin miring yang mengandung 2
dan 4% oxgall dalam formulasi saat ini tersedia dari dua sumber komersial utama di Amerika Serikat.

Katalase-negatif, gram-positif cocci berpasangan dan rantai membentuk alpha-hemolitik atau koloni
nonhemolitik pada 5% agar darah domba yang positif untuk PYR (Murex, Dartford, Inggris Raya) dan
tumbuh dalam kaldu kedelai tryptic mengandung 6,5% NaCl (Becton Dickinson sistem Mikrobiologi
[BDMS], Cockeysville, Md) diidentifikasi sebagai enterococci; .. mereka speciated dengan API cepat
Strep sistem (bioMerieux Vitek, Hazelwood, Mo) katalase-negatif, gram-positif cocci berpasangan
dan rantai membentuk alpha koloni -hemolytic atau nonhemolitik yang negatif untuk PYR, tidak
tumbuh di 6,5% NaCl, positif untuk kelompok D antigen oleh latex aglutinasi (Murex), dan memiliki
sugestif (90% probabilitas) biokimia pola oleh API sistem cepat Strep diidentifikasi sebagai S. bovis.
katalase-negatif, gram-positif cocci berpasangan dan rantai membentuk koloni alpha-hemolitik atau
nonhemolitik yang negatif untuk PYR dan kelompok D antigen (dan tidak larut dalam empedu jika
alpha-hemolytic) disebut kelompok viridans streptokokus.

Sebanyak 110 strain enterococcal (34 Enterococcus faecalis, 15 Enterococcus faecium, dan 61 strain
nonhemolitik dan nonspeciated), 30 S. strain bovis (2 alpha-hemolitik dan 28 strain non-hemolitik),
dan 110 non-group D viridans kelompok streptokokus strain (83 alpha-hemolitik dan 27 strain
nonhemolitik) diuji. strain diisolasi secara berurutan dari kultur darah dilakukan di Duke University
Medical Center selama periode 4 tahun, kecuali 19 S. bovisstrains yang diperoleh dari Mayo Clinic.

Segar bakteri (24 jam) diinokulasi pada tiga miring esculin agar berbeda mengandung baik tidak ada
empedu (BDMS), 2% oxgall (setara dengan 20% empedu) (BDMS), atau 4% oxgall (setara dengan
40% empedu) (Remel , Lenexa, Kans) Kecuali untuk oxgall, komposisi tiga media yang sama untuk
masing-masing media, dua teknik inokulasi berikut digunakan: ... (i) langsung, nonstandardized
inokulasi S berbentuk 1 sampai 10 koloni dan (ii) tidak langsung, inokulasi standar dari 10 ml
(dikalibrasi loop) dari 0,5 McFarland suspensi standar bakteri di dalam air deionisasi steril. Para
miring diinkubasi pada 35 C di udara ambien (2) dengan topi longgar selama 48 jam. Bacaan

diambil pada 24 dan 48 jam. reaksi dianggap positif ketika satu-setengah atau lebih dari media itu
menghitam (4).

Dengan satu pengecualian, semua 110 strain enterococcal memberikan yang jelas reaksi positif
setelah 24 dan 48 jam inkubasi (sensitivitas 99%). The inokulum standar (sekitar 106 CFU) adalah
sensitif seperti lebih berat, inokulum nonstandardized. Facklam dan Moody, menggunakan inokulum
dari 107-108 CFU pada miring agar, melaporkan sensitivitas 100% pada 48 jam tetapi menemukan 2
dari 76 (5) dan 6 dari 157 (3) strain enterococcal menjadi empedu-esculin negatif (98% sensitivitas)
setelah 24 jam inkubasi. Swan (13), dengan menggunakan inokulum nonstandardized digambarkan
sebagai berat serta piring agar-agar yang menghitam setiap dianggap hasil yang positif, memperoleh
sensitivitas 100% pada 24 jam dengan 121 strain enterococcal. Meskipun demikian, berdasarkan
pada publikasi Facklam, kebanyakan buku pelajaran dan manual prosedur merekomendasikan
inkubasi selama 48 jam sebelum melaporkan hasil negatif.

Semua 30 strain S. bovis positif pada 24 dan 48 jam tanpa konsentrasi empedu atau metode
inokulasi (sensitivitas 100%). Facklam (3) melaporkan sensitivitas 94 dan 100% pada 24 dan 48 jam,
masing-masing, dengan 37 grup D strain streptokokus.

Tabel 1 memberikan persentase tes empedu-esculin positif palsu untuk 110 non-grup D viridans
kelompok strain streptokokus. Kami menemukan bahwa kekhususan (100% minus persen false
positive) adalah maksimal (97%) dengan inokulum standar melesat di agar miring yang mengandung
4% oxgall dan dibaca setelah 24 jam. salah positif diperoleh dengan dua Streptococcus milleriand
satu Streptococcus lactis subsp. diacetylactisstrains. Kurangnya standarisasi inokulum, penurunan
konsentrasi oxgall 2%, dan perpanjangan waktu inkubasi 48 jam meningkatkan jumlah positif palsu
sampai maksimal 24%. dalam studi sebelumnya dengan agar esculin selektif yang mengandung
natrium azida dan hanya 10% empedu, reaksi positif dengan non-kelompok D viridans kelompok
streptokokus yang umum (6, 11, 12). Tidak ada data tentang penggunaan media yang mengandung
2% oxgall telah diterbitkan sebelumnya. hasil penelitian kami menunjukkan bahwa konsentrasi ini
suboptimal. menggunakan 4% oxgall, Swan (13) menemukan kelompok dua viridans empedu toleran
strain streptokokus dari 21 isolat; .. regangan tidak, bagaimanapun, esculin terhidrolisis pada 24 jam
Facklam et al melaporkan kekhususan dari 99% pada 24 jam (3) dan 81 (4) 97% (3) pada 48 jam
dengan 4% oxgall.

Lihat tabel ini:

Dalam jendela ini Di jendela baru
TABEL 1.
Reaksi positif palsu dari 110 non-grup D viridans kelompok strain streptokokus pada esculin miring
dengan 0, 20, dan 40% empedu

Perbedaan yang mencolok ditemukan ketika subkelompok dari alpha-hemolitik dan nonhemolitik
non-group D viridans streptococci kelompok dibandingkan untuk jumlah positif palsu. Untuk strain
alpha-hemolytic, angka ini adalah 0% setelah 24 jam dan 3% setelah 48 jam , sedangkan untuk strain
nonhemolitik itu 11% setelah 24 jam dan 33% setelah 48 jam, dengan 4% oxgall dan inokulum
standar. (P = 0,017 untuk nilai 24-jam, dua ekor uji eksak Fisher) observasi seperti itu belum telah
dilaporkan sebelumnya.

Untuk spesimen selain darah dan situs yang biasanya steril, flowchart berdasarkan uji empedu
esculin-dikombinasikan dengan 6,5% NaCl toleransi atau kehadiran PYR cukup untuk identifikasi
yang dapat diandalkan enterococci. Organisme empedu-esculin-positif dari darah dan tempat yang
biasanya steril harus menjadi speciated. Spesiasi enterococci berguna untuk alasan epidemiologi dan
karena E. faecium dan spesies lainnya cenderung lebih tahan terhadap antibiotik dari E. faecalis (8,
9). Sebuah ofs identifikasi definitif. bovis penting, karena organisme terkait dengan kanker kolon,
yang harus disingkirkan pada pasien tersebut (7). di sisi lain, positif palsu laporan OFS. bovis dapat
menyebabkan investigasi yang tidak perlu. Spesiasi organisme empedu-esculin positif juga akan
memungkinkan deteksi positif palsu non-group D viridans kelompok streptokokus. Terapi kesalahan
dapat terjadi dengan kesalahan identifikasi streptokokus dan enterococci (1). spesiasi rutin
organisme empedu-esculin negatif tidak diperlukan, karena enterococci dan kelompok D
streptococci jarang memberikan reaksi negatif palsu.

Kesimpulannya, uji empedu esculin-karya enterococci dan kelompok dengan baik untuk cepat
terpisah D streptococci dari non-grup D viridans streptococci grup dengan biaya rendah dan dengan
sensitivitas yang baik (> 99%) dan spesifisitas (97%), asalkan itu dilakukan pada agar miring yang
mengandung 40% empedu, dilakukan dengan inokulum standar (10 ml dari 0,5 McFarland standar
suspensi bakteri), dan membaca pada 24 jam.

Bile-Esculin Test for Presumptive Identification of

Enterococci and Streptococci: Effects of Bile
Concentration, Inoculation Technique, and Incubation
Time
1. C. Chuard1, and
2. L. B. Reller1,2,3,*

pengantar
Empedu esculin adalah selektif dan media diferensial. Ini berisi empedu (yang menghambat Grampositif
staphylococci) dan natrium azida (yang menghambat bakteri Gram-negatif). Ini berisi esculin dan
pepton sebagai

sumber nutrisi dan sitrat besi sebagai indikator warna.

Esculin adalah karbohidrat terkait dengan alkohol. Banyak organisme dapat menghidrolisis esculin
tapi sangat sedikit dapat melakukannya di
kehadiran empedu. Organisme yang memetabolisme esculin menghasilkan esculetin sebagai olehproduk. Esculetin bereaksi
dengan sitrat besi untuk membentuk gelap (hitam) warna.
hasil
+ = Positif (Setiap menghitam agar dalam waktu 72 jam)
- = Negatif (ada penghitaman agar dalam waktu 72 jam)
PERHATIAN: Tes ini harus diinkubasi tidak lebih dari 72 jam.
metode
1. Mendapatkan dua Bile esculin (BE) agar miring dari rak belakang.
2. Inokulasikan satu BE miring menggunakan teknik aseptik (menyuntik hanya permukaan miring).
Biarkan BE lain
miring diinokulasi (ini akan menjadi kontrol negatif).
3. Inkubasi pada suhu yang sesuai (suhu apapun organisme Anda tumbuh dengan baik di). Inkubasi
selama 24 sampai 48 jam (tidak melebihi 72 jam untuk tes ini).
4. Mendapatkan miring BE Anda dari inkubator dan mengamati warna pada foto di bawah ini