LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA ORGANIK (KI2051)

PERCOBAAN 8 & 9

UJI TRITERPEN & STEROID DAN UJI ALKALOID

Nama

: Bunga Indraswari Sekaton

NIM

: 10614047

Kelompok

:5

Tanggal Percobaan

: 22 Oktober 2015

Asisten

: Riga / 20515005

LABORATORIUM KIMIA ORGANIK

PROGAM STUDI KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG
2015

PERCOBAAN 8
UJI TRITERPEN DAN STEROID

I.

TUJUAN
1. Menentukan keberadaan senyawa triterpen dan steroid pada daun
tanaman tapak dara (Catharanthus roseus) dengan uji LiebermanBurchard.
2. Menentukan keberadaan senyawa triterpen dan steroid pada daun
tanaman tapak dara (Catharanthus roseus) dengan uji busa.
3. Menentukan kemurnian senyawa triterpen dan steroid pada daun
tanaman tapak dara (Catharanthus roseus) dengan uji Kromatorgrafi
Lapis Tipis (KLT) dengan berdasarkan nilai Rf noda.

II.

DATA PENGAMATAN

2.1.

Sampel
Sampel 1

Tapak Dara

Klasifikasi ilmiah
Kerajaan

Plantae

Divisi

Magnoliophyta

Kelas

Magnoliopsida

Ordo

Gentianales

Famili

Apocynaceae

Genus

Catharanthus

Spesies

Catharanthus roseus

Sampel 2

Dadap Merah

Klasifikasi ilmiah
Kerajaan

Plantae

Divisi

Magnoliophyta

2.1.

Kelas

Magnoliopsida

Ordo

Fabales

Famili

Fabaceae

Genus

Erythrina

Spesies

Erythrina variegata

Uji Liebermann-Burchard
Tabel 2.1. Data Pengamatan Uji Liebermann-Burchard Pada Daun Tapak Dara

No

Sampel

Ekstrak

Pengamatan
kering

daun Setelah

tapak dara

Foto

ditambahkan

anhidrida asetat, diaduk

kemudian ditambahkan
asam

sulfat

pekat,

warna larutan awalnya

kuning

dan

setelah

beberapa menit warna

larutan berubah menjadi
warna hijau gelap
2

Ekstrak

kering

daun

dadap merah

2.2.

Uji Busa
Tabel 2.2 Data Pengamatan Uji Busa pada Daun Tapak Dara

No

Sampel

Pengamatan

Foto

Ekstrak daun tapak dara Setelah ditambahkan air

yang tidak larut dalam 5 mL, pengamatan awal
eter

tidak

terdapat

Setelah

pengocokan

terdapat

busa

permukaan (+)
2

Ekstrak

daun

dadap

busa.

pada

merah yang tidak larut

dalam eter

2.3.

Analisis KLT

III. PEMBAHASAN

Uji millon adalah sebuah uji menggunakan reagen millon yang merupakan
sebuah reagen yang digunakan untuk mendeteksi adanya protein terlarut.. hasil
positifnya berupa perubahan warna menjadi jingga-merah yang terbentuk saat
pemanasan, yang mengindikasikan adanya tyrosine, yakni asam amino yang
terdapat pada semua protein pada umumnya. Reagen millon adalah larutan
yang terdiri dari mercury nitrates (III) dan (V) di dalam nitric acid.
Nitrophenols, terbentuk dari reaksi tyrosine oleh nitric acid (V), dimana akan
membentuk komplek jingga-merah dengan mercury. Prinsip reaksi yang terjadi
adalah sebagai berikut:

Gambar 3.1 Prinsip reaksi pada uji Millon (www.edubio.info)

Hasil pada percobaan menunjukkan sampel kasein baik pada wujud cair
maupun kasein serbuk yang diencerkan dengan akuades ketika diberikan uji
millon terjadi endapan dengan warna jingga pada larutan. Hal ini
mengindikasikan adanya protein terlarut pada kasein.
Uji ninhidrin adalah sebuah reaksi kimia yang dilakukan untuk mendeteksi
keberadaan asam amino. Ninhydrin (triketohydrindene hydrate) adalah sebuah
oxidating agent yang akan melakukan oxidative deamination pada gugus
alpha-amino. Ketika ninhidrin bereaksi dengan asam amino, akan terbentuk
CO2 dimana menyebabkan hasil positif berupa warna biru atau ungu. Asam

amino berupa proline dan hydroxyproline juga bereaksi terhadap reagen

ninhidrin, namun menghasilkan kompleks kuning. Reaksi yang terjadi adalah
sebagai berikut:

Gambar 3.2 Reaksi pada uji ninhidrin (vlab.amrita.edu)

Hasil dari percobaan menunjukkan adanya kompleks biru tua keunguan yang
terbentuk. Hal ini menyatakan adanya asam amino (kecuali asam amino proline
dan hydroxyproline) baik pada kasein maupun glisin.
Uji sulfur adalah salah satu uji untuk menentukan keberadaan sulfur atau
belerang pada asam amino dengan atom sulfur, misalnya sistein dan methionin.
Pada uji ini dalam suasana basa, Pb asetat akan bereaksi dengan sulfur dari
asam amino membentuk garam PbS yang akan menghasilkan kompleks hitam.
Penambahan NaOH berfungsi untuk mendenaturasi protein yang akan
mengakibatkan ikatan pada atom S yang terputus. Reaksi yang terjadi adalah
sebagai berikut:

Gambar 3.3. Reaksi pada uji sulfur (Dokumentasi pribadi, 2015)

Hasil dari pengamatan diperoleh bahwa kasein hanya berwarna keruh

sedangkan sistein terdapat endapan hitam. Hal ini mengindikasikan bahwa
sistein mengandung atom sulfur sedangkan kasein tidak mengandung asam
amino yang memiliki atom sulfur.

Reaksi asam nitrit dengan glisin akan menghasilkan gas nitrogen (N2) dan
asam karboksilat. Keberadaan gas nitrogen ini ditandai dengan larutan yang
berubah warna menjadi biru muda. HCl yang ditambahkan pada reaksi ini akan
bereaksi dengan asam amino membentuk senyawa lain, dan muncullah warna
biru muda ini. HCl murni saja yang direaksikan dengan asam nitrit hanya
membuat sedikit gelembung dan larutan berwarna bening. Reaksi ini bertujuan
untuk mengetahui keberadaan gugus amina bebas pada asam amino dan protein
yang ditandai dengan terbentuknya gas nitrogen dan reaksinya menunjukkan
adanya amina primer pada pengujian protein. Reaksi yang terjadi adalah
sebagai berikut:

Gambar 3.4 Reaksi glisin dengan asam nitrit (harpercollege.edu)

Reaksi antara kasein dan asam nitrit akan menghasilkan endapan putih yang
mengindikasikan tidak ada reaksi yang terjadi.
Uji biuret adalah sebuah tes kimia yang dilakukan untuk mendeteksi
adanya ikatan peptida. Reaktan NaOH disini berfungsi untuk memutuskan
ikatan peptida untuk membentuk kompleks ungu. Dan ion copper(II) dari
penambahan CuSO4 akan bereaksi dengan adanya peptida membentuk
kompleks ungu. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

Gambar 3.5 Reaksi pada uji biuret (uwplatt.edu)

Uji xanthoproteat digunakan untuk menentukan keberadaan tyrosine,

trypthopane, dan phenylalanine pada protein. Hasil tes positif akan muncul

pada protein dengan asam amino yang membawa gugus aromatik, khususnya
tyrosine. Gugus aromatic pada asam amino akan dinitrasi oleh HNO3. Derivat
nitro ini akan menghasilkan warna kuning-jingga. Reaksi adisi dari nitric acid
ini umumnya sebagai tanda adanya tyrosine atau tryptophan pada protein.
Penambahan basa kuat berupa NaOH akan membuat kompleks warna yang
dihasilkan menjadi tua mendekati jingga. Reaksi yang terjadi pada uji ini
adalah sebagai berikut:

Gambar 3.6 Reaksi pada uji xanthoproteat (uwplatt.edu)

Uji molisch adalah uji kimia yang digunakan untuk menunjukkan

keberadaan karbohidrat. Semua jenis karbohidrat (monosakarida, disakarida,
oligosakarida, dan polisakarida) akan menunjukkan hasil positif dengan uji ini.
Reagen molisch yang digunakan pada praktikum ini adalah naftal. H2SO4
yang turut ditambahkan pada uji ini yang menyebabkan terjadinya dehydration
pada sampel (gula) dari pentosa menjadi bentuk furfural, seperti yang
ditunjukkan pada gambar dibawah:

Gambar 3.7. Dehydration pada sampel (gula) dari pentosa/hexosa menjadi bentuk furfural
(harpercollege.edu)

Selanjutnya bentuk furfural ini akan bereaksi dengan naftal yang ada pada
reagen uji untuk membentuk kompleks ungu. Hasil pengamatan menunjukkan
semua sampel adalah senyawa karbohidrat.
Uji benedict akan menghasilkan hasil positif pada gula pereduksi.
Komposisi pereaksi benedict adalah Na-sitrat, Na2CO3 anhidrat, CuSO4 dan air.
Gula pereduksi akan teroksidasi oleh ion Cu di larutan reagen untuk
membentuk asam karboksilat dan kompleks merah copper (I) oxide, seperti
reaksi di bawah ini:

Gambar 3.8 Reaksi pada uji benedict (harpercollege.edu)

Hasil pengamatan menunjukkan bahwa sukrosa bukanlah gula pereduksi

karena tidak adanya kompleks merah yang terbentuk dari hasil uji ini.
Uji barfoed menyatakan hasil positif pada gula monosakarida pereduksi.
Reagen barfoed terdiri dari copper acetate dan acetic acid. Monosakarida
pereduksi akan teroksidasi oleh ion Cu di larutan membentuk asam karboksilat
dan kompleks merah copper (I) oxide selama kurang lebih 3 menit. Disakarida
pereduksi juga mengalami reaksi yang sama hanya saja dengan laju reaksi yang
lebih lambat. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

Gambar 3.9 Reaksi pada uji barfoed (harpercollege.edu)

Hasil dari pengamatan menunjukkan fruktosa dan glukosa merupakan gula

monosakarida pereduksi dengan ditandai munculnya endapan merah bata.
Pada uji hidrolisis gula, HCl pekat bertindak sebagai asam yang akan
menghidrolisis

sampel

gula

(disakarida

dan

monosakarida)

menjadi

monosakarida penyusunnya. Sedangkan tes tape dilakukan untuk menguji

kandungan glukosa. Tape ini mengandung enzim glukosa oksidase dan
peroksidase, dan orto-toluidin. Glukosa oksidase mengoksidasi glukosa
menjadi asam glukonat dan hidrogen peroksida. Lalu hidrogen peroksida akan

bereaksi dengan peroksidase menghasilkan oksigen yang mengoksidasi ortotoluidin menghasilkan larutan berwarna hijau. Sedangkan larutan NaOH
digunakan sebagai penetralan larutan apabila masih terlalu asam.

IV. KESIMPULAN

Dari hasil pengamatan dapat ditarik sebuah kesimpulan bahwa:

Kasein memiliki kandungan asam amino tyrosine

Glisin dan kasein mengandung asam amino (kecuali asam amino

proline dan hydroxyproline)

Sistein memiliki unsur belerang (S).

Glisin memiliki gugus amina bebas

Kasein mengandung gugus aromatik

Glukosa, fruktosa, maltosa, laktosa dan sukrosa merupakan

senyawa karbohidrat

Glukosa, fruktosa, maltosa dan laktosa adalah gula pereduksi. Gula

pereduksi dapat dideteksi dengan uji benedict.

Glukosa dan fruktosa adalah monosakarida pereduksi sedangkan

laktosa, maltosa dan sukrosa adalah disakarida pereduksi

Kandungan glukosa pada:

sukrosa: 2000 mg/dL
laktosa: 100 mg/dL
maltosa: 250 mg/dL
kanji: 0

V. DAFTAR PUSTAKA
Arthur, W. Devor, J. 1950. Carbohydrate Tests Using Sulfonated Naphthol. Chem. Soc. , 1950, 72 (5), pp 20082012.
Boyer, R. 2000. Modern Experimental Biochemistry, 3rd ed. California:
Addison Wesley Longman, Inc.
Cooper, A. J. L. 1983. Biochemistry of Sulfur-Containing Amino Acids.
Annual Review of Biochemistry. Vol. 52: 187-222
Gornall, G., Bardawill, C., & David, M. 1949. Determination of Serum
Proteins by means of the Biuret Reaction. J. Biol. Chem., 177, 751-766.
Helmpkamp, G. K., Johnson, Jr., H. W. 1964. Selected Experiments in
Organic Chemistry. San Francisco: H. Freeman and Company. p. 128.
Karl H. Van Norman. 1909. The Biuret Reaction and the Cold Nitric Acid
Test in the Recognition of Protein. Biochem J. 1909; 4(3-4): 127135.
Wilcox, C. F., Wilcox, M. F. 1998. Experimental Organic Chemistry: A
Small Scale Approach. New York: Prentice Hall. P. 506