Anda di halaman 1dari 30

LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI “PEMBUATAN MEDIA KULTUR JARINGAN”

Disusun Oleh :
Disusun Oleh :

Nama

: Frelyta A. Z.

NIM

: 115040201111290

Kelompok

: Selasa, (06.00 WIB)

Asisten

: Dita Pahlevi

PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG

2012

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kultur jaringan tanaman merupakan bagian suatu teknik perbanyakan vegetatif nonkonvensional. Perbedaan teknik ini dibandingkan dengan teknik perbanyakan vegetative konvensional biasanya terletak dalam situasi dan lokasi yang berbeda. Penerapan teknikkultur jaringan tanaman mensyaratkan kondisi di dalam ruangan (laboratorium) dan sifatnya aseptik (steril dari patogen).

Media merupakan faktor utama dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Keberhasilan perbanyakan dan perkembangbiakan tanaman dengan metode kultur jaringan secara umum sangat tergantung pada jenis media. Media tumbuh pada kultur jaringan sangat besar pengaruhnya terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan serta bibit yang dihasilkannya. Oleh karena itu, berbagai komposisi media kultur telah diformulasikan untuk mengoptimalkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman yang dikulturkan.

1.2 Tujuan Tujuan dari praktikum ini adalah sebagai berikut :

Untuk mengetahui jenis jenis media kultur jaringan dan

aplikasi penggunannya

Untuk mengetahui komposisi dan unsur dalam media MS

Untuk mengetahui teknik teknik aseptic pembuatan media

Untuk mengetahui dan memahami rumus perhitungan larutan stok

1.3 Manfaat

Manfaat yang dapat diperoleh dari praktikum ini adalah sebagai berikut :

Agar memahami jenis-jenis media pada kultur jaringan.

Agar memahami Komposisi dan Fungsi Unsur Dalam media MS

Agar mengetahui teknik-teknik aseptik dalam pembuatan mediaRumus perhitungan larutan stok

.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Jenis-jenis Media Kutur Jaringan serta Aplikasi Kegunaannya

Formulasi

media

kultur

jaringan

pertama

kali

dibuat

berdasarkan

komposisi

larutan

yang

digunakan

untuk

hidroponik,

khususnya

komposisi

unsur-unsur

makronya.

Unsur-unsur

hara

diberikan

dalam

bentuk

garam-garam

anorganik.

Beberapa media dasar yang banyak digunakan antara lain:

a) Media Knop

Dapat juga digunakan untuk menumbuhkan kalus wortel. Kultur kalus, biasanya ditumbuhkan pada media dengan kosentrasi garam-garam yang rendah seperti dalam kultur akar dengan penambahan suplemen seperti glucosa, gelatine, thiamine, cysteine-HCl dan IAA.

b) Media White

Dikembangkan oleh Hildebrant untuk keperluan kultur jaringan tumor bunga matahari, ditemukan bahwa unsur makro yang dibutuhkan kultur tersebut, lebih tinggi dari pada yang dibutuhkan oleh kultur tembakau. Unsur F, Ca, Hg dan S pada media untuk tumor bunga matahari ini, sama dengan media untuk jaringan normal yang dikembangkan kemudian. Konsentrasi NO3- dan K+ yang digunakan Hildebrant ini lebih tinggi dari media white, tetapi masih lebih rendah dari pada media-media lain yang umum digunakan sekarang.

c)

Media Knudson dan media Vacin and Went

Media ini dikembangkan khusus untuk kultur anggrek. Tanaman yang ditanam di kebun dapat tumbuh dengan baik dengan pemupukan yang hanya mengandung N dari Nitrat. Knudson pada tahun 1922, menemukan penambahan 7.6 mM NH4+ disamping 8.5 mM NO3-, sangat baik untuk perkencambahan dan pertumbuhan biji anggrek. Penambahan NH4+ ternyata dibutuhkan untuk perkembangan protocorm. Media Nitsch & Nitsch, menggunakan NO3- dan K+ dengan kadar yang cukup tinggi untuk mengkulturkan jaringan tanaman artichoke Jerussalem. Penambahan ammonium khlorida sebanyak 0.1 mM, menghasilkan pertumbuhan jaringan yang menurun. Pertumbuhan sel dari jaringan suatu organ dibandingkan dengan jaringan tumor tanaman Venca rosea (Catharanthus roseus), menunjukkan bahwa penambahan ammonium ke dalam media White yang sudah dimodifikasi, mempunyai pertumbuhan yang lebih baik. Konsentrasi NO3-, NH4-, K+ dan H2PO4- yang diperoleh, hampir sama dengan yang dikembangkan oleh Miller.

d) Media Murashige & Skoog (media MS)

Merupakan perbaikan komposisi media Skoog, terutama kebutuhan garam anorganik yang mendukung pertumbuhan optimum pada kultur jaringan tembakau. Media MS mengandung 40 mM N dalam bentuk NO3 dan 29 mM N dalam bentuk NH4+. Kandungan N ini, lima kali lebih tinggi dari N total yang terdapat pada media Miller, 15 kali lebih tinggi dari media tembakau Hildebrant, dan 19 kali lebih tinggi dari media White. Kalium juga ditingkatkan sampai 20 mM, sedangkan P, 1.25 mM. Unsur makro lainnya konsentrasinya dinaikkan sedikit. Pertama kali unsur-unsur makro dalam media MS dibuat untuk kultur kalus tembakau, tetapi komposisi MS ini sudah umum digunakan untuk kultur jaringan jenis tanaman lain.

Media MS paling banyak digunakan untuk berbagai tujuan kultur pada tahun-tahun sesudah penemuan media MS, sehingga dikembangkan media-media lain berdasarkan media MS tersebut, antara lain media :

1. Lin & Staba, menggunakan media dengan setengah dari komposisi unsur makro MS, dan memodifikasi : 9 mM ammonium nitrat yang seharusnya 10mM, sedangkan KH2 PO4 yang dikurangi menjadi 0.5 Mm, tidak 0.625 mM. Larutan senyawa makro dari media Lin & Staba, kemudian digunakan oleh Halperin untuk penelitian embryogenesis kultur jaringan wortel dan juga digunakan oleh Bourgin & Nitsch (1967 dalam Gunawan 1988) serta Nitsch & Nitsch (1969 dalam Gunawan 1988) dalam penelitian kultur anther.

2. Modifikasi media MS yang lain dibuat oleh Durzan et alI

(1973 dalam Gunawan 1988) untuk kultur suspensi sel white spruce dengan cara mengurangi konsentrasi K+ dan NO3-, dan

menambah konsentrasi Ca2+ nya.

3. Chaturvedi et al (1978) mengubah media MS dengan menurunkan konsentrasi NO3-, K+, Ca2+, Mg2+ dan SO4-2 untuk keperluan kultur pucuk Bougainvillea glabra.

4. Senyawa-senyawa di dalam media MS dapat terjadi

pengendapan persenyawaan, ini terlihat jelas pada media cair.

Kebanyakan dari persenyawaan yang mengendap adalah fosfat dan besi, kemudian dalam jumlah yang lebih sedikit adalah Ca, K, N, Zn dan Mn. Senyawa paling sedikit adalah senyawa yang mengandung unsur C, Mg, H, Si, Mo, S, Ca dan Co. Setelah tujuh hari dibiarkan, maka kira-kira 50% dari Fe dan 13% dari PO4+, mengendap (Dalton et al, 1983). Pengendapan unsur- unsur tersebut mungkin tidak penting, karena unsur-unsur tersebut masih tersedia bagi jaringan tanaman dan pengaruh

pengendapannya belum diketahui. Untuk mengatasi pengendapan Fe, Dalton dan grupnya menganjurkan supaya konsentrasi Fe dikurangi sampai 1/3 dengan EDTA yang tetap.

5.Media Gamborg B5 (media B5)

Pertama kali dikembangkan untuk kultur kalus kedelai dengan konsentrasi nitrat dan amonium lebih rendah dibandingkan media MS. Untuk selanjutnya media B5 dikembangkan untuk

kultur kalus dan suspensi, serta sangat baik sebagai media dasar

untuk meregenerasi seluruh bagian tanaman

media B5 juga digunakan untuk kultur-kultur lain. Media ini dikembangkan dari komposisi PRL-4, media ini menggunakan konsentrasi NH4+ yang rendah, karena konsentrasi yang lebih tinggi dari 2 mM menghambat pertumbuhan sel kedelai. Fosfat yang diberikan setelah 1 mM, Ca2+ antara 1-4 mM, sedangkan Mg2+ antara 0.5-3 mM (Gamborg et al, 1968).

Pada masa ini

6.Media Schenk & Hildebrant (media SH)

Merupakan media yang juga cukup terkenal, untuk kultur kalus tanaman monokotil dan dikotil. Konsentrasi ion-ion dalam komposisi media SH sangat mirip dengan komposisi pada media Gamborg dengan perbedaan kecil yaitu level Ca2+, Mg2+, dan PO4-3 yang lebih tinggi. Schenk & Hildebrant mempelajari pertumbuhan jaringan dari 37 jenis tanaman dalam media SH dan mendapatkan bahwa: 32 % dari spesies yang dicobakan, tumbuh dengan sangat baik, 19% baik, 30% sedang, 14% kurang baik, dan 5% buruk pertumbuhannya. Tetapi karena zat tumbuh yang diberikan pada tiap jenis tanaman tersebut berbeda. Media SH ini cukup luas penggunaannya, terutama untuk tanaman legume.

7.Media WPM (Woody Plant Medium)

Yang dikembangkan oleh Lioyd & Mc Coen pada tahun 1981, merupakan media dengan konsentrasi ion yang lebih rendah dari media MS. Media diperuntukkan khusus tanaman berkayu, dan dikembangkan oleh ahli lain, tetapi sulfat yang digunakan lebih tinggi dari sulfat pada media WPM. Saat ini WPM banyak digunakan untuk perbanyakan tanaman hias berperawakan perdu dan pohon-pohon.

8.Media N6

Media N6 mempunyai ciri perbandingan NH₄⁺ dan NO₃⁻ yang jauh perbandinganya. Amonium yang diberikan dalam bentuk (NH)SOhanya sebanyak 363 mg/l, sedangkan KNO2830 mg/l. (Suryowinoto, M. 1991)

2.2 Komposisi dan Fungsi Unsur Dalam Media MS (Murashige & Skogg)

Media Murashige & Skoog (MS) merupakan perbaikan komposisi media Skoog, terutama kebutuhan garam anorganik yang mendukung pertumbuhan optimum pada kultur jaringan tembakau. Media MS mengandung 40 mM N dalam bentuk NO3 dan 29 mM N dalam bentuk NH4+. Kandungan N ini, lima kali lebih tinggi dari N total yang terdapat pada media Miller, 15 kali lebih tinggi dari media tembakau Hildebrant, dan 19 kali lebih tinggi dari media White. Kalium juga ditingkatkan sampai 20 mM, sedangkan P, 1.25 mM. Unsur makro lainnya konsentrasinya dinaikkan sedikit. Pertama kali unsur-unsur makro dalam media MS dibuat untuk kultur kalus tembakau, tetapi komposisi MS ini sudah umum digunakan untuk kultur jaringan jenis tanaman lain. (Madigan, M.T.2003).

Media MS paling banyak digunakan untuk berbagai tujuan kultur pada tahun-tahun sesudah penemuan media MS, sehingga dikembangkan media-media lain berdasarkan media MS tersebut, antara lain media Lin & Staba, menggunakan media dengan setengah dari komposisi unsur makro MS, dan memodifikasi : 9 mM ammonium nitrat yang seharusnya 10mM, sedangkan KH2 PO4 yang dikurangi menjadi 0.5 Mm, tidak 0.625 mM. (Hendaryono dan Wijayani, 1994).

Adapun kompisisi medium kultur jaringan tanaman adalah sebagai berikut:

1) Air

Air merupakan komponen yang penting di dalam pengkulturan eksplan karena 95% dari medium mengandung air. Untuk tujuan penelitian, digunakan air destilasi, dan untuk penelitian dengan materi eksplan dari protoplas, meristem dan sel sebaiknya digunakan aquabides . Dimana air destilasi (air suling) tersebut telah steril dari kontaminasi mikroorganisme atau substansi yang dapat merusak proses perkembangan eksplan (Madigan,

M.T.2003).

2) Larutan Garam Anorganik

Tiap tanaman memerlukan setidaknya 6 elemen makronutrien, yaitu unsur yang diperlukan dalam jumlah besar meliputi N, K, Mg, Ca, S, P dan 7 elemen mikronutrien, yaitu unsur yang diperlukan dalam jumlah kecil meliputi Fe, Mn, B, Mo, Cl (Wetherell, 1976). Unsur-unsur makro biasanya diberikan dalam bentuk NH4NO3, KNO3, CaCl2.2H2O, MgSO4.7H2O dan KH2PO4, sedangkan unsur mikro biasanya diberikan dalam bentuk MnSO4.4H2O, ZnSO4.4H2O, H3BO3, KI, Na2MoO4. 2H2O5,CuSO4.5H2O dan CoCl2.6H2O.

(Hendaryono dan Wijayani, 1994).

pereduksi yang berfungsi mereduksi indikator-indikator seperti ion kupri (Cu2+) menjadi bentuk kupro (Cu+) yang bermanfaat pada perkembangan dan perbaikan . Vitamin adalah bahan yang perlu ditambahkan dalam medium kultur in vitro, sebab sel bagian tanaman yang dikulturkan secara in vitro belum mampu membuat vitamin sendiri untuk kehidupannya. Vitamin yang sering ditambahkan ke dalam medium adalah tiamin (vitamin B1), asam nikotinat (niasin), piridoksin (vitamin B6).

(Indra.2008).

3) Zat-zat organik

Senyawa kimia organik yang biasa dipakai sebagai sumber energi dalam kultur in vitro adalah karbohidrat. Karbohidrat tersusun atas unsur-unsur C, H, O sebagai elemen penyusun utama. Bahan-bahan organik yang termasuk karbohidrat meliputi gula, pati dan selulosa. Karbohidrat mempunyai dua fungsi utama yaitu sebagai sumber energi untuk jaringan dan untuk keseimbangan tekanan osmotik dalam medium. Karbohidrat yang sering digunakan adalah sukrosa meskipun kadang-kadang diganti dengan glukosa dan fruktosa dapat digunakan tetapi harganya lebih mahal hasilnya tidak selalu lebih baik daripada sukrosa. Konsentrasi sukrosa yang digunakan berkisar 1 5% (10 - 15 g/l), tetapi untuk kebanyakan pengkulturan konsentrasi optimum sukrosa adalah 2 - 3%. Sedangkan kadar sukrosa untuk keperluan pengkulturan berkisar antara 2 - 4%. Dan kadar sukrosa yang digunakan sebagai sumber energi untuk menginduksi pertumbuhan eksplan dalam medium adalah 2 - 7%. Hendaryanto menyatakan bahwa sukrosa bersifat labil terhadap suhu tinggi sehingga apabila disterilkan dalam autoklaf bersama-sama zat lain akan mengakibatkan penguraian sukrosa menjadi kombinasi antara

sukrosa, D-glukosa, dan D-fruktosa. Keuntungan dari penguraian ini adalah terbentuknya aldosa (D-glukosa) dan ketosa (D-fruktosa) yang melimpah ruah. (Hendaryono dan Wijayani, 1994).

Jadi apabila disimpulkan menjadi seperti berikut :

1. UnsurMakro

 : 14,85 g NH 4 NO 3  KNO 3 : 17,1 g Sebagaipembuat
 : 14,85 g
NH 4 NO 3
 KNO 3
: 17,1
g
Sebagaipembuat 300 ml
 MgSO 4 7H 2 O
: 3,33
g
media kulturlarutanmakro
 KH 2 PO 4
: 1,53
g
 CaCl 2 2H 2 O
: 3,96
g
Untukmedaikultur (3 ml)
2. UnsurMikro A
 H 3 BO 3
: 0,038
g
 MnSO 4 4H 2 O
: 0,2007 g
media kulturdiambil 3 ml
 ZnSO 4 7H 2 O
: 0,0774 g
Untukpembuatan 300 ml
3. UnsurMikro B
 KI
: 0,083 g
 Na 2 MoO 4 7H 2 O : 0,025 g
Untukpembuatan 300 ml
CuSO 4 5H 2 O
CoCl6H 2 O
: 0,0025 g
: 0,0025 g
diambillarutan 0,3 ml
4. FeEDTA
 FeSO 4 7H 2 O
: 2,503 g
 Na 2 EDTA
: 3,357 g
Untukpembuatan 300 ml
diambillarutan 3 ml

5. Vitamin

TiaminHCl

: 0,001 g

PeridoksinHCl : 0,005 g

AsamNikotinat : 0,005 g

Olycine

: 0,02

g

Untukpembuatan 300ml: 0,005 g  AsamNikotinat : 0,005 g  Olycine : 0,02 g (Anonymous a ,

(Anonymous a , 2012)

diambil 0,3 larutan vitamin

2.3 Teknik-teknik Aseptis Dalam Pembuatan Media Kultur Jaringan

Tahapan yang dilakukan dalam perbanyakan tanaman dengan teknik kultur jaringan adalah:

1)

2) Inisiasi

3) Sterilisasi

4) Multiplikasi

5) Pengakaran

6) Aklimatisasi

Pembuatan media

Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral, vitamin, dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula, dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga bervariasi, baik jenisnya maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara memanaskannya dengan autoklaf.

Inisiasi adalah pengambilan eksplan dari bagian tanaman yang akan dikulturkan. Bagian tanaman yang sering digunakan untuk kegiatan kultur jaringan adalah tunas.

Sterilisasi adalah bahwa segala kegiatan dalam kultur jaringan harus dilakukan di tempat yang steril, yaitu di laminar flow dan menggunakan alat-alat yang juga steril. Sterilisasi juga dilakukan terhadap peralatan, yaitu menggunakan etanol yang disemprotkan secara merata pada peralatan yang digunakan. Teknisi yang melakukan kultur jaringan juga harus steril.

Multiplikasi adalah kegiatan memperbanyak calon tanaman dengan menanam eksplan pada media. Kegiatan

ini dilakukan di laminar flow untuk menghindari adanya kontaminasi yang menyebabkan gagalnya pertumbuhan eksplan. Tabung reaksi yang telah ditanami ekplan diletakkan pada rak-rak dan ditempatkan di tempat yang steril dengan suhu kamar. Pengakaran adalah fase dimana eksplan akan menunjukkan adanya pertumbuhan akar yang menandai bahwa proses kultur jaringan yang dilakukan mulai berjalan dengan baik. Pengamatan dilakukan setiap hari untuk melihat pertumbuhan dan perkembangan akar serta untuk melihat adanya kontaminasi oleh bakteri ataupun jamur. Eksplan yang terkontaminasi akan menunjukkan gejala seperti berwarna putih atau biru (disebabkan jamur) atau busuk (disebabkan bakteri). Aklimatisasi adalah kegiatan memindahkan eksplan keluar dari ruangan aseptic ke bedeng. Pemindahan dilakukan secara hati-hati dan bertahap, yaitu dengan memberikan sungkup. Sungkup digunakan untuk melindungi bibit dari udara luar dan serangan hama penyakit karena bibit hasil kultur jaringan sangat rentan terhadap serangan hama penyakit dan udara luar. Setelah bibit mampu beradaptasi dengan lingkungan barunya maka secara bertahap sungkup dilepaskan dan pemeliharaan bibit dilakukan dengan cara yang sama dengan pemeliharaan bibit generatif. Keunggulan inilah yang menarik bagi produsen bibit untuk mulai mengembangkan usaha kultur jaringan ini. Saat ini sudah terdapat beberapa tanaman kehutanan yang dikembangbiakkan dengan teknik kultur jaringan, antara lain adalah: jati, sengon, akasia, dll. Bibit hasil kultur jaringan yang ditanam di beberapa areal menunjukkan pertumbuhan yang baik, bahkan jati hasil kultur jaringan yang sering disebut dengan jati emas dapat dipanen dalam jangka waktu yang relatif lebih pendek dibandingkan dengan tanaman jati yang berasal dari benih generatif, terlepas dari kualitas kayunya yang belum teruji di Indonesia. (Machmud, M. 2008)

2.4 Rumus Perhitungan Larutan Stok

Volume stok untuk setiap pembuatan media q liter.

V1 X M1 = V2 x M2

Ket:

V1 = Volume stok yang dicari.

V2 = Volume larutan stok

M1 = Konsentrasi larutan stok

M2 = Konsentrasi yang diinginkan.

(Hemawan dan Na”em, 2006)

BAB III

METODOLOGI

3.1 Alat, Bahan dan Fungsi

3.1.1 Alat

1. 4 botol kultur media kultur

:

berfungsi sebagai tempat

2. 1 pak karet gelang

:

berfungsi untuk penutup

atau tali penutup plastik dan alumunium

3. Plastik tahan tanas (untuk 8 botol, dengan ukuran pxl;

: sebagai penutup botol

12 x 13 cm)

kultur (perlakuan a)

4. Gelas ukur : untuk mengukur cairan yang di butuhkan

5. Mikro pipet : untuk mengambil larutan

6.

stok dengan ukuran terkecil mikro meter

Beaker glass

larutan stok

:

untuk tempat pembuatan

7. pH universal (indikator pH) : untuk mengukur pH larutan

8.

9. microwave : untuk memasak larutan hingga larutan mengental

10. alumanium foil (unutk 6 botol, dengan ukuran pxl; 24 x

sitter

: megaduk larutan

15, kertas di lipat/rangkap) kultur (perlakuan b)

:

sebagai penutup botol

11. autoclave

:

sterilisasi botol kultur

sebelum di masukkan ke ruangan pengamatan

12. Timbangan analitik : untuk menimbang berat bahan yang diperlukan

13. Oven

kultur

3.1.2 Bahan

:

sterilisasi

kering

botol

Aquades

: 50 ml (bahan tambahan pada larutan stok)

Makro

: 30 ml

Mikro A

: 3 ml

Mikro B

: 0,3 ml sebagai bahan

FeEDTA

: 3 ml pembuatan larutan stok

Vitamin

: 0,3 ml

CaCl2

: 3 ml

Sukrosa : untuk 300 ml. Larutan media digunakan 9 gram gula. (untuk membuat larutan menjadi tercampur rata)

Agar-agar : unutk 300 ml. Larutan media digunakan 2,1 gram agar-agar (untuk mengentalkan larutan)

3.2 Cara Kerja Pembuatan Media Kultur

Timbang

Timbang

agar-agar

sukrosa

2,1 gram

9 gram

Timbang agar-agar sukrosa 2,1 gram 9 gram Pada labu erlenmeyer (diisi dengan : - makro: 30

Pada labu erlenmeyer (diisi dengan :

- makro: 30 mL, CaCl2: 3 mL, - mikro A: 3 mL, - mikro B: 0,3 mL, - FeEDTA: 3 mL, - Vitamin: 0,3 mL.

3 mL, - mikro B: 0,3 mL, - FeEDTA: 3 mL, - Vitamin: 0,3 mL. Ditambahkan

Ditambahkan aquades (H2O) hingga 300 mL.

- Vitamin: 0,3 mL. Ditambahkan aquades (H2O) hingga 300 mL. Ukuran pH larutan stock sampai 5,5-5,8

Ukuran pH larutan stock sampai

5,5-5,8

NB:

+NaOH :apabila terlalu asam

+HCL

:apabila terlalu basa

Ukuran pH larutan stock sampai 5,5-5,8 NB: +NaOH :apabila terlalu asam +HCL :apabila terlalu basa

Campur dan stiter (tanpa dipanaskan) sampai tampak pusaran.

Masukan microwave selama 7 menit

sampai tampak pusaran. Masukan microwave selama 7 menit Masukkan ke botol kultur @20 mL. Di autoclave

Masukkan ke botol kultur @20 mL.

microwave selama 7 menit Masukkan ke botol kultur @20 mL. Di autoclave dengan tekanan 1,5atm, suhu

Di autoclave dengan tekanan 1,5atm, suhu 121°C selama 15 menit

3.3 Analisa Perlakuan

Sebelum pembuatan media hal yang pertama kali dilakukan adalah mensterilkan semua peralatan yang akan digunakan dengan alcohol 95% serta diiuti dengan pembakaran kemudian didinginkan, hal ini bertujuan agar alat tidak terkontaminasi dengan jamur atau bakteri.

Isi breaker glas dengan larutan aquades kurang lebih 50 ml. Setelah itu, tambahkan unsur-unsur larutan yang sudah di stok, yaitu : makro (30 ml), mikro A (3 ml), mikro B (0,3 ml), Fe EDTA (3 ml), Vitamin (0,3 ml) dan CaCl2 (3 ml). Setelah semua larutan selesai ditambahkan, tambahkan lagi aquades hingga volume mencapai 300 ml. Stirer (aduk) larutan dan ukut pH larutan menggunakan indikator pH hingga mencapai pH sekitar 5 6. Masukkan sukrosa (9 gram) dan agar-agar (2,1 gram) yang bertujuan untuk melarutkan larutan dan mengentalkan larutan. Stirer kembali sampai larutan berwarna putih bening. Setelah selesai, tutup breaker glas dengan plastik wrap dan masukkan ke dalam microwave selama 7 menit setelah selesai, masukkan larutan ke dalam botol kultur dengan 8 botol di tutup plastik, dan 6 botol ditutup alumunium. Masukkan ke autoclave untuk sterilisasi akhir, dan amati selama 2 minggu, apakah terjadi kontaminasi atau tidak, catat hasil.

BAB IV

HASIL dan PEMBAHASAN

4.1 Hasil

a.

Tabel Media Kultur Dengan Penutup Plastik

 
 

Hari

     

No

Pengamatan

Ke-

Botol Ke-

Jenis

Kontaminan

 

Ket

1

Hari ke-2 (16 Oktober 2012)

 

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

 

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

7 Tidak ada

masih

8 Tidak ada

putih dan

sudah

mengental

2

Hari ke 4 (22 Oktober 2012)

 

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

 

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

7 Tidak ada

masih

8 Tidak ada

putih dan

sudah

mengental

3

Hari ke 6 (24 Oktober 2012)

 

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

 

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

   

7 Tidak ada

masih

8 Tidak ada

putih dan

sudah

mengental

 

4 Hari ke 8 (25 Oktober 2012)

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

   

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

7 Tidak ada

masih

8 Tidak ada

putih dan

sudah

mengental

 

5 Hari ke 10 *(29 Oktober

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

 

2012)

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

7 Tidak ada

masih

8 Tidak ada

putih dan

sudah

mengental

 

6 Hari ke 12

1 Tidak ada

Tidak

(31Oktober

2 Tidak ada

terjadi

2012)

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

7 Tidak ada

masih

8 Tidak ada

putih dan

sudah

mengental

7

Hari ke 14 (2 November

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

2012)

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

7 Tidak ada

masih

8 Tidak ada

putih dan

sudah

mengental

pengamatan

tetapi hari libur jadi pengamatan dilakukan lebih maju 1 hari tgl 25 oktober dan dimundurkan pada tanggal 29 Oktober 2012.

*Seharusnya tanggal 26 dan 28 Oktober 2012 ada

b.

Tabel Media KulturDenganPenutupAlumunium Foil

 

Hari

     

No

Pengamatan

Ke-

Botol Ke-

Jenis

Kontaminan

 

Ket

1

Hari ke-2 (16 Oktober 2012)

 

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

 

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

masih

putih dan

sudah

mengental

2

Hari ke 4 (22 Oktober 2012)

 

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

 

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

   

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

masih

putih dan

sudah

mengental

 

3 Hari ke 6 (24 Oktober 2012)

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

   

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

masih

putih dan

sudah

mengental

 

4 Hari ke 8 (25 Oktober 2012)

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

   

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

masih

putih dan

sudah

mengental

 

5 Hari ke 10 *(29 Oktober 2012)

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

   

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

masih

putih dan

sudah

     

mengental

6

Hari ke 12

1 Tidak ada

Tidak

(31Oktober

2 Tidak ada

terjadi

2012)

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

masih

putih dan

sudah

mengental

7

Hari ke 14 (2 November

1 Tidak ada

Tidak

2 Tidak ada

terjadi

2012)

3 Tidak ada

kontamina

4 Tidak ada

n

dengan

5 Tidak ada

warna

6 Tidak ada

yang

masih

putih dan

sudah

mengental

*Seharusnya tanggal 26 dan 28 Oktober 2012 ada pengamatan tetapi hari libur jadi pengamatan dilakukan lebih maju 1 hari tgl 25 oktober dan dimundurkan pada tanggal 29 Oktober 2012.

4.2 Pembahasan

Pada praktikum kali ini kita kita mencoba membuat media kultur jaringan dengan bahan-bahan yang sudah dijelaskan di atas, setelah di autoklaf kita mengamati perkembangan media pada hari kamis tanggal 20 oktber, disana terlihat bahwa media yang ditutup dengan plastic dan alumunium poli keadaan semuanya masih baik, dengan tanda-tanda tidak ada perubahan warna (tetap putih) dan juga masih

kelihatan stabil dengan kata lain tidak terlihat danya jamur pathogen yang masuk.

Kemudian pada hari kamis tanggal 25 oktober kita mengamati lagi dan ternyata tidak jauh berbeda dengan yang pengamatan pertama jadi semua media baik 8 sample yang ditutpi plastic dan 6 sample yang ditutupi alumunium tidak ada tanda-tanda terkontaminasi, tetapi disini ada satu media yang tertutupi alumunium yang kelihatan warnanya agak kekuningan tetapi menurut saya masih dalam keadaan tidak terkontaminasi karena ketika begitu sample didekatkan warnanya masih putih sebenarnya cuma memang dari jauh kelihatan agar sedikit kekuningan, seandainya itu termasuk dalam tanda kontaminasi tidak mungkin sebab saya melihat sample praktikan lain ada yang kuning tetapi disitu ada jamur yang menggelembung (membentuk bundaran) yang berwarna hitam ke abu-abuan, sedangkan pada sample kami tidak sedemikian itu.

Begitupun pada pengamatan ke-3 pada hari selasa tanggal 29 oktober 2012 kami menyimpulkan tidak ada yang terkontaminasi, begitu juga pada saat pengamatan ke-4 hari rabu, tanggal 31 oct 2012. Hingga pada pengamatan yang terakhir pada hari jum’at tanggal 02 nop 2012, ke 8 sample media kultur jaringan yang ditutupi plastic tidak terlihat adanya kontainasi begitupun ke 6 sample yang ditutupi alumunium.

Seperti apa yang dikemukakan oleh Andria bin Muhayat bahwa “eksplan yang terkontaminasi akan menunjukkan gejala seperti berwarna putih sampai biru (disebabkanjamur) atau busuk (disebabkan bakteri) (Sriyanti, Daisy P. 1994.)

5.1 Kesimpulan

BAB V

PENUTUP

Media merupakan faktor utama dalam perbanyakan dengan kultur jaringan. Keberhasilan perbanyakan dan perkembangbiakan tanaman dengan metode kultur jaringan secara umum sangat tergantung pada jenis media. Media MS mengandung 40 mM N dalam bentuk NO3 dan 29 mM N dalam bentuk NH4+. Dan Media MS inilah yang paling banyak digunakan untuk berbagai tujuan kultur pada tahun-tahun sesudah penemuan media MS. Pada praktikum kali ini kita mencoba membuat media tanam kultur jaringan dengan jenis media MS tersebut, dan akhirnya dapat ditarik kesimpulan ketika kita sudah melakukan beberapa kali pengamatan, media kultur jaringan yang ditutup dengan plastic biasa tepatnya ada 8 sampel dan 6 sampel yang ditutupi alumunium foil semuanya tidak terkontaminasi, masih putih normal Dari data hasil praktikum yang telah didapatkan, diketahui bahwa pembuatan media kultur yang telah dilakukan dapat dikatakan berhasil. Hal ini diketahui dari pengamatan yang telah dilaksanakan selama 2 minggu pengamatan (dengan selang waktu 2 hari sekali), yaitu warna dari larutan yang berada di dalam botol kultur tutup plastik maupun tutup alumunium berwarna putih dan sudah mengental.

5.2 Saran Untuk praktikum saran saya agar mahasiswanya

dikurangi lagi sebab terlalu kebanyakan jadi kaya ga efektif

saya suka gaya mbak mega

mudah dipahami namun ada 1 yang saya

nilai pas praktikum yaitu yang lebih teliti dalam

melakukan praktikum dan mengajari praktikannya

mengajar

Untuk Asisten Good Job

enak

DAFTAR PUSTAKA

Anonymous a ,2012.http://www.blog.ub.ac.id/fitafitriya/2012/10/06/la poran-bioteknologi-pembuatan-media-kultur-jaringan/. Diaksestanggal 30 Oktober 2012.

Gamborg et al, 1968. Molekuler Biotechnology, Principles and applications of Recombinan DNA. ASM Press. Washinton D.C.

Hendaryono.D.P.S., dan Wijayani 1994.Teknik Kultur Jaringan,

Pengenalan dan

Modern. Kansius:Yogyakarta.

Petunjuk

Perbanyakan

Secara

Vegetatif

Herawan, T dan M. Na’iem. 2006. Pengaruh Jenis Media dan Konsentrasi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Perakaran pada Kultur Jaringan Cendana (Santalum album Linn.). Jurnal Agrosains 19(2) : 103-109.

Indra.2008.

Media

Pengembangan

dan

media

Tanam

dan

pada tanggal 30 Oktober 2010

Machmud,M,2008. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan

Mikroba. Balai Penelitian Bioteknologi Tanaman

pada tanggal 30 Oktober 2012

Madigan, M.T.2003.Brock Biology Of Microorganism. Pearson

Education, Inc: Amerika

Sriyanti,

Daisy

Yogyakarta.

P.

1994.

Teknik

Kultur

Jaringan.

Kanisius.

LAMPIRAN

Dokumentasi hari ke-2 (16 Oktober 2012)

Dokumentasi hari ke-2 (16 Oktober 2012)

Plastik

Dokumentasi hari ke-2 (16 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Alumunium

Dokumentasi hari ke-2 (16 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Dokumentasi hari ke-4 (22 Oktober 2012)

Dokumentasi hari ke-4 (22 Oktober 2012)

Plastik

Dokumentasi hari ke-4 (22 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Alumunium

Dokumentasi hari ke-4 (22 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Dokumentasi hari ke-6 (24 Oktober 2012) Plastik Alumunium Tidak terjadi kontaminasi Tidak terjadi kontaminasi
Dokumentasi hari ke-6 (24 Oktober 2012)
Plastik
Alumunium
Tidak terjadi kontaminasi
Tidak terjadi kontaminasi
Dokumentasi hari ke-6 (24 Oktober 2012)

Dokumentasi hari ke-6 (24 Oktober 2012)

Plastik

Dokumentasi hari ke-6 (24 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Alumunium

Dokumentasi hari ke-6 (24 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Dokumentasi hari ke-8 dan 10 (25 Oktober 2012)

Plastik

Alumunium

Dokumentasi hari ke-8 dan 10 (25 Oktober 2012) Plastik Alumunium Tidak terjadi kontaminasi Tidak terjadi kontaminasi
Dokumentasi hari ke-8 dan 10 (25 Oktober 2012) Plastik Alumunium Tidak terjadi kontaminasi Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Dokumentasi hari ke-12 (31 Oktober 2012)

Dokumentasi hari ke-12 (31 Oktober 2012)

Plastik

Dokumentasi hari ke-12 (31 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Alumunium

Dokumentasi hari ke-12 (31 Oktober 2012) Plastik Tidak terjadi kontaminasi Alumunium Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Dokumentasi hari ke-14 (02 November 2012)

Plastik

Alumunium

Plastik Alumunium Tidak terjadi kontaminasi Tidak terjadi kontaminasi
Plastik Alumunium Tidak terjadi kontaminasi Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi

Tidak terjadi kontaminasi