PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DAUN SAWO MANILA (Manilkara

zapota) TERHADAP KONSENTRASI SPERMATOZOA

Studi Eksperimental pada Mencit Jantan (Mus Musculus) yang dipapar Asap
Rokok

Skripsi
untuk memenuhi sebagian persyaratan
mencapai gelar Sarjana Kedokteran

Oleh :
Indit Septi Pamuji
30101206773

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG
SEMARANG
2016

ii

iii

PRAKATA

Assalamualaikum Wr.Wb.
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala berkah dan karunia-Nya
sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan judul Pengaruh
Pemberian Ekstrak Daun Sawo Manila (Manilkara zapota) Terhadap
Konsentrasi Spermatozoa, Studi Eksperimen pada Mencit Jantan (Mus
Musculus) yang dipapar Asap Rokok. Karya ilmiah ini merupakan salah satu
syarat untuk mendapatkan gelar sarjana kedokteran di Fakultas Kedokteran
Universitas Islam Sultan Agung Semarang.
Penulis menyadari akan kekurangan dan keterbatasan,sehingga selama
menyelesaikan Skripsi ini, penulis mendapat bantuan, bimbingan, dorongan, dan
petunjuk dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan ini penulis
mengucapkan terimakasih sebesar besarnya kepada :
1. dr. H. Iwang Yusuf, M.Si., selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Islam Sultan Agung yang telah memberikan ijin kepada penulis untuk
melakukan penelitian ini.
2. Dra. Eni Widayati, M.Si, selaku dosen pembimbing I dan Dr. dr. H. Taufiq
R.Nasihun, M.Kes., Sp.And selaku dosen pembimbing II yang telah dengan
sabar meluangkan waktu dan pikiran untuk mengarahkan dan membimbing
penulis hingga terselenggaranya karya tulis ilmiah ini.
3. dr. Danis Pratiwi, Msi.Med, Sp. PK dan dr. Andriana Sp.THT-KL, sebagai
anggota tim penguji yang telah memberikan masukan sehingga penyusun

iv

karya tulis ilmiah ini terselesaikan.

4. Ayahanda Dimin dan Ibunda Kadaryati, serta kakak Titik Suprihatin Ningsih,
dan adik Igun Tri Basik Prasetyo yang selalu memberikan dukungan yang
tiada henti-hentinya.
5. Pak Yuli, Bu Wati serta seluruh staf PAU dan PK FK UGM yang telah
membantu alam penelitian ini.
6. Teman sekelompok penelitian Karina Apriliana Putri dan Lili Musfiroh atas
kerjasamanya, bantuan serta semangatnya.
7. Serta kepada semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah
membantu baik secara langsung maupun tidak langsung dalam penyusunan
karya tulis ilmiah ini penulis menyampaikan ucapan terima kasih yang
sebesar-besarnya, semoga Allah SWT melimpahkan rahmad-Nya kepada
saudara sekaliaan atas kebaikan dan dukungannya. Sebagai akhir kata dari
penulis, penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Wassalamualaikum Wr.Wb.

Semarang, Maret 2016

Penulis

Indit Septi Pamuji

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ...................................................................................

HALAMAN PENGESAHAN .....................................................................

ii

SURAT PERNYATAAN ............................................................................

iii

PRAKATA ..................................................................................................

iv

DAFTAR ISI ...............................................................................................

vi

DAFTAR SINGKATAN .............................................................................

DAFTAR TABEL .......................................................................................

xi

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................

xii

DAFTAR LAMPIRAN ...............................................................................

xiii

INTISARI ...................................................................................................

xiv

BAB

I PENDAHULUAN .......................................................................

1.1. Latar Belakang........ .............................................................

1.2. Perumusan Masalah.. ...........................................................

1.3. Tujuan Penelitian........ .........................................................

1.3.1 Tujuan Umum ..........................................................

1.3.2 Tujuan Khusus..........................................................

1.4. Manfaat Penelitian............... .................................................

1.4.1 Manfaat Teoritis ......................................................

1.4.2 Manfaat Praktis ........................................................

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..............................................................

2.1. Sperma ...............................................................................

2.1.1. Definisi ....................................................................

vi

2.1.2. Spermatogenesis .......................................................

2.2. Kualitas Sperma ...................................................................

2.2.1. Kriteria kualitas sperma ............................................

2.2.2. Pemeriksaan Konsentrasi Spermatozoa ....................

2.3. Faktor yang Mempengaruhi konsentrasi spermatozoa .........

2.4. Asap Rokok .........................................................................

13

2.4.1 Kandungan dan Dampaknya .....................................

13

2.5. Daun Sawo (Manilkara Zapotta L.)......................................

25

2.5.1. Taksonomi ...............................................................

25

2.5.2. Habitat ......................................................................

15

2.5.3. Morfologi Daun .......................................................

15

2.5.4 Kandungan Kimia dan Sawo.....................................

15

2.5.5. Manfaat Bagi Kesehatan ..........................................

16

2.6

Mekanisme Kerja Ekstrak Daun Sawo terhadap konsentrasi

spermatozoa mencit jantan yang dipapar asap rokok ..........

17

Kerangka Teori ....................................................................

21

2.10 Kerangka Konsep ................................................................

22

2.11 Hipotesis ..............................................................................

22

BAB III METODE PENELITIAN ...........................................................

23

2.7

3.1

Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................

23

3.2

Variabel dan Definisi Operasional ........................................

23

3.2.1 Variabel Penelitian ...................................................

23

3.2.1.1 Variabel bebas ............................................

23

3.2.1.2 Variabel tergantung .....................................

23

vii

3.2.1.3 Variabel Prakondisi ....................................

23

3.2.2 Definisi Operasional .................................................

23

3.2.2.1 Ekstrak Daun Sawo .....................................

23

3.2.2.2 Konsentrasi Spermatozoa ............................

24

3.2.2.3 Paparan asap rokok ....................................

24

Populasi dan Sampel ...........................................................

25

3.3.1 Populasi penelitian ...................................................

25

3.3.2 Sampel Penelitian ....................................................

25

Instrumen dan Bahan Penelitian ..........................................

26

3.4.1 Instrumen Penelitian ................................................

26

3.4.2 Bahan Penelitian ......................................................

27

Cara Penelitian.....................................................................

27

3.5.1 Persiapan penelitian ..................................................

27

3.5.2 Menentukan Dosis Ekstrak Daun Sawo ....................

28

3.5.3 Pelaksanaan Penelitian .............................................

28

3.5.4 Pembatasan Ekstrak Daun Sawo .............................

29

3.5.5 Cara Pemeriksaan Konsentrasi ..................................

30

Tempat dan waktu penelitian ...............................................

30

3.6.1 Tempat penelitian .....................................................

30

3.6.2 Waktu penelitian.......................................................

30

3.7

Alur Penelitian ...................................................................

31

3.8

Analisis data ........................................................................

32

BAB IV HASIL PENELITIAN.....................................................................

33

4.1 Hasil Penelitian......................................................................... .

33

3.3

3.4

3.5

3.6

viii

4.2 Pembahasan.............................................................................. .

38

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN..........................................................

42

5.1 Kesimpulan............................................................................... .

42

5.2 Saran.........................................................................................

42

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................

43

LAMPIRAN...................................................................................................

47

ix

DAFTAR SINGKATAN

BMI

: Body Mass Index

Depkes

: Departemen Kesehatan

DNA

: Deoxyribo Nucleic Acid

LH

: Luteinizing Hormone

NaCl

: Natrium Chlorida

NADH

: Nicotinamide Adenine Dinucleotide

NADPH

: Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphat

ROS

: Reactive Oxygen Species

WHO

: World Health Organisation

DAFTAR TABEL

Tabel

4.1 Hasil Berat Badan, Uji One Way Anova Konsentrasi

Spermatozoa dan Uji Kruskall Wallis..............

Tabel

4.2 Hasil Uji

Mann Whitney.........................

xi

35
36

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Mencit ....................................................................................

Gambar2.2.

10

Tahapan perkembangan sel spermatogenik dalam tubulus

seminiferus ............................................................................

12

Gambar 2.3. Daun Sawo .............................................................................

14

Gambar 4.1. Rerata Konsentrasi Spermatozoa....................................... .......

36

xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Ethical Clearance ..........................................................

49

Lampiran 2. Hasil Uji SPSS Berat Badan Mencit .............................

50

Lampiran 3. Hasil Uji SPSS Konsentrasi Spermatozoa ....................

52

Lampiran 4. Surat Keterangan Penelitian Laboratorium PAU UGM

61

Lampiran 5. Surat Keterangan Pembuatan Ekstrak Laboratorium Kimia

FK UNISSULA...........................................................

62

Lampiran 6. Surat Keterangan Pemeriksaan Laboratorium Patologi Klinik

FK UGM.......................................................................

63

Lampiran 7. Dokumentasi Penelitian ................................................

64

xiii

INTISARI

Paparan asap rokok meningkatan ROS sehingga

menurunkan
konsentrasi spermatozoa. Daun sawo manila memiliki antioksidan flavonoid, yang
mampu mengikat ROS sehingga diharapkan dapat meningkatkan konsentrasi
spermatozoa. Hal tersebut perlu dibuktikan dengan penelitian mengenai pengaruh
pemberian ekstrak daun sawo manila yang mendapat paparan asap rokok.
Penelitian eksperimental rancangan post test only control groups design
menggunakan 30 mencit jantan (Mus Musculus) dibagi menjadi 5 kelompok. K-I
(tanpa perlakuan), K-II (perlakuan), K-III (perlakuan + ekstrak daun sawo 8,4mg),
K-IV (perlakuan + ekstrak daun sawo 16,8mg), K-V (perlakuan + ekstrak daun
sawo 33,6mg). Perlakuan selama 21 hari. Hasil rerata konsentrasi spermatozoa
dilakukan uji Kruskal-Wallis kemudian uji Man Whitney.
Hasil rerata konsentrasi spermatozoa K I = 28,90 ; K II = 22,32 ; K III =
31,13, K IV = 35,02, dan K V = 48,68. Hasil uji normalitas (Shapiro-Wilk) K I
(p=0,547), K II (p=0,224), KIII (p=0,131), K IV (p=0,726), K V (p=0,000). Uji
homogenitas Levene Test p= 0,122. Hasil uji Kruskal-Wallis p=0,014. Hasil uji
Mann-Whitney antara K I dengan K II p=0,201, K I dengan K III p=0,522, K I
dengan K IV p=0,361, K I dengan KV p=0,004, K II dengan K III p=0,144, K II
dengan K IV p=0,009, K II dengan K V p=0,006, K III dengan K IV p= 0,361, K
III dengan K V p=0,199, K IV dengan K V p=0,272 .
Pemberian ekstrak daun sawo manila berpengaruh terhadap konsentrasi
spermatozoa yang dipapar asap rokok.
Kata kunci : Ekstrak daun sawo manila , konsentrasi spermatozoa, paparan asap
rokok.

xiv

BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Infertilitas adalah masalah bagi pasangan yang sudah menikah dan
ingin mendapat keturunan. Infertilitas merupakan ketidakmampuan pasangan
suami istri untuk menjadikan istri hamil dan melahirkan anak hidup setelah
melakukan hubungan seksual secara teratur dalam waktu satu tahun tanpa alat
kontrasepsi (Mardiyana, 2007). Kasus infertilitas hampir 50% dikarenakan
faktor pria yang sering melakukan aktifitas merokok (Agarwal et al, 2010).
Merokok adalah suatu masalah kesehatan masyarakat di Indonesia (Toruan
et al, 2005). Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan Tendean dkk (2013)
, akibat yang ditimbulkan dari asap rokok adalah menurunnya kualitas dari
spermatozoa yang meliputi konsentrasi, motilitas dan morfologi. Efek negatif
ini diduga akibat kandungan zat kimia yang dikandung oleh asap rokok yang
dapat

menimbulkan

peningkatan

produksi

radikal

bebas

sehingga

mengakibatkan keadaan yang disebut dengan stres oksidatif (Batubara et al.,

2013). Stres Oksidatif ini diakibatkan peningkatan ROS (Reactive Oxygen
Species) yang mengakibatkan kerusakan DNA dan pada akhirnya terjadi
apoptosis spermatozoa (Sari, 2014). Daun sawo manila mengandung
antioksidan alami yaitu flavonid dan saponin (Dalimartha, 2007) diharapkan
flavonoid yang terkandung dalam daun sawo manila mampu mencegah
penurunan konsentrasi spermatozoa yang diakibatkan oleh asap rokok.

Penelitian mengenai pengaruh ekstrak daun sawo manila terhadap konsentrasi

spermatozoa akibat asap rokok saat ini belum dilakukan.
Tahun 2001, Indonesia menempati rangking ke empat dalam konsumsi
rokok dengan jumlah 182 miliar batang/tahun dan pada tahun 2009
mengalami peningkatan menjadi 260,8 miliar batang/tahun (Depkes, 2012).
Laporan WHO menyebutkan, jumlah perokok meningkat 2,1 persen per tahun
di negara berkembang (WHO, 2012). Hasil survey WHO yang dilakukan
pada tahun 2012 menyatakan bahwa laki-laki di Indonesia

yang

mengkonsumsi rokok tercatat sebanyak 67% dari seluruh jumlah populasi

yang diteliti yakni sebanyak 244.769 juta (WHO, 2013). Penelitian
Mardiyana pada tahun 2007 merokok dapat menyebabkan gangguan kualitas
spermatozoa yang merupakan salah satu penyebab infertilitas. Jika penurunan
kualitas sperma pada pria akibat merokok tidak diatasi maka kemungkinan
angka infertilitas pada pria akan mengalami peningkatan.
Penelitian yang telah dilakukan mengenai manfaat daun sawo.
Penelitian Osman dkk pada tahun 2010 menyebutkan bahwa flavonoid yang
terkandung di daun sawo memiliki daya hambat terhadap 4 bakteri gram (+)
dan 5 bakteri gram (-). Penelitian Chanda dkk pada tahun 2010 menyatakan
bahwa kapasitas flavonoid di dalam daun sawo manila sebesar 0,27mg/g
dengan pelarut ekstrak aceton 100ml. Penelitian yang dilakukan Mustikasari
dkk pada tahun 2013 menyatakan bahwa zat aktif yang terkandung dalam
daun katuk yaitu flavonoid berpengaruh signifikan terhadap konsentrasi
spermatozoa mencit yang dipapar asap rokok. Diharapkan kandungan
flavonoid dalam daun sawo juga dapat berpengaruh terhadap konsentrasi

spermatozoa mencit jantan, namun sampai saat ini belum pernah dilakukan
penelitian.
Penjelasan diatas dapat disebutkan bahwa stess oksidatif yang diakibatkan
oleh asap rokok dapat menyebabkan terjadinya penurunan konsentrasi
spermatozoa, sedangkan daun sawo manila memiliki kandungan antioksidan
salah satunya flavonoid yang dapat menekan stess oksidatif , sehingga
diharapkan terjadi peningkatan konsentrasi spermatozoa. Maka dari itu perlu
dilakukan penelitian tentang pengaruh pemberian ekstrak daun sawo manila
terhadap konsentrasi spermatozoa pada mencit jantan (Mus Musculus) yang
mendapat paparan asap rokok.

1.2 Rumusan Masalah

Apakah terdapat pengaruh pemberian ekstrak daun sawo manila
(Manilkara zapota) terhadap konsentrasi spermatozoa mencit jantan (Mus
Musculus) yang diberi paparan asap rokok?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum
Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun sawo manila terhadap
konsentrasi spermatozoa pada mencit jantan (mus musculus) yang
dipapar asap rokok.
1.3.2 Tujuan Khusus
1.3.2.1 Mengetahui konsentrasi spermatozoa mencit pada masingmasing kelompok baik yang tidak diberi ekstrak daun sawo

manila maupun yang diberi ekstrak daun sawo manila dengan

berbagai tingkat dosis.
1.3.2.2 Mengetahui dosis paling efektif ekstrak daun sawo manila
terhadap konsentrasi spermatozoa yang dipapar asap rokok
dengan cara melakukan uji beda antar kelompok.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Teoritis
Sebagai bukti ilmiah bahwa pemberian ekstak daun sawo manila
berpengaruh terhadap konsentrasi spermatozoa yang dipapar asap
rokok.
1.4.2 Manfaat Praktis
Sebagai informasi kepada masyarakat tentang penggunaan ekstrak
daun sawo manila untuk meningkatkan konsentrasi spermatozoa
sehingga diharapkan dapat mencegah infertilitas pada pria akibat
merokok.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Sperma
2.1.1. Definisi
Sperma atau spermatozoa adalah sel germinal jantan matang
yang merupakan hasil khusus dari testis, sel ini merupakan unsur
generatif semen yang bertugas membuahi ovum dan mengandung
informasi genetik untuk dihantarkan ke zigot (Dorland, 2003).
2.1.2. Spermatogenesis
Spermatogenesis adalah suatu rangkaian perkembangan sel
spermatogonia menjadi spermatozoa (Ganong, 2006).
Proses perkembangan spermatogonium menjadi spermatozoa
dibagi menjadi tiga tahap yaitu Spermatositogenesis, Meiosis dan
Spermiogenesis (Naz dan Rajendran, 2006).
1.

Spermatositogenesis
Merupakan proses deferensiasi spermatogonia menjadi
spermatid primer. Spermatogonia yang terletak di lapisan paling
luar tubulus secara terus menerus membelah dengan cara mitosis
dimana sel baru yang terbentuk identik dengan sel induk.
Spermatosit primer masuk ke fase istirahat selama kromosom
mengalami duplikasi dan untai-untai ganda tetap bersatu sebagai
persiapan untuk pembelahan meiosis pertama (Sherwood, 2006).

2.

Meiosis
Pembelahan meiosis pertama dari spermatosit primer,
diikuti dengan pembelahan meiosis kedua spermatosit sekunder,
dimana jumlah kromosom berkurang dan DNA spermatid
menjadi haploid (n). (Sherwood, 2006).

3.

Spermiogenesis
Spermiogenesis adalah proses transformasi spermatid
menjadi spermatozoa. Selama proses ini hanya terjadi deferensiasi
tanpa ada pembelahan sel (Junqueira et al., 2007).
Spermiogenesis dapat dibagi menjadi tiga fase :
a.

Fase golgi
Sitoplasma spermatid mengandung kompleks Golgi,
mitokondria, sentriol, ribosom bebas, dan tubulus retikulum
endosplasma halus. Granula proakrosom berkumpul di
kompleks Golgi dan kemudian menyatu membentuk satu
granula akrosom yang terdapat dalam vesikel akrosom
(Junqueira et al., 2007).

b.

Fase akrosom
Vesikel

dan

granula

akrosom

menyebar

untuk

menutupi belahan anterior inti yang memadat yang dikenal

akrosom. Akrosom mengandung beberapa enzim hidrolitik,
seperti hialuronidase, asam fosfatase, neuraminidase, dan

protease. Jadi, akrosom berfungsi sebagai lisosom (Junqueira

et al., 2007).
c.

Fase pematangan
Sitoplasma residu dibuang dan difagositosis oleh sel
Sertoli dan spermatozoa dilepaskan ke dalam lumen tubulus
(Junqueira et al., 2007).

2.2. Kualitas Sperma

2.2.1. Kriteria Kualitas Sperma
Kriteria yang digunakan oleh WHO tahun 2010, tentang
fertilitas pria normal meliputi jumlah, motilitas, dan morfologi
sperma.
Setengah dari kasus infertilitas pria disebabkan oleh rendahnya
motilitas sperma dan atau konsentrasi sperma, dan kelainan
morfologis sperma (Shamsi et al., 2010). Jadi apabila konsentrasi
sperma < 15 juta/ml disebut oligozoospermia; motilitas sperma
(progresif motility >32%) < 50% disebut asthenozoospermia;
morfologi sperma normal < 32% disebut teratozoospermia; tidak ada
sperma dalam ejakulat disebut azoospermia (WHO, 2010).
2.2.2. Pemeriksaan Konsentrasi Spermatozoa
Penilaian konsentrasi spermatozoa per mililiter semen sangat
penting, karena akan menggambarkan sifat-sifat semen dan dipakai
sebagai salah satu kriteria penentuan kualitas semen. konsentrasi
digabungkan

dengan

volume

dan

prosentase

sperma

motil,

memberikan

informasi

jumlah

spermatozoa

per

ejakulat.

Penghitungan konsentrasi spermatozoa dilakukan dengan membuat

larutan homogeny yaitu spermatozoa dengan larutan George. Menurut
WHO (2010) penghitungan konsentrasi spermatozoa dapat dilakukan
dengan

menggunakan

metode

hemositometer

yaitu

dengan

menggunakan bilik hitung dan pengamatan mikroskop dengan

perbesaran 400x untuk menghitung jumlah sel sperma dalam satuan
juta/cc pada bilik kotak sedang, kemudian dikonversikan kedalam
rumus untuk menemukan konsentrasi dalam satuan mililiter
(Konsentrasi Sperma) = n. 106
Keterangan :
n : Jumlah Sperma
2.2.3. Faktor-faktor yang Mempengaruhi Konsentrasi Spermatozoa
1.

Suhu
Pada manusia berendam dalam air panas (43-45C selama
30 menit per hari) dan memakai celana atletik sebagai pelindung
mengurangi jumlah sperma (Ganong, 2006)

2.

Hormon
Ada

beberapa

hormon

yang

berperan

dalam

spermatogenesis yang mempunyai pengaruh dalam konsentrasi

spermatozoa (Guyton et al., 2008)
a.

LH (Luteinizing Hormone)
Dihasilkan oleh kelenjar hipofisis yang mempunyai
fungsi untuk merangsang sel Leydig untuk menghasilkan

testosteron. Jika kadar LH tinggi maka kadar testosteron juga

tinggi sehingga meningkatkan jumlah sperma (Ganong,
2006)
b.

Hormon Testosteron
Hormon testosteron disekresikan oleh sel leydig dan
mempunyai

fungsi

dalam

pembelahan

meiosis

dari

spermatosit primer ke spermatosit sekunder (Guyton et al.,

2008).
3.

Nutrisi (Asupan Makanan)

Makanan yang mengandung tinggi lemak menyebabkan
kualitas spermatozoa menurun. Lemak mempunyai peranan
dalam pembentukan hormon estradiol, semakin tinggi hormon
estradiol maka akan semakin rendah pula produksi hormon
testosteron. Dengan rendahnya kadar testosteron sebagai hormon
pengatur fungsi seksual pria yang utama, maka kuantitas dan
kualitas spermatozoa juga akan mengalami penurunan (Guyton et
al., 2008).

4.

Kelainan Anatomi
Kriptokrismus atau undesensus testis yaitu testis yang
terjebak dalam rongga abdomen merupakan kelainan anatomi
bawaan yang dapat menyebabkan kerusakan ireversibel terhadap
epitel

spermatogenik

sehingga

oligozoospermia (Ganong, 2006).

bisa

menyebabkan

10

5.

Faktor Lain
Frekuensi berhubungan sex yang rapat

juga dapat

menyebabkan konsentrasi spermatozoa menurun. Karena jumlah

spermatozoa yang seharusnya ditampung di dalam epididimis dan
vas deferens

selalu

dikeluarkan saat

berhubungan seks.

Abstinensia 2-7 hari dibutuhkan agar konsentrasi spermatozoa

meningkat (WHO, 2010).
Gaya hidup yang tidak sehat seperti konsumsi alkohol,
marijuana, rokok dapat mempengaruhi hormon yang berpengaruh
dalam spermatogenesis sehingga jumlah spermatozoa kurang dari
normal (Somwanshi et al., 2012).

2.3. Reproduksi Mencit

Gambar 2.1. Mencit (Anonymous, 2010).

Kingdom
Phylum
Sub-phylum
Class
Ordo
Family
Genus
Species

:
:
:
:
:
:
:
:

Animalia
Chordata
Vertebrata
Mamalia
Rodentia
Muridae
Mus
Mus Musculus L.

11

Mencit (Mus musculus) merupakan hewan percobaan yang

mudah diternakan dan dipelihara. Mencit mempunyai periode
gestasi yang pendek (18-21 hari) dan usia reproduksi dimulai dari
2-14 bulan (Rugh, 2005). Proses spermatogenesis pada mencit
hampir sama dengan mamalia yang lain. Satu siklus epitel
seminiferus membutuhkan 2076 jam, dan empat siklus tersebut
terjadi

antara

spermatogonium

menjadi

spermatozoid.

Spermatositogenesis terjadi selama 8 hari, meiosis I selama 12,5

hari, meiosis II 9,5 hari, dan spermiogenesis terjadi selama 5,5 hari
(Rugh, 2005).
Spermatogenesis pada mencit menyerupai proses yang terjadi
pada manusia maupun hewan lainnya dan berlangsung dalam tiga
tahap.

Diawali

fase

spermatogenesis

dari

pembelahan

spermatogonia yang terjadi beberapa kali sehingga menghasilkan

spermatogonia tipe A2, A3 dan A4. Spermatogonia A4 kemudian
mengalami pembelahan menghasilkan spermatogonia intermediat
yang kemudian akan membelah lagi untuk menghasilkan
spermatogonium B. Spermatogonium B selanjutnya mengalami
mitosis sehingga terbentuk spematosit primer dan berada pada fase
istirahat pada tahap preleptoten (Gilbert, 2006).
Tahap berikutnya adalah meiosis yang terdiri dari dua
tahap, yaitu meiosis I dan meiosis II dimana masing-masing
mengalami fase profase, metafase, anafase dan telofase. Profase

12

pada meiosis I yang meliputi leptoten, zigoten, pakiten, diploten

dan diakinesis. Meiosis I berakhir dengan terbentuknya spermatosit
sekunder dan kemudian memasuki meiosis II dan pembelahan
berlanjut untuk membentuk spermatid (Johnson and Everitt, 2005).
Selanjutnya diakhiri tahap spermiogenesis yang merupakan
transformasi

spermatid

dari

bentuk

yang

bulat

menjadi

spermatozoa dengan kepala, leher dan ekor. Spermiogenesis pada

mencit terdiri dari 16 tingkat yang secara umum diklasifikasikan
menjadi empat fase, yaitu fase golgi, fase cap, fase akrosom dan
fase maturasi (Johnson and Everitt, 2005).

Gambar 2.2. Tahapan perkembangan sel spermatogenik dalam tubulus

seminiferus (Dunkin, 2013).

13

2.4. Asap Rokok

2.4.1. Kandungan dan Dampaknya
Asap rokok tembakau mengandung gas dan bahan-bahan kimia
yang bersifat racun dan atau karsinogenik. Komposisi kimia asap
rokok tergantung pada jenis tembakau , desain rokok ( memiliki filter
atau tidak, bahan tambahan, dsb) ,pola merokok dari setiap individu.
Umumnya asap rokok mengandung

bahan

yang dapat

mengganggu kesehatan seperti : amoniak, asam fprmat, hidrogen

sianida/HCN, nitrous oxid, formaldehid, fenol, asetol, hidrogen
sulfide,

piridin,

metil

klorida,

metanol,

dan

radikal

bebas

(Gondodiputro, 2007).
Radikal bebas sangat berperan dalam proses rusaknya sperma.
Radikal bebas merupakan atom atau molekul yang memiliki elektron
yang tidak berpasangan, menjadi bersifat reaktif sehingga dapat
bereaksi dengan molekul sel tubuh dengan cara mengikat elektron dari
molekul sel tersebut. Akibatnya akan terjadi reaksi berantai yang bisa
mengakibatkan

radikal

(Gondodiputro,2007).

bebas

baru

secara

terus

menerus

14

2.5. Daun Sawo Manila (Manilkara Zapotta L.)

Gambar 2.3. Daun Sawo (Anonymous,2015).

2.5.1. Taksonomi
Sawo manila (Manilkara zapotta) adalah pohon buah yang dapat
berbuah sepanjang tahun. Sawo manila memiliki pohon yang besar
dan rindang, dapat tumbuh hingga setinggi 30-40 m. Bunga tunggal
terletak di ketiak daun dekat ujung ranting, bertangkai 1-2 cm,
kerapkali menggantung, diameter bunga s/d 1,5 cm, sisi luarnya
berbulu kecoklatan. Kelopaknya biasanya tersusun dalam dua
lingkaran, mahkota berbentuk genta, putih, berbagi sampai setengah
panjang tabung (Morton, 2013). Samini (2008) menyatakan bahwa
kedudukan taksonomi tanaman sawo manila (Manilkara zapotta L.)
adalah sebagai berikut :
Kingdom
Divisi
Kelas
Bangsa
Suku
Marga
Jenis

:
:
:
:
:
:
:

Plante
Magnoliophyta
Magnoliopsida
Ebenales
Sapotaceae
Manilkara
Manilkara Zapota

15

2.5.2. Habitat
Sawo manila banyak ditanam di daerah dataran rendah , meski
dapat tumbuh dengan baik hingga ketinggian sekitar 2.500 m di atas
permukaan laut. Pohon sawo tahan terhadap kekeringan , salinitas
yang agak tinggi dan tiupan angin keras. Sawo dapat berbunga dan
berbuah sepanjang tahun, akan tetapi pada umumnya terdapat satu
atau dua musim untuk berbuah (Morton, 2013).
2.5.3. Morfologi Daun
Daun tunggal, terletak berseling , sering mengumpul pada ujung
ranting, sedikit berbulu, hijau tua mengkilap, bentuk bundar telur
jorong sampai agak lanset, 1-5-7 x 3,5-1,5 cm, pangkal dan ujungnya
bentuk baji, bertangkai 1-3,5 cm , tulang daun utama menonjol di sisi
sebelah bawah (Morton, 2013).
2.5.4. Kandungan Kimia Daun Sawo
Kandungan zat kimia dari tumbuhan sawo manila (Manilkara
zapota ) adalah :
1.

Tanin
Tanin merupakan senyawa kompleks yang banyak terdapat
pada tumbuhan, biasanya merupakan campuran polifenol yang
sukar untuk dipisahkan karena tidak dalam bentuk kristal. Di
dalam tumbuhan letak tanin terpisah dari protein dan enzim
sitoplasma, tetapi bila jaringan tumbuhan rusak maka reaksi
penyamakan dapat terjadi. Reaksi ini menyebabkan protein lebih

16

sukar dicapai oleh cairan pencernaan hewan pemakan tumbuhan

karena rasanya yang sepat (Harborne, 2007).
2.

Flavoniod
Flavoniod merupakan senyawa metabolit sekunder yang
terdapat pada tanaman hijau kecuali alga. Flavonoid yang lazim
ditemukan pada tumbuhan tingkat tinggi (angiospermae) adalah
flavon dan flavonol dengan C- dan O-glokosida, isoflavon C- dan
O- glikosida, flavon C- dan O- glikosida, khalkon dengan C- dan
O-glikosida dan dihidrokhalkon, proantosianidin dan antosianin ,
auron O-glikosida, dan dihidroflavonol O-glikosida (Markham,
1998). Golongan flavon, flavonol, flavonon, isoflavon dan
khalkon juga sering ditemukan dalam bentuk aglikonnya.
Flavonoid termasuk senyawa fenolik alam yang potensial sebagai
antioksidan

dan

mempunyai

bioaktifitas

sebagai

obat

(Royam,2008).
2.5.5. Manfaat Bagi Kesehatan
Manfaat daun sawo manila menurut Orwan (2009) adalah
sebagai bahan obat , seperti obat demam, perdarahan, luka dan bisul
serta neuralgia , dilihat dari kandungannya yaitu Tanin dan Flavonoid.
Daun sawo manila mengandung antioksidan alami yaitu flavonid dan
saponin (Dalimartha, 2007). Falovonoid merupakan antioksidan
alami, dan falvonoid memiliki efek biologis yang bersifat antioksidan
(Redha, 2010). Pada penelitian yang dilakukan Vergina tentang
perbedaan Kualitas Spermatozoa yang diberi Vitamin C setelah

17

dipapar asap rokok didapatkan hasil bahwa ada perbaikan konsentrasi

, motilitas, dan morfologi spermatozoa pada kelompok yang dipapar
asap rokok dengan disertai pemberian vitamin C. Vitamin C
merupakan antioksidan yang mampu menekan proses stress oksidatif
akibat asap rokok (Tendean et al., 2013). Sama halnya dengan
flavonoid yang merupakan antioksidan.

2.6. Mekanisme

Kerja

Ekstrak

Daun

Sawo

terhadap

konsentrasi

spermatozoa mencit jantan yang dipapar asap rokok

Rokok berpengaruh kepada kualitas dan kuantitas sperma. Pada kasus
infertilitas, hasil analisis semen menunjukan bahwa infertilitas banyak
disebabkan oleh kelianan konsentrasi spermatozoa, disusul dengan kelainan
morfologi dan motilitas (Saleh et al., 2003).
Asap rokok yang dihirup seorang perokok mengandung komponen gas
dan partikel. Komponen gas sangat berpotensi untuk menimbulkan radikal
bebas yang diantaranya terdiri dari karbon monoksida, karbondioksida,
oksida dan nitrogen dan senyawa hidrokarbon. Sedangkan komponen partikel
beberapa diantaranya terdiri dari tar, nikotin, benzopiren, fenol, dan
cadmium. Komponen ini dibebaskan sebanyak 5 x 109 pp selama merokok
(Zavos et al., 2007). Karbonmonoksida merupakan gas racun yang tidak
berwarna dan tidak

berbau.

Karbonmonoksida

dapat

menyebabkan

berkurangnya pengiriman dan pemanfaatan oksigen pada jaringan tubuh.

Nikotin merupakan senyawa yang diserap ke dalam sistem pembuluh darah
melalui paru-paru dan selanjutnya disirkulasikan ke otak dalam waktu yang

18

sangat cepat serta dapat menyebabkan penurunan kadar hormon testosteron.

Tar merupakan bahan karsinogenik , tetapi merupakan campuran yang sangat
kompleks yang dapat menyebabkan berbagai penyakit diantaranya kanker,
penyakit jantung, bronchitis, gangguan kehamilan, dan impotensi. Dalam
asap rokok tar mempunyai sedikitnya 4 jenis radikal bebas yang berbeda dan
salah satunya adalah semiquinon moieties yang dihasilkan dari bermacammacam quinone dan hydroquinone, semiquinone dapat bereaksi dengan
oksigen menghasilkan radikal anion superoksida yang selanjutnya akan
menghasilkan hidrogen peroksida dan radikal hiroksil yang menyerang DNA
(Arief, 2013).
Radikal bebas adalah molekul yang mempunyai atom dengan elektron
yang tidak berpasangan. Radikal bebas tidak stabil dan mempunyai
reaktivitas yang tinggi. Reaktivitasnya dapat merusak seluruh tipe
makromolekul seluler termasuk karbohidrat, protein, lipid dan asam
nukleat(Langseth, 2006).
Radikal bebas secara fisiologis terdapat pada semen manusia (Zavos et
al., 2007), dan timbulnya radikal bebas dalam tubuh diimbangi dengan
mekanisme pertahanan endogen dengan memproduksi zat yang mempunyai
pengaruh sebagai anti radikal bebeas disebut antioksidan. Akan tetapi, pada
saat level ROS meningkat melebihi dari sistem pertahanan antioksidan tubuh,
terjadilah stress oksidatif (Saleh et al., 2003).
Stress oksidatif merupakan kondisi dimana terjadi peningkatan ROS
yang akan menyebabkan kerusakan sel, jaringan atau organ (Saleh et al.,

19

2003). Pada kondisi stress oksidatif, radikal bebas akan menyebabkan

terjadinya peroksidasi lipid membran sel dan merusak organisasi membran
sel. Membran sel ini sangat penting bagi fungsi reseptor dan fungsi enzim,
sehingga terjadinya peroksidasi lipid membran sel oleh radikal bebas dapat
mengakibatkan hilangnya fungsi seluler secara total (Evans et al., 2005).
Membran sel juga mengandung sejumlah lemak, membran sel mampu beraksi
dengan radikal bebas sehingga menjadi lebih permeabel dan memungkinkan
substansi lain melewati membran secara bebas. Struktur di dalam sel seperti
mitokondria dan lisosom juga dilindungi oleh membran yang mengandung
lemak sehingga mudah diganggu oleh radikal bebas (Setiati et al., 2009).
Stress oksidatif menyebabkan infertilitas melalui efek negatifnya ke
spermatozoa

seperti

hilangnya

motilitas,

peningkatan

kerusakan

membran,dan penurunan konsentrasi spermatozoa (Twig et al., 2005).

Untuk menghambat kerusakan pada membran sel makan dibutuhkan
antioksidan untuk melawan radikal bebas yang dihasilkan oleh rokok.
Antioksidan adalah senyawa yang mempnyai struktur molekul yang dapat
memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas tanpa terganggu
fungsinya dan dapat memutus reaksi berantai dari radikal bebas (Arief, 2013).
Daun sawo manila mengandung antioksidan alami yaitu flavonid dan saponin
(Dalimartha, 2007). Flavonoid merupakan antioksidan alami ,dan memiliki
efek biologis yang bersifat antioksidan (Redha, 2010). Flavonoid dari daun
sawo juga memiliki kemampuan sebagai antioksidan yang kuat (Zuhra et al.,
2008).

20

Flavonoid adalah antioksidan yang larut lemak dalam membran sel

yang mampu menghambat peroksidasi lipid, meningkatkan aktivitas berbagai
antioksidan yang dapat mengikat radikal bebas, meningkatkan konsentrasi
spermatozoa dan berperan dalam mengurangi fragmentasi DNA spermatozoa
(Agarwal, et al., 2010). Flavonoid juga berperan sebagai antioksidan dengan
cara mengikat logam atau dalam bentuk bebas aglikon (Redha, 2010).

21

2.7. Kerangka Teori

Jumlah Paparan Asap Rokok

Kadar Nitrogen
Kadar Hidrokarbon
Kadar Karbon monoksida
Kadar Tar
Kadar Nikotin
Kadar Benzopiren
Kadar Fenol
Kadar Cadnium

Dosis Ekstrak Daun

Sawo Manila

Kadar Flavonoid

Kadar Semiquinone moites (Radikal

Bebas)

Kadar MDA

- Banyak
Mebran
sel
spermatozoa
- Banyak
Mitokondria
Spermatozoa
- Banyak
Lisosom
spermatozoa
- Banyak DNA spermatozoa

Konsentrasi
Spermatozoa

Keterangan :
: Jalur Tanpa Pengaruh pemberian ekstrak daun sawo
: jalur pengaruh pemberian ekstrak daun sawo

- Gaya Hidup
- BMI
- Undesencende
n testis
- Suhu
- Kadar hormon
LH

22

2.8. Kerangka Konsep

Ekstrak Daun Sawo

Konsentrasi Spermatozoa

2.9. Hipotesis
Pemberian ekstrak daun sawo manila (Manilkara zapota) berpengaruh
terhadap konsentrasi spermatozoa mencit jantan (Mus Musculus) yang
mendapat paparan asap rokok.

BAB III
METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode penelitian eksperimental dengan
rancangan penelitian Post Test Only Control Group Design.

3.2 Variabel dan Definisi Operasional

3.2.1 Variabel
3.2.1.1 Variabel Bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah pemberian
ekstrak daun sawo (Manilkara zapota L.)
3.2.1.2 Variabel Tergantung
Variabel terikat dalam penelitian ini adalah konsentrasi
spermatozoa mencit jantan.
3.2.1.3 Variabel Prakondisi
Paparan asap rokok.
3.2.2 Definisi Operasinoal
3.2.2.1

Ekstrak Daun Sawo

Ekstrak daun sawo manila adalah hasil ekstrak dari
daun sawo manila dengan metode maserasi menggunakan
pelarut etanol 96% yang dibuat di Laboratorium Kimia
Universitas Islam Sultan Agung Semarang. Ekstrak Daun
sawo manila dalam bentuk powder sebanyak 500gr.
Pemberian ekstrak daun sawo manila diberikan dengan dosis
23

24

8,4mg/ekor, 16,8mg/ekor, 33,6mg/ekor (Ganguly et al.,

2013) ,masing-masing dilarutkan dalam 1ml aquadest yang
diberikan peroral sebanyak satu kali sehari, pemberian
dilakukan

bersama-sama dengan paparan asap rokok

sebanyak 2 batang/hari (Batubara et al., 2013)

Skala : rasio
3.2.2.2 Konsentrasi Spermatozoa
Konsentrasi spermatozoa adalah jumlah sel sperma tiap
mililiter

semen.

konsentrasi

Menurut

spermatozoa

menggunakan

metode

WHO

(2010)

dapat

dilakukan

hemositometer

perhitungan

yaitu

dengan
dengan

menggunakan bilik hitung dan pengamatan mikroskop

dengan perbesaran 400X untuk menghitung jumlah sel
sperma dalam satuan juta/cc pada bilik kotak sedang,
kemudian dikonversikan ke dalam rumus untuk menentukan
konsentrasi dalam mililiter
Spermatozoa = ( n x p / V bilik hitung)
Keterangan :
n

: Jumlah Spermatozoa

: faktor pengenceran

: volume

Skala

: Rasio

3.2.2.3 Paparan Asap Rokok

25

Asap rokok adalah asap yang dapat dilihat dari hasil

pembakaran rokok jenis kretek merk Dji Sam Soe yang
mengandung bahan aktif 20 mg Tar ; 4,0 nikotin (tertera
dalam kemasan) yang kemudian

dipaparkan ke mencit

21hari.

3.3 Populasi dan Sampel

3.3.1 Populasi Penelitian
Mencit jantan (Mus Musculus) yang ada di Laboratorium Pusat
Studi Pangan dan Gizi UGM
3.3.2 Sampel Penelitian
Penghitungan sampel menggunakan rumus Ferderer. Besar
sampel penelitian dibagi menjadi 5 kelompok, tiap kelompok terdiri
dari 5 ekor mencit.
Rumus ferderer : (n-1) (t-1) 15
(n-1) (5-1) 15
(n-1) 4

15

4n-1

15

4n

15

4,75

keterangan :
n : jumlah sampel perkelompok perlakuan
t : jumlah perlakuan

26

Pada penelitian ini ditambahkan 1 ekor mencit untuk

mengantisipasi drop out, sehingga total hewan uji menjadi 30 ekor
mencit jantan (Mus Musculus). Sampel di dapatkan dari Laboratorium
Pusat Studi Pangan dan Gizi UGM dengan kriteria inklusi sebagai
berikut:
3.3.2.1 Kriteria Inklusi
1.

Berat badan 20-25gram

2.

Umur 3 bulan

3.

Sehat pada penampilan luar :

a.

Gerak aktif

b.

Makan dan minum normal

c.

Tidak ada luka

d.

Tidak ada cacat

.
Kriteria drop out adalah mencit mati selama penelitian.

3.4 Instrumen dan Bahan penelitian

3.4.1 Instrumen Penelitian
1.

Kandang mencit dan perlengkapannya (tempat pakan dan minum)

2.

Timbangan hewan coba

3.

Sonde oral

4.

Alat untuk pengambilan sperma

a.

Gunting kecil

b.

Pinset sirurgis

27

c.

Pisau silet

5.

Mikroskop cahaya

6.

Gelas obyek

7.

Cawan petri

8.

Sarung tangan

9.

Klem

10. Handle scaple

11. Objek glass
12. Deck glass
3.4.2 Bahan Penelitian
1.

Ekstrak

daun

sawo

manila

dengan

dosis

8,4mg/ekor,

16,8mg/ekor dan 33,6mg/ekor.

2.

Pakan standart
Pakan standart yang digunakan adalah CP-12 dalam bentuk
padat. Jumlah pakan standart untuk mencit 3-5g/ekor/hari

3.

Sperma mencit

4.

NaCl Fisiologis

5.

Larutan eosin

6.

Aquadest

3.5 Cara penelitian

28

3.5.1 Persiapan Penelitian

Beberapa persiapan dilakukan dalam penelitian ini adalah
menyiapkan mencit jantan (Mus Musculus) sebanyak 30 ekor dari
Laboratorium Pusat Studi Pangan dan Gizi UGM. Kemudian
menyiapkan kandang mencit lengkap dengan pakan pur ayam, minum
standart, ekstrak daun sawo manila, dan alat serta bahan untuk
pemeriksaan konsentrasi spermatozoa.
Menentukan Dosis Ekstrak Daun Sawo
Dosis ekstrak daun sawo manila yang digunakan merujuk pada
penelitian sebelumnya yaitu 0,84mg/ekor mencit (Ganguly et al.,
2013).

3.5.2 Pelaksanaan Penelitian

Mencit dibagi menjadi 5 kelompok secara acak dengan masingmasing kelompok 6 ekor. Paparan asap rokok dilakukan 1 hari sekali
(2 batang rokok) yang diberikan secara bersamaan dengan pemberian
ekstrak daun sawo. Kelima kelompok penelitian , terdiri dari:
Kelompok A

: paparan asap rokok (-) ,ekstrak daun sawo manila

(-)

Kelompok B

: paparan asap rokok (+), ekstrak daun sawo manila

(-)

Kelompok C

: paparan asap rokok (+), ekstrak daun sawo manila

8,4mg/ekor dilarutkan dengan 1ml aquadest.

29

Kelompok D

: paparan asap rokok (+), ekstrak daun sawo manila

16,8mg/ekor dilarutkan dengan 1ml aquadest.

Kelompok E

: paparan asap rokok (+) ekstrak daun sawo manila

33,6mg/ekor dilarutkan dengan 1 ml aquadest.

Pemberian perlakuan dilakukan selama 21 hari dan pada hari ke

22 masing-masing hewan coba dikorbankan dengan cara dibius
dengan chloroform. Setelah mencit tidak sadarkan diri, difiksasi
kemudian dibedah. Sperma diambil dengan cara memotong cauda
epididimis sampai ampula vas deferens kira-kira 1,5 sampai 2 cm
kemdian diurut dengan scapel dan ditaruh didalam cawan petri yang
didalamnya berisi larutan NaCl fisiologis 0,9% dan dihomogenkan
kemudian sampel diperiksa konsentrasi.
3.5.3 Pembuatan Ekstrak daun Sawo
Ektrak daun sawo manila dibuat dari daun sawo manila yang
telah dicuci sampai bersih kemudian dikeringkan dengan cara dijemur
dibawah sinar matahari dengan menggunakan kain hitam. Setelah
mendapat sediaan simplisia kemudian diblender hingga halus dan
kemudian masuk ke proses maserasi.
Proses maserasi dimulai dari menimbang serbuk daun sawo
kemudian masukan ke dalam toples dan tambahkan ethanol dan
diaduk. Tutup toples dan diamkan selama 1 hari. Setelah 1 hari larutan
di saring dengan kertas saring dan ditampung. Ampas dari hasil hari
pertama masukan ke toples dan beri ethanol sambil diaduk, ditutup

30

dan diamkan selama 1 hari. Lakukan hal yang sama pada hari ke-3.
Selanjutnya masukan hasil saringan ke tabung evaporator untuk
mendapatkan ekstrak daun sawo.

3.5.4 Cara pemeriksaan Konsentrasi

1.

Sperma dihisap dengan pipet leukosit sampai angka 0,5 dan jaga
jangan sampai sperma keluar pipet. Kemudian ujung pipet
diletakkan pada bahan yang tidak meresap seperti kuku atau
plastik

2.

Larutan pengencer george dihisap sampai angka 11

3.

Pipet leukosit dipegang dengan ibu jari dan telunjuk di kedua

ujung pipet. Selanjutnya kocok pipet agar homogen selama 2
menit lalu buang 3 tetes pertama

4.

Sperma yang sudah homogen diteteskan ke atas bilik hitung yang

telah ditutup deck glass

5.

Spermatozoa dihitung pada bidang seluas mm2

6.

Pengamatan dan perhitungan spermatozoa dilakukan di bilik

hitung kotak sedang. Namun bila dalam bilik hitung kotak sedang
numlah spermatozoa >10 sel lakukan perhitungan pada bilik
hitung kotak kecil.

7.

Jumlah sel sperma yang didapat dimasukan dalam rumus untuk

mendapatkan konsentrasi.

31

3.6 Tempat dan Waktu Penelitian

3.6.1 Tempat Penelitian
Tempat penelitian dan perlakuan pada hewan coba bertempat di
Laboratorium Pusat Studi Pangan dan Gizi Gedung PAU UGM.
3.6.2 Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan Desember 2016.

32

3.7 Alur Penelitian

Populasi mencit jantan (Mus Musculus)

Sampel mencit jantan (Mus Musculus) 30 ekor

Randomisasi
Aklimatisasi 7 hr

Dibagi menjadi 5 kelompok (I,II,III,IV,V)

Kelompok I
6 ekor

Kelompok II
6 ekor

Kelompok III
6 ekor

Kelompok IV
6 ekor

Kelompok V
6 ekor

Asap rokok
(-)
Ekstrak
daun sawo
(-)
(Kontrol
Normal)
Selama 21
hari

Asap rokok
(+)
Ekstrak daun
sawo (-)
(Kontrol
Negatif)
Selama 21
hari

Asap rokok
(+)
Ekstrak daun
sawo (+)
dengan dosis
8,4mg/ekor
Diberikan
bersamaan
Selama 21
Hari

Asap rokok (+)

Ekstrak daun
sawo (+)
dengan dosis
16,8mg/ekor
Diberikan
bersamaan
Selama 21 hari

Asap rokok
(+)
Ekstrak daun
sawo (+)
dengan dosis
33,6mg/ekor
Diberikan
bersamaan
Selama 21
hari

Hari ke-22 Pemeriksaan konsentrasi

spermatozoa

33

3.8 Analisis Hasil

Hasil penelitian berupa data Konsentrasi spermatozoa. Data dari hasil
penelitian kemudian dilakukan uji normalitas dengan menggunakan Shapiro
wilk dan uji homogenitas dengan Levene test. Karena data terdistribusi normal
dan namun tidak homogen dilakukan uji Kruskall walis, dan dilanjutkan uji
Mann Whiteney.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian
Penelitian menggunakan mencit jantan starin Balb/C sebanyak 30 ekor dengan
umur 3 bulan, berat badan 20-30 gram dengan kondisi sehat dan tidak
cacat. Penelitian ini dilakukan dengan rancangan penelitian eksperimental
sederhana Post Test Only Control Group Design. Penelitian dilakukan di
laboratorium Pusat Studi Pangan dan Gizi PAU UGM. Aklimatisasi dilakukan
selama 7 hari, kemudian mencit dikelompokan dengan cara simple random
sampling. Sampel dibagi menjadi 5 kelompok ,setiap kelompok tediri dari 6
ekor. Kelompok I merupakan kelompok kontrol positif atau kelompok normal
yang hanya mendapatkan makan dan minum mencit biasa. Kelompok II
merupakan kelompok kontrol negatif atau kelompok dengan perlakuan
paparan asap rokok. Kelompok III mendapatkan perlakuan pemberian ekstrak
daun sawo manila dengan dosis 8,4mg/ekor dan paparan asap rokok.
Kelompok IV mendapatkan ekstrak daun sawo manila dengan dosis
16,8mg/ekor dan paparan asap rokok. Kelompok V mendapat dosis tertinggi
yaitu ekstrak daun sawo manila sebanyak 33,6mg/ekor dan paparan asap
rokok. Paparan asap rokok dilakukan selama 21 hari sebanyak 2 batang per
hari. Hari ke 22 mencit di bius dengan chloroform kemudian dibedah dan
diambil cauda epdidimis untuk diperiksa konsentrasi spermatozoa.

34

35

Hasil pengukuran berat badan, uji One Way Anova persentase

konsentrasi spermatozoa dan uji Kruskall-Wallis ditunjukkan dalam Tabel
4.1.
Tabel 4.1. Hasil Berat Badan, Uji One Way Anova, Konsentrasi
Spermatozoa dan Uji Kruskall-Wallis

Variabel

II

Rerata Berat Badan

(gram)
Standar Deviasi
Uji One Way Anova
(p)
Rerata Persentase
Konsentrasi
Spermatozoa (x106)
Standar Deviasi
Uji Kruskall Wallis
(p)

20,33
1,032

20,55
1,048

Kelompok
III
21,00
1,414

IV

20,66
0,816

20,50
1,378

0,885
28,90

22,32

31,13

35,02

48,68

7,886

3,141

9,182

7,747

20,740

0,014

Berdasarkan tabel 4.1 menunjukkan bahwa terdapat perbedaan rerata berat

badan mencit pada tiap kelompok. Mengetahui perbedaan tersebut bermakna atau
tidak, maka dilakukan uji statistik yang di dahului uji normalitas (Shapiro Wilk)
dan uji homogenitas (Levene test). Uji normalitas (Shapiro Wilk) didapatkan
sebaran data normal dengan p=0,887 (p>0,05) dan varian data homogen. Sebaran
data normal dan varian data homogen maka dilanjutkan dengan uji One Way
Anova. Hasil One Way Anova diperoleh p >0,05 yaitu 0,885. Hasil uji yang telah
dilakukan menyebutkan bahwa berat badan mencit antar kelompok terdapat
perbedaan yang tidak bermakna atau berat badan mencit setiap kelompok sama.

36

Uji Normalitas pada kelompok I-IV didapatkan sebaran data terdistribusi

normal dengan nilai p=0,547 untuk kelompok I, p=0,224 kelompok II, p=0,131
pada kelompok III, dan p=0,726 untuk kelompok IV, sedangkan pada kelompok V
didapatkan p=0,000 yang memiliki arti data tidak terdistribusi normal. Uji
Homogenitas juga perlu dilakukan yang hasilnya adalah varian data konsentrasi
spermatozoa dengan nilai p=0,122 (p>0,05). Sebaran data tidak normal dan
variasi data homogen, maka untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan rerata
konsentrasi spermatozoa antar kelima kelompok dilakukan uji non parametrik
Kruskal-Wallis. Uji Kruskal-Wallis didapatkan nilai p=0,014 (p<0,05) yang
memiliki arti bahwa diantara kelima kelompok perlakuan memiliki perbedaan
rerata konsentrasi spermatozoa yang bermakna. Mengetahui perbedaan rerata
konsentraasi spermatozoa anta dua kelompok perlu dilakukan uji Mann Whitney,
yang hasilnya disajikan pada tabel 4.2
Tabel 4.2. Hasil Uji Mann Whitney
Variabel Persentase Konsentrasi Spermatozoa
Rerata
Kelompok
p (Sig.)
(%)
I-II
28,90 22,32
0,201
I-III
28,90 31,13
0,522
28,90 35,02
I-IV
0,361
28,90 48,68
I-V
0,004(*)
22,32 31,13
II-III
0,144
II-IV
22,32 35,02
0,009(*)
II-V
22,32 48,68
0,006(*)
III-IV
31,13 35,02
0,361
III-V
31,13 48,68
0,199
IV-V
35,02 48,68
0,272
* : signifikan
.

37

Keterangan gambar : konsentrasi spermatozoa x 106

Gambar 4.1 Diagram batang rerata jumlah spermatozoa

Berdasarkan gambar 4.1 menunjukan bahwa rerata persentase
konsentrasi spermatozoa terendah pada kelompok II yang berperan sebagai
kontrol negatif dengan rerata sebesar 22,32 x 10 6. Rerata prosentase
konsentrasi spermatozoa tertiggi ditemukan pada kelompok V yaitu
kelompok yang mendapatkan perlakuan paparan asap rokok dan ekstrak
daun sawo dengan dosis tertinggi 33,6mg/ekor yaitu dengan rerata sebesar
48,68 x 106.
Berdasarkan tabel 4.2 menunjukan bahwa terdapat perbedaan rerata
konsentrasi spermatozoa antara kelompok I dengan kelompok II namun tidak
bermakna (p>0,05). Hal ini menunjukan paparan asap rokok berpengaruh
dalam menurunkan konsentrasi spermatozoa tetapi tidak bermakna. Antara
kelompok II dengan kelompok III terdapat perbedaan rerata konsentrasi

38

spermatozoa tetapi tidak bermakna (p>0,05), ini berarti bahwa pemberian

ekstrak daun sawo manila dosis 8,4mg/ekor dapat mencegah penurunan
konsentrasi spermatozoa akibat paparan asap rokok tetapi tidak bermakna.
Perbedaan antara kelompok II dengan kelompok IV dan V menunjukan
perbedaan bermakna (p<0,05), yang berarti bahwa pemberian ekstrak daun
sawo manila dengan dosis 16,8mg/ekor dan 33,6mg/ekor dapat mencegah
penurunan konsentrasi spermatozoa secara bermakna akibat paparan asap
rokok.
Antara kelompok III dengan kelompok IV dan V , maupun antara
kelompok IV dan V menunjukan adanya perbedaan tetapi tidak bermakna
(p<0,05). Hal ini menunjukan bahwa terdapat perbedaan antara daun sawo
manila dosis 8,4mg/ekor dengan 16,8mg/ekor dan 33,6mg/ekor, maupun
antara dosis 16,8mg/ekor dengan 33,6mg/ekor berpengaruh dalam mencegah
penurunan konsentrasi spermatozoa namun perbedaan tersebut tidak
bermakna.
Antara kelompok I dengan kelompok III dan IV menunjukan perbedaan
yang tidak bermakna (p>0,05). Hal ini menunjukan bahwa pemberian ekstrak
daun sawo manila antara dosis 8,4mg/ekor dan 16,8mg/ekor dapat
meningkatkan konsentrasi spermatozoa namun tidak bermakna. Antara
kelompok I dengan kelompok V menunjukan perbedaan yang bermakna
(p>0,05), yang berarti bahwa pemberian ekstrak daun sawo manila dosis
33,6mg/ekor dapat meningkatkan konsentrasi spermatozoa melebihi kondisi
normal dengan perbedaan yang bermakna.

39

Hasil yang telah dipaparkan diatas menunjukan bahwa paparan asap

rokok sebanyak 2 batang per hari selama 21 hari belum mampu menurunkan
konsentrasi spermatozoa. Pemberian ekstrak daun sawo manila dosis
33,6mg/ekor dapat mempengaruhi konsentrasi spermatozoa melebihi kondisi
normal sehingga hipotesis penelitian dapat diterima.
4.2 Pembahasan
Hasil uji statistik terhadap rerata berat badan mencit (Mus musculus) tiap
kelompok tidak terdapat adanya perbedaan bermakna, Hormon reproduksi
dapat terpengaruh oleh berat badan dan dapat mengakibatkan penurunan
kualitas spermatozoa , dalam penelitian ini menunjukkan berat badan mencit
jantan (Mus musculus) tidak

mempengaruhi

rerata dari konsentrasi

spermatozoa.
Hasil penelitian konsentrasi spermatozoa mencit jantan (Mus musculus)
yang dipapar asap rokok menunjukkan kelompok I (kontrol normal) dengan
kelompok II (kontrol negatif)

di dapatkan hasil berbeda namun tidak

bermakna (p>0.05). Pada penelitian didapatkan hasil kelompok I dan

kelompok II menunjukan konsentrasi spermatozoa dalam batas normal hal ini
dikarenakan kemungkinan pemaparan asap rokok yang kurang, sehingga
konsentrasi sperma yang dihasilkan masih dalam batas normal.
Kelompok

II

atau

kontrol

negatif

menunjukan

konsentrasi

spermatozoa terendah yaitu 22,32 x 106/mL dapat disimpulkan bahwa asap

rokok yang mengandung ROS dapat menurunkan konsentrasi spermatozoa

40

sesuai hasil penelitian yang dilakukan oleh Sari (2014) menyatakan bahwa
ROS dapat merusak DNA sel sperma dan dapat menyebabkan apoptosis sel
sperma sehingga dapat menurunkan konsentrasi sperma. ROS merupakan
radikal bebas yang mempunyai kemampuan oksidatif yang cukup tinggi.
Radikal bebas mengandung satu atau lebih senyawa elektron bebas sehingga
bersifat tidak stabil. Mekanisme utama dalam proses kerusakan membran
spermatozoa oleh ROS ini adalah reaksi peroksidasi lipid. Hidrogen
Peroksida (H2O2) adalh senyawa yang memproduksi ROS terbesar dalam
spermatozoa manusia (Sari, 2014).
Spermatozoa menghasilkan ROS memiliki 2 mekanisme ;
1. Sistem oksidasi NADPH

(Nicotinamide Adenine Dinucleotide

Phosphate) pada level membraane plasma spermatozoa

2. NADH

(Nicotinamide

Adenine

Dinucleotide)

dependen

oksidereduktase pada level mitokondria

Paparan asap rokok dapat meningkatkan kadar lipid peroxidase
yang akan merusak sel-sel pada testis yaitu sel leydig,sel spematid dan sel
sertoli dan menyebabkan penurunan konsentrasi spermatozoa (Agarwal et al.,
2010). Kerusakan sel leydig karena paparan asap rokok akan menurunkan
kadar hormon testosteron yang menyebabkan penurunan konsentrasi
spermatozoa (Murray et al., 2013), namun pada penelitian ini belum
diketahui kadar hormon Testosteron yang turun akibat pemaparan asap rokok
sehingga belum bisa memastikan bahwa

penurunan kadar hormon

41

testosteron diakibatkan oleh radikal bebas asap rokok .

Hasil penelitian konsentrasi spermatozoa mencit jantan strain Balb/C
yang dipapar asap rokok menunjukkan bahwa ada perbedaan rerata konsentrasi
spermatozoa antara kelompok kontrol positif dengan kelompok dosis 33,6mg/ekor
ekstrak daun sawo manila (p = 0,004) dan antara kelompok kontrol negatif dengan
kelompok dosis 16,8mg/ekor esktrak daun sawo manila (p = 0,009). Hasil analisis
kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan (paparan asap rokok)
dengan dosis ekstrak 33,6mg/ekor menunjukan adanya perbedaan signifikan.
Hasil ini membuktikan bahwa antioksidan yang dimiliki oleh ekstrak daun
sawo manila dapat mencegah radikal bebas seperti yang telah dijelaskan dalam
penelitian Konczak (2004) tentang aktivitas flavonoid sebagai antioksidan
eksogen yang bermanfaat dalam mencegah kerusakan sel akibat stress oksidatif.
Flavonoid bekerja secara langsung dan tidak langsung. Flavonoid sebagai
antioksidan secara langsung adalah dengan memberikan ion hidrogen sedangkan
jika bekerja secara tidak langsung adalah dengan cara flavonoid meningkatkan
ekspresi gen antioksidan endogen. Peningkatan rerata konsentrasi spermatozoa
pada kelompok yang diberikan ekstrak daun sawo manila disebabkan karena daun
sawo manila bersifat sebagai antioksidan kuat untuk melawan radikal bebas
seperti flavonid dan saponin (Dalimartha, 2007; Panjaitan et al., 2005).
Antioksidan yang dikandung daun sawo manila efektif mencegah terjadinya stess
oksidatif dengan mereduksi radikal hidroksil, superoksida, dan radikal peroksil
(Agarwal et.al., 2010).
Flavonoid pada daun sawo memiliki 6 zat aktif seperti flavons, isoflavon,

42

flavonone, anthocyanin, catechin, isocatechin yang dapat merangsang sel-sel

leydig untuk mengeluarkan hormon testosteron yang berperan dalam proses
spermatogenesis, sehingga jumlah spermatozoa akan meningkat (Chanda et.al
2010).
Pelaksanaan penelitian terdapat 2 subyek yang mengalami drop out
karena mencit mati, kemungkinan karena mencit mengalami stress pada saat
pelaksanaan penelitian.
Penelitian ini diharapkan ekstrak daun sawo manila dapat menjadi
alternatif pencegahan penurunan konsentrasi spermatozoa akibat paparan asap
rokok, sehingga dapat menurunkan kasus infertilitas pria.
Keterbatasan dalam penelitian ini adalah kandang hewan coba yang
digunakan tidak memenuhi standar sebagai kandang pemberian paparan asap
sehingga asap rokok mudah terbawa angin, dan dosis paparan tidak terpenuhi.
Selain itu pemeriksaan konsentrasi spermatozoa dilakukan oleh peneliti sendiri
sehingga faktor subyektifitas sangat tinggi.

43

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan
Simpulan yang dapat diambil dari hasil penelitian mengenai pengaruh
ekstrak daun sawo manila terhadap konsentrasi spermatozoa mencit Balb/c
jantan yang diberi paparan asap rokok sebagai berikut:
5.1.1. Pemberian ekstrak daun sawo manila (Manilkara zapota) berpengaruh
terhadap konsentrasi spermatozoa mencit jantan (Mus Musculus) yang
mendapat paparan asap rokok.
5.1.2. Tidak terdapat perbedaan secara bermakna antara rerata konsentrasi
spermatozoa kelompok yang diberi ekstrak daun sawo manila dosis
8,4mg/ekor dengan kelompok yang tidak diberi ekstrak daun sawo
manila. Terdapat perbedaan secara bermakna rerata konsentrasi
spermatozoa antara kelompok yang diberi ekstrak daun sawo manila
dosis 16,8mg/ekor dan 33,6mg/ekor terhadap kelompok kontrol
negatif.
5.1.3. Dosis ekstrak daun sawo manila (Manilkara zapota) yang paling
berpengaruh dalam mencegah penurunan konsentrasi spermatozoa
mencit jantan (Mus Musculus) yang dipapar asap rokok adalah dosis
33,6mg/ekor.

44

5.2 Saran
5.2.1

Melakukan penelitian menggunakan kandang hewan coba yang sesuai

atau khusus untuk pemberian paparan asap yang benar.

5.2.2

Pembacaan konsentrasi spermatozoa sebaiknya dilakukan sekurangkurangnya oleh 2 orang yang ahli dalam bidangnya agar tidak terjadi
bias.

DAFTAR PUSTAKA

Agarwal A., Saleh R.A., Bedaiwy MA., 2010, Role of Reactive Oxygen Species in
The Pathophisyology of Human Reproduction, Fertility and Sterility, 79:
829-843.
Anonymous, 2010, Mencit Binatang Lucu, http://difarimouse.blogspot. com/
2010/05/mencit-binatang-lucu.html, diakses 21 Juni 2015.
Anonymous, 2015, http://herba.berita1.com/sawo-manila-manilkara-zapota-2 ,
diakses 21 Juni 2015.
Arief, S., 2013, Radikal Bebas, Fakultas Kedokteran Unair, Surabaya.
Batubara I. V. D., Wantouw B., 2013, Pengaruh Paparan Asap Rokok Kretek
Terhadap Kualitas Spermatozoa Mencit Jantan (Mus musculus), Jurnal eBiomedik (eBM), Vol 1
Chanda, V.S., Nagani, K.V., 2010, Antioxidant Capacity of Manilkara zapota L.
Leaves Extracts Evaluated by Four in vitro Methods, Saurastra University,
Gujarat, India.
Dalimartha, S., 2007, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, Jilid 4, Cetakan 2, Puspa
Swara, Depok, Hal 78.
Depkes, 2012, Bunga Sampai Fakta Tembakau dan Permasalahannya di
Indonesia, http://tcsc-indonesia .org/wp-content/uploads/2012/12/BukuFakta- Tembakau.pdf., diakses 24 Juni 2015.
Dorland, W. A. Newman, 2003, Kamus Kedokteran Dorland Edisi 30, EGC,
Jakarta, 2003.
Dunkin,
M.A.,
2013,
Super
Foods
for
Optimal
Health,
http://www.webmd.com/food-recipes/antioxidants-your-immune-systemsuper-foods-optimal-health, diakses 4 Juni 2015.
Evans, A.R., Limp-Foster, M., Kelly, M.R., 2005, Fertilty and sterility, Journal of
Urology.
Ganguly, A., Mahmud, A.Z., Uddin, N., Rahman, A.S., 2013, In-vivo antiinflammatory and anti-pyretic activities of Manilkara zapota leaves in
albino Wistar rats, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, Elsevier.
Ganong, W.F., 2006, Fisiologi Kedokteran Edisi 10, Penerbit Buku kedokteran
EGC, Jakarta, hal 372-379.
Gilbert, S.F. 2006. Developmental Reproductive Biology. Sunderland: Sinauere
Associates Inc.

45

46

Gondodiputro S, 2007, Bahaya Tembakau dan Bentuk-bentuk Sediaan Tembakau.

Bagian Ilmu Kesehatan Masyarakat Fakultas Kedokteran Universitas
Padjajaran.
http://resources.unpad.ac.id/unpadcontent/uploads/publikasi_dosen/Rokok.P
df. ( Accessed 2015 Juni 2015 )
Guyton, A.N., Hall, J. E., 2008, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi Sembilan,
Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal 341.
Harborne, 2007 , Forest and Landscape (Manilkara Zapotta L.), Seed Leaflet,
University of Copenhagen.
Johnson M, Everitt B, 2005. Essential in Reproduction. London: Blackwell
Science Pub Oxford.
Junqueira, L. C., Jose Carneiro, Robert O, K, 2007, Histologi Dasar edisi ke-8.
Jakarta: EGC, Hal 419-432.
Langseth , 2006, Male Infertility, European Associattion of Urology, h 46-55.
Mardiyana, Lina, 2007, Ramuan Tradisional Untuk Kesuburan Suami dan Istri,
Penebar Swadaya, Depok. 3-4.
Markham, 1998, Harvesting of economically important edible plant species series
22 : Manilkara zapota, Journal of Insect Behavior, Mexico.
Morton,T., 2013, Edible Medicinal adn Non-medicinal Plants;Volume 6, Springer
Science.
Murray R. K, Granner D.K, Rodwell V.W, 2013, Biokimia Harper, Edisi 27,
Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal 341.
Mustikasari, D.R., Tjandrakirana., Qomariyah, N., 2013, Pengaruh Pemberian
Filtrat Daun Katuk terhadap Konsentrasi dan Morfologi Normal
Spermatozoa Mencit (Mus musculus) yang Terpapar Asap Rokok,
LenteraBio, vol.2, 155-158
Naz R. K, and Rajendran Sellamuthu, 2006, Receptor In Spermatozoa : Are They
Real, Journal of Andrology. 7 (25)
Orwan , 2009, Uji Obat Tradisional Indonesia, Universitas Andalas, Padang.
Osman, A.M., Aziz, A.M., Habib, R.M., Karim, R.M., 2010, Antimicrobial
Investigation on Manilkara zapota (L.) , International Journal of Drug
Development and Research, Bangladesh.
Panjaitan, Budhi Prasetyo, Leenawaty Limantara, 2005, Peranan Karotenoid
Alami dalam mengkal radikal bebas didalam tubuh.Program Magister
Biologi, Universitas Kristen Satya Wacana.

47

Redha, A., 2010, Flavonoid : Struktur, Sifat Antioksidatif Dan Perannya Dalam
Sistem Biologis, Jurnal Belian, Politeknik Negeri Pontianak.
Royam, 2008, Thrips-pollination in sapodilla (Manilkara zapota), Proccedings of
the Indian National Science Academy, Journal of Applied Horticulture.
Rugh R, 2005, The Mouse : Its Reproduction and Development, Burgess
Publishing Co, Minneapolis, hal 12-22.
Saleh, R.A., Agarwal, A., Nada, E.A., El-Tonsy, M.H., Sharma, R.K., Meyer, A.,
2003, Negative effects of increased sperm DNA demage in relation to
seminal oxidative stress in men with idiopathic and male factor infertility,
Fertil Steril, 79(3): 1597-1605.
Samini, 2008, Tanaman Obat Indonesia;vol 1 , Universitas Andalas.
Sari, D.P., 2014, Effect of Cigarette Smoke in Quality and Quantity Spermatozoa,
Fakultas Kedokteran Universitas Lampung, Journal Majority, Vol. 3, No. 7.
Setiati, S., Harimurti, K., Govinda R, Arya., 2009, Buku Ajar Ilmu Penyakit
Dalam, Jilid I, 1, Interna Publishing, Jakarta, 759-760
Shamsi, M.B., Venkatesh S, Kumar R, Gupta, N.P., Malhotra N, Singh N, Mittal
S, Arora S, Arya, D.S., Talwar P, Sharma, R.K,. Dada R, 2010 Antioxidant
Levels in Blood and Seminal Plasma and Their Impact on Sperm Parameters
in Infertile Men, Indian Journal of Biochemistry & Biophysics, Vol 47. Pp
38-43.
Sherwood, L., 2006, Fisiologis Manusia ; dari sel ke sistem ed.2, Jakarta ; EGC,
hal.691-705.
Somwanshi, S.D., Madole, M.B., Bikkad, M.D., Bhavthankar,S.S., Gavkare, A.,
Shelke, B.,2012, Effect of Cigarette Smoking on Sperm Count and Sperm
Motility, Journal of Medical Education & Research, Vol. 2, No.1, Jan-June
2012.
Terahara N., I. Konczak, H. Ono, M. Yoshomoto, dan O. Yamakawa, 2004.
Characterization of acylated anthocyanins in callus induced from storage
root of purple-fleshed sweet potato, lpomoea batatas L., Journal Biomed.
Biotechnol. 5 :279-286.
Toruan, L., Pradono, Y., Sirait, A.M., 2005, Perilaku Merokok Di Indonesia,
Buletin Penelitian Kesehatan, Jakarta.
Twig, W., Buhlinger-Gopfarth, N., 1998, Smoking and Low antioxidant levels
increase oxidative damage to sperm DNA. Mutat Res.

48

Tendean, L., Vergina, C., Queljoe, E., 2013, Perbedaan Kualitas Spermatozoa
Mencit Jantan (Mus Musculus) Yang Diberikan Vitamin C Setelah
Pemaparan Asap Rokok, Jurnal e-Biomedik (eBM), Fakultas Kedokteran
Universitas Sam Ratulangi, Manado.
WHO, 2012, Infencundity Infertility and Chlidlessness in Developing Countries,
DHS Comparative Report No.9.
WHO, 2013, WHO Report On The Global Tobacco Epidemic ( Country Profile
Indonesia), WHO Press, Switzerland.
World Health Organization, 2010, WHO Laboratory Manual for the Examination
and Processing of Human Semen, Geneva, WHO Press, Switzerland.
Zavos, P. M., Correa, J.R., 2007, An Electron Microscope Study of th axonemal
Ultrastructure in Human Spermatozoa from Male smokers and Nonsmokers,
Human Reproduction Update, University of Nort Carolina.
Zuhra, C.F., Tarigan, J.B., Sihotang, H., 2008, Aktivitas Antioksidan Senyawa
Flavonoid dari Daun Katuk (Sauopus androgynus (L) Merr), Jurnal Biologi
Sumatera, Vol.3, No 1, Hlm. 7-10,

49

Lampiran 1. Ethical Clearance

50

Lampiran 2. Hasil Uji Spss Berat Badan Mencit

Descriptives
BB

N
K1
K2
K3
K4
K5
Total

6
6
6
6
6
30

Mean
20.3333
20.5000
21.0000
20.6667
20.5000
20.6000

St d. Dev iation
1.03280
1.04881
1.41421
.81650
1.37840
1.10172

St d. Error
.42164
.42817
.57735
.33333
.56273
.20115

95% Conf idence Interv al f or

Mean
Lower Bound
Upper Bound
19.2495
21.4172
19.3993
21.6007
19.5159
22.4841
19.8098
21.5235
19.0535
21.9465
20.1886
21.0114

Minimum
19.00
19.00
19.00
20.00
19.00
19.00

Tests of Normal ity

a

BB

Kelompok
K1
K2
K3
K4
K5

Kolmogorov -Smirnov
Stat istic
df
Sig.
.293
6
.117
.183
6
.200*
.167
6
.200*
.293
6
.117
.308
6
.077

Stat istic
.915
.960
.982
.822
.857

Shapiro-Wilk
df
6
6
6
6
6

*. This is a lower bound of the true signif icance.

a. Lillief ors Signif icance Correction
Test of Homogeneity of Variance

BB

Based on Mean
Based on Median
Based on Median and
with adjusted df
Based on t rimmed mean

Lev ene
St at ist ic
.281
.179

df 1
4
4

df 2
25
25

Sig.
.887
.947

.179

17.487

.946

.260

25

.901

Sig.
.473
.820
.960
.091
.178

Maximum
22.00
22.00
23.00
22.00
23.00
23.00

51

26
23.00

22.00

21.00

20.00

19.00

K1

K2

K3

K4

K5

Kelompok

Oneway
ANOVA
BB

Between Groups
Within Groups
Total

Sum of
Squares
1.533
33.667
35.200

df
4
25
29

Mean Square
.383
1.347

F
.285

Means Plots
21.00
21.00
K3

20.90

Mean of BB

20.80

20.667
K4

20.70

20.60
20.50
K2

20.50
K5

20.50

20.40
20.333
K1

20.30

K1

K2

K3

Kelompok

K4

K5

Sig.
.885

52

Lampiran 3. Hasil Uji SPPS Morfologi Spermatozoa

Descriptives
Jumlah Sperma

N
K1
K2
K3
K4
K5
Total

6
5
6
5
6
28

Mean
28.9000
22.3200
31.1333
35.0200
48.6833
33.5357

St d. Dev iation
7.88619
3.14197
9.18208
7.74706
20.74015
14.06741

St d. Error
3.21952
1.40513
3.74857
3.46459
8.46713
2.65849

95% Conf idence Interv al f or

Mean
Lower Bound
Upper Bound
20.6240
37.1760
18.4187
26.2213
21.4973
40.7693
25.4007
44.6393
26.9179
70.4488
28.0809
38.9905

Minimum
17.00
17.40
22.40
26.50
39.20
17.00

Maximum
37.20
25.00
42.50
45.10
91.00
91.00

Uji Normalitas Sebaran Data dan homogenitas

Tests of Normal ity
a

Jumlah Sperma

Kelompok
K1
K2
K3
K4
K5

Kolmogorov -Smirnov
Stat istic
df
Sig.
.212
6
.200*
.304
5
.148
.262
6
.200*
.173
5
.200*
.476
6
.000

Stat istic
.926
.859
.840
.948
.525

Shapiro-Wilk
df
6
5
6
5
6

*. This is a lower bound of the true signif icance.

a. Lillief ors Signif icance Correction
Test of Homogeneity of Variance

Jumlah Sperma

Based on Mean
Based on Median
Based on Median and
with adjusted df
Based on trimmed mean

Lev ene
Stat istic
2.039
.334

df 1
4
4

df 2
23
23

Sig.
.122
.852

.334

6.510

.847

1.344

23

.284

Sig.
.547
.224
.131
.726
.000

53

NPar Tests
Kruskal-Wallis Test
Ranks
Kelompok
K1
K2
K3
K4
K5
Total

Jumlah Sperma

N
6
5
6
5
6
28

Mean Rank
11.17
6.00
14.33
17.80
22.33

Test Statisticsa,b

Chi-Square
df
Asy mp. Sig.

Jumlah
Sperma
12.575
4
.014

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: Kelompok

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K1
K2
Total

N
6
5
11

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
8.000
23.000
-1.278
.201
a

.247

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

Mean Rank
7.17
4.60

Sum of Ranks
43.00
23.00

54

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K1
K3
Total

N
6
6
12

Mean Rank
5.83
7.17

Sum of Ranks
35.00
43.00

Mean Rank
5.17
7.00

Sum of Ranks
31.00
35.00

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
14.000
35.000
-.641
.522
a

.589

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K1
K4
Total

N
6
5
11

55

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
10.000
31.000
-.913
.361
a

.429

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

NPar Tests
Mann-Whitney Test

Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K1
K5
Total

N
6
6
12

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
.000
21.000
-2.887
.004
a

.002

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

Mean Rank
3.50
9.50

Sum of Ranks
21.00
57.00

56

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K2
K3
Total

N
5
6
11

Mean Rank
4.40
7.33

Sum of Ranks
22.00
44.00

Mean Rank
3.00
8.00

Sum of Ranks
15.00
40.00

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
7.000
22.000
-1.461
.144
a

.177

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K2
K4
Total

N
5
5
10

57

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
.000
15.000
-2.611
.009
a

.008

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K2
K5
Total

N
5
6
11

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
.000
15.000
-2.745
.006
a

.004

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

Mean Rank
3.00
8.50

Sum of Ranks
15.00
51.00

58

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K3
K4
Total

N
6
5
11

Mean Rank
5.17
7.00

Sum of Ranks
31.00
35.00

Mean Rank
5.17
7.83

Sum of Ranks
31.00
47.00

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
10.000
31.000
-.913
.361
a

.429

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

NPar Tests
Mann-Whitney Test
Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K3
K5
Total

N
6
6
12

59

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
10.000
31.000
-1.283
.199
a

.240

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

NPar Tests
Mann-Whitney Test

Ranks
Jumlah Sperma

Kelompok
K4
K5
Total

N
5
6
11

Test Statisticsb

Mann-Whitney U
Wilcoxon W
Z
Asy mp. Sig. (2-tailed)
Exact Sig. [2*(1-tailed
Sig.)]

Jumlah
Sperma
9.000
24.000
-1.098
.272
a

.329

a. Not corrected f or t ies.

b. Grouping Variable: Kelompok

Mean Rank
4.80
7.00

Sum of Ranks
24.00
42.00

60

Means Plots

48.68
K5

50.00

45.00

Mean of Jumlah

40.00

35.02
K4

35.00
31.13
K3

30.00

28.90
K1

25.00
22.32
K2

20.00

K1

K2

K3

Kelompok

K4

K5

61

Lampiran 4. Surat Penelitian Laboratorium Pusat Studi Pangan dan Gizi Gedung
PAU UGM

62

Lampiran

5.

Unissula

Surat

Pembuatan

Ekstrak

Laboratorium

Kimia

FK

63

Lampiran 6. Surat Pemeriksaan Konsentrasi Spermatozoa Laboratorium Patologi

Klinik FK UGM

64

Lampiran 7. Dokumentasi Penelitian

Pembuatan Ekstrak Daun Sawo Manila

Ekstrak Daun Sawo Manila

Sonde oral

Pembedahan mencit

65

Analisis sperma

Konsentrasi sperma mencit