Repositori FMIPA Jurnal Ilmiah Biosaintropis Vol. 1 No.1 Januari.

Unisma 2013 ISSN 2338-2805 (print) Pratiwi:1-5

Uji Hormon NAA dan BAP dalam Medium MS untuk Pertumbuhan Eksplan
Alfalfa (Medicago sativa L) dari Berbagai Sumber Eksplan
UNISMAUNISMA

Endang Pratiwi1, Tintrim Rahayu2

2
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Islam Malang
1
Email: cinta_kakbah@yahoo.co.id

ABSTRAK
FMIPA FMIPA

Alfalfa (Medicago sativa L) merupakan tanaman yang mengandung klorofil tinggi.

Perbanyakan tanaman ini masih mengalami hambatan diantaranya benih harus impor dari luar negeri.
Perbanyakan tanaman tersebut dapat melalui kultur jaringan. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui pengaruh penggunaan hormon NAA dan BAP terhadap pertumbuhan kalus dan tunas
alfalfa (Medicago sativa L) serta untuk menentukan konsentrasi hormon NAA dan BAP terhadap
pertumbuhan kalus dan tunas alfalfa (Medicago sativa L). Rancangan dalam penelitian ini
menggunakan metode eksperimen dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 16
perlakuan dengan 3 kali ulangan. Data yang diperoleh di analisis secara deskriptif dan ANOVA,
dengan uji BNT 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan hormon NAA dan BAP
Repositori

memberikan pengaruh nyata terhadap pertumbuhan kalus maupun tunas alfalfa (Medicago sativa L)
baik dari eksplan epikotil dan hipokotil. Hormon yang optimal untuk menghasilkan kalus yaitu BAP 1,5
ppm NAA 3 ppm, sedangkan untuk menghasilkan tunas yaitu BAP 1 ppm NAA 0 ppm.

Kata kunci : konsentrasi NAA dan BAP, kalus, tunas, hipokotil, epikotil
Repositori
 Repositori FMIPA Unisma Jurnal Ilmiah Biosaintropis Vol. 1 No.1 Januari.
2013 ISSN 2338-2805 (print)
PENDAHULUAN
UNISMA
Alfalfa (Medicago sativa L) merupakan
Leguminosae yang berkhasiat menyembuhkan
penyakit kanker, diabetes, lupus, dan hepatitis.
Alfalfa dikenal sebagai penghasil klorofil yang
digunakan sebagai bahan suplemen makanan.
Klorofil adalah molekul organik pada tumbuhan
dengan struktur seperti haemoglobin pada
UNISMA
manusia, yang dapat meningkatkan ketahanan
tubuh. Alfalfa juga mengandung karotenoid, asam
amino, flavonoid, fito-estrogen, dan saponin.
Manfaat alfalfa lainnya adalah sebagai pakan
FMIPAFMIPA
ternak dan penghasil minyak (Peretty dan Horne,
2007)[1].
Di Indonesia, tanaman ini belum
dibudidayakan. Alfalfa diimpor dalam bentuk
kecambah dan produk suplemen dari Amerika,
Cina, atau negara-negara Arab. Hanya beberapa
herbalis Indonesia yang sudah mengoleksi
tanaman ini sebagai tanaman hias atau sebagai
bahan baku obat. Beberapa herbalis menyatakan
Repositori
bahwa tanaman ini cukup menjanjikan sebagai
tanaman obat, sehingga perlu dimasukkan ke
dalam khasanah pengobatan di Tanah Air
(Rahmayanti dan Sitanggang, 2006) [2].
Secara umum perbanyakan tanaman
berdasarkan perkembangan siklus hidupnya dapat
digolongkan menjadi dua, yaitu : perbanyakan
Repositori
seksual dan perbanyakan aseksual. Pada
perbanyakan melalui siklus seksual tanaman baru
muncul sebagai penggabungan dua gamet
induknya dan berkembang melalui biji. Pada
perbanyakan kasus anakan baru akan
menunjukkan variasi genetik yang besar, akibat
kombinasi-kombinasi baru selama meiosis.
Berbeda sekali dengan perbanyakan secara
aseksual, perbanyakan vegetatif masih mampu
mempertahankan karakter unik dari individu
tanaman (tanaman induk, tanaman stok, atau
ortet) melalui pertumbuhan dan perbanyakan sel-
sel dimana gen-gennya dikopi melalui
pembelahan mitosis. Namun dapat pula terjadi
sebagian dari tanaman baru (atau rawet) yang
diproduksi dengan metode ini menunjukkan suatu
individu yang berbeda dengan galur sel
somatiknya akibat terjadi mutasi. Hal seperti ini
umumnya terjadi pada penggunaan kalus yang
telah berumur (long time callus) (Santoso dan
Nursandi, 2001) [3].
Perbanyakan tanaman secara seksual
melalui kultur in vitro (Santoso dan Nursandi,
2001)[3]. Perbanyakan secara in vitro merupakan
Pratiwi:1-5
salah satu metode perbanyakan secara vegetatif
yang dapat menghasilkan bibit dalam jumlah
banyak dalam waktu relatif cepat, memiliki sifat
yang sama dengan induknya, dan menghasilkan
tanaman yang unggul yaitu tahan terhadap
penyakit, perakaran kuat, bentuk morfologinya
baik dan dapat berbuah lebat (Wijayanti dan
Hendaryono, 1994)[4]. Mikropropagasi atau
perbanyakan secara in vitro dapat dilakukan
dengan perbanyakan tunas dari eksplan berupa
mata tunas atau meristem, namun dapat pula
terjadi secara tidak langsung melalui
pembentukan kalus dari jaringan vegetatif,
misalnya hipokotil. Selanjutnya kalus terbentuk
dapat dirangsang untuk berdiferensiasi menjadi
planlet (Hartman et al., 19905; Suryowinoto,
19966) .
Menurut Evans et al. (2003)7, induksi
kalus dipengaruhi oleh rasio auksin dan sitokinin
yang seimbang, sehingga diperlukan kombinasi
yang tepat agar dapat menginduksi pembentukan
kalus yang optimal. Hartman et al., 19905;
Suryowinoto, 1996 [6] bahwa perbanyakan dari
eksplan berupa hipokotil akan menghasilkan kalus
dan perbanyakan dari eksplan berupa epikotil
akan menghasilkan tunas.
Berdasarkan hal tersebut di atas, pada
penelitian ini dilakukan pemberian kombinasi
ZPT, yaitu antara NAA dan BAP untuk
mengetahui kombinasi konsentrasi yang tepat
dalam menginduksi kalus dan tunas yang optimal
dari eksplan hipokotil dan epikotil alfalfa.
BAHAN DAN CARA KERJA
Penyediaan eksplan
Eksplan yang digunakan adalah hipokotil dan
epikotil alfalfa (Medicago sativa L.), yang diambil
dari kecambah alfalfa aseptik umur 8 hari.
Induksi Kalus dan tunas
Hipokotil dan epikotil dipotong sepanjang
1 cm, kemudian di tanam dalam botol-botol kultur
sesuai dengan 16 macam perlakuan media MS,
setiap satu botol berisi satu potong eksplan.
Variabel yang diamati adalah morfologi kalus,
tekstur kalus, warna kalus, respon callogenesis,
respon organogenesis, penambahan volume kalus
dan tinggi tunas.
 Repositori FMIPA Jurnal Ilmiah Biosaintropis Vol. 1 No.1 Januari.
Unisma 2013 ISSN 2338-2805 (print) Pratiwi:1-5

HASIL DAN PEMBAHASAN
Morfologi Kalus dan Morfologi Tunas, Respon
Callogenesis dan Respon Organogenesis Hasil
Kultur dengan Penggunaan Hormon NAA dan
BAP pada Berbagai Konsentrasi.
Pertumbuhan kalus, menunjukkan bahwa
pertumbuhan dapat terjadi pada semua macam
Repositori FMIPA UNISMA
rata-rata 7 daun. BAP 0 ppm dan NAA 3 ppm,
menghasilkan pertumbuhan tunas dengan tinggi
tunas rata-rata 23,5 mm serta menghasilkan daun
rata-rata 3,5 daun. Perbedaan ini disebabkan
karena faktor eksogen, dimana BAP dalam
konsentrasi kecil mampu menghasilkan tunas
sedangkan NAA dalam konsentrasi besar baru
mampu menghasilkan daun dan tunas (Katuuk,
1989)[10] seperti yang terlihat dalam gambar 1.

perlakuan yang menggunakan sumber eksplan Eksplan hipokotil dan epikotil yang
dari hipokotil tetapi tidak menunjukkan digunakan pada penelitian ini mempunyai umur
pertumbuhan kalus pada eksplan yang bersumber yang masih muda (8 hari) dan kondisi yang sehat,
dari epikotil. Hal ini mungkin dikarenakan karena eksplan diisolasi dari biji alfalfa yang
beberapa faktor yang menghambat pertumbuhan dikecambahkan secara aseptis. Eksplan yang
kalus di antaranya : penggunaan sumber eksplan muda, sel-selnya bersifat meristematis sehingga
juga mempengaruhi hasil kultur. Eksplan berupa masih aktif membelah. Kesehatan eksplan juga
hipokotil akan menghasilkan kalus dan eksplan
berupa epikotil akan menghasilkan tunas
(Hartman et al., 19905; Suryowinoto, 19966) dan
mungkin juga dikarenakan penambahan hormon
eksogen tidak berpengaruh terhadap jumlah dan
kerja hormon endogen untuk mendorong
pertumbuhan dan perkembangan eksplan
[8] a b
(Gunawan, 1988) .
Faktor-faktor di atas juga terjadi pada
pertumbuhan tunas, dimana pertumbuhan tunas
hanya terjadi pada eksplan yang bersumber dari
epikotil dengan penambahan BAP 1 ppm NAA 0
ppm, BAP 1.5 ppm dan NAA 0 ppm, BAP 0 ppm
dan NAA 3 ppm. Hal ini dikarena eksplan epikotil
membutuhkan waktu yang lama untuk
menghasilkan tunas dan disebabkan adanya
pengaruh apical dominan yaitu dominan pucuk
yang diakibatkan konsentrasi auksin yang tinggi c d
pada meristem pucuk (Salissbury dan Roos,
1992)[9], dimana tunas epikotil menghambat
pembentukan tunas axilar sehingga perlu
penambahan NAA dan BAP tinggi. Pertumbuhan Gambar 1. Pertumbuhan Tunas Alfalfa dari
tunas pada perlakuan media BAP 1 ppm NAA 0 sumber eksplan epikotil (a), dalam perlakuan
ppm, BAP 1.5 ppm dan NAA 0 ppm, media BAP 1 ppm, NAA 0 ppm(b), BAP 1,5 ppm,
menunjukkan fungsi sitokinin yaitu memacu NAA 0 ppm(c), dan BAP 0 ppm, NAA 3 ppm(d)
pertumbuhan tunas, begitu juga dengan perlakuan
media BAP 0 ppm dan NAA 3 ppm menunjukkan
fungsi auksin juga bisa memacu pertumbuhan berpengaruh pada kondisi fisiologis sel dan
tunas tetapi dengan konsentrasi tinggi (Katuuk, proses-proses yang ada di dalamnya. Eksplan
1989) [10]. yang sehat, proses-proses fisiologisnya akan jauh
Pengaruh penggunaan hormon NAA dan lebih baik. Chawla (2003)[11] menyatakan bahwa
BAP terhadap pertumbuhan tunas di semua eksplan yang berasal dari jaringan muda dan sehat
perlakuan berbeda. BAP 1 ppm dan NAA 0 ppm, umumnya lebih responsif dalam kultur in vitro,
menghasilkan pertumbuhan tunas dengan tinggi sehingga proses regenerasi sel dapat berlangsung
tunas ratarata 32 mm serta menghasilkan daun cepat.
rata-rata 1,5 daun. BAP 1,5 ppm dan NAA 0 ppm, Hasil pengamatan morfologi kalus di atas
menghasilkan pertumbuhan tunas dengan tinggi terdapat warna dan tekstur yang berbedabeda.
tunas rata-rata 22,5 mm serta menghasilkan daun Tekstur kalus ini menunjukkan variasi akibat
 Repositori FMIPA Unisma Jurnal Ilmiah Biosaintropis Vol. 1 No.1 Januari.
2013 ISSN 2338-2805 (print) Pratiwi:1-5

perlakuan hormon yang berbeda. Kalus warna
kuning, hampir terbentuk di semua media
perlakuan NAA dan BAP yang konsentrasinya di
bawah 1 ppm. Tekstur kalus remah, juga hampir
terbentuk di semua media perlakuan NAA tanpa
penambahan BAP. Warna kuning pada kalus
diduga merupakan pigmen antosantin (Evans et
al., 2003)[7]. Pigmen antosantin ini adalah
senyawa fenol dari kelompok flavonoid. Senyawa
Repositori FMIPA UNISMA
suatu media, perlu dipindahkan secara teratur
dalam waktu tertentu. Masa kultur yang panjang
dalam media yang tetap akan menyebabkan
terjadinya kehabisan unsur hara dan air. Selain itu
selsel dalam kalus juga mengeluarkan
persenyawaanpersenyawaan hasil metabolisme
yang menghambat pertumbuhan kalus itu sendiri.
Contoh hasil senyawa metabolik sekunder yaitu
fenol. Jika fenol yang terbentuk mengalami

fenol yang terbentuk pada kalus dalam penelitian oksidasi maka akan menyebabkan warna coklat
ini merupakan bentuk respon eksplan terhadap pada kalus (Pierik, 1987)[12]. Seperti gambar 2.
luka. Luka pada kedua ujung hipokotil karena Senyawa fenol yang muncul pada kalus
pengirisan akan memacu eksplan untuk akan bersifat toksik bagi sel apabila dalam
melakukan usaha untuk pertahanan diri. Usaha konsentrasi yang berlebihan, yang akan
tersebut dilakukan dengan meningkatkan aktifitas menghambat pertumbuhannya. Produksi senyawa
metabolik sehingga dihasilkan senyawa metabolik fenol yang terbatas pada eksplan ataupun kalus
sekunder yaitu fenol. Jika fenol yang terbentuk masih dapat ditoleransi. Namun apabila senyawa
mengalami oksidasi maka akan menyebabkan fenol sudah menyebabkan pencoklatan pada
warna coklat pada kalus (Pierik, 1987)[12]. Tekstur media tanam, hal ini dapat menghambat
kalus yang remah sejalan dengan perkembangan pertumbuhan eksplan yang mengakibatkan
kalus yang menunjukkan terjadinya poliferasi kematian kultur (Robbiani, 2010) [14].
massa sel dalam kalus (Khrisnamoorthy, 1981)[13].
Pertumbuhan Kalus
Penggunaan hormon NAA dan BAP pada
berbagai konsentrasi memberikan pengaruh nyata
terhadap pertumbuhan kalus alfalfa. Kalus pada
semua media perlakuan menunjukkan perbedaan
volume.
a b
Tabel 1. Volume Kalus Dari Eksplan Hipokotil (mm)
pada Berbagai Media Perlakuan
No. Konsentrasi (ppm) Rataan
1 B0 N0 2,01 e
2 B1 N0 1,82 c
c d 3 B2 N0 1,03 b
4 B3 N0 0,88 a
Gambar 2. Pertumbuhan Kalus dan contoh hasil 5 B0 N1 2,07 g
morfologi kalus (tektur dan warna) dari sumber 6 B1 N1 2,03 f
eksplan hipokotil(a), warna kalus kuning dengan
7 B2 N1 2,52 n
tekstur remah(b), cokelat dengan tektur
kompak(c), dan kuning dengan tekstur remah(d). 8 B3 N1 2,44 m
9 B0 N2 2,52 n
10 B1 N2 2,39 k
Sedangkan kalus warna cokelat dengan
11 B2 N2 2,11 h
tekstur kompak hanya terbentuk pada media
perlakuan BAP 1 ppm NAA 0 ppm dan BAP 1.5 12 B3 N2 2,21 i
ppm NAA 0 ppm. Warna coklat pada kalus, 13 B0 N3 2,32 j
menandakan bahwa kalus telah mengalami fase 14 B1 N3 2,4 l
penuaan. Fase ini terjadi setelah fase Linier : fase 15 B2 N3 1,99 d
dimana sel mulai lambat berkembang sebab mulai
kehabisan makanan (Katuuk, 1989)[10]. Menurut 16 B3 N3 3,11 o
Gunawan (1988)[8] kalus yang ditumbuhkan pada
 Repositori FMIPA Jurnal Ilmiah Biosaintropis Vol. 1 No.1 Januari.
Unisma 2013 ISSN 2338-2805 (print) Pratiwi:1-5

Sedangkan volume kalus dari eksplan Tabel 3. Tinggi Tunas Epikotil (mm)
epikotil dengan KT Galat 0, sehingga tidak bisa di No Konsentrasi (ppm) Rataan
lanjutkan ke uji BNT 5%.
1 B0 N0 0,71 a
2 B1 N0 1,09 b
3 B2 N0 1,45 e
Tabel 2. Volume Kalus Dari Eksplan Epikotil
(mm) pada Berbagai Media Perlakuan 4 B3 N0 1,44 d
No Konsentrasi (ppm) Rataan 5 B0 N1 0,71 a
Repositori FMIPA UNISMA

1 B0 N0 0,71 a 6 B1 N1 0,71 a
2 B1 N0 0,71 a 7 B2 N1 0,71 a
3 B2 N0 0,71 a 8 B3 N1 0,71 a
4 B3 N0 0,71 a 9 B0 N2 0,71 a
5 B0 N1 0,71 a 10 B1 N2 0,71 a
6 B1 N1 0,71 a 11 B2 N2 0,71 a
7 B2 N1 0,71 a 12 B3 N2 0,71 a
8 B3 N1 0,71 a 13 B0 N3 1,15 c
9 B0 N2 0,71 a 14 B1 N3 0,71 a
10 B1 N2 0,71 a 15 B2 N3 0,71 a
11 B2 N2 0,71 a 16 B3 N3 0,71 a
12 B3 N2 0,71 a
13 B0 N3 0,71 a Tabel 4. Tinggi Tunas Hipokotil (mm)
14 B1 N3 0,71 a No Konsentrasi (ppm) Rataan
15 B2 N3 0,71 a 1 B0 N0 0,71 a
16 B3 N3 0,71 a 2 B1 N0 0,71 a
3 B2 N0 0,71 a
4 B3 N0 0,71 a
5 B0 N1 0,71 a
Pertumbuhan Tunas
6 B1 N1 0,71 a
Penggunaan hormon NAA dan BAP pada 7 B2 N1 0,71 a
berbagai konsentrasi memberikan pengaruh nyata 8 B3 N1 0,71 a
terhadap pertumbuhan tunas yang dilihat dari hasil 9 B0 N2 0,71 a
pengukuran tinggi tunas.
10 B1 N2 0,71 a
Sedangkan tinggi tunas dari eksplan hipokotil
dengan KT Galat 0, sehingga tidak bisa di 11 B2 N2 0,71 a
lanjutkan ke uji BNT 5%. Adapun pertumbuhan 12 B3 N2 0,71 a
tunas hipokotil alfalfa dapat dilihat pada tabel 13 B0 N3 0,71 a
dibawah ini. 14 B1 N3 0,71 a
Berdasarkan beberapa gambar histogram
diatas menunjukkan bahwa hormon endogen saja 15 B2 N3 0,71 a
tidak cukup untuk pertumbuhan sehingga 16 B3 N3 0,71 a
diperlukan hormon eksogen, terutama pada kultur
jaringan. Oleh karena itu, pemberian zat pengatur
tumbuh harus sesuai jenis dan konsentrasinya KESIMPULAN
karena akan mempengaruhi pertumbuhan eksplan
(Santi dan Kusumo, 1996) [15]. 1. Penggunaan hormon NAA dan BAP
berpengaruh nyata terhadap morfogenesis
eksplan tanaman alfalfa yaitu menghasilkan
kalus disemua perlakuan dengan sumber
eksplan dari hipokotil dan menghasilkan tunas
 Repositori FMIPA Unisma Jurnal Ilmiah Biosaintropis Vol. 1 No.1 Januari.
2013 ISSN 2338-2805 (print) Pratiwi:1-5

di perlakuan BAP 1 ppm NAA 0 ppm , BAP
1.5 ppm NAA 0 ppm, dan BAP 0 ppm NAA 3
ppm dengan sumber eksplan dari epikotil
2. Penggunaan hormon NAA dan BAP yang
optimal untuk menghasilkan kalus yaitu BAP
1.5 ppm NAA 3 ppm, sedangkan untuk
menghasilkan tunas yaitu BAP 1 ppm NAA 0
ppm
Repositori FMIPA UNISMA
[12] Pierik, R.L.M. 1987. In Vitro Culture Of
Higher Plant. Martinus Nijhoff Publ. Boston.
344p.
[13]Krishnamoorthy HN. 1981. Plant Growth
Subtances Including Application in Agriculture.
Tata Mc. Graw. Hill, Publishing Co. Ltd. New
York. 50p.
[14] Robbiani, D. 2010. Pengaruh NAA dan
Kinetin Pada Kultur In Vitro Ekspln Daun

DAFTAR PUSTAKA Tembakau. Institut Teknologi Sepuluh Nopember

(ITS). Surabaya.
[1] Peretty, P and S. Horne. 2007. Alfalfa [15] Santi, A dan Kusumo. 1996. Komposisi
Medicago sativa. Natures Field 23 (6): 1. Media Tumbuh yang Cocok untuk Perbanyakan In
http://www.treelite.com/NF/2007/07/PetHealth.pd Vitro Bromelia. Jurnal Hortikultura 5(5): 94-98.
f. (3 Juli 2012)
[2] Rahmayanti, E dan M. Sitanggang. 2006.
Taklukkan Penyakit dengan Klorofil Alfalfa. PT
Agromedium Pustaka. Jakarta.
[3] Santoso, U dan Nursandi, F. 2001. Kultur
Jaringan Tanaman. Universitas Muhammadiyah
Malang (UMM). Malang.
[4] Wijayanti dan Hendaryono,D.P. 1994. Teknik
Kultur Jaringan. Kanisius. Yogyakarta.
[5] Hartman, H T., D E. Kester, and F T. Davies.
1997. Plant Propagation Principle and Practicer
Fifth edition. Prentice-Hall international. New
Jersey
[6] Suryowinoto, M. 1996. Pemuliaan Tanaman
Secara In vitro. Kanisius, Yogyakarta.
[7] Evans, D.E., J.O.D. Coleman, and A. Keams.
2003. Plant Cell Culture. BIOS Scientific
Publisher. New York.
[8] Gunawan,L.W 1988. Teknik Kultur Jaringan
Tumbuhan. Laboratorium Kultur Jaringan
Tumbuhan PAU Bioteknologi. Institut Pertanian
Bogor. Bogor.
[9] Mastuti,R dan Widoretno,W. 2010. Petunjuk
Praktikum Kultur Jaringan Tumbuhan.
Laboratorium Kultur Jaringan Tumbuhan Jurusan
Biologi Fakultas MIPA Universitas Brawijaya
Malang. Malang.
[10] Katuuk, 1989. Teknik Kultur Jaringan
Dalam Mikropropagasi Tanaman. P2LPTK.
Jakarta
[11] Chawla H.S. 2003. Plani Biotechnology. A
Practical Approach Science Publisher, Inc. USA