PENGENALAN RUANG LABORATORIUM DAN ALAT ALAT KULTUR

JARINGAN TANAMAN

Femin damayanti
1419810401012
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam, Universitas
Jember Laboratorium Bioteknologi
Jln. Kalimantan 37, Jember 68121
Email: femin.damayanti@gmail.com

ABSTRAK

Laboratorium Kultur Jaringan Tumbuhan terdiri dari ruangan-ruangan yang

dipisahkan berdasarkan fungsinya, yaitu ruang persiapan (preparation area), ruang
laminar dan ruang inkubasi. Sebelum bekerja bioteknologi tanaman, perlu dipahami
nama, penggunaan, prinsip kerja dan komponen dari alat-alat yang digunakan di
dalam praktikum kultur jaringan tanaman. Alat- alat yang digunakan antara lain alat
Laminar Air Flow Cabinet merupakan tempat kerja khusus yang dilengkapi dengan
penyaring udara dihubungkan dengan ruang tertutup. Penyaring berupa HEPA
(High Efficiency Particulate Air) sehingga udara yang ada dilam ruang tertutup
tersebut steril dari partikel debu dan mikroorganisme. Selain itu juga dilengkapi
dengan lampu UV. pH meter, alat untuk mengukur kesaman senyawa. Neraca
digital, digunakan mengukur massa bahan. Mikropipet, untuk mengambil larutan
dalam skala yang sangat kecil (mikroliter). Magnetik stirer, alat yang digunakan
untuk menghomogenkan larutan. Timbangan, untuk menimbang sampel. Penangas
untuk memanaskan media. Autoklaf untuk menstrerilkan alat dan media dan
perlengkapan lain seperti botol kurjar, pinset, skapel, gunting,dll.

Kata kunci : Ruang preparasi, Ruang laminar, ruang inkubasi, LAF, oven, autokaf,
Ph meter, kompor, magnetic stirer, mikropipet dan neraca analitik dan perlengkapan
lain seperti botol kurjar, pinset, skapel, gunting, dll.
PENDAHULUAN kalibrasi sebelum penggunaan alat
serta perawatannya
Sebelum melakukan pekerjaan
di dalam laboratorium sangat penting
METODE PENELITIAN
untuk mengetahui ruangan ruangan
Praktikum dilakukan di
yang terdapat dalam laboratorium
Laboratorium Bioteknologi Jurusan
kultur jaringan karena setiap ruangan
Biologi Fakultas Matematika dan
memiliki karakteristik dan fungsi
Ilmu Pegetahuan Alam Universitas
yang berbeda dan harus dipahami
Jember pada hari jumat, 24 september
praktikan untuk mempermudah
2017
kegiatan praktikum selanjutnya.
Selain ruangan, Praktikan harus
Alat dan Bahan
mengerti prinsip kerja alat-alat yang
Alat dan bahan dalam
di gunakan dalam laboratorium. Hal
praktikum ini yaitu, Ruang Preparasi,
ini di maksudkan agar praktikan tidak
Ruang laminar dan Ruang inkubasi
salah dalam penggunaan alat-alat di
dan alat alat kultur jaringan seperti
dalam laboratorium. Selain itu,
Autoklaf, Laminar Air Flow, pH
dengan mengenal dan mengetahui
meter, Micropipet, Magneticstirer,
nama, fungsi, dan cara kerja alat-alat
Oven, Neraca Analitik, Penangas, dan
laboratorium tersebut, kemungkinan
perlengkapan lain seperti botol kurjar,
salah dalam melakukan praktikum
pinset, skapel,dll.
tersebut sangatlah kecil. Karena
pemahaman tentang alat-alat
praktikum tersebut telah dikuasai oleh Langkah Kerja
praktikan. Langkah kerja dalam
Dalam sebuah praktikum praktikum ini adalah Ruangan
pengenalan ruang dan alat praktikum laboratorium kultur jaringan
tidak hanya penting pada prosedur tumbuhan dan alat-alat laboratorium
penggunaan, tetapi juga penting yang digunakan dalam praktikum
dalam perawatan dan kebersihan kultur jaringan dikenalkan oleh
ruang dan alat-alat praktikum itu asisten fungsi, prinsip kerja, serta
sendiri. Karena dengan ruang dan komponen-komponennya kepada
alat-alat yang bersih dan terawat juga praktikan. Kemudian praktikan
merupakan hal penting dalam mencatat nama-nama alat praktikum
berjalannya sebuah praktikum yang beserta fungsinya. Alat-alat tersebut
diharapkan sesuai dengan hasil berupa yaitu Autoklaf, Laminar Air
akhirnya. Terlebih lagi alat-alat dalam Flow, pH meter, Micropipet,
analisis biologi tanaman, yang Magneticstirer, Oven, Neraca
membutuhkan pemahaman yang baik Analitik, Penangas, dan perlengkapan
berkenaan dengan cara kerja, fungsi, lain seperti botol kurjar, pinset,
skapel, dll.
 HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pengenalan Laboratorium
Kultur Jaringan Tumbuhan
Laboratorium Kultur Jaringan
Tumbuhan terdiri dari ruangan-
ruangan yangdipisahkan berdasarkan
fungsinya, yaitu ruang preparasi,
ruang laminar dan ruang inkubasi. [4]
1. Ruang Preparasi
Ruang preparasi sesuai namanya
yaitu ruangan untuk mempersiapkan
segala sesuatu sebelum melakukan
peketjan kultur jaringan. Ruangan ini
mempunyai 3 fungsi dasar yaitu untuk
membersihkan alat-alat (alat-alat
gelas seperti petri, botol, dll),
persiapan dan sterilisasi media, dan
penyimpanan alat-alat gelas. Sebuah
bak untuk mencuci yang dilengkapi
dengan kran untuk aliran air mengalir
juga diperlukan untuk membersihkan
alat-alat berbahan gelas. Selain itu
diperlukan meja yang permukaanya
dilapisi dengan bahan yang mudah
dibersihkan. Peralatan selanjutnya
yang digunakan dalam ruang
preparasi adalah lemari es untuk
menyimpan larutan stok dan beberapa
media, timbangan analitik, autoclave,
pH meter, magnetic stirrer, destilator
[4]. Selain alat di atas, ruangan ini
juga dilengkapi dengan alat-alat
seperti Hot plate dengan magnetic
stirer,Oven, pH meter , kompor gas,
labu takar, gelas piala, erlenmeyer,
pengaduk gelas, spatula, petridish,
pipet, botol kultur, pisau scalpel [4]
2. Ruangi Laminar
Ruang Laminar sesuai namanya
merupakan ruangan yang terdapat
laminar dan digunakan untuk isolasi,
inokulasi dan subkultur (penjarangan)
pada kondisi steril yang di dalamnya
terdapat lemari kaca atau kabinet
yang disebut Laminar Airflow (LAF).
Laminar Airflow ini digunakan untuk
pemotongan eksplan, melakukan
penanaman dan subkultur. Akan
tetapi jika tidak ada LAF yang
memadai, tahap isolasi (pemotongan
eksplan) dapat dilakukan di antara
kertas saring steril. Sangat dianjurkan
untuk menggunakan jas laboratorium
yang bersih selama tahap persiapan
dan mensterilkan tangan dengan
alkohol 96% [5] Alat-alat seperti
scalpel, gunting dan alat-alat
inokulasi lainnya harus disterilkan
dengan alkohol 96% dan dilanjutkan
dengan pemanasan di atas api bunsen.
Lampu ultraviolet (UV) juga
digunakan mensterilkan ruang,
sebelum LAF digunakan.
Pemotongan eksplan juga dilakukan
di dalam LAF yang kemudian
dilanjutkan dengan beberapa tahapan
sterilisasi sebelum ditanam pada
media kultur. Selama inokulasi atau
penanaman, botol yang berisi media
padat pada prinsipnya pada kondisi
horisontal, hal ini dilakukan untuk
mengurangi kontaminasi, terutama
ketika tidak bekerja dalam LAF.
Subkultur atau tahap penjarangan
juga dilakukan dalam LAF, dan
merupakan tahapan yang perlu
dilakukan pada metode kultur
jaringan. Ada beberapa alasan perlu
dilakukannya subkultur, diantaranya
yaitu nutrisi media yang semakin
lama semakin berkurang, munculnya
browning atau media agar menjadi
kecoklatan karena jaringan tanaman
kadang mengeluarkan senyawa
toksik, atau eksplan membutuhkan
tahap perkembangan lebih lanjut [4].
3. Ruang Inkubasi
Ruang inkubasi merupakan
ruang pertumbuhan atau ruang
penyimpanan hasil kultur
pada kondisi cahaya dan temperatur
B. Alat Alat dalam Kultur Jaringan Tumbuhan
Autoklaf, Laminar Air Flow, pH meter, Micropipet, Magneticstirer, Oven,
Neraca Analitik, Penangas, dan perlengkapan lain seperti botol kurjar, pinset,
skapel, gunting,dll. Gambar atau foto beberapa alat tersebut dapat dilihat pada tabel
1.
Tabel 1. Gambar dan fungsi beberapa alat dalam metode kultur jaringan
no Nama Alat Gambar
1 Laminar Air
Flow
yang terkontrol. Ruang inkubasi
terdiri dari ruang gelap untuk inkubasi
kultur yang sensitif terhadap cahaya
misal saat proses induksi dan
proliferasi kalus dan ruang terang
untuk memfasilitasi eksplan
melakukan fotosintesis. Ruang
pertumbuhan ini terdiri dari rakrak
yang biasanya terbuat dari kaca dan
digunakan untuk meletakkan botol-
botol kultur setelah proses
penanamanan pada ruang isolasi di
dalam LAF. Rak-rak yang digunakan
untuk inkubasi dilengkapi dengan
lampu neon di atasnya sebagai
sumber cahaya. Sedangkan ruang
pertumbuhan dalam kultur jaringan
dilengkapi dengan Air conditioner
(AC) untuk mengontrol suhu ruang
[4].
Fungsi
Kabinet yangdigunakan untuk
isolasi, inokulasi dan subkultur.
Laminar air-flow cabinet ini
harus steril dan bebas dari debu
yang dilengkapi dengan UV,
lampu neon dan blower.
Kabinet ini dapat diganti
dengan enkas (kotak tertutup
yang terbuat dari kaca atau
 triplek dengan permukaan licin
putih

2 Autoklaf Mensterilkan alat dan media

yang akan digunakan

3 oven Mengeringkan alat alat yang

selesai di autoklaf

4 Ph meter Mengukur ph media

5 Magnetic stirer Menghomogenkan larutan

dalam media dan melarutkan
sukrosa dalam media

6 Timbangan Menimbang komposisi media

analitik kultur jaringan
 7. penangas Memanaskan media sehingga
agar larut kedalam media

8. mikropipet Mengambil komponen media

dalam satuan mikroliter

10 Botol kuljar Tempat eksplan yang

dikulturkan tumbuh

11 Pinset, skalpel Perperan dalam isolasi eksplan,

seperti mengambil dan
memotong eksplan

Ruang kerja yang steril adalah laboratorium yang memerlukan

Laminar Air Flow Cabinet. Laminar sterilsitas yang tinggi, seperti saat
Air Flow Cabinet merupakan ruang melakukan kultur jaringan dan
yang dirancang khusus untuk kerja transformasi DNA genom.
Lingkungan dalam laminar air flow
disterilisasi dengan 2 cara. Yaitu
dengan penyaring khusus yang
Gambar 1: laminar air flow beserta komponennya
Sumber: http://www.biobase.cc/productdetail.asp?PId=66
Komponen-komponen utama
dalam laminar air flow cabinet adalah
yang pertama HEPA (High Efficiency
Particulate Air) merupakan
penyaring udara khusus dari berbagai
partikel kontaminan serta bakteri
yang mungkin berada di udara.
Sehingga memungkinkan
mengalirkan udara bersih (bebas
debu) di dalam ruang tertutup dalam
Laminar Air Flow (LAF) pertama kali
udara memasuki saluran HEPA (High
Efficiency Particulate Air) sehingga
partikel debu tersaring. Saringan ini
ada batas waktu pemakaiannya, jika
sudah rusak harus diganti dengan
yang baru [9].
disebut HEPA (High Efficiency
Particulate Air) dan sinar UV [2]
Selain itu Laminar Air Flow
(LAF) yang dilengkapi dengan lampu
UV [7] dan lampu TL (lampu neon
biasa). Lampu UV berfungsi untuk
membunuh mikroorganisme di udara.
Panjang gelombang yang dapat
membunuh mikroorganisme adalah
220-290 nm, radiasi paling efektif
adalah 253,7 nm [9]. Cahaya
ultraviolet tidak terlihat oleh mata,
sinar ini akan berpengaruh terhadap
asam nukleat. Sinar ultra violet ini
menyebabkan ikatan molekul timin
terlepas dari dimernya, hai ini dapat
merusak DNA [9]
Cara kerja alat ini adalah 1-2
jam sebelum dilakukan kerja didalam
ruang di dalam Laminar Air Flow
(LAF), hidupkan terlebih dahulu
sinar UV untuk sterilisasi udara dari
mikroorganisme. Matika sinar UV
diganti dengan lampu TL untuk mulai
bekerja, sebelumnya hidupkan
terlebih dahulu blower untuk
menciptakan udarah bersih didalam
ruang Laminar Air Flow (LAF) [2]
Selain ruang kerja Laminar
Air Flow (LAF) yang sempit,
sterilisasi juga meliputi pada ruang
penyimpanan hasil kultur jaringan
disebut Ruangan Steril. Ruangan ini
didisain khusus sebagai tempat
penyimpanan untuk pertumbuhan
kalus. Suhu ruangan ini dijaga agar
tetap 24oC dan intensitas cahaya
Keterangan: Gambar 2: Bagian-Bagian Autoklaf
1. Tombol Sumber:
pengatur waktu http://dc399.4shared.com/doc/oNX5C6VG/preview.html
mundur (timer)
2. Timer
3. Katup pengeluaran uap
4. Pengukur tekanan
5. Klep pengaman
6. Tombol on/off
7. Termometer
1000-2000 LUX. Ruangan ini
dilengkapi dengan sinar UV. Selain
itu, ruangan ini diberi pengaturan
khusus berkenaan dengan lama
penyinaran lampu yang disesuaikan
dengan panjang hari tanaman yang
ada di ruangan tersebut [3]
Selanjutnya adalah sterilisasi
alat bahan yang digunakan didalam
praktikum. Alat-alat yang digunakan
di dalam proses ini adalah Autoklaf
dan Oven. Yang pertama sterilisasi
mengunakan Autoklaf. Prinsip kerja
dari autoklaf adalah penggunaan uap
air jenuh pada tekan diatas tekanan
atmosfir dan digunakan untuk
memanaskan isi di dalam autoklaf [3]
8. Lempeng sumber panas
9. Akuades
10. Sekrup pengaman
11. Batas penambahan air
 Autoklaf memiliki suatu ruang
yang mempu menahan tekanan diatas
1 atm. Pada saat air mulai dipanaskan
maka uap air akan masuk kedalam
tangki pensterik dan kemudian
mendesak semua udara untuk keluar
[9] Sterilisasi dilakukan pada suhu
121oC, tekanan 2 atm, selama 15-20
Gambar 3: Prinsip Umum Auto klaf
Dalam praktikum ini sterilisasi
dilakukan pada alat-alat gelas seperti
botol kultur, cawan petri, dan botol
akuades. Untuk sterilisasi alat-alat
kaca dilakukan tanpa pembungkusan
khusus, karena kaca tergolong bahan
Kelebihan penggunaan
autoklaf adalah pemanasan
berlangsung cepat, mempunyai daya
tembus dan kelembaban yang tinggi.
Semua proses tersebut akan
mempermudah koagolasi protein sel-
menit [9] . Alat dan bahan yang
biasanya disterilisasi dengan autoklaf
adalah alat dari bahan kaca, besi,
kertas dan sebagainya, untuk bahan,
adalah bahan-bahan yang tidak
mengandung bahan termolabil
(seperti antibiotik dan susu) [1]
yang tahan terhadap tekanan dan
suhu. Namun untuk alat yang tertutup,
makan tutup dilonggarkan agar uap
air dapat masuk kedalam dan
membunuh organisme yang ada di
dalam ) [1]
sel mikroorganisme. Sehingga
kematian mikroorganisme karena
suhu bukan karena uapnya atau
tekanan uapnya) [1]
 Selanjutnya setelah dikukan
sterilisasi di dalam autoklaf alat-alat
tersebut dimasukkan kedalam oven
untuk sterilisasi selanjudnya,
dikatakan juga sebagai sterilisasi
panas kering. Sterilisasi dengan
menggunakan oven berlaku untuk
peralatan laboratorium seperti cawan
petri, piper, shiring, alat suntik, dan
untuk bahan adalah gliserin, parafin,
petrolatum, serbuk sulfomida, dan
materi-materi lain yang berbantuk
powder atau minyak Alat-alat yang
akan disterilisasi ditempatkan di
dalam oven dimana suhunya dapat
mencapai 160-180oC, dengan cara
memanaskan udara dalam over
dengan listrik. Daya tembus udara
panas tidak sebesar uap panas
bertakanan sehingga membutuhkan
waktu lebih lama untuk proses
sterilisasinya. Efek sterilisasi sama
dengan efek pembakaran. Panas yang
dihasilkan akan mengoksidasi protein
mikoba. Selain itu, untuk
mengeringkan alat-alat dari uap
autoklaf [6]
Pemahaman tentang alat-alat
analisis dan pengukuran laboratorium
kultur jaringan sangat penting.
Berikut beberapa alat-alat yang perlu
pH meter adalah alat pengukur
pH (keasaman) suatu bahan atau
larutan. Prinsip kerja pH meter adalah
bila suatu elektrode dimasukkan
kedalam suatu larutan, maka
elektrode akan cenderung
memberikan ion-ion keadalam
Mikropipet merupakan alat
laboratorium selanjudnya. Alat ini
dipahami : Neraca analitik adalah alat
timbangan yang digunakan untuk
menimbang secara teliti. Neraca ini
mampu menimbang zat atau benda
sampai batas 0,0001 g. Beberapa hal
yang perlu diperhatikan bekerja
dengan neraca ini adalah: Neraca
analitik digital adalah neraca yang
sangat peka, karena itu bekerja
dengan neraca ini harus secara halus
dan hati-hati. Sebelum mulai
menimbang persiapkan semua alat
bantu yang dibutuhkan dalam
penimbangan. Langkah kerja
penimbangan yang meliputi:
Persiapan pendahuluan alat-alat
penimbangan, siapkan alat dan zat
yang akan ditimbang, sendok, kaca
arloji dan kertas isap, pendahuluan
terhadap neraca meliputi: periksa
kebersihan neraca (terutama piring-
piring neraca), kedataran dan
kesetimbangan neraca. dan
Penimbangan, dapat dilakukan
setelah diperoleh keadaan setimbang
pada neraca dan timbangan pada
posisi nol, demikian pula setelah
penimbangan selesai posisi
timbangan dikembalikan seperti
semula [7]
larutan. Ion-ion didalam larutan akan
cenderung bereaksi dengan elektrode.
Kedua tersebut akan menghasilkan
tegangan elektrode. Adanya tegangan
ini menjadi dasar pH meter untuk
mengukur pH larutan [9].
biasa digunakan untuk mengambil
larutan dengan volume yang sangat
kecil (mikroliter). Ukuran mikropipet
bermcam-macam, ada mikropipet
yang digunakan untuk mengambil
larutan volume maksimal 20 L
KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
Laboratorium Kultur Jaringan
Tumbuhan terdiri dari ruangan-
ruangan yang dipisahkan berdasarkan
fungsinya, yaitu ruang persiapan
(preparation area), ruang laminar dan
ruang inkubasi. Sebelum bekerja
kultur tanaman, perlu dipahami nama,
penggunaan, prinsip kerja dan
komponen dari alat-alat yang
digunakan di dalam praktikum
bioteknologi tanaman. Alat- alat yang
digunakan antara lain alat Laminar
Air Flow Cabinet merupakan tempat
kerja khusus yang dilengkapi dengan
penyaring udara dihubungkan dengan
ruang tertutup. Penyaring berupa
HEPA (High Efficiency Particulate
Air) sehingga udara yang ada dilam
Saran
Dalam pengerjaan setiap
praktikum ini, diperlukan kesabaran
dan ketelitan yang tinggi untuk
mendapatkan hasil yang baik.
Diperlukan kedisiplinan yang tinggi
terkait penggunaan alat-alat
laboratorium, mengingat alat-alat
laboratorium yang terbatas sehingga
setiap praktikan bisa menggunakan
sampal 1000 L untuk mengambil
senyawa dengan volume tertentu
menggunakan tip khusus sesua
volume yang dikehendaki [6].
ruang tertutup tersebut steril dari
partikel debu dan mikroorganisme.
Selain itu juga dilengkapi dengan
lampu UV. pH meter, alat untuk
mengukur kesaman senyawa. Neraca
digital, digunakan mengukur massa
bahan. Mikropipet, untuk mengambil
larutan dalam skala yang sangat kecil
(mikroliter). Magnetik stirer, alat
yang digunakan untuk
menghomogenkan larutan.
Timbangan, untuk menimbang
sampel. Penangas untuk memanaskan
media. Autoklaf untuk menstrerilkan
alat dan media dan perlengkapan lain
seperti botol kurjar, pinset, skapel,
,dll.
secara bergiliran. Diperlukan
pemahaman yang baik berkaitan
dengan prosedur penggunaan alat-alat
laboratorium karena alat-alat yang
canggih dan selalu mengikuti
petungjuk dari asisten. Serta
diharapkan selalu bekerja secara
aseptis agar tidak terjadi kontaminasi.
 DAFTAR PUSTAKA [5] Pierik, R.M.L. 1987. In Vitro
Culture of Higher Plants.
[1] Aulanniam. 2012. Instruksi Martinus Nijhoff
Kerja Penggunaan Autoclaf. Publishers.Dordrecht.The
Laboratorium Mikrobiologi Netherlands.
dan Imunologi Program [6] Petrucci, Ralph H. 1987.
Kedokteran Hewan Kimia Dasar Prinsip dan
Universitas Brawijaya. Terapan Modern. Jilid 2 Edisi
Malang. 4. Jakarta: Erlangga.
[2] Edhi, Sandra .2013. Cara [7] Srilestari, Rina. 2005. Induksi
Mudah Memahami dan Embrio Somatik Kacang
Menguasai Kultur Jaringan. Tanah Pada Berbagai Macam
IPB Press. Vitamin Dan Sukrosa. llmu
[3] Endang, Lestari. 2011. Pertanian. 12(1): 43-50.
Peranan Zat Pengatur [8] Tenriulo, Andi. Suryati,
Tumbuh dalam Perbanyakan Emma. Parerrengi, Andi. Dan
Tanaman melalui Kultur Rosmiat. 2001. Ekstraksi Dna
Jaringan. Jurnal Biogen. 7 Rumput Laut Kappaphycus
(1):63-68 alvarezii Dengan Metode
[4] Hartmann, H.T., D.E. Kester, Fenol Kloroform. Marina
F.T. Davies Jr., and R.L. Chimica Acta. ISSN 1411-
Geneve. 1997. Plant 2132. 2 (2): 6-10.
Propagation: Principle And [9] Waluyo, Lud. 2008. Teknik
Practices Sixth Ed. metode Dasar mikrobiologi.
UMM Press: Malang.