BAB 21: ASAM ABSISAT, ETHYLENE, DAN BRASSINOSTEROIDS

21.1 ASAM ABSISAT

Tidak seperti auksin, giberelin, dan sitokinin, hormon asam absisat (ABA)
ditunjukkan oleh 15-karbon tunggal sesquiterpene. ABA memiliki jangkauan efek spesifik
yang lebih terbatas daripada auksin, giberelin, dan sitokinin. Fungsi utama ABA adalah (1)
menghambat perkecambahan sebelum waktunya dan mendukung dormansi pada biji dan (2)
mendorong penutupan stomata dan memproduksi molekul yang melindungi sel terhadap
pengeringan. ABA juga terlibat dalam respons perkembangan lainnya, termasuk induksi
penyimpanan protein pada biji, heterofil (daun dengan bentuk berbeda pada tanaman yang
sama), inisiasi akar sekunder, pembungaan, dan penuaan.

21.1.1 ASAM ABSISAT DISINTESIS DARI PREKURSOR KAROTENOID

Terdapat dua jalur pembentukan ABA yaitu jalur langsung dan jalur tidak langsung.
Pada jalur langsung, ABA akan disintesis dari prekursor 15-karbon terpenoid seperti farnesyl
diphosphate. Pada akhir 1970-an telah jelas ditetapkan bahwa jalur ini beroperasi pada
patogen tanaman jamur tertentu yang secara aktif mensintesis ABA, tetapi tidak pada
tanaman itu sendiri. Pada jalur tidak langsung, ABA dihasilkan dari pembelahan karotenoid
seperti β-karoten. Pembelahan karotenoid, terutama β-karoten yang menghasilkan biokimia
bermanfaat bukan tanpa preseden. Misalnya Cyanobacterium Microcystis, menghasilkan
metabolit C10 dengan pembelahan β-karoten. Mamalia menghasilkan vitamin A dengan
pembelahan β-karoten dan telah dilaporakan pembelahan β-karoten untuk menghasilkan
fotoreseptor dari 2 molekul retina (C20).
Sekarang ada semakin banyak bukti yang mendukung sintesis tidak langsung ABA
dari β-karoten melalui 40-karbon terpene violaxanthin (Gambar 21.2). Awalnya, serangkaian
vivipar mutan pada jagung ditemukan telah mengurangi kadar karotenoid dan ABA. Mutan
ini terbukti berpengaruh pada langkah awal biosintesis karotenoid, membangun korelasi yang
kuat antara karotenoid dan biosintesis ABA. Kedua, kerangka karbon ABA dan posisi
substituen yang mengandung oksigen sangat mirip dengan violaxanthin. JAD Zeevaart dan
18
rekan-rekannya membandingkan penggabungan O2, isotop oksigen yang stabil ke dalam
ABA pada daun yang terkena tekanan air dan daun turgid dari beberapa spesies. Pola
18
pengayaan O2 pada kelompok karboksil ABA konsisten dengan pembelahan xantofil dan
dikonversi dengan cepat menjadi ABA pada daun yang terkena tekanan air. Ketiga, diketahui
bahwa violaxanthin dapat terdegradasi dalam cahaya in vitro menjadi turunan 15-karbon,
xanthoxin yang merupakan unsur alami tumbuhan. Jika xanthoxin berlabel radio
diumpankan ke tanaman kacang atau tomat, beberapa radioaktivitas muncul pada ABA.
Namun, pada mutan tomat yang kekurangan ABA, konversi xanthoxin berlabel radio menjadi
ABA berkurang. Akhirnya, setidaknya dua kelompok telah melaporkan hubungan
stoikiometrik antara hilangnya violaxanthin dan peningkatan ABA pada daun kacang etiol
yang tertekan.

Gambar 21.2 Aliran untuk biosintesis asam absisat.

Meskipun ABA disintesis dalam sitosol, jalur biosintesisnya dimulai pada kloroplas
(dan mungkin juga plastid lain dalam sel nongreen) yang merupakan tempat pigmen
karotenoid diproduksi (Gambar 21.2). Critical enzim adalah sembilan-cisexpoycarotenoid
dioxygenase (NCED). Enzim ini membelah 40-karbon karotenoid violaxanthin untuk
menghasilkan 15 produk karbon, xanthoxin, dan 25-karbon '' produk sampingan''. Xanthoxin
kemudian diubah menjadi aldehida absis oleh alkohol dehydrogenase. Aldehida absisik pada
gilirannya dioksidasi menjadi asam absisat oleh aldehida oksidase absisat. Enzim NCED dan
akibatnya produksi xanthoxin, diketahui ditargetkan dalam kloroplas sedangkan alkohol
dehidrogenase dan absisat aldehida oksidase terletak di sitosol. Ini berarti bahwa xanthoxin
harus bermigrasi dari kloroplas ke dalam cytosol, walaupun mekanisme migrasi belum
diketahui.

21.1.2 ASAM ABSISAT TERDEGRADRASI MENJADI FASE ASAM OLEH

OKSIDASI
Metabolisme asam absisat cepat ketika diaplikasikan secara eksogen ke jaringan
tanaman. Ester glukosa ABA telah ditemukan dalam konsentrasi rendah di berbagai tanaman,
tetapi rute metabolisme utama tampaknya adalah oksidasi menjadi fase asam (PA) dan
pengurangan berikutnya dari kelompok cincin keton untuk membentuk asam dihidrofase
(DPA) ( Gambar 21.3). Setidaknya beberapa jaringan tampaknya membawa metabolisme
lebih lanjut untuk membentuk 4-glukosida DPA. DPA dan glukosida keduanya secara
metabolik tidak aktif.

Gambar 21.3 Degradasi dari produk.Asam absisat menjadi asam fasa dan asam dihidrofasa.

21.1.3 ASAM ABSISAT DISINTESIS DI MESOPHYL SEL, SEL PENJAGA, DAN

JARINGAN VASKULER
Studi fisiologis sebelumnya menunjukkan bahwa asam absisat ditemukan pada daun
hijau dewasa, terutama pada tanaman yang terkena stress air. Prekursor ABA berasal dari
kloroplas tetapi ABA sendiri terbentuk di sitoplasma. Pada pH rendah, ABA ada dalam
bentuk ABAH yang terprotonasi secara bebas menembus membran sel. Bentuk terdisosiasi
ABA− bersifat impermeant karena merupakan molekul bermuatan yang tidak mudah
melintasi membran. Ketika fotosintesis aktif di sel mesofil, sitosol akan cukup asam (pH 6,0-
6,5) sedangkan stroma kloroplas bersifat basa (pH 7,5-8,0). Sehingga, ABAH berdifusi
dengan mudah dari sitosol ke dalam stroma kloroplas yang berdisosiasi dan terikat. ABA
yang disimpan ini nantinya dapat dilepaskan ketika fotosintesis berhenti dan pH stroma
menurun.
Ekspresi dari Absisat aldehida oksidase (AAO) diinduksi di sel penjaga di bawah
kondisi stress air dan ekspresi NCED terdeteksi di sel penjaga daun dan kotiledon. ABA juga
disintesis secara langsung dalam sel penjaga. Jaringan pembuluh juga merupakan tempat
sintesis ABA pada tanaman tanpa stress. Asam absisat sangat mobile dan bergerak cepat dari
daun ke bagian lain tanaman, terutama jaringan sink. Misalnya, asam absisat berlabel
radioaktif yang diaplikasikan pada daun kedelai dapat dideteksi di akar pada waktu 15 menit.
Bibit yang berkembang juga mengimpor asam absisat dalam jumlah besar dari daun. Ada
juga beberapa bukti di bawah kondisi stress air, ABA yang disimpan atau disintesis dalam
akar dengan cepat diekspor ke daun.
21.1.4 ASAM ABSISAT MENGATUR PEMATANGAN EMBRYO DAN GERMINASI
BENIH
Perkembangan embrio dan perkecambahan benih selanjutnya ditandai dengan
perubahan kadar hormon. Pada sebagian besar biji, kadar sitokinin tertinggi selama tahap
awal perkembangan embrio ketika tingkat pembelahan sel juga tertinggi. Ketika tingkat
sitokinin menurun dan benih memasuki periode pembesaran sel yang cepat, tingkat GA dan
IAA meningkat. Pada tahap awal embriogenesis, ada sedikit atau bahkan tidak ada ABA yang
terdeteksi. Hanya pada tahap akhir perkembangan embrio, ketika level GA dan IAA mulai
menurun, level ABA mulai meningkat. Tingkat ABA umumnya memuncak selama tahap
pematangan, ketika volume benih dan berat kering juga mencapai maksimum dan kemudian
kembali ke tingkat yang lebih rendah saat benih kering. Pematangan embrio ditandai dengan
berhentinya pertumbuhan embrio, akumulasi cadangan nutrisi dalam endosperma, dan
perkembangan toleransi terhadap pengeringan. Waktu akumulasi ABA bertepatan dengan
pematangan embrio yang mencerminkan peran penting ABA dalam proses pematangan.
Salah satu fungsi benih adalah untuk penyebaran populasi dan memastikan kelangsungan
hidup spesies melalui kondisi yang tidak menguntungkan. Sebuah benih akan bernilai kecil
jika embrio tidak memasuki masa dormansi tetapi terus tumbuh dan membentuk tanaman
baru sebelum penyebaran dapat terjadi. Salah satu fungsi ABA adalah untuk mencegah
perkecambahan sebelum waktunya atau vivipary, sementara benih masih pada tanaman
induk.
Hubungan antara ABA dan perkecambahan sebelum waktunya jelas. Vivipary dapat
diinduksi secara kimiawi dalam jagung dengan bulir yang sedang berkembang pada waktu
yang tepat dengan fluridone yaitu penghambat kimiawi dari biosintesis karotenoid. Karena
karotenoid dan ABA berbagi langkah biosintesis awal, fluridone juga menghambat
biosintesis ABA. Vivipary yang diinduksi oleh fluridone setidaknya dapat dikurangi sebagian
dengan pemberian ABA eksogen. Embrio kedelai dapat didorong untuk berkecambah
sebelum waktunya dengan perawatan seperti mencuci atau pengeringan lambat yang
keduanya menurunkan tingkat ABA endogen. Perkecambahan sebelum waktunya akan terjadi
ketika konsentrasi ABA berkurang menjadi 3 hingga 4 μg per g berat basah benih yang
biasanya tidak tercapai sampai tahap akhir pematangan benih.
Indikasi terkuat dari peran ABA dalam mencegah perkecambahan dini, berasal dari
studi tentang mutan vivipar. Setidaknya empat mutan vivipar di jagung (vp2, vp5, vp7, vp9)
diketahui sebagai mutan biosintesis ABA dengan penurunan kadar ABA dalam biji. Satu
mutan jagung vp1, tampaknya memiliki kadar ABA normal tetapi tidak memiliki apa yang
diyakini sebagai faktor transkripsi spesifik ABA. Semua mutan ini berkecambah sebelum
waktunya pada tongkolnya sebelum bijinya memasuki dormansi. Mutan vivipar juga dikenal
karena Arabidopsis. ABA juga menstimulasi akumulasi protein pada tahap akhir
pengembangan embrio kedelai dan diketahui mencegah biosintesis α-amilase yang diinduksi
oleh GA dalam biji-bijian sereal. Semua hasil ini membangun hubungan yang kuat antara
ABA dan pematangan benih dan / atau pencegahan perkecambahan dini. ABA juga memulai
pengeringan benih, meskipun mekanismenya tidak diketahui. Ini mungkin melibatkan
regulasi gen ABA yang menyandikan protein yang terlibat dalam toleransi pengeringan.

21.1.5 RESPONSE ASAM ABSISAT TERHADAP STRESS AIR

Tanaman umumnya merespons kekurangan air akut dengan menutup stomatanya
agar kehilangan air dari permukaan daun dengan laju di mana air dapat disuplai kembali oleh
akar. Sejak ditemukannya ABA pada akhir 1960-an, telah diketahui memiliki peran penting
dalam penutupan stomata selama tekanan air. Faktanya, ABA telah lama dikenal sebagai
antitranspiran karena kemampuannya untuk menginduksi penutupan stomata dan dengan
demikian mengurangi kehilangan air melalui transpirasi.
ABA terakumulasi dalam daun yang stress air (yaitu layu) dan aplikasi ABA
eksogen merupakan penghambat kuat pembukaan stomata. Dua mutan tomat yang dikenal
sebagai flacca dan sitiens, gagal mengakumulasi kadar ABA normal dan keduanya mudah
layu. Peran tepat ABA dalam penutupan stomata pada seluruh tanaman yang stress air sulit
untuk diuraikan dengan pasti. Ini karena ABA ada di mana-mana, sering terjadi dalam
konsentrasi tinggi pada jaringan yang tidak tertekan. Juga, beberapa studi awal menunjukkan
bahwa stomata akan mulai menutup sebelum peningkatan ABA dapat dideteksi. Deteksi awal
stress air pada daun terkait dengan efeknya pada fotosintesis. Penghambatan transpor elektron
dan fotofosforilasi dalam kloroplas akan mengganggu akumulasi proton dalam lumen tilakoid
dan menurunkan pH stroma. Pada saat yang sama, ada peningkatan pH apoplast yang
mengelilingi sel-sel mesofil. Gradien pH yang dihasilkan merangsang pelepasan ABA dari
sel-sel mesofil ke dalam apoplast, di mana ia dapat dibawa dalam aliran transpirasi ke sel-sel
penjaga (Gambar 21.4).
Seperti disebutkan di atas, daun layu mengakumulasi ABA dalam jumlah besar.
Dalam kebanyakan kasus, penutupan stomatal dimulai sebelum ada peningkatan yang
signifikan dalam konsentrasi ABA. Ini dapat dijelaskan dengan pelepasan ABA yang
disimpan ke dalam apoplast, yang terjadi cukup awal dan dalam jumlah yang cukup
(konsentrasi apoplast setidaknya akan berlipat ganda) untuk menjelaskan penutupan awal.
Sintesis ABA yang meningkat mengikuti dan berfungsi untuk memperpanjang efek
penutupan.

Gambar 21.4 Pergerakan ABA dalam apoplast.

Penutupan stomata tidak selalu bergantung pada persepsi kekurangan air dan sinyal
yang muncul di dalam daun. Dalam beberapa kasus tampak bahwa stomata menutup sebagai
respons terhadap pengeringan tanah sebelum ada pengurangan turgor yang terukur dalam sel
mesofil daun. Dalam percobaan ini, tanaman ditanam sedemikian rupa sehingga akarnya
terbagi rata antara dua wadah tanah (Gambar 21.5A). Kekurangan air dapat dimasukkan
dengan menahan air dari satu wadah sementara yang lain disiram secara teratur. Perlakuan
kontrol yaitu menerima penyiraman rutin di kedua wadah. Pembukaan stomata bersama
dengan faktor-faktor seperti tingkat ABA, potensi air, dan turgor dibandingkan antara
tanaman yang diberi air setengah dan kontrol yang disiram sepenuhnya. Biasanya,
konduktansi stomata, ukuran pembukaan stomata, menurun dalam beberapa hari menahan air
dari akar (Gambar 21.5B), namun tidak ada perubahan yang terukur dalam potensi air atau
hilangnya turgor di daun. Dalam percobaan dengan bunga (Commelina communis), ada
peningkatan yang signifikan dalam kandungan ABA dari akar di wadah kering dan epidermis
daun (Gambar 21.6). Selanjutnya, ABA ditranslokasi dari akar ke daun dalam aliran
transpirasi, bahkan ketika akar terkena udara kering. Hasil ini menunjukkan bahwa ABA
terlibat dalam semacam sistem peringatan dini yang mengkomunikasikan informasi tentang
potensi air tanah ke daun.

21.1.6 TANGGAPAN ASAM ABSISAT LAINNYA

ABA mungkin juga berperan dalam perkembangan akar lateral atau sekunder.
Inisiasi dan pengembangan akar lateral diketahui terutama di bawah kendali auksin, tetapi
perkembangan akar lateral dapat dihambat oleh ABA jika hormon diterapkan selama tahap
awal perkembangan akar lateral, sebelum meristem akar lateral menjadi terorganisasi.

Gambar 21.5 (A) Pengaturan eksperimental untuk menguji efek dari akar kering pada sintesis ABA dan
penutupan stomata. (B) Penutupan stomatal dalam percobaan split-root.

Gambar 21.6 Pengaruh pengeringan udara pada kandungan ABA dari ujung akar Commelina communis
Dampak ABA eksogen pada pembentukan bunga dalam kondisi tertentu. Secara
khusus, tidak ada hubungan sebab akibat yang dapat ditetapkan antara tingkat ABA endogen
dan perilaku berbunga. Pada kondisi yang biasanya akan menunda pembungaan, mutan
Arabidopsis yang kekurangan ABA menghasilkan bunga agak lebih awal daripada tanaman
wildtype. Pengamatan ini menunjukkan bahwa ABA endogen biasanya dapat menghambat
atau menunda pembungaan di Arabidopsis. Penemuan bahwa gen (FCA) yang sebelumnya
diketahui terlibat dalam pengendalian waktu berbunga juga memiliki sifat reseptor asam
absisat.

21.1.7 PERSEPSI ABA DAN TRANSDUKSI SINYAL

ABA adalah asam lemah, karena itu kemungkinan ada di kedua yang terprotonasi
dan bentuk-bentuk yang tidak terprotonasi dalam relatif lingkungan apoplas asam. Dalam
keadaan terprotonasi, ia dapat berdifusi melintasi membran plasma dan bereaksi dengan
reseptor intraseluler atau dalam bentuk yang tidak terawasi ia dapat tetap berada di luar sel
untuk dirasakan oleh suatu situs pada membran plasma. Selama 20 tahun terakhir, metode
yang biasanya digunakan untuk mengidentifikasi reseptor hormon terbukti relatif tidak
berhasil dalam pencarian reseptor ABA. Pendekatan yang lebih baru telah menggunakan
reaksi antigen-antibodi dengan apa yang disebut antibodi antiidiotipik. Dalam metode ini,
antibodi yang ditingkatkan melawan ABA digunakan sebagai antigen untuk meningkatkan
kelompok antibodi kedua (antibodi anti-idiotipik) yang memiliki karakteristik mengikat yang
mirip dengan ABA. Jadi, protein apa pun yang berikatan dengan antibodi anti-idiotipik bisa
menjadi reseptor ABA. Antibodi anti-idiotipik kemudian digunakan untuk menyaring protein
yang dikodekan oleh DNA (cDNA) untuk sel-sel bareur aleuron. Pendekatan ini mengarah
pada identifikasi ABAP1, protein yang terletak di membran plasma sel-sel bareur aleuron dan
yang secara spesifik dan reversibel mengikat ABA in vitro.
Sejak ditemukannya ABAP1, setidaknya tiga reseptor ABA diduga telah
diidentifikasi. Salah satunya adalah protein kloroplas Subunit H Chetalase Magnesium
Protoporphyrin-IX (CHLH juga dikenal sebagai ABAR). Kedua adalah protein kontrol FCA
larut-waktu berbunga yang diisolasi dari Arabidopsis. Berdasarkan kesamaan urutan asam
amino, FCA homolog dengan protein barley ABAP1. FCA berinteraksi dengan protein lain
(TA) untuk mengatur pemrosesan mRNA fungsional. Reseptor ketiga adalah reseptor
ditambah G-protein (GPCR) membran-lokal yang diidentifikasi sebagai GCR2. Fakta
sederhana bahwa protein-protein ini mengikat ABA secara in vitro tidak membuktikan bahwa
mereka adalah reseptor yang sebenarnya. Masih perlu dibuktikan bahwa hilangnya fungsi
atau peningkatan fungsi mengubah fungsi ABA dengan cara yang dapat diprediksi.
Mutasi gen tidak sensitif ABA yang baru ditemukan dan dapat diringkas dalam poin-
poin berikut.
1. Tampaknya ada pergantian ABA yang cepat pada tanaman yang stress dan tidak stress,
tetapi peristiwa yang merasakan stress abiotik dan memulai akumulasi ABA masih belum
diketahui.
2. Ca2+ tampaknya menjadi bagian penting dari rantai sinyal ABA terutama dalam sel
penjaga stomata. Ca2+ memediasi penyesuaian turgor yang diinduksi ABA dengan
mengaktifkan saluran anion membran plasma (Gambar 21.7).
3. Wilayah promotor dari beberapa gen mengandung urutan yang disebut elemen respons
ABA (ABRE). Faktor transkripsi yang dikenal sebagai faktor pengikat elemen respons
ABA (ABFs) mengikat wilayah promotor ini untuk mengatur aktivitas gen yang diinduksi
ABA. Gen-gen ini termasuk protein pelindung diduga seperti enzim yang diperlukan
untuk sintesis osmolytes atau zat terlarut yang kompatibel yang membantu tanaman
beradaptasi dengan tekanan air dan faktor transkripsi yang pada gilirannya mengatur
perubahan lain dalam ekspresi gen
4. Sejumlah ABA-tidak sensitif (abi) mutan telah diidentifikasi. Setidaknya tiga mutan tidak
sensitif, abi3, abi 4, dan abi 5, hanya merusak perkecambahan biji dan perkembangan awal
pembibitan. Ketiga gen wildtype (ABI3, 4, 5) mengkodekan faktor transkripsi yang
diekspresikan terutama dalam biji, menunjukkan bahwa peran ABA dalam biji
membutuhkan transkripsi gen.
5. Sejumlah protein kinase teraktivasi ABA yang secara positif mengatur respons ABA telah
diidentifikasi. Selain itu, ABI1 dan ABI2 adalah protein fosfatase yang secara negatif
mengatur respon ABA. Jadi, peristiwa fosforilasi protein jelas penting dalam pensinyalan
ABA.